用于治疗红细胞病症的方法及低剂量方案的制作方法

专利名称：用于治疗红细胞病症的方法及低剂量方案的制作方法
用于治疗红细胞病症的方法及低剂量方案相关申请的交叉引用本申请根据35U. S. C 119 Ce)要求下述申请的优先权2010年11月8日提交的美国临时专利申请系列号61/411，369、2010年7月23日提交的美国临时专利申请系列号61/367，326、2010年3月9日提交的美国临时专利申请系列号61/312，090、2010年2月19日提交的美国临时专利申请系列号61/306，376、2010年I月15日提交的美国临时专利申请系列号61/295，650和2009年12月8日提交的美国临时专利申请系列号61/267，727 ；这些专利申请的内容通过引入以其整体并入本文。有关联邦政府赞助研究的声明本文描述的某些发明是在国立卫生研究院(National Institutes of Health)资助DK-52962的美国政府支持下完成的。
背景技术：
贫血，一种红细胞病症，可大体上定义为血液运送氧的能力下降。虽然红细胞病症可能由某些药物和免疫系统病症引起，但大部分是由血红蛋白表达方面的遗传缺陷引起。血红蛋白合成的病症包括珠蛋白合成不足(deficiencies of globin synthesis),例如地中海贫血综合征；以及珠蛋白结构异常，例如镰状细胞综合征和与不稳定血红蛋白有关的综合征。胎儿珠蛋白(也称为Y珠蛋白)通常在产前与α珠蛋白链结合，以形成胎儿血红蛋白(HbF)。在出生后，胎儿珠蛋白被β珠蛋白取代，然后β珠蛋白与α珠蛋白结合形成成人血红蛋白Α。胎儿珠蛋白与β珠蛋白具有相同的功能，可与α链结合以产生健康形式的血红蛋白，从而降低未匹配的α珠蛋白链的高浓度。各种类型的β地中海贫血是由突变引起的综合征，突变导致β珠蛋白链不足。在β地中海贫血中，未匹配的α珠蛋白链在红细胞(RBC)及它们的祖细胞(progenitors)内集聚，造成RBC及RBC祖细胞过早破坏，由此导致贫血、输血依赖(transfusion-dependence)、铁超负荷、器官衰竭以及早逝。在镰状细胞病(S⑶)中，β珠蛋白链中的一个氨基酸取代导致产生镰状形成的血红蛋白(HbS)，使得在脱氧作用的反复循环下发生聚合。聚合导致RBC “镰状形成(sickling)”。镰状形成后的RBC造成溶血，同时粘附的镰状RBC阻塞微循环，诱发广泛的组织局部缺血和器官梗死(organ infarction)。S⑶的自然病程的标志为疼痛危象(painful crises);急性胸综合征；以及最终潜在威胁生命的后遗症，包括肾功能不全、视网膜炎、骨坏死、骨髓炎、再生障碍危象(aplastic crises)、功能性无脾(functionalasplenism)、中风、阴莖异常勃起(priapism)和重度肺动脉高压(severe pulmonaryhypertension)。本文公开的内容提供用于使患有血液病症(包括β地中海贫血和镰状细胞病)的患者的胎儿血红蛋白增加的新型方法和组合物。

发明内容
本文提供用于使受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比增加的方法，所述方法包括对所述受试者给予a)作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2- 二甲基丁酸类物质(DMB);以及b)选自于由羟基脲、地西他滨或HDAC抑制剂所组成的组中的一种或多种药剂，其中在给予后，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比增加。在一些实施方式中，与基线相t匕，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予I周后增加。在其他实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予2周后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予4周后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予I天后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予3天后增加。在用于增加胎儿血红蛋白百分比的方法的一些实施方式中，所述受试者已被诊断患有患有血液病症或贫血。在某些实施方式中，所述血液病症为镰状细胞综合征。在一些实施方式中，所述血液病症为P地中海贫血综合征。
在一些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2-二甲基丁酸钠进行给予。在某些实施方式中，口服给予DMB。在一些实施方式中，所述HDAC抑制剂为MS-275。在某些实施方式中，口服给予所述的一种或多种药剂。在一些实施方式中，口服给予所述的DMB和一种或多种试剂。在某些实施方式中，以结合口服剂型给予所述的DMB和一种或多种试剂。在一些实施方式中，DMB的总日剂量不超过100mg/kg、不超过90mg/kg、不超过80mg/kg、不超过70mg/kg、不超过60mg/kg、不超过50mg/kg、不超过40mg/kg、不超过35mg/kg、不超过30mg/kg、不超过25mg/kg、不超过20mg/kg、不超过15mg/kg、不超过10mg/kg或不超过5mg/kg。在某些实施方式中，DMB的总日剂量为10-60mg/kg、20-70mg/kg、30-80mg/kg、40_90mg/kg 或 50_100mg/kg。在某些实施方式中，羟基脲的剂量不超过35mg/kg/天。在一些实施方式中，羟基脲的剂量小于35mg/kg/天、小于30mg/kg/天、小于25mg/kg/天、小于20mg/kg/天、小于15mg/kg/天、小于10mg/kg/天或小于5mg/kg/天。在某些实施方式中，轻基脲的剂量小于最大耐受剂量的90%。在其他实施方式中，所述羟基脲的剂量小于最大耐受剂量的80%、小于最大耐受剂量的70%、小于最大耐受剂量的60%、小于最大耐受剂量的50%、小于最大耐受剂量的40%、小于最大耐受剂量的30%、小于最大耐受剂量的20%、小于最大耐受剂量的10%。在一些实施方式中，地西他滨的剂量不超过15mg/m2。在某些实施方式中，地西他滨的剂量小于约15mg/m2、小于约10mg/m2、小于约5mg/m2、小于约3mg/m2、小于约2mg/m2、或小于约lmg/m2。在其他实施方式中，地西他滨以不多于约240mg、不多于约180mg、不多于约120mg、不多于约60mg或不多于约30mg的剂量进行口服给予。在某些实施方式中，每周所给予的MS-275的剂量不超过6mg/m2。在一些实施方式中，每周所给予的MS-275的剂量小于约6mg/m2、小于约5mg/m2、小于约4mg/m2、小于约3mg/m2、小于约2mg/m2或小于约lmg/m2。在某些实施方式中，每天给予MS-275。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 u g/mL DMB的浓度。在其他实施方式中，血浆浓度不超过120iig/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过150 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过200 u g/mL的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过250 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度为 20 Ii g/mL 到 90 u g/mL、或 25 u g/mL 到 120 u g/mL>30 u g/mL 到 150 u g/mL、或为 30 u g/mL到250 u g/mL。在某些实施方式中，DMB的最大血浆浓度小于350 u g/mL、小于250 u g/mL、小于 200 u g/mL、小于 150 u g/mL、小于 140 u g/mL、小于 130 u g/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 ii g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于 40 u g/mL、小于 30 u g/mL 或小于 20 u g/mL。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的F-细胞的数目增加。在某些实施方式中，受试者血液中的F-网织红细胞(F-reticulocytes)的数目增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增力口。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。在一些实施方式中，DMB的给予通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给 予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予DMB间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式中，在受试者的一生中进行给予。在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是牲畜(animals)。在一些实施方式中，所述牲畜是马。在某些实施方式中，所述哺乳动物是人。在一些实施方式中，所述人是儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。本文还提供用于使受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比增加的方法，所述方法包括对所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中所述DMB的总日剂量不多于40mg/kg，并且其中在给予后，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比增力口。在某些实施方式中，所述受试者已被诊断患有P地中海贫血。在一些实施方式中,所述DMB的总日剂量不超过40mg/kg、不超过35mg/kg、不超过30mg/kg、不超过25mg/kg、不超过20mg/kg、不超过15mg/kg、不超过10mg/kg或不超过5mg/kg。在某些实施方式中，所述DMB 的总日剂量为 5_25mg/kg、10-30mg/kg、20-40mg/kg、5_20mg/kg、10_25mg/kg、15_30mg/kg、20-35mg/kg或25_40mg/kg。在一些实施方式中，所述DMB的总日剂量小于约40mg/kg、小于约35mg/kg、小于约30mg/kg、小于约25mg/kg、小于约20mg/kg、小于约15mg/kg或小于约 10mg/kg。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 U g/mL DMB的浓度。在其他实施方式中，所述血浆浓度不超过120 ii g/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，所述DMB的血浆浓度不超过150 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，所述DMB的血浆浓度为20 u g/mL到90 V- g/mL、或 25 u g/mL 到 120 u g/mL、或 30 u g/mL 到 150 u g/mL。在某些实施方式中，所述DMB的血浆浓度小于150 u g/mL、小于140 u g/mL、小于130 u g/mL、小于120 u g/mL、小于110 u g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于50 V- g/mL、小于40 u g/mL、小于30 u g/mL、或小于20 u g/mL。在一些实施方式中，所述DMB 的血衆浓度为 50 u g/mL 到 100 u g/mL>40 u g/mL 到 90 u g/mL>30 u g/mL 到 80 u g/mL、25 u g/mL 到 90 ii g/mL、或 20 ii g/mL 到 100 y g/mL。在某些实施方式中，AUC 小于 2500h* y g/mL、小于 2000h* u g/mL、小于 1500h*ii g/mL、小于 1000h*ii g/mL 或小于 500h* u g/mL。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予I周后增加。在其他实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予2周后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予4周后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在 给予I天后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白的百分比在给予3天后增加。在一些实施方式中，用于增加胎儿血红蛋白百分比的方法进一步包括对受试者给予羟基脲、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合。在某些实施方式中，所述HDAC抑制剂为MS-275。在某些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2-二甲基丁酸钠进行给予。在某些实施方式中，所述DMB通过口服给予进行给予。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的F-细胞的数目增加。在某些实施方式中，受试者血液中的F-网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。在一些实施方式中，DMB通过脉冲式给予进行给予。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予DMB间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式中，在受试者一生中进行给予。


