专利名称：君白菊组织培养快速繁殖方法
技术领域：
本发明是涉及一种组织培养的技术方法，更具体的说涉及一种君白菊的组织培养快速繁殖方法。2.技术背景君白菊是北京林业大学经过十几年的潜心研究而培育出的优质菊花品种。它的花序直径多为I. 5 4cm，呈现扁球形或球形，外围为多层白色或黄色舌状花，中央为管状花。君白菊气清香，味甘、微苦，花性辛、甘、苦，微寒，具有疏散风热，平肝明目，清咽润喉，护肝正气等医学功效和药用价值。此外，君白菊还是一种优质的饮用茶品种，它是唯一不须使用任何农药的高品质饮用菊花，含有人体保健最需要的17种氨基酸和8种矿物质，无论在营养、口感还是在保健方面都超过了传统茶菊，它的胎菊中维生素E含量高出普通饮用菊花数倍，拥有很好的抗衰老功效。因此，它也被誉为菊之秀，花之魁，绿之宝，作为重要的花卉经济品种，君白菊在食用、药用、保健等方面的开发还具有着很大的潜力。3.
发明内容
本发明的目的是提供一种君白菊组织培养快速繁殖的方法，发明人在开展君白菊组织培养的研究中，从君白菊组织培养的基本过程，包括丛生芽诱导、叶片愈·伤组织诱导、不定芽分化、不定芽生根等阶段，筛选出最佳培养基，使君白菊实现了有效繁殖，从而达到本发明的目的。本发明提出的君白菊组织培养快速繁殖方法包括下述培养阶段a)带芽茎段的选择与消毒灭菌选择室内盆栽君白菊植株作为待选外植体材料，每天浇水一次，每月用2%。的NaClO消毒液对植株进行消毒一次。选取健壮无病虫害的茎，剪取顶端以下3-4个幼嫩的带腋芽的茎段作为外植体材料。首先对带芽茎段材料进行初步灭菌，用75%酒精浸润材料30S后，迅速用无菌水冲洗4次，然后再用3% -5% NaClO溶液消毒5min (优选4% )，灭菌时不停的振荡消毒液使其与材料充分接触，消毒结束后用无菌水冲洗4次，待接种。b)丛生芽诱导阶段将消毒后的带芽茎段接种于诱导培养基上，正常培养15-20天后，可产生不定芽。所述诱导培养基为以MS培养基为基本培养基，附加6-BA 3. Omg. Γ1,NAAO. 5mg. L-1 ;另添加琼脂 7g. L—1,鹿糖 25g. L'c)叶片的愈伤组织诱导阶段将b)中带芽茎段丛生芽诱导中形成的无菌叶片切成O. 5cmX0. 5cm左右的小块，作为叶片不定芽再生诱导的外植体，接种到愈伤组织诱导培养基中。正常培养15-20天后产生大量愈伤组织。所述诱导培养基为以MS培养基作为基本培养基，附加 6-BA 5. Omg. L-1，NAA I. Omg. L—1，另添加琼脂 7g. L—1，蔗糖 25g. L-1。d)不定芽诱导分化阶段将c)中诱导出的良好的愈伤组织切成I. 5cmX I. 5cm的小块接种于分化培养基中，正常培养15-20天后在愈伤组织中有不定芽产生。上述分化培养基为以MS培养基作为基本培养基，添加6-BA 3. Omg. L_\ ΝΑΑ0. 5mg. L_\另添加琼脂7g. L—1,鹿糖 25g. L'e)生根培养阶段将丛生芽诱导和愈伤组织分化形成的不定芽切割成约I. 5-2. Ocm的带腋芽小茎段接种于生根培养基中，25-30天后生成不定根。上述生根培养基为以1/2MS为基本培养基附加I. Omg. PlBA。上述步骤中正常培养的条件为室温25±2°C，空气相对湿度60%左右，光照强度为2000-30001x，光周期为光培养16h、暗培养8h。
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附图I空白对照生长附图2丛生芽诱导附图3不定芽分化附图4不定芽诱导生根
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具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。 实施例I选取室内盆栽君白菊植株的带芽茎段为外植体，用75%酒精对其进行灭菌15-30S (优选30S)，无菌水冲洗4次后对材料进行初步消毒，再用3% -5% NaClO溶液消毒5min (优选5% )，无菌水冲洗4次后进行全面消毒处理。经此方法灭菌后，外植体污染率低于5%。成活率均高于90%以上。将灭菌后的带芽茎段接种于附加不同生长调节剂的MS培养基中，每瓶接种2-3个，置于室温25±2°C，空气相对湿度60%，光照强度2000-30001x，光培养/16h、暗培养/8h条件下进行培养。1-2天后，腋芽迅速膨大萌发成幼嫩小叶片，95%以上的外植体完成启动生长，经过30天培养后，统计结果(表I)显示，MS+3. Omg. Γ^-ΒΑ+Ο. 5mg. T1NAA中丛生芽诱导效果最好，增殖系数可达5. 5。表I不同生长调节剂对带芽茎段丛生芽诱导的影响