本发明的新特征在所附的权利要求中详细给出。参考以下给出的阐明说明性实施方式(其中利用了本发明的原理)的详细描述和附图，将会更好地理解本发明的特征和优点，附图如下图I是用羟基脲(HU)和2，2- 二甲基丁酸类物质(DMB)治疗的狒狒体内胎儿珠蛋白(Y-珠蛋白)mRNA的图示。图2是地西他滨和DMB对F-细胞的加合效应的图示。图3是使用DMB、丁酸精氨酸(AB)、地西他滨和HDAC抑制剂(MS275)观察到的对诱导Y -珠蛋白mRNA的协同效应的图示。图4是在经IV和口服给药的狒狒体内，血浆DMB随时间变化的图示。图5是在重复剂量毒性研究中，Beagle犬体内DMB暴露量(AUC和Cmax)与剂量的 关系的图不。图6是在重复剂量毒性研究中，Sprague Dawley大鼠体内DMB血浆水平与剂量和持续时间的关系的图示。图7是在用单一剂量的DMB治疗的健康人类受试者体内，血浆DMB浓度随时间变化的图示。图8是在用单一剂量的DMB治疗的健康人类受试者体内，Cmax与DMB剂量水平的关系的图不。图9是在用单一剂量的DMB治疗的健康人类受试者体内，AUC与DMB剂量水平的关系的图不。图10是在用单一剂量DMB治疗的健康人类受试者体内，在禁食治疗和进食治疗两种情况下，平均血浆DMB浓度随时间变化的图示。图11是在对健康人类受试者体内的DMB进行重复剂量研究的第0天时，平均血浆DMB浓度随时间变化的图示。图12是在对健康人类受试者体内的DMB进行重复剂量研究的第13天时，平均血浆DMB浓度随时间变化的图示。图13是通过Advia Coulter计数器从基线(白条)分析的平均绝对网织红细胞的变化的图示，并示出在安慰剂和活性治疗组中治疗时的峰值(黑条)；在条的上方用星号标注出显著性变化。图14是在DMB的重复剂量研究中，在来自泰国和黎巴嫩的P地中海贫血患者体内，几种剂量水平下胎儿血红蛋白(ffiF)百分比的变化的图示(X表示来自泰国的患者)。图15是在DMB的重复剂量研究中，在来自泰国和黎巴嫩的P地中海贫血患者体内，几种剂量水平下胎儿血红蛋白(ffiF)浓度的变化的图示(X表示来自泰国的患者)。图16是在DMB的重复剂量研究中，在来自泰国和黎巴嫩的P地中海贫血患者体内，几种剂量水平下总血红蛋白(Hgb)的变化的图示(X表示来自泰国的患者)。图17是0地中海贫血2期临床试验中，不同剂量水平下多名受试者的平均血浆DMB浓度随时间变化的图示。图18是在DMB的重复剂量研究中,在镰状细胞病患者体内，不同剂量水平下胎儿血红蛋白(HbF)百分比的变化的图示(X表示还接受羟基脲的患者)。图19是在DMB的重复剂量研究中,在镰状细胞病患者体内，几种剂量水平下胎儿血红蛋白(HbF)浓度从基线到治疗结束时的变化的图示(X表示还接受羟基脲的患者)。
图20是在DMB的重复剂量研究中，在镰状细胞病患者体内，几种剂量水平下总血红蛋白(Hgb)浓度从基线到治疗结束时的变化的图示(X表示还接受羟基脲的患者)。图21是与安慰剂患者(下图)相比，用10mg/kg的DMB治疗的三名镰状细胞病患者在前三张图中所示期间内胎儿珠蛋白mRNA的变化的图示。图22是在用10mg/kg的DMB治疗直到第97天期间及治疗后的随访期间，一名镰状细胞病患者的胎儿血红蛋白(ffiF)百分比和F-细胞百分比的变化的图示。
具体实施例方式正常成人血红蛋白(HbA)由两条a珠蛋白链和两条P珠蛋白链(a2@2)组成。血红蛋白病(Hemoglobinopathies)例如P地中海贫血和镰状细胞病(S⑶)，由成人血红蛋白的功能与数量或氨基酸序列的变化引起。胎儿珠蛋白(亦称Y珠蛋白)通常在产前与a珠蛋白链结合以形成胎儿血红蛋白(ffiF)。 珠蛋白基因的顺序表达(sequential expression)导致在发育的不同阶段产生特异型的血红蛋白。在妊娠期的第12周，发生由胚胎血红蛋白向胎儿血红蛋白(a2Y2)的转变；并在妊娠期的第28周，￠-珠蛋白和成人血红蛋白A (HbA, a2@2)的量不断增加。对于形成完好的血红蛋白四聚体，类a珠蛋白蛋白质必须等于类P珠蛋白蛋白质。贫血红细胞的主要功能是将氧运送给身体的组织。其次要作用包括运送营养素、细胞间信息和细胞因子(cytokines),还包括吸收细胞代谢物。贫血或者是红细胞或红细胞容量的降低，可大体上定义为血液运送氧的能力下降。贫血可通过测定患者的红细胞总量(redblood cell mass)或血细胞比容(Hct)来测定。血细胞比容值是血样中总血红蛋白浓度的间接但相当准确的度量。由降低的Hct测定的贫血可能是慢性或急性的。急性贫血可能由创伤或外科手术所引起。胃肠道损伤或妇科干扰(gynecologic disturbances)通常引起慢性失血。慢性贫血可由红细胞外部异常、红细胞内部异常或红细胞生成受损(impairedproduction)引起。外部异常或细胞外(extra-corpuscular)异常包括抗体介导的病症，例如输血反应和成红细胞增多(erythroblastosis);红细胞的机械性创伤,例如微血管病性溶血性贫血、血栓性血小板减少性紫癜和弥散性血管内凝血。另外，寄生虫(例如疟原虫)感染、由例如铅中毒引起的化学损害、放射疗法、骨髓/干细胞移植以及例如脾功能亢进在单核系统中的隔离作用(sequestration)可造成红细胞病症和不足。通过干扰干细胞或定向细胞(committed cell)的增殖和分化，可能发生红细胞生成受损。一些更常见的红细胞生成疾病包括再生障碍性贫血、再生不良性贫血、单纯红细胞发育不全和与肾衰竭或内分泌病症有关的贫血。对成红细胞增殖和分化的干扰包括DNA合成方面的缺陷，例如维生素B12或叶酸的利用下降和巨幼红细胞性贫血；血红素或珠蛋白合成方面的缺陷；以及未明原因的贫血，例如铁粒幼细胞性贫血、与慢性感染(例如疟疾、锥虫病、HIV、肝炎病毒或其他病毒)有关的贫血、与慢性炎症(例如类风湿性关节炎)有关的贫血以及由骨髓不足所引起的骨髓病性贫血。内部异常包括遗传性病症和获得性病症。获得性病症是通过例如膜缺陷诱发的病症(例如阵发性睡眠性血红蛋白尿)。遗传性病症包括膜细胞骨架病症，例如球形红细胞症和椭圆形红细胞症(spherocytosis and elliptocytosis);脂质合成病症,例如细胞膜的卵磷脂含量非正常增加；红细胞酶不足，例如丙酮酸激酶、己糖激酶、谷胱甘肽合成酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的不足。虽然红细胞病症可能由某些药物和免疫系统病症引起，但大多数是由血红蛋白表达方面的遗传学缺陷引起。血红蛋白合成病症包括珠蛋白合成的不足，例如地中海贫血综合征；以及珠蛋白结构异常，例如镰状细胞综合征和与不稳定血红蛋白有关的综合征。旦地中海贫血地中海贫血综合征由或a-珠蛋白或类P珠蛋白链的不足引起(分别为a-地中海贫血和￠-地中海贫血)。当所缺乏的珠蛋白在发育期间必需时，该疾病变得明显。a-地中海贫血在妊娠期间是有征状的，因为a -珠蛋白为胎儿血红蛋白(ffiF, a2Y2)所必需。由于在出生前并未大量地需要P珠蛋白，所以￠-地中海贫血在直到出生后约6个月以前都没有征状。造成拖延胎儿Y-珠蛋白链生成的突变可能出现得更晚，在2-4岁的年龄时。地中海贫血中的主要病理过程是a珠蛋白链和非a珠蛋白链累积的不平衡。未受影响的链以正常量产生，在红细胞生成期间沉淀。在￠-地中海贫血中，沉淀的a-珠 蛋白链尤其有毒性，损害细胞膜并引起细胞快速死亡(细胞凋亡)。除去网状内皮系统中的不正常细胞使红细胞寿命更进一步地缩短。红细胞生成素水平增加，引起红系增生(erythroid hyperplasia)。脾功能允进造成更为严重的贫血。P珠蛋白通过两个基因产生，每条11号染色体上分别有一个。P地中海贫血综合征由超过175个影响P珠蛋白基因综合体的分子突变引起。每个P珠蛋白基因包括三个外显子(对约146个氨基酸进行编码)、两个内含子以及包含启动子序列的5'-非翻译区(untranslated region)。P珠蛋白的生物合成始于整个基因的转录，随后是信使RNA加工、通过拼接除去内含子、加入多聚腺苷酸(poly A)、加帽以及转录后修饰。成熟mRNA分子从核中排出并被翻译成0珠蛋白。已经发现这些功能中每个的缺陷都与特异性地中海贫血有关。经识别的突变包括单个核苷酸的删除、插入和置换；移码突变(frame shiftmutations);编码或控制区域的整个片段的删除；不正确的终止信号；异常的拼接信号；以及多点突变。P 地中海贫血的特点在于完全没有任何P珠蛋白链。P+-地中海贫血的特点在于可检测到所存在的P链的量降低。P地中海贫血有三种主要类型重型地中海贫血、中间型地中海贫血和轻型地中海贫血。根据贫血的严重程度对地中海贫血综合征进行分级。重型地中海贫血表现为在婴儿期出现严重的贫血，它由两个严重受损的￠-珠蛋白等位基因的遗传引起。当胎儿珠蛋白链的生成增加或当a地中海贫血的共同遗传使a-珠蛋白与￠-珠蛋白的净失衡(netimbalance)降低时,上述纯合(homozygous)或双重杂合病状(conditions)有着较轻微的表现。地中海贫血特征(trait)(单个有缺陷的等位基因的遗传)其特点在于轻微的小细胞低色素性贫血，并无需治疗。中间型地中海贫血(TI)造成中度贫血，总血红蛋白水平为6. 0-10. 0g/dL。这些患者受感染时需要临时输血，但在孩童时期不需要定期输血，然而许多人在以后的生活中病情恶化，并出现类似于重型地中海贫血中的并发症。P地中海贫血特征还能够与变体血红蛋白(variant hemoglobins)结合,产生其他相关的血液病症。血红蛋白E特征是最常见的异常血红蛋白之一。在一些情况下，人类携带@地中海贫血特征和血红蛋白E特征会导致HbE &地中海贫血，这是一种中度严重的贫血,与中间型3地中海贫血具有类似症状,但有时可能与重型地中海贫血一样严重。通常见于东南亚世系的人，例如柬埔寨人、越南人和泰国人。在某些情况下，人类携带3地中海贫血特征和血红蛋白S特征(在患有镰状细胞病的人体内发现的异常血红蛋白)，导致ffis ^地中海贫血。这一病状的严重程度根据由3珠蛋白基因广生的正常P珠蛋白的量而变化。当P珠蛋白基因不广生P珠蛋白时，该病状几乎与镰状细胞病相同。当P珠蛋白基因产生一些P珠蛋白时，该病状不太严重。血红蛋白S特征通常见于非洲或地中海世系的人，例如非洲人、意大利人、希腊人、土耳其人和来自加勒比海的人。在重型￠-地中海贫血中，红细胞(RBC)输血是支持疗法的支柱。输血应该使血红蛋白水平理想地保持在10. 5-llg/dL以上(10. 5-13g/dL的范围)。输血可传播感染，包括肝炎病毒、HIV、CMV及其他病原体。当铁沉积引起心、肝、和内分泌器官功能障碍时，会出现由输血疗法引起的进一步并发症。常见的有胰岛素依赖性糖尿病的葡萄糖不耐性、原发性甲状腺功能减退、甲状旁腺功能减退、青春期延迟、闭经和骨质减少(osteopenia);随甲状 旁腺功能减退而继发的心脏含铁血黄素沉着和低血钙症经常促成心律不齐。在13岁前对生长激素作出生长迟缓的响应。肝脏的铁和丙型肝炎造成纤维化和肝硬化。心脏功能障碍可通过心血管磁共振和T2*测定结果<20ms以及射血分数降低进行早期检测，并出现疲劳、心律不齐或心包炎，发展到以下症状充血性心力衰竭是输血患者死亡主要的原因(60%)，随后是感染(13%)，以及包括肝细胞癌在内的肝疾病(6%)。肺动脉高血压在患有溶血的未输血中型患者中发生；TR喷射速度>2与25%死亡率相关联。骨质减少出现在约55%的重型地中海贫血和中间型地中海贫血患者中。在某些情况下，它很严重并造成骨折，因此甚至出现在幼童时期的输血患者中。在有些情况下，受影响的患者靠元素钙(1500mg/天)和维生素D (400IU/天)得以维持。在某些情况下，用双膦酸盐类物质(bisphosphonates)治疗骨质疏松。应监控患者骨髓扩张、面部畸形、脾肿大、生长迟缓、内分泌病和骨质减少。最近认识到肺动脉高血压有风险，与未输血患者的慢性溶血相关。三尖瓣反流(TR喷射>2)与25%死亡率有关，因此应该进行输血。患有P +地中海贫血和基线红细胞生成素水平<130mU/mL的患者需要红细胞生成素和胎儿珠蛋白刺激物。中间型地中海贫血中增生性的骨髓刺激肠内铁吸收,最终如同重型地中海贫血那样出现铁超负荷和内分泌不足，但是更慢；而在未输血的患者体内未发生心肌病。避免富铁肉类和定期喝茶可降低铁吸收。骨质减少发生在55%的重型和中间型患者中。高凝状态和血栓栓塞事件(hypercoagulability and thromboembolic events)尤其出现在脾切除患者中，与血小板增多和肝功能障碍相关。应该利用叶酸和抗氧化补充物。对于在下肢方面急性或不断增加的虚弱、麻木(numbness)和反射消失(医疗急救)，应该怀疑由胸部或脊椎的椎旁骨髓(thoracic or vertebral paraspinal bone marrow)引起的脊柱压迫综合征。在一些情况下，确定患者体内P地中海贫血的基因型的测试包括但不局限于血红蛋白电泳、珠蛋白链电泳、分子突变分析、家族研究和数量性状基因座(QTL)分析。在某些情况下，P珠蛋白基因复合体的分裂(disruption)导致非a珠蛋白链与a珠蛋白链的合成比率降低、过量失衡的a珠蛋白链沉淀以及成红细胞在其发育初期的程序性细胞死亡。受影响的患者直到胎儿(Y )珠蛋白基因在发育方面沉默才变成贫血。具有持续高水平胎儿珠蛋白的患者通常患有不太严重的贫血(轻微的临床综合征)，并且通常不依赖输血。因而3地中海贫血是几个临床病状之一，该临床病状中，在胎儿期瞬时表达的基因可在功能上取代在随后的发育中正常表达的突变基因。胎儿(Y)珠蛋白表达的再激活(reactivation)作为P地中海贫血的治疗方法而吸引人，这是因为胎儿珠蛋白基因普遍存在，并且在几乎所有人的造血干细胞内的P珠蛋白基因座中适当地前后整合(Contextuallyintegrated)0镰状细胞病在镰状细胞病(S⑶)中，P珠蛋白链中的一个氨基酸取代导致生成血红蛋白S (HbS)。脱氧后，HbS分子进行聚集和聚合，最终导致红细胞的形态畸变，获得镰状或冬青叶(holly-leaf)的形状。镰状形成有两个主要后果造成组织缺血性损伤的小血管阻塞和慢性溶血性贫血。此外，当暴露于低氧张力时，聚合作用将含ffis的血液从自由流动的液体转变为粘稠的凝胶。因此，在某些情况下，与镰状细胞病有关的病理程度(degreeofpathology)与患者系统中HbS的相对量有关。HbS聚合还受细胞中血红蛋白浓度的显著 影响。HbS浓度越高，两个或多个HbS分子间接触的机会越大。在一些情况下，脱水作用增加血红蛋白浓度并大大促进镰状形成。在某种程度上，镰状形成是可逆现象。随着氧张力增加，镰状形成的细胞解聚。这个聚合-解聚过程对红细胞膜非常具有破坏性，并最终导致不可逆镰状细胞(ISC)，该不可逆镰状细胞即使被完全氧化也保持它们的异常形状。与正常的120天寿命相比，ISC在身体内平均存活约20天。患有HbS综合征的个体具有频繁感染、伴有显著的网织红细胞增多的慢性溶血以及高胆红素血的情况。上述疾病的病程通常被各种疼痛危象(称为血管阻塞性危象)打断(punctuated)。这些危象表明器官、腹部、胸、四肢或关节的缺氧损伤和梗死的发作。腿部溃疡是这一疾病的血管阻塞趋势另外的表现。中枢神经系统受累(involvement)通常引起癫痫甚至中风。同样常见的再生障碍危象表明骨髓活动的临时中断，在某些情况下由感染、叶酸缺乏或两者同时引起。危象是偶发的(印isodic)且可逆的，但可能是致命的。由危象发作引起的损害有累积的趋势，甚至在那些患有较轻微形式镰状细胞病的个体中，寿命也可能大大降低。在没有替代干预(alternative intervention)的情况下,患者通常在30岁前死亡。患有重度S⑶的个体直到出生后约五到六个月后才出现症状。在这些婴儿中，胎儿血红蛋白(HbF)不与HbS相互作用，并且只要存在足够量的HbF，就能够调节HbS的作用。HbF水平在20%以上通常被认为足以消除与镰状细胞病有关的症状。血液病症镰状细胞病和地中海贫血可以称为“血液病症”，由珠蛋白基因异常引起。血液病症包括可治疗、预防的病症，或者还包括可通过给予本发明的化合物或组合物予以改善的其它病症。血液病症是血液和造血器官的任何病症。术语“血液病症”包括营养性贫血，例如铁缺乏性贫血、缺铁性吞咽困难(sideropenic dysphasia)、Plummer-Vinson综合征、维生素B12缺乏性贫血、由于内因子(intrinsic factor)引起的维生素B12缺乏性贫血、恶性贫血、叶酸缺乏性贫血及其他营养性贫血；骨髓增生异常综合征；骨髓衰竭或由化疗、放疗或其他试剂或疗法引起的贫血；溶血性贫血，例如由于酶病症引起的贫血、由于磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏引起的贫血(蚕豆病)、由于谷胱甘肽代谢引起的贫血、由于糖酵解酶病症引起的贫血、由于核苷酸代谢病症引起的贫血以及由于非特定酶病症引起的贫血；地中海贫血，a-地中海贫血、0 -地中海贫血(例如血红蛋白E ^地中海贫血)、6 ￠-地中海贫血、地中海贫血特征、遗传性胎儿血红蛋白持存(HPFP)及其它地中海贫血；镰状细胞病症，具有危象的镰状细胞性贫血、没有危象的镰状细胞性贫血、双杂合性镰状形成病症、镰状细胞特征及其他镰状细胞病症；遗传性溶血性贫血，遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症、其他的血红蛋白病及其他特定的遗传性溶血性贫血(例如口形红细胞增多症(stomatocyclosis));获得性溶血性贫血，例如药物诱发的自身免疫性溶血性贫血、其他自身免疫性溶血性贫血(例如温抗体型自身免疫性溶血性贫血)、药物诱发的非自身免疫性溶血性贫血、溶血性尿毒症综合征及其他非自身免疫性溶血性贫血(例如微血管病性溶血性贫血);再生障碍性贫血，例如获得性纯红细胞再生障碍(成红细胞减少症)、其他的再生障碍性贫血(例如体质性再生障碍性贫血和fanconi贫血)、急性失血性贫血和慢性疾病中的贫血；凝血缺陷、例如弥散性血管内凝血(去纤维蛋白综合征)，遗传因子VIII缺乏(甲型血友病)、遗传因子IX缺乏(Christmas病)及其他凝血缺陷(例如Von Willebrand氏病、遗传 因子Xi缺乏(丙型血友病))；紫癜，例如血小板质量缺陷和Glanzmann氏病；中性粒细胞减少、粒细胞缺乏、多形核中性粒细胞功能病症；其他的白细胞病症，例如嗜酸细胞增多、白细胞增多、淋巴细胞增多、淋巴细胞减少、单核细胞增多和浆细胞增多；脾疾病；高铁血红蛋白血症；其他的血液和造血器官疾病，例如家族性红细胞增多、继发性红细胞增多症、特发性血小板增多和嗜碱细胞增多；血小板减少；传染性贫血；造血障碍性贫血或再生不良性贫血；血红蛋白C、血红蛋白D和血红蛋白E疾病；血红蛋白I印ore疾病；以及HbH与HbS疾病；由于失血、放射疗法或化学疗法引起的贫血；或由于放射疗法或化学疗法引起的血小板减少和中性粒细胞减少；铁粒幼细胞性贫血；抗体介导的贫血；以及某些涉及淋巴网状组织和网状组织细胞系统的疾病，例如Langerhans氏细胞组织细胞增多、嗜酸细胞性肉芽肿、Hand-Schuller-Christian病、嗜血细胞性淋巴组织细胞增生和与感染有关的噬血细胞综合征。疗法选择患有0地中海贫血和S⑶的美国患者平均存活年龄分别为约26岁和40岁。在中间型0地中海贫血(TI)和S⑶中，在得到适当的支持性护理、例如在生病(如感染)或怀孕时进行输血的情况下，大部分受影响的个体可维持日常生活的活动。随着时间的推移，输血需要更加频繁，因为病状发展成为更为严重、晚期的疾病。许多患者患上铁超负荷(多次输血的并发症)及其他与输血有关的并发症(例如上文所述)。在世界上血液产品筛选未达最佳标准的地区，频繁输血也使上述患者承担潜在血源性病原的风险。由丙型肝炎引起的肝硬化常见于世界许多地区患者中。采用输血疗法，许多患者变成同种免疫(alloimmunized)，增加过敏性反应的风险，并由于逐渐降低的RBC存活率而增加输血需求。胎儿血红蛋白的作用对于虽未形成成人P珠蛋白、但避免严重并发症的健康个体，已经确定其遗传型变异。在某些情况下，这些患者以足以取代缺失的3珠蛋白链的量表达胎儿珠蛋白。在一些情况下，这种胎儿血红蛋白的遗传性持存(hereditary persistence)涉及一个或两个胎儿珠蛋白基因。在某些情况下，胎儿珠蛋白的稳定生成完成了异常或缺失的3珠蛋白链的必要功能。胎儿血红蛋白(HbF)表达的水平为患有S⑶患者疾病表达的最重要的调节剂(modifier)之一。HbF的百分比(％HbF)影响患有S⑶的孩童和成人的实验室值和临床特点。在一种情况下，每个红细胞中有30%HbF为临床镰状形成的高效抑制剂，而60%-70%的细胞中有15%-22%HbF对沙特阿拉伯和印度患者有益。在更多情况下，升高的％HbF已显著关系到疼痛血管阻塞事件较少、急性胸综合征的发作较少和早逝减少。增加的HbF水平与器官损伤的减少和患者存活率的提闻相关联。在0地中海贫血患者体内，较高的HbF生成伴有(parallels)较高的血红蛋白水平，这类似于镰状细胞病中的发现。在某些情况下，用羟基脲治疗的P地中海贫血患者的HbF水平增加，并且危象频率明显下降。例如，患有HbE &地中海贫血疾病的患者体内两种主要的血红蛋白组分为ffiE和HbF，HbF的水平由30%变为70%。有些情况下，在患有HbE P地中海贫血疾病的患者的某些组中，血红蛋白水平与HbF生成的量存在着良好的相关性。利用羟基脲可实现与a珠蛋白/非-a珠蛋白生成增加有关的HbF生成增加。在有 些情况下，在％HbF增加(以及％HbE相应减少)和总血红蛋白增加之间的时间关系(temporalrelationship)与红细胞生成的增加一致。例如，在一项研究中，几乎所有用轻基脲治疗的HbEP地中海贫血患者都响应出HbF水平增加以及％HbE的相应减少，网织红细胞增多症减少，并且血红蛋白水平有统计学上显著的些许增加，a珠蛋白链/非-a珠蛋白链比值的平衡性得到提高。在某些情况下，使胎儿珠蛋白再活化为a -珠蛋白链合成的约60-70%在P地中海贫血中改善了贫血，从而足以消除输血需求。在临床试验中，正在评价化疗剂(羟基脲和5-氮杂胞苷或地西他滨)、短链脂肪酸衍生物(SCFAD)和促红细胞生成素(EP0)，在基线(未输血)HbF水平>50%、促红细胞生成素水平>130mU/mL的患者中观察到最高的血液学反应。在一些情况下，需要将这些试剂结合起来以消除重度P地中海贫血患者定期的输血需求。与用于终身治疗的化学疗法相比，优选不致突变、无细胞毒性的试剂。在未输血的患者中，苯基丁酸钠(Buphenyl)和丁酸精氨酸使总血红蛋白在基线以上增加了 l_4g/dL，但分别需要大量片剂或静脉内输注。患有￠+地中海贫血且基线EPO水平<80mU/ml的患者对丁酸盐/酯和EPO的结合疗法作出了最好的响应。长效EPO制剂达贝泊汀(darb印oietin)增加一些患者的血红蛋白。这些疗法需要补充口服铁以使得即使出现铁蛋白水平升高也会有效，因为存储的铁未必能用于红细胞生成，而且常常需要几个月的治疗。经过评价，新的口服短链脂肪酸衍生物表现出更容易耐受。羟基脲已经表明多种小分子影响胎儿血红蛋白或胎儿珠蛋白的表达。例如，发现羟基脲(HU)刺激珠蛋白表达(Letvin，N. L.等人，1984N. Engl. J. Med. 310:869-73)。然而，刺激对胎儿珠蛋白没有表现出非常具有特异性(Charache，S.等人，1987Blood 69:109-16)。羟基脲是第一种和唯——种经FDA批准用于治疗S⑶的潜在病理学(underlyingpathology)的药品，其通过增加胎儿珠蛋白水平起作用。然而，由于若干原因羟基脲仅用于小部分患者。它在许多SCD患者体内并未增加胎儿珠蛋白，并且仅在40-50%的患者中观察到了临床受益。此外，羟基脲是与潜在的致癌性和致畸性有关的、致突变的癌症化学疗法。
用羟基脲治疗患者可能并发严重的、有时危及生命的副作用。羟基脲会导致突变和致染色体断裂(clastogenic)，并造成细胞转化为致瘤表型。因此，羟基脲具有明确的基因毒性并且推测是跨物种的(trans-species)致癌物质，这意味对人类有致癌风险。在长期接受羟基脲治疗脊髓增殖性疾病(例如真性红细胞增多和血小板增多)的患者中，已经报导了继发性白血病。羟基脲不是唯一的具有细胞毒性和骨髓抑制作用的试剂。此外，羟基脲具有窄的治疗指数，用羟基脲进行有效治疗需要小心地将剂量逐步上升直至最大耐受剂量(MTD)或规定的最大剂量。羟基脲的初剂量为单次剂量15mg/kg/天。必须每两周监控患者的血细胞计数。如果血细胞计数处于可接受范围，所述剂量每12周可增加5mg/kg/天直到达到最大耐受剂量(超过连续24周不产生有毒血细胞计数的最高剂量)或35mg/kg/天。如果血细胞计数在可接受范围和有毒范围之间，不增加剂量。如果认为血细胞计数有毒，应该停止羟基脲直到血液学意义上复原。然后，在将剂量由与血液学毒性有关的剂量降低2. 5mg/kg/天后，可恢复治疗。接下来，羟基脲可能或上调或下调进行观察(titrated up or down)，每12周增加2. 5mg/kg/天，直到患者处于24周不导致血液学毒性的稳定剂量。不应再次试验使患者两次产生血液学毒性的任何剂量。 除了羟基脲，其他的癌症试剂(例如5-氮杂胞苷和5-氮杂-2'-脱氧胞苷)也在小的SCD临床试验中显示了功效，但这些药物的毒性和致突变性限制了它们的临床发展和广泛应用。至于3地中海贫血，骨髓(或干细胞)移植是唯一有效的疗法，但仅在具有匹配良好捐献者和大量资金来源或健康保险的少数患者中可行。已表明红细胞生成刺激剂(ESA)、例如促红细胞生成素(EPO)和达贝泊汀的外源性给予能够增加3地中海贫血患者的RBC计数和总Hgb水平，但无法修正珠蛋白链的失衡。2，2- 二甲基丁酸类物质(DMB )2，2- 二甲基丁酸类物质(DMB)是一类被称为短链脂肪酸(SCFA)和短链脂肪酸衍生物(SCFAD)的药剂中的新型化合物。DMB是增强胎儿珠蛋白基因启动子表达、从而增加胎儿珠蛋白合成的几种SCFA之一。2，2- 二甲基丁酸类物质(DMB)指2，2- 二甲基丁酸的游离酸、药学上可接受的盐或酯(例如2，2- 二甲基丁酸钠)。丁酸精氨酸(AB)是成功用在0地中海贫血患者的小型研究中以刺激胎儿珠蛋白表达并增加总血红蛋白(Hgb)水平的上一代SCFA。AB研究中招收的几名患者进行长期家庭疗法达7年的情况下，变得不依赖输血。另一种SCFA苯基丁酸钠(SPB)使得未输血P地中海贫血患者50%的总血红蛋白水平在基线以上增加2g/dL。然而，AB和SPB均是抑制细胞生长并抑制红细胞生成的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂，对克服患者贫血起反作用。在进行P地中海贫血的开放性初步临床研究(open-lable pilot clinicalstudies)中，在DMB之前评价的SCFA、例如苯基丁酸类物质和丁酸精氨酸(AB)增加胎儿珠蛋白合成和总血红蛋白水平，足以使一些以前依赖输血的患者能够变成不依赖输血。然而，这些早期的SCFA治疗剂快速代谢，因而为了达到效果需要大剂量和/或长期的静脉内(IV)输注。此外，用这些化合物进行的连续治疗抑制红细胞生成(一种降低胎儿珠蛋白表达净收益、并且可在间歇地给予药物时得以改善的作用)。苯基丁酸钠(SPB)和AB都增加S⑶患者的HbF和总血红蛋白(Hgb)水平。用于P地中海贫血或S⑶患者的治疗剂的目标产品特性为同时刺激胎儿珠蛋白基因表达和增强红细胞生成的口服给予用药。DMB是生物可口服利用的第三代SCFA，并具有比AB或SPB更长的半衰期。此外，DMB没有表现出在与生物活性有关的浓度抑制红细胞生成，反而刺激细胞增殖并抑制所培养的来自地中海贫血患者的红系祖细胞(erythroid progenitor)的细胞凋亡。在另外的情况下，DMB刺激红系细胞(erythroid cell)增殖和存活，并增加经放血的贫血狒狒的总血红蛋白水平。DMB不是HDAC抑制剂，但在某些情况下，会通过延长转录因子STAT-5的磷酸化而促进红细胞生成，同时仍诱导胎儿珠蛋白基因启动子的表达。DMB是靶向启动子的口服胎儿珠蛋白基因刺激剂，同时延长红系细胞存活和增殖，并在I期临床试验正常的自愿者中已显示出有利的药代动力学(PK)特性和安全特性。在由地中海贫血患者培养的红系祖细胞中以及在红系细胞系、报告基因分析的实验室研究中，DMB诱导胎儿珠蛋白表达。通过用网织红细胞、总血红蛋白(Hgb)和血细胞比容(Hct)进行分析，在转基因小鼠和贫血狒狒上进行的体内研究也表现出胎儿珠蛋白水平 增加以及RBC生成的增加。在一些实施方式中，作为用于S⑶和P地中海贫血的治疗剂，DMB诱导胎儿珠蛋白合成，分别替代突变体或缺失的P珠蛋白链。在P地中海贫血中，胎儿珠蛋白链可与a链结合，降低未匹配a珠蛋白链的高浓度。在S⑶中，胎儿珠蛋白抑制HbS的聚合，这使RBC的镰状形成降低，从而减少局部缺血事件和溶血性贫血。DMB的临床前研究和临床研究在26周中每天向Sprague Dawley大鼠给予高剂量的DMB (采用高达500mg/kg/天[人等效剂量(HED) =81mg/kg/天]的每日口服剂量完成)表明DMB耐受良好，仅在几只雌性大鼠的肝功能试验中为可逆增加。对Beagle犬进行的26周研究采用高达300mg/kg/天(HED=167mg/kg)的每日口服剂量的DMB完成，结果是与对照动物相比仅体重增加稍微滞后，该滞后与进食或活动方面的变化无关，另外DMB耐受良好。在异速放大(allometricscaling)后，犬和大鼠的这些剂量达到了人类受试者20mg/kg剂量的I. 2和2. 9倍的累积药物浓度(表7和表8)。在实验室研究中，已经证明DMB能够通过STAT-5信号通路(由促红细胞生成素促进剂激活的相同通路)刺激红系细胞增殖。此外，DMB通过延长Bcl-xL (抗凋亡蛋白复合物)的表达来减少地中海贫血的红系祖细胞过早死亡。迄今为止，已经在有55名健康人类受试者的2个临床试验中对DMB进行了评价。在单一剂量的I期研究中，以2-20mg/kg的剂量水平用单一剂量的DMB对受试者进行治疗。在没有发现临床上显著的不良事件(AE)的情况下完成了这一研究，表明可用10mg/kg以上的剂量实现具有生物活性的血浆药物水平(此前用来自中间型地中海贫血(TI)患者的全血进行的体外试验中确定的水平)。在41名健康人类受试者的多剂量I期临床研究中，连续14天的DMB重复日剂量(5-15mg/kg/天)耐受良好，没有观察到临床上显著的AE或实验室异常。此外，已经在21名中间型地中海贫血患者中(以8周内10mg/kgkg、20mg/kg、30mg/kg和40mg/kg的重复剂量)以及25名镰状细胞病患者中(以6周内10mg/kg、20mg/kg和30mg/kg的重复剂量)对DMB进行了评价。脉冲式给予
在一些实施方式中，脉冲式给予比连续治疗更有效，因为总的脉冲剂量常常比连续给予相同组合物期望的剂量低。每次脉冲剂量能够被降低，从而使治疗过程给予的药物
总量最小。在传统的疗法形式中，重复给予是为了保持活性成分在体内的期望水平。常常可将产生的并发症归因于虽然有效、但对正常细胞接近有毒或有害的剂量水平。相反，采用脉冲治疗，体内药物水平降低到低于有效连续治疗所需的水平。因此，脉冲并不仅仅是给予足够大的快速灌注(bolus)从而长时间存在治疗上足够的可利用的药物。脉冲式给予能够实质上降低每剂或每个总治疗方案所给予患者的组合物的量，同时增加有效性。这表现出在时间、人力和费用方面的显著节约，更重要的是，较低的有效剂量实质上使患者可能经受的并发症的数量和严重程度减少。单个脉冲可在几小时(例如约2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小
时或16小时)或几天(例如2天、3天、4天、5天、6天或7天)的时间段内连续递送至患者， 优选约I小时到约24小时，更优选约3小时到约9小时。或者，周期性剂量能够以将组合物进行单次快速灌注或少次注射的形式在短时间内(通常小于I或2小时)给予。例如，丁酸精氨酸已通过以下方式给予在4天内，每日输注8小时或过夜输注，随后7天内不进行治疗。已经证明这是对许多地中海贫血病症有效的方案。胎儿血红蛋白水平实质上升高，且成人血红蛋白表达细胞和胎儿血红蛋白表达细胞的数目都有显著上升。在某些情况下，HbF显著上升意味着对于提高患者的生活标准存在积极影响，例如增加的活动性或移动性、较少副作用、较短的住院期或看病次数、或者较少的输血。例如，通常认为HbF水平高于20%足以消除与镰状细胞病有关的症状。脉冲之间的间隔或不进行递送的间隔大于24小时，优选大于48小时，并且甚至能够更长、例如3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天、2周、3周或4周或更长的时间。通常，通过在递送下次脉冲前无法再检测到患者体内的组合物或组合物的活性组分时给予另一剂组合物，可以计算脉冲之间的间隔。还可由组合物的体内半衰期计算间隔。可计算出间隔大于体内半衰期，或比组合物半衰期大2倍、3倍、4倍、5倍、甚至10倍。对于具有相当快半衰期的组合物，间隔可以是化学组合物半衰期的25倍、50倍、100倍、150倍、200倍、250倍、300倍、甚至500倍。单个疗法方案中脉冲的数目可少达2个，但通常为约5_10个、10-20个、15-30个或更多。在一些实施方式中，患者根据本发明的方法终身接受药物，而没有与目前疗法有关的问题和不便。在某些实施方式中，组合物通过大多数任意手段进行给予，但更优选作为注射剂(例如静脉内、皮下、动脉内)、输液剂或滴注剂递送至患者，更优选通过口服摄取。用于增加％HbF和/或总血红蛋白的方法本文提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，包括向所述受试者给予a)作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2-二甲基丁酸类物质；以及b)选自于由羟基脲、地西他滨或HDAC抑制剂所组成的组中的一种或多种试剂；其中，受试者血中的胎儿血红蛋白百分比在给予后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I周后增加。在其他的实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予2周后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予4周后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I天后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予3天后增加。在一些用于增加胎儿血红蛋白百分比的方法的实施方式中，所述受试者被诊断为患有血液病症或贫血。在某些实施方式中，所述血液病症是镰状细胞综合征。在一些实施方式中，所述血液病症是3地中海贫血综合征。在一些实施方式中，2，2- 二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠进行给予。2，2- 二甲基丁酸类物质包括但不限于2，2- 二甲基丁酸、2，2- 二甲基丁酸钠、2，2- 二甲基丁酸钾、2，2-二甲基丁酸镁、2，2-二甲基丁酸钙、2，2-二甲基丁酸精氨酸、2，2-二甲基丁酸赖氨酸、2，2- 二甲基丁酸胆碱、2，2- 二甲基丁酸甲酯(2，2- 二甲基丁酸甲基酯)、2，2- 二甲基丁酸乙酯、2，2- 二甲基丁酸丙酯、2，2- 二甲基丁酸异丙酯或2，2- 二甲基丁酸叔丁酯。在某些实施方式中，口服给予DMB。在一些实施方式中，HDAC抑制剂为MS-275。在某些实施方式中，口服给予一种或多种药剂。在一些实施方式中，口服给予DMB和一种或多 种药剂。在某些实施方式中，以结合口服剂型给予DMB和一种或多种药剂。在一些实施方式中，DMB的总日剂量不超过100mg/kg、不超过90mg/kg、不超过80mg/kg、不超过70mg/kg、不超过60mg/kg、不超过50mg/kg、不超过40mg/kg、不超过35mg/kg、不超过30mg/kg、不超过25mg/kg、不超过20mg/kg、不超过15mg/kg、不超过10mg/kg、或不超过5mg/kg。在某些实施方式中，DMB的总日剂量为10-60mg/kg、20-70mg/kg、30-80mg/kg、40-90mg/kg或50_100mg/kg。在一些实施方式中，DMB的总日剂量小于100mg/kg、小于 90mg/kg、小于 80mg/kg、小于 70mg/kg、小于 60mg/kg、小于 50mg/kg、小于 40mg/kg、小于35mg/kg、小于 30mg/kg、小于 25mg/kg、小于 20mg/kg、小于 15mg/kg 或小于 10mg/kgo在某些实施方式中，羟基脲的剂量不超过35mg/kg/天。在一些实施方式中，羟基脲的剂量小于35mg/kg/天、小于30mg/kg/天、小于25mg/kg/天、小于20mg/kg/天、小于15mg/kg/天、小于10mg/kg/天或小于5mg/kg/天。在某些实施方式中，轻基脲的剂量小于最大耐受剂量的90%。在其他的实施方式中，羟基脲的剂量小于最大耐受剂量的80%、小于最大耐受剂量的70%、小于最大耐受剂量的60%、小于最大耐受剂量的50%、小于最大耐受剂量的40%、小于最大耐受剂量的30%、小于最大耐受剂量的20%、小于最大耐受剂量的10%。在一些实施方式中，地西他滨的剂量不超过15mg/m2。在某些实施方式中，地西他滨的剂量小于约15mg/m2、小于约10mg/m2、小于约5mg/m2、小于约3mg/m2、小于约2mg/m2或小于约lmg/m2。在其他的实施方式中，以不超过约240mg、不超过约180mg、不超过约120mg、不超过约60mg或不超过约30mg的剂量口服给予地西他滨。在某些实施方式中，每周所给予的MS-275的剂量不超过6mg/m2。在一些实施方式中，每周所给予的MS-275的剂量小于约6mg/m2、小于约5mg/m2、小于约4mg/m2、小于约3mg/m2、小于约2mg/m2或小于约lmg/m2。在某些实施方式中，每天给予MS-275。在一些实施方式中，DMB的总日剂量多于90mg/kg、多于80mg/kg、多于70mg/kg、多于 60mg/kg、多于 50mg/kg、多于 40mg/kg、多于 30mg/kg、多于 20mg/kg 或多于 10mg/kg。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 U g/mL DMB的浓度。在其他实施方式中，所述血浆浓度不超过120 ii g/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过150 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过200 u g/mL的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过250 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度为 20 u g/mL 到 90 u g/mL、或 25 u g/mL 到 120 u g/mL>30 u g/mL 到 150 u g/mL、或 30 u g/mL到250 ii g/mL。在某些实施方式中，DMB的最大血浆浓度小于400 ii g/mL、小于350 ii g/mL、小于 300 u g/mL、小于 250 u g/mL、小于 200 u g/mL、小于 150 u g/mL、小于 140 u g/mL、小于130 u g/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 y g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于 40 u g/mL、小于 30 u g/mL 或小于20u g/mLo在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的F-细胞的数目增加。在某些实施方式中，受试者血液中的F-网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。在某些实施方式中，每天给予DMB。在进一步的实施方式中，给予是连续的。在一些实施方式中，DMB的给予通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，脉冲式给予包括给予 DMB脉冲约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，在受试者的一生中进行给药。在一些实施方式中，DMB的给予通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予DMB约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式中，在受试者的一生中进行给予。在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是牲畜。在一些实施方式中，所述牲畜是马。在某些实施方式中，所述哺乳动物是人。在一些实施方式中，所述人是儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。本文进一步提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中在给予后，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加。在一些实施方式中，DMB的总日剂量不超过100mg/kg、不超过 90mg/kg、不超过 80mg/kg、不超过 70mg/kg、不超过 60mg/kg、不超过 50mg/kg、不超过40mg/kg、不超过35mg/kg、不超过30mg/kg、不超过25mg/kg、不超过20mg/kg、不超过15mg/kg、不超过10mg/kg或不超过5mg/kg。在某些实施方式中，DMB的总日剂量为10-30mg/kg、20-40mg/kg、30-50mg/kg、40-60mg/kg 或 5_20mg/kg。在某些实施方式中，DMB的总日剂量为 10-60mg/kg、20-70mg/kg、30-80mg/kg、40-90mg/kg 或 50_100mg/kg。在一些实施方式中，DMB的总日剂量小于约80mg/kg、小于约70mg/kg、小于约60mg/kg、小于约50mg/kg、小于约40mg/kg、小于约35mg/kg、小于约30mg/kg、小于约25mg/kg、小于约20mg/kg、小于约15mg/kg或小于约10mg/kg。本文还提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量不多于40mg/kg，并且其中在给予后，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加。在某些实施方式中，所述受试者已被诊断患有0地中海贫血。在一些实施方式中，DMB的总日剂量不超过40mg/kg、不超过35mg/kg、不超过30mg/kg、不超过25mg/kg、不超过20mg/kg、不超过15mg/kg、不超过10mg/kg、不超过5mg/kg、不超过2mg/kg或不超过lmg/kg。在某些实施方式中，DMB 的总日剂量为 5_25mg/kg、10-30mg/kg、20-40mg/kg、5-20mg/kg、10_25mg/kg、 15-30mg/kg、20-35mg/kg或25_40mg/kg。在一些实施方式中，DMB的总日剂量小于约40mg/kg、小于约35mg/kg、小于约30mg/kg、小于约25mg/kg、小于约20mg/kg、小于约15mg/kg或小于约10mg/kg。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 U g/mL DMB的浓度。在其他实施方式中，所述血浆浓度不超过120 ii g/mL DMB的浓度。在一些实施方式中，DMB的最大血浆浓度小于 150 u g/mL、小于 140 u g/mL、小于 130 u g/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 y g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于40 ii g/mL、小于30 ii g/mL或小于20 ii g/mL。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度为50-100 u g/mL,40-90 u g/mL,30-80 u g/mL,25-90 u g/mL 或 20-100 u g/mL。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度为20 u g/mL到90 u g/mL,或为25 u g/mL到120 u g/mL,或为30 u g/mL到150 u g/mLo在一些实施方式中，AUC小于2500h* y g/mL、小于2000h* y g/mL、小于1500h* u g/mL、小于 1000h*ii g/mL 或小于 500h* u g/mL。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I周后增加。在其他实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予2周后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予4周后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I天后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予3天后增加。在一些实施方式中，用于增加胎儿血红蛋白百分比的方法进一步包括向所述受试者给予羟基脲、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合。在某些实施方式中，所述HDAC抑制剂为 MS-275。在某些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2-二甲基丁酸钠进行给予。在某些实施方式中，所述DMB通过口服给予进行给予。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的F-细胞的数目增加。在某些实施方式中，受试者血液中的F-网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。在一些实施方式中，DMB通过脉冲式给予进行给予。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、 约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式中，在受试者一生中进行给予。本文进一步提供用于使被诊断患有镰状细胞病的受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中在给予后，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加。在一些实施方式中，DMB的总日剂量不超过100mg/kg、不超过90mg/kg、不超过80mg/kg、不超过70mg/kg、不超过60mg/kg、不超过50mg/kg、不超过40mg/kg、不超过35mg/kg、不超过30mg/kg、不超过25mg/kg、不超过20mg/kg、不超过15mg/kg或不超过10mg/kg。在某些实施方式中，DMB的总日剂量为 10-30mg/kg、20-40mg/kg、30-50mg/kg、40-60mg/kg、50-70mg/kg、40-80mg/kg、50-90mg/kg、60-100mg/kg、30-70mg/kg、20-60mg/kg、10_50mg/kg 或 5_20mg/kg。在一些实施方式中，DMB的总日剂量小于约100mg/kg、小于约90mg/kg、小于约80mg/kg、小于约70mg/kg、小于约60mg/kg、小于约50mg/kg、小于约40mg/kg、小于约35mg/kg、小于约30mg/kg、小于约25mg/kg、小于约20mg/kg、小于约15mg/kg或小于约10mg/kg。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 U g/mL DMB的浓度。在其他实施方式中，所述血浆浓度不超过120 ii g/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过150 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过200 u g/mL的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过250 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度为 20 u g/mL 到 90 u g/mL、或 25 u g/mL 到 120 u g/mL>30 u g/mL 到 150 u g/mL、或 30 u g/mL到250 u g/mL。在某些实施方式中，DMB的最大血浆浓度小于300 u g/mL、小于250 u g/mL、小于 200 u g/mL、小于 150 u g/mL、小于 140 u g/mL、小于 130 u g/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 ii g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于50 V- g/mL、小于40 u g/mL、小于30 u g/mL或小于20 u g/mL。在某些实施方式中，AUC 小于 3500h* u g/mL、小于 3000h* u g/mL、小于 2500h* u g/mL、小于 2000h* u g/mL、小于1500h* u g/mL、小于 IOOOh* u g/mL 或小于 500h* u g/mL。本文还提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2-二甲基丁酸类物质(DMB)，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量。本文还提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量的80%，并且其中在给予后，所述受试者血液中的总血红蛋白百分比增加。本文进一步提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量。本文还提供用于使受试者体内的总血红蛋白、血细胞比容、红细胞或它们的组合增加的方法,所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量。在一些实施方式中，所述方法进一步包括向所述受试者给予羟基脲、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合。在某些实施方式中，所述HDAC抑制剂为MS-275。在一些实施方式中，2，2- 二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠进行给予。在某些实施方式中，口服给予所述2，2- 二甲基丁酸类物质。
在一些实施方式中，DMB的总日剂量大于最大耐受剂量的25%且小于最大耐受剂量的75%。在其他实施方式中，DMB的总日剂量小于最大耐受剂量的80%、小于最大耐受剂量的75%、小于最大耐受剂量的70%、小于最大耐受剂量的65%、小于最大耐受剂量的60%、小于最大耐受剂量的55%、小于最大耐受剂量的50%、小于最大耐受剂量的45%、小于最大耐受剂量的40%、小于最大耐受剂量的35%、小于最大耐受剂量的30%、小于最大耐受剂量的25%、小于最大耐受剂量的20%、小于最大耐受剂量的15%、小于最大耐受剂量的10%、小于最大耐受剂量的5%、小于最大耐受剂量的2%或小于最大耐受剂量的1%。在某些实施方式中，DMB的总日剂量小于约100mg/kg、小于约90mg/kg、小于约80mg/kg、小于约70mg/kg、小于约60mg/kg、小于约50mg/kg、小于约40mg/kg、小于约35mg/kg、小于约30mg/kg、小于约25mg/kg、小于约20mg/kg或小于约10mg/kg。在一些实施方式中，所述总日剂量为约 100mg/kg、约 90mg/kg、约 80mg/kg、约 70mg/kg、约 60mg/kg、约 50mg/kg、约 40mg/kg、约 35mg/kg、约 30mg/kg、约 25mg/kg、约 20mg/kg、约 10mg/kg 或约 5mg/kg。在具体的实施方式中，所述总日剂量小于约40mg/kg。在一些实施方式中，血浆浓度不超过90 ii g/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，DMB的平均血浆浓度小于150 u g/mL、小于140 u g/mL、小于130 u g/mL、小于120 u g/mL、小于 110 ii g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于 40 u g/mL、小于 30 u g/mL、小于 20 u g/mL 或小于 15 u g/mL。在某些实施方式中，所述受试者被诊断患有血液病症。在其他实施方式中，所述受试者被诊断患有贫血。在一些实施方式中，所述血液病症为镰状细胞病。在其他实施方式中，所述血液病症为3地中海贫血病症或综合征。在某些实施方式中,所述3地中海贫血病症或综合征为中间型P地中海贫血。在一些实施方式中,所述P地中海贫血为重型3地中海贫血。在某些实施方式中,所述P地中海贫血为轻型P地中海贫血(P地中海贫血特征)。在一些实施方式中,所述P地中海贫血为HbE ^地中海贫血。在某些实施方式中，所述P地中海贫血为HbS &地中海贫血。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在其他实施方式中，受试者血液中的总胎儿血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是牲畜。在一些实施方式中，所述牲畜是马。在某些实施方式中，所述哺乳动物是人。在一些实施方式中，所述人是儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。在一些实施方式中，给予DMB在与生物活性有关的浓度不抑制红细胞生成。在某些实施方式中，给予DMB刺激细胞增殖。在一些实施方式中，给予DMB抑制红系祖细胞的细胞凋亡。在进一步的实施方式中，给予DMB刺激红系细胞增殖和存活。在一些实施方式中，给予DMB刺激红系细胞增殖。在某些实施方式中，给予DMB刺激红系细胞存活。在一些实施方式中，给予DMB刺激红细胞生成。在某些实施方式中，给予DMB导致镰状血细胞存活更久。在一些实施方式中，给予DMB刺激红细胞生成。在某些实施方式中，给予DMB诱导胎儿珠蛋白基因启动子的表达。在一些实施方式中，给予DMB提高胎儿珠蛋白水平。在某些实施方式中，给予DMB增加RBC生成。在一些情况中，增加的RBC生成通过网织红细胞、总血红蛋白(Hgb)和红细胞比容(Hct)来进行分析。
在某些实施方式中，给予DMB增加受试者血液中的胎儿珠蛋白的量。在一些实施方式中，给予DMB增加受试者血液中的胎儿血红蛋白的量。在某些实施方式中，给予DMB增加受试者血液中的总血红蛋白的量。在一些实施方式中，给予DMB增加受试者血液中的网织红细胞百分比。在某些实施方式中，给予DMB增加受试者血液中的网织红细胞的数目。在一些实施方式中，给予DMB增加红细胞比容。与羟基脲相反，在增加％HbF方面，DMB在低于最大耐受剂量的总日剂量有效。在一些情况下，给予DMB并不需要小心的剂量调整(为目前使用羟基脲的治疗所需)。此外，在某些情况下，在增加患有血液病症的受试者血液中的ffiF百分比方面，DMB出乎意料地在低的日剂量比在接近MTD的更高日剂量更为有效(参见实施例12)。此外，在增加HbF百分比方面有效的DMB总日剂量明显低于其他SCFAD(如丁酸精氨酸)所需要的剂量，使得能够口服给予DMB。通过将丁酸精氨酸给予3地中海贫血患者来增加HbF百分比和治疗P地中海贫血需要500-750mg/kg/天的总日剂量，在大多数情况下必须每天输注10-16小时。相反,在一些情况下,DMB的总日剂量仅为5-40mg/kg/天,这在大多数情况下能够口服给予。此外，在一些实施方式中，仅为5-40mg/kg/天的DMB总日剂量刺激红系细胞增殖和/或存活，使得总血红蛋白水平升高。在本文所述方法的一些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2-二甲基丁酸钠进行给予。2，2-二甲基丁酸类物质包括但不限于2，2-二甲基丁酸、2，2-二甲基丁酸钠、2，2- 二甲基丁酸钾、2，2- 二甲基丁酸镁、2，2- 二甲基丁酸钙、2，2- 二甲基丁酸精氨酸、2，2- 二甲基丁酸赖氨酸、2，2- 二甲基丁酸胆碱、2，2- 二甲基丁酸甲酯(2，2- 二甲基丁酸甲基酯)、2，2- 二甲基丁酸乙酯、2，2- 二甲基丁酸丙酯或2，2- 二甲基丁酸异丙酯。在本文所述方法的某些实施方式中，每天给予DMB。在进一步的实施方式中，给予是连续的。在一些实施方式中，给予DMB通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB脉冲约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，在受试者的一生中进行给予。在一些实施方式中，每隔一天给予DMB。在某些实施方式中，脉冲式给予包括每周约5天给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约5天，随后约2天不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约I周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约I周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在进一步的实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些情况下，相比于将DMB给予具有不同基因型的P地中海贫血的受试者，将 DMB给予具有一种基因型的3地中海贫血的受试者在升高％HbF方面更有效。本文进一步提供下述方法，所述方法包括诊断患者的P地中海贫血的基因型；考虑P地中海贫血的基因型后确定治疗计划；以及任选地增加患者血液中的胎儿血红蛋白百分比，包括向所述患者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量。本文还提供用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括以至多约 lmg/kg、约 2mg/kg、约 5mg/kg、约 10mg/kg、约 15mg/kg、约 20mg/kg、约 25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg或约40mg/kg的单位剂量向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB的口服制剂。本文进一步提供增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括提供胶囊剂或片剂形式的单位剂量，所述胶囊剂或片剂包含:约2000mg、约1750mg、约1500mg、约 1250mg、约 lOOOmg、约 900mg、约 800mg、约 750mg、约 700mg、约 600mg、约 500mg、约 400mg、约 300mg、约 250mg、约 200mg、约 175mg、约 150mg、约 125mg、约 lOOmg、约 75mg 或约50mg的DMB、或其药学上可接受的盐或酯；以及药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，单位剂量与一种或多种赋形剂(例如，乳糖、纤维素、乙醇酸盐/酯和/或硬脂酸镁)一起配制在明胶胶囊中。每单位剂的毫克数可表示游离酸形式的DMB或者盐或酯形式的DMB。本文还提供用于使被诊断患有血液病症的人的血液中胎儿血红蛋白百分比增加的方法,所述方法包括向所述受试者给予DMB钠,其中DMB钠的总日剂量小于80mg/kg/天，并且其中在给予后，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加。本文进一步提供下述方法，所述方法包括诊断患者的P地中海贫血综合征的类型；考虑3地中海贫血综合征的类型后确定治疗计划；以及任选地增加患者血液中的胎儿血红蛋白百分比，包括向所述患者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量。接受任一种本文所述DMB制剂的受试者还接受一种或多种以下治疗羟基脲、地西他滨、叶酸、阿片样物质(opioids)、止痛剂、抗生素、多种形式的红细胞生成素、或HDAC抑制剂。因此，本发明考虑了对患有血液病症的受试者进行治疗的下述方法以本文所述的剂量水平和/或剂量单位将任一种本文所述DMB制剂和一种或多种其他的治疗剂给予所述受试者，上述治疗剂例如选自于由羟基脲、地西他滨、叶酸、阿片样物质、止痛剂、抗生素、多种形式的红细胞生成素、和HDAC抑制剂所组成的组中的任一种，但不限于此。本文使用的术语“受试者”是脊椎动物，优选哺乳动物，更优选灵长类动物，进一步更优选人类。哺乳动物包括但不限于人类、灵长类动物、野生动物、野化动物(feralanimals)、家畜(farm animals)、运动动物和宠物。在某些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，所述哺乳动物为牲畜。在某些实施方式中，所述牲畜为马。在具体的实施方式中、所述哺乳动物为人。在一些实施方式中，所述人为儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。Freireich 等人在 Cancer Chemother Rep 50:219 (1966)中描述了用于动物和人类的剂量的相互关系(基于毫克每平方米体表面)。体表面积可根据患者的高度和重量大体上确定。参见例如 Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardley,N. Y. , 1970, 537。
治疗方法在有些情况下，直接通过与常规药物(例如，用于某些血液病症的羟基脲、HDAC抑制剂或促红细胞生成素)进行比较来测定血液病症对本发明所述治疗方法的响应性，或是基于对疾病病因和发展的理解进行推断。例如，有许多本领域广泛接受的、作为体内效应预测的HbF表达分析系统。因此，这些分析中本发明所述治疗方法产生诱导HbF表达的表现是这些药物用于治疗S⑶和/或地中海贫血(即血液病症)的临床应用的证据。在本发明的一个实施方式中，“治疗”是指对S⑶和/或地中海贫血(即血液病症)或它们的至少一种可觉察的(discernible)症状进行改善。在另外的实施方式中，“治疗”是指对患者未必能觉察的至少一个可测定的物理参数进行改善。在又一个实施方式中，“治疗”是指抑制SCD和/或地中海贫血(即血液病症)的发展，可以在身体方面(例如可觉察的症状得以稳定)或生理方面(例如物理参数得以稳定)或者两方面都得到抑制。在又一个实施方式中，“治疗”是指使SCD和/或地中海贫血(即血液病症)或它们的症状延迟发作。在用于人类之前，根据本发明的方法所给予的组合物能够在体外或体内分析所需的治疗或预防活性。在有些情况下，用动物模型系统来证实本发明所述化合物的安全性和有效性。不希望受理论的限制，相信实施本发明所述治疗方法的结果是诱导基因表达(例如，胎儿血红蛋白表达)，因而实现治疗或预防S⑶和/或地中海贫血(即血液病症)。然而，应当注意所述治疗方法可能通过次要活性或不同活性发挥它们的作用，例如但不限于刺激造血作用、红细胞生成以及提高正常干细胞的自我更新。本文提供用于治疗受试者血液病症的方法，所述方法包括向所述受试者给予a)作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2-二甲基丁酸类物质(DMB);以及b)选自于由羟基脲、地西他滨或HDAC抑制剂所组成的组中的一种或多种药剂。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I周后增加。在其他的实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予2周后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予4周后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I天后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予3天后增加。在一些用于治疗受试者血液病症的方法的实施方式中，所述血液病症是贫血。在某些实施方式中，所述血液病症是镰状细胞综合征。在一些实施方式中，所述血液病症是3地中海贫血综合征。在一些实施方式中，2，2- 二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠给予。在某些实施方式中，口服给予DMB。在一些实施方式中，HDAC抑制剂为MS-275。在某些实施方式中，口服给予所述的一种或多种药剂。在一些实施方式中，口服给予DMB和所述的一种或多种药剂。在某些实施方式中，以结合口服剂型给予DMB和所述的一种或多种试剂。在一些实施方式中，DMB的总日剂量小于100mg/kg、小于90mg/kg、小于80mg/kg、小于 70mg/kg、小于 60mg/kg、小于 50mg/kg、小于 40mg/kg、小于 30mg/kg、小于 20mg/kg 或小于10mg/kg。在某些实施方式中，平均血浆浓度不超过90 u g/mL DMB的浓度。在一些实施方 式中，DMB的平均血浆浓度小于300 u g/mL、小于250 u g/mL、小于200 u g/mL、小于150 u g/mL、小于 140 u g/mL、小于 130 u g/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 u g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 ii g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于 40 u g/mL、小于 30 u g/mL、小于 20 u g/mL、小于 15 u g/mL、小于 10 u g/mL 或小于 5 u g/mL。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的F-细胞的数目增加。在某些实施方式中，受试者血液中的F-网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。
在一些实施方式中，给予DMB通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予DMB的脉冲约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式中，在受试者的一生中进行给予。在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是牲畜。在一些实施方式中，所述牲畜是马。在某些实施方式中，所述哺乳动物是人。在一些实施方式中，所述人是儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。本文进一步提供用于治疗受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量不多于40mg/kg。在一些实施方式中，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予后增加。在某些实施方式中，所述受试者已被诊断患有P地中海贫血。在一些实施方式中，DMB的总日剂量小于约40mg/kg、小于约35mg/kg、小于约30mg/kg、小于约25mg/kg、小于约20mg/kg、小于约15mg/kg或小于约 10mg/kg。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I周后增加。在其他实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予2周后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予4周后增加。在一些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予I天后增加。在某些实施方式中，与基线相比，受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比在给予3天后增加。在某些实施方式中，用于治疗受试者的方法进一步包括向所述受试者给予羟基脲、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合。在某些实施方式中，所述HDAC抑制剂为MS-275。在一些实施方式中，2，2- 二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠进行给予。在 某些实施方式中，DMB的给予通过口服给予进行。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 U g/mL DMB的浓度。在其他的实施方式中，所述血浆浓度不超过120 ii g/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过150 u g/mL DMB的浓度。在一些实施方式中，DMB的最大血浆浓度小于300 u g/mL、小于 250 u g/mL、小于 200 u g/mL、小于 180 u g/mL、小于 170 u g/mL、小于 160 u g/mL、小于 150 u g/mL、小于 140 u g/mL、小于 130 u g/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 u g/mL、小于
100u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于 70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于40 ii g/mL、小于30 ii g/mL或小于20 ii g/mL。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过90 ii g/mL DMB的浓度。在其他的实施方式中，所述血浆浓度不超过120 y g/mL DMB的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过150 ii g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过200 u g/mL的浓度。在某些实施方式中，DMB的血浆浓度不超过250 u g/mL的浓度。在一些实施方式中，DMB的血浆浓度为20 u g/mL到90 u g/mL、或25 u g/mL 到 120 V- g/mL>30 u g/mL 到 150 u g/mL、或 30 u g/mL 到 250 u g/mL。在某些实施方式中，AUC 小于 3500h* u g/mL、小于 3000h* u g/mL、小于 2500h* u g/mL、小于 2000h* u g/mL、小于1500h* u g/mL、小于 1000h*ii g/mL、或小于 500h* u g/mL。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的F-细胞的数目增加。在某些实施方式中，受试者血液中的F-网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。在一些实施方式中，DMB的给予通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约8周，随后约4周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约6周，随后约2周不给予DMB。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约4周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予DMB约2周，随后约2周不给予DMB。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予DMB的脉冲约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予DMB的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式中，在受试者的一生中进行给予。本文还提供用于治疗受试者血液病症的方法，该方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2-二甲基丁酸类物质(DMB)，其中2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量小于最大耐受剂量。本文还提供用于治疗受试者血液病症的方法，该方法包括向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB，其中DMB的总日剂量小于最大耐受剂量的80%，并且其中所述受试者血液中的总血红蛋白百分比在给予后增力口。在一些实施方式中，所述血液病症是镰状细胞病。在其他的实施方式中，所述血液病症是@地中海贫血。在一些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2-二甲基丁酸钠进行给予。在某些实施方式中，口服给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
在一些实施方式中，所述的方法进一步包括向所述受试者给予羟基脲、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合。在某些实施方式中，所述HDAC抑制剂为MS-275。在一些实施方式中，2，2- 二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠进行给予。在某些实施方式中，口服给予2，2- 二甲基丁酸类物质。在一些实施方式中，所述受试者已被诊断患有血液病症，所述血液病症是贫血。在一些实施方式中，所述血液病症是镰状细胞综合征。在其他的实施方式中，所述血液病症是^地中海贫血病症或综合征。在某些实施方式中，所述3地中海贫血病症或综合征是中间型@地中海贫血。在一些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量大于最大耐受剂量的25%并小于最大耐受剂量的75%。在其他的实施方式中，2，2- 二甲基丁酸类物质的总日剂量小于最大耐受剂量的80%、小于最大耐受剂量的75%、小于最大耐受剂量的70%、小于最大耐受剂量的65%、小于最大耐受剂量的60%、小于最大耐受剂量的55%、小于最大耐受剂量的50%、小于最大耐受剂量的45%、小于最大耐受剂量的40%、小于最大耐受剂量的35%、小于最大耐受剂量的30%、小于最大耐受剂量的25%、小于最大耐受剂量的20%、小于最大耐受剂量的15%、小于最大耐受剂量的10%、小于最大耐受剂量的5%、小于最大耐受剂量的2%或小于最大耐受剂量的1%。在某些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量小于80mg/kg、小于60mg/kg、小于40mg/kg、小于30mg/kg、小于20mg/kg或小于10mg/kg。在一些实施方式中，平均血浆浓度不超过90 ii g/mL 2，2-二甲基丁酸类物质的浓度。在某些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质的平均血浆浓度小于150 ii g/mL、小于140 y g/mL、小于130 yg/mL、小于 120 u g/mL、小于 110 u g/mL、小于 100 u g/mL、小于 90 u g/mL、小于 80 u g/mL、小于70 u g/mL、小于 60 u g/mL、小于 50 u g/mL、小于 40 u g/mL、小于 30 u g/mL、小于 20 u g/mL、小于 15 ii g/mL、小于 10 u g/mL 或小于 5 u g/mL。在某些实施方式中，受试者血液中的胎儿珠蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。在某些实施方式中，受试者血液中的总血红蛋白的量增加。在一些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞百分比增加。在某些实施方式中，受试者血液中的网织红细胞的数目增加。在一些实施方式中，血细胞比容增加。在某些实施方式中，红细胞生成增加。在一些实施方式中，2，2-二甲基丁酸类物质的给予通过脉冲式给予进行。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予2，2- 二甲基丁酸类物质约8周，随后约4周不给予2，2-二甲基丁酸类物质。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约6周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。在某些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予2，2- 二甲基丁酸类物质约4周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。在一些实施方式中，所述脉冲式给予包括给予2，2- 二甲基丁酸类物质约2周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。在一些实施方式中，脉冲式给予包括给予2，2- 二甲基丁酸类物质的脉冲约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在某些实施方式中，脉冲式给予包括不给予2，2- 二甲基丁酸类物质的间隔约I天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约10天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约9个月、约12个月。在一些实施方式中，给予是连续的。在某些实施方式 中，在受试者的一生中进彳丁给予。在一些实施方式中，所述受试者是哺乳动物。在某些实施方式中，所述哺乳动物是牲畜。在一些实施方式中，所述牲畜是马。在某些实施方式中，所述哺乳动物是人。在一些实施方式中，所述人是儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。接受任一种本文所述2，2- 二甲基丁酸类物质制剂的受试者还可接受一种或多种下列治疗羟基脲、地西他滨、叶酸、阿片样物质、止痛剂、抗生素、多种形式的红细胞生成素。因此，本发明考虑了对患有血液病症的受试者进行治疗的下述方法以本文所述的剂量水平和/或剂量单位将任一种本文所述2，2- 二甲基丁酸类物质制剂和一种或多种其他的治疗剂给予所述受试者，上述治疗剂例如选自于由羟基脲、地西他滨、叶酸、阿片样物质、止痛剂、抗生素和多种形式的红细胞生成素所组成的组中的任一种，但不限于此。本文还提供了治疗受试者血液病症的方法，所述方法包括以至多5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg的单位剂量向所述受试者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB的口服制剂。在一些实施方式中，向患有血液病症的患者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB的口服制剂，总日剂量至多100mg/kg/天、至多90mg/kg/天、至多80mg/kg/天、至多70mg/kg/天、至多60mg/kg/天、至多50mg/kg/天、至多40mg/kg/天、至多30mg/kg/天、至多20mg/kg/天、至多15mg/kg/天、至多IOmg/kg/天或至多5mg/kg/天。本文还提供一种治疗受试者血液病症的方法，该方法包括提供胶囊剂或片剂，所述胶囊剂或片剂包含约2000mg、约1750mg、约1500mg、约1250mg、约lOOOmg、约900mg、约800mg、约 750mg、约 700mg、约 600mg、约 500mg、约 400mg、约 300mg、约 250mg、约 200mg、约175mg、约150mg、约125mg、约100mg、约75mg或约50mg的DMB或其药学上可接受的盐或酯；
以及药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，单位剂量与一种或多种赋形剂(例如，乳糖、纤维素、乙醇酸盐/酯和/或硬脂酸镁)一起配制在明胶胶囊中。每单位剂量的毫克数可表示游离酸形式的DMB或者盐或酯形式的DMB。本发明的方法可进一步包括监控受试者的步骤，例如监控任何与临床结果改善相关的参数。可在一个或多个下列期间监控受试者在治疗开始之前；在治疗期间；或在治疗的一个或多个要素已经给予之后。监控可用来评价对采用根据本发明所述方法给予的组合物作进一步治疗的需要，或评价对采用另外的药剂作额外治疗的需要。可以记录有关监控的信息，例如以电子或数字的形式。本文公开的方法可与一种或多种另外的治疗形式结合使用，所述另外的治疗形式包括但不限于外科手术、放射疗法和化学疗法。结合疗法在某些实施方式中，将药物组合物进行单独给予，或与其他已知的用于治疗受试 者(例如哺乳动物)血液病症的组合物进行结合给予。在一些实施方式中，哺乳动物包括猫、犬、猪、马、牛、大鼠、小鼠、猴子、黑猩猩、狒狒和人类。在具体的实施方式中，所述哺乳动物是人类。在一些实施方式中，所述人类是儿童。在某些实施方式中，所述人的年龄在18岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在10岁以下。在一些实施方式中，所述人的年龄在2岁以下。在一个实施方式中,所述受试者患有血液病症。在另一个实施方式中，所述受试者处于患有血液病症的风险中。用语“与已知的组合物结合”意在包括同时给予本发明的组合物和已知的组合物；首先给予本发明的组合物，随后给予已知的组合物；首先给予已知的组合物，随后给予本发明的组合物。本领域已知的任何用于治疗血液病症的组合物可用于本发明的方法中。本文进一步描述了如下发现2，2-二甲基丁酸钠(DMB钠)连同羟基脲(HU)、地西他滨和/或组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂显示出加合活性和/或协同活性。简言之，已发现DMB在与羟基脲(HU)、地西他滨或组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂一起给予时能诱导较高的Y-珠蛋白表达水平。因此，一方面，本发明针对用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白的方法，该方法包括向所述受试者给予包含作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB以及羟基脲的药物组合物。另一方面，本发明针对用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白的方法，该方法包括向所述受试者给予包含作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB以及地西他滨的药物组合物。另一方面，本发明针对用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白的方法，该方法包括向所述受试者给予包含作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB以及HDAC抑制剂的药物组合物。在又一个方面，本发明针对用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白的方法，该方法包括向所述受试者给予包含以下物质的药物组合物i)作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB ；以及ii)羟基脲、地西他滨和/或HDAC抑制剂。在本发明所述方法的一个实施方式中，HDAC抑制剂是MS-275。另外一个方面，本发明针对用于治疗受试者血液病症的方法，该方法包括向所述受试者给予包含作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB以及羟基脲的药物组合物。另一方面，本发明针对用于治疗受试者血液病症的方法，该方法包括向所述受试者给予包含作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB以及地西他滨的药物组合物。另一方面，本发明针对用于治疗受试者血液病症的方法，该方法包括向所述受试者给予包含作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB以及HDAC抑制剂的药物组合物。另一方面，本发明针对用于治疗受试者血液病症的方法，该方法包括向所述受试者给予包含以下物质的药物组合物i)作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的DMB ;以及ii)羟基脲、地西他滨和/或HDAC抑制剂。在本发明所述方法的一个实施方式中，HDAC抑制剂是MS-275。在本发明所述方法的一个实施方式中，所述血液病症是地中海贫血。在另一个实施方式中，所述地中海贫血选自重型0地中海贫血、中间型地中海贫血和血红蛋白EP地中海贫血。在一些实施方式中，除了将DMB用于治疗血液病症，还伴随给予其他的药物和营养品化合物。例如，对患有镰状细胞病的人给予DMB和羟基脲(以降低疼痛的发生)、叶酸补充物(用于血细胞生成)、阿片样物质或止痛剂(用于疼痛管理)和/或抗生素(用于治疗继发性感染)。在进一步的实施方式中，用于治疗血液病症的DMB给予与天然或合成的红细胞生成素的给予相结合。在某些情况下，DMB和第二药剂伴随治疗同时进行，或在不同方案计划中进行。DMB是生物可口服利用的化合物，该化合物以良好的耐受剂量具有活性。DMB不是 全面的HDAC抑制剂，而是延长STAT-5活化的温和的红细胞生成刺激剂。此外，DMB在包括灵长类动物在内的多个物种中特性良好，半衰期为9-11小时，并且在正常的志愿者中具有良好的安全特性。在一些情况下，当将羟基脲(HU)和DMB给予贫血狒狒并分析Y _珠蛋白mRNA时，Y-珠蛋白mRNA随DMB剂量的增加而增加。在顺序地给予HU (3天/星期)进行治疗的狒狒体内，Y -珠蛋白mRNA在基线以上增加了 80-120%，DMB的治疗使Y -珠蛋白mRNA在基线以上增加了 290% ;而用HU和DMB两种药剂结合进行治疗时，使Y-珠蛋白mRNA增加了360%。与单独给予HU或DMB相比，HU和DMB —起给药时，观察到Y -珠蛋白mRNA明显更大的增加(图I)。在更进一步的情况下，在红系祖细胞的培养物中以结合方式评价了 HbF诱导物，当DMB和地西他滨一起给药时，观察到了加合效应(图2)。在Bfu-e培养物中，比较DMB在有无地西他滨时的情况，F-细胞在用DMB单独处理的培养物中在基线以上增加了 32-71%，单独用西他滨处理时增加了 66-104%，而用二种药剂的结合处理时在对照培养物中的F-细胞水平上增加了 147%。在一些情况下，当DMB和HDAC抑制剂一起给药时，在诱导Y -珠蛋白mRNA方面观察到了显著的协同效应。该增加比任一试剂单独给药大数倍(图3)。在一些实施方式中，DMB作为不抑制红系细胞增殖的双效口服Y-珠蛋白诱导物，当与HU、地西他滨或HDAC抑制剂结合时，具有加合活性或协同活性。在某些实施方式中，DMB与HU、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合相结合进行给予，用于治疗血液病症。在一些实施方式中，所述血液病症为镰状细胞病。在其他的实施方式中，血液病症是地中海贫血。在某些实施方式中，DMB与HU、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合相结合进行给予，用于增加受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比。在其他的实施方式中，所述结合用于增加受试者血液中的总血红蛋白、血细胞比容或血细胞。在一些实施方式中,本文所述的方法包括向受试者给予有效量的DMB和有效量的一种或多种其他治疗剂。在本发明的一个将另一种治疗剂给予受试者的实施方式中，根据本发明的方法给予的、包含DMB的组合物的有效量小于不给予另一种治疗剂时的有效量。在另一个实施方式中，另一种治疗剂的有效量小于在不给予根据本发明的方法给予的组合物时的有效量。在本文描述的一些方面中，所述方法包括另外的治疗形式。在一些实施方式中，所述另外的治疗形式为HDAC抑制剂。在某些实施方式中，所述另外的治疗形式为地西他滨。在另外的实施方式中，所述另外的治疗形式为羟基脲。地西他滨(5-氮杂-2'-脱氧胞苷)为核苷类似物药物一一种模拟DNA天然组分的药物。地西他滨和相关化合物5-氮杂胞苷在核苷类似物药物大家族中是独一无二的，因为它可与DNA甲基-转移酶I (DNMTl)结合并使其减少(cbplete)。DNMTl是在阻遏(repress)基因的机构(machinery)中起关键和核心作用的酶。体内大多数细胞(包括癌细胞或血液病症细胞，例如镰状细胞)包含相同的整套基因(complement of genes)。因此，细胞的功能和特化由这些基因中哪个开启(活化)和哪个关闭(阻遏)来决定。活化是指基因所编码的蛋白的表达，而基因的阻遏意味着基因所编码的蛋白以较低水平表达或根本不 表达。因此，改变细胞内DNMTl的水平可以对基因表达的模式、细胞的功能和特化产生巨大影响。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC抑制剂)是一类干扰组蛋白去乙酰化酶功能的化合物，被考虑作为另外的药剂用于结合疗法。HDAC抑制剂包括但不限于异羟肟酸类(例如，曲古抑菌素A)、环四肽类(例如，trapoxin B)、缩酚酸肽类(例如，罗咪酯肽)、苯甲酰胺类、亲电的酮类、脂肪酸化合物(例如，苯基丁酸类物质、丙戊酸)、SAHA/伏立诺他、FK228、Belinostat/PXDlOl、帕比司他、MS-275、LAQ824/LBH589、CI994、MGCD0103、烟酰胺、NAD 衍生物、二氢香豆素、萘并卩比喃酮(naphthopyranone)和2_轻基萘甲醒。在一些实施方式中，DMB在与羟基脲、地西他滨或HDAC抑制剂结合时具有加合的ffiF-诱导活性。在一些情况下，需要多种药剂克服P重型地中海贫血。在某些实施方式中，具有互补分子机制(complementary molecular mechanisms)的药剂比单独一种药剂诱导出更高的Y-珠蛋白表达水平。理想情况下，抑制细胞增殖的药剂不与结合疗法一起使用。参考本文公开的方法，术语“结合”是指利用一种或多种另外的药剂或疗法来治疗同一名患者，其中所述药剂或疗法的使用或作用在时间上重叠。另外的药剂或疗法可以在给予根据本发明所述方法给予的组合物的同时给予，或按任何次序顺序地给予。顺序给予是在不同的时间进行给予。一种药剂与另一种药剂给予之间的时间可以是数分钟、数小时、数天或数周。本申请文件中公开的所有特征能够以任意组合的方式相结合。本申请文件中公开的每个特征可被用于相同、等同或类似目的的替代特征所替换。因此，除非另外明确指明，所公开的每个特征仅是等同或类似特征的上位系列的实例。根据上述描述和接下来的实施例，本领域技术人员可容易地确定本发明的本质特征，并且在不背离其精神和范围的情况下，可以对本发明作出各种改变和改进以使其适应于各种用法和条件。例如，本发明的化合物可用作研究工具(例如，用于分离进行药物发现的新目标)。所述化合物例如可以进行放射性同位素标记，用于组织或器官成像或用于形成生物缀合物用于亲合力分析。本发明所述化合物和组合物的这些及其他用途和实施方式对于本领域普通技术人员而言将会是显而易见的。
结合疗法可以包括给予降低其他疗法副作用的药剂。结合疗法还可以包括给予降低其他疗法给予频率的药剂。本领域技术人员将会理解和明了有用的结合疗法。上述结合疗法的潜在优点包括能使用较少的每种单独活性成分来使毒副作用最小、协同提高功效、提高给予或使用的方便性和/或降低化合物制备或制剂的总体费用。药物组合物在一些实施方式中，根据被治疗的受试者的体重、体表面积和病状，根据本发明所述方法给予的药物组合物以有效剂量进行口服给予。在一些情况下，根据被治疗的受试者的物种、对所述药剂的个体反应以及所选取的药物制剂的种类和进行给予的时间和间隔来发生变化。在一些实施方式中，根据本发明所述方法给予药物组合物以单剂量的或多剂量进行。例如，所述组合物可以以各种不同的剂型进行给予，即，可与各种药学上可接受的惰性载体以片剂、糖衣剂(dragees)、胶囊剂、锭剂(lozenges)、锭剂(troches)、硬糖剂、水性悬浮剂、酏剂、糖浆剂等形式相结合。上述载体包括固体稀释剂或填充剂、无菌水性介质和各 种无毒的有机溶剂等等。此外，口服的药物组合物可适当地加甜和/或调味。 在某些实施方式中，本发明的药物组合物适于口服。适用于口服的药物组合物可为胶囊剂、片剂、丸剂、锭剂(lozenges)、扁囊剂(cachets)、糖衣剂、粉末、颗粒的形式；或作为处于水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油或油包水的液体乳剂；或作为酏剂或糖浆剂等；每个包含预定量的本发明的化合物作为活性成分。当打算以固体剂型(g卩，作为胶囊剂、片剂、丸剂等)口服给予时，本发明所述的药物组合物通常包含作为活性成分的本发明所述化合物；以及一种或种多药学上可接受的载体，例如柠檬酸钠或磷酸二I丐(dicalcium phosphate)。作为任选或替代,上述的固体剂型还可包含填充剂或扩充剂(filters or extenders),例如淀粉、微晶纤维素、乳糖、鹿糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐/、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；保湿剂(humectant)，例如甘油；崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐/酯和/或碳酸钠；溶液阻滞剂，例如石蜡；吸收加速剂，例如季铵化合物；润湿剂(wetting agent),例如鲸腊醇和/或单硬脂酸甘油酯；吸收剂，例如高岭土和/或膨润土 ；润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和/或它们的混合物；着色剂；和缓冲剂。类似类型的固体组合物也可用作明胶胶囊中的填充剂；这方面优选的材料还包括乳糖(lactose or milk sugar)以及高分子量聚乙二醇。在希望口服给予水性悬浮剂和/或酏剂时，活性成分可与各种甜味剂或调味剂、色素或染料结合；如果需要的话，还可与乳化剂和/或悬浮剂以及稀释剂(例如水、乙醇、丙二醇、甘油和它们的各种类似组合)一起进行结合。在本发明的药物组合物中还可以存在释放剂(release agents)、润湿剂、包衣齐U、甜味剂、调味剂和增香剂、防腐剂和抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、偏硫酸氢钠(sodiummetabisulfate)、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂,例如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化轻基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、a-生育酚等；以及金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。用于片齐IJ、胶囊齐IJ、丸剂等的包衣剂包括用于肠溶衣的包衣剂，例如邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)、邻苯二甲酸聚醋酸乙烯酯(PVAP)、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三酸醋酸纤维素(CAT)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、琥珀酸醋酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)等。此外，本发明的所述的药物组合物可任选地包含遮光剂，并可进行配制从而使它们仅释放活性成分，或优先地在胃肠道的某部分释放，任选地以延缓的方式进行。可用的嵌入组合物的实例包括聚合物物质以及蜡。活性成分还可以是微囊密封(micro-encapsulated)形式,如果合适，还可以使用一种或多种上述赋形剂。如果需要，还可对本发明的药物组合物进行配制来提供活性成分的缓释或控释，上述配制通过利用例如下述物质不同比例的羟丙基甲基纤维素；或其他的聚合物基质、脂质体和/或微球。可配制包括下述组合物的缓释组合物，在所述组合物中，活性组分用可差别降解的包衣例如通过微囊密封、多层包衣等进行衍生化。应明白的是，用于给定疗法中的活性化合物实际优选的量会根据配制的具体组合物而变化。对于给定的给药计划(protocol)最佳的给予速率,可由本领域技术人员根据前 述指导采用常规的剂量确定试验容易地确定。还应理解的是，关于本发明所述化合物的给予，通常会采取常规上已知的正常防范措施来确保它们在正常使用环境下的功效。尤其是在用于对人类和动物进行体内治疗时，医师应该采取所有合理的防范措施以避免常规上已知的矛盾和有毒影响。本发明所述剂型的组成、形状和种类通常会根据它们的应用而变化。本发明的这方面对于本领域技术人员而言是显而易见的。参见例如，Remington’s PharmaceuticalSciences (1990)第 18 版，Mack Publishing, Eastern Pa。在某些实施方式中，本发明的药物组合物以单位剂型进行包装。术语“单位剂型”或“单位剂量”是指适合于给予患者的、物理上独立的单位，即，每个单位包含预定量的活性齐U，所述活性剂经计算与一种或多种另外的单位结合以产生所希望的治疗效果或单独产生所希望的治疗效果。例如，上述的单位剂型可以是胶囊剂、片剂、丸剂等。还可将单位剂量制备为包含任何有用量的活性成分(例如，DMB钠)。例如，单位剂量可包含每单位剂量10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、llOmg、120mg、125mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、175mg、180mg、190mg、200mg、210mg、220mg、225mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、275mg、280mg、290mg、300mg、310mg、320mg、325mg、330mg、340mg、350mg、360mg、370mg、375mg、380mg、390mg、400mg、410mg、420mg、425mg、430mg、440mg、450mg、460mg、470mg、475mg、480mg、490mg、500mg、510mg、520mg、525mg、530mg、540mg、550mg、560mg、570mg、575mg、580mg、590mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、lOOOmg、I100mg、1200mg>1250mg>1300mg>1400mg>1500mg>1600mg、1700mg、1750mg、1800mg、1900mg、或2000mg的DMB。每单位剂量的毫克数可表示游离酸形式的DMB或者盐或酯形式的Dffi。在一些实施方式中，将单位剂量包装插页(insert)的试剂盒中，所述插页用于就合适的剂量对受试者进行指导。给予可在连续的或非连续的多天重复进行。因此，每天给予可进行2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个或更多个连续天数。例如，每天两次给予10mg/kg的DMB (以20mg/kg的总日剂量),连续给予14天。或者,给予可在多天中进行，但在被I天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天或更多天隔开的非连续天数中进行。例如，在治疗开始后每隔一天进行给予15mg/kg的DMB。在另一情况下，给予DMB每周进行5天。上述的给药方案(dosing regimens)能够基于任何临床上的相关参数为个体患者定制，所述参数包括但不限于毒性、耐受度、副作用、有效性等。实施例至今进行的非临床研究揭露了 DMB具有显著的生物活性以及振奋人心的非临床安全特性。人类红系祖细胞培养物中胎儿珠蛋白表达、红细胞生成以及F-细胞生成(在50-200 u g/mL DMB容易实现)的浓度依赖性增加表明，这种化合物可显著提高血红蛋白病患者的治疗效果。至今，已经在有55名健康受试者的两个I期临床试验中，对DMB进行了评价。此夕卜，已经在有21名中间型地中海贫血患者和25名镰状细胞病患者的两个2期临床试验中，对DMB进行了评价。此外，在几个非临床研究中，对DMB的安全性和功效进行了评价。
表I示出DMB和示例性制剂的某些性能。表I:药学性能和制剂
权利要求
1.一种用于增加受试者血液中胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述受试者给予 a)作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2-二甲基丁酸类物质；以及 b)选自于由羟基脲、地西他滨和HDAC抑制剂所组成的组中的一种或多种药剂； 其中，在给予后，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加。
2.权利要求I所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠进行给予。
3.权利要求I所述的方法，其中所述HDAC抑制剂是MS-275。
4.权利要求I所述的方法，其中所述给予为通过口服给予。
5.权利要求I所述的方法，其中所述受试者已被诊断患有血液病症或贫血。
6.权利要求5所述的方法，其中所述血液病症是镰状细胞综合征。
7.权利要求5所述的方法，其中所述血液病症是3地中海贫血综合征。
8.权利要求I所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量多于最大耐受剂量的25%，且少于最大耐受剂量的75%。
9.权利要求I所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量小于SOmg/kg o
10.权利要求I所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量小于40mg/kg o
11.权利要求I所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量小于20mg/k g o
12.权利要求I所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质的血浆浓度不超过150 u g/mL的浓度。
13.权利要求I所述的方法，其中所述受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。
14.权利要求I所述的方法，其中所述受试者血液中的总血红蛋白的量增加。
15.权利要求I所述的方法，其中所述给予为脉冲式给予。
16.权利要求15所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约8周，随后约4周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
17.权利要求15所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约6周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
18.权利要求15所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约4周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
19.权利要求15所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约2周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
20.权利要求I所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。
21.权利要求20所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
22.权利要求21所述的方法，其中所述人是儿童。
23.一种用于增加受试者血中的胎儿血红蛋白百分比的方法，所述方法包括向所述患者给予作为游离酸、其药学上可接受的盐或酯的2，2-二甲基丁酸类物质；其中2，2-二甲基丁酸类物质的总日剂量不超过40mg/kg;并且其中在给予后，所述受试者血液中的胎儿血红蛋白百分比增加。
24.权利要求23所述的方法，其中所述受试者已被诊断患有P地中海贫血。
25.权利要求23所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者给予羟基脲、地西他滨、HDAC抑制剂或它们的组合。
26.权利要求25所述的方法，其中所述HDAC抑制剂是MS-275。
27.权利要求23所述的方法，其中所述2，2-二甲基丁酸类物质作为2，2- 二甲基丁酸钠进行给予。
28.权利要求23所述的方法，其中所述给予为通过口服给予。
29.权利要求23所述的方法，其中2，2-二甲基丁酸类物质的血浆浓度不超过90 u g/mL的浓度。
30.权利要求23所述的方法，其中所述受试者血液中的胎儿血红蛋白的量增加。
31.权利要求23所述的方法，其中所述受试者血液中的总血红蛋白的量增加。
32.权利要求23所述的方法，其中所述给予为脉冲式给予。
33.权利要求32所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约.8周，随后约4周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
34.权利要求32所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约.6周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
35.权利要求32所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约.4周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
36.权利要求32所述的方法，其中所述脉冲式给予包括给予2，2-二甲基丁酸类物质约.2周，随后约2周不给予2，2- 二甲基丁酸类物质。
全文摘要
本文公开了用于在患有红细胞病症(例如β地中海贫血、镰状细胞病、其他贫血、或失血)的患者体内增加胎儿血红蛋白水平的方法和低剂量方案。通过单独给予2,2-二甲基丁酸类物质(DMB)或者与羟基脲、地西他滨或HDAC抑制剂结合给予，增加胎儿血红蛋白和总血红蛋白水平以及血红细胞计数。治疗能够连续进行至少两周。
文档编号A01N37/10GK102802412SQ201080063016
公开日2012年11月28日 申请日期2010年12月8日 优先权日2009年12月8日
发明者苏珊·珀赖因, 罗纳德·J·贝伦森, 道格拉斯·V·法勒 申请人:海玛奎斯特医药公司, 波士顿大学董事会