处理号 6-BA (mg/L)NAA(rag/L)增殖系数(平均不定芽数)
66I. 53. 5
44O. 83. 6
55I3. 8
22O. 24. 2
II O. I 4. 5
33O. 55. 5实施例2以丛生芽诱导中形成的无菌叶片作为外植体，切成O. 5cmX0. 5cm左右的小块，接种到附加不同生长调节剂的诱导培养基中培养，培养条件为室温25 ± 2 °C，空气相对湿度60%,光照强度2000-30001x，光培养/16h、暗培养/8h。15天后，在叶片与培养基接触的地方开始有少量的愈伤组织生长，靠近叶柄的地方愈伤组织生长量较大。15-30天时，愈伤组织生长迅速，呈现黄绿色或淡绿色的颗粒状突起，愈伤组织紧实，生长情况较好。统计结果(表2)显示，MS+5. Omg. L—VBA+l. Omg. T1NAA培养基中愈伤组织诱导率最高，达到100%，愈伤量较多。表2不同生长调节剂的MS培养基对愈伤组织诱导的影响
权利要求
1.ー种君白菊组织培养快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤将带芽茎段消毒灭菌后接种进行丛生芽诱导増殖，再将丛生芽生成的无菌叶片切成O. 5cmX0. 5cm的小块进行愈伤组织诱导和不定芽诱导，将上述两种方法获得的不定芽进行生根诱导。
2.根据权利要求I所述的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的带芽茎段消毒灭菌方法包括用75%酒精浸润带芽茎段外植体30S后无菌水冲洗4次，再用3^-5%NaClO溶液浸润带芽茎段外植体并振荡消毒液5min后无菌水冲洗4次。
3.根据权利要求I所述的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的带芽茎段丛生芽诱导培养基为MS+3. Omg.じ16-BA+O. 5mg.じ1NAA。
4.根据权利要求I所述的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述无菌叶片的愈伤组织诱导培养基为MS+5. Omg.じ16-BA+l. Omg.じ1NAA ;不定芽诱导分化培养基为MS+3. Omg.L ^-BA+O. 5mg. L 1NAAq
5.根据权利要求I所述的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述的不定芽生根培 养基为1/2MS+1. Omg.じ1IBA。
6.根据权利要求I所述的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，培养基均添加7g.じ1琼月旨，25g.じ1蔗糖，PH为5. 8-6. 0，高压灭菌121°C 20min，培养条件为室温25±2°C，空气相对湿度60%左右，光照强度为2000-30001X，光周期为光培养16h和暗培养8h。
全文摘要
本发明提供一种君白菊的组织培养与快速繁殖方法。选取君白菊植株的带芽茎段为外植体，消毒灭菌后接种培养。经过丛生芽诱导或诱导丛生芽的叶片产生愈伤组织，再进行愈伤组织的增殖和不定芽分化，最后再将其进行诱导生根的培养，建立了君白菊的无性繁殖体系。本发明首次建立了君白菊的组织培养快速繁殖体系，为君白菊进一步经济、生态等综合价值的开发和利用提供了技术保障。
文档编号A01H4/00GK102845302SQ20111017391
公开日2013年1月2日 申请日期2011年6月27日 优先权日2011年6月27日
发明者贾忠奎, 怀慧明, 马履一, 张东升 申请人:北京林业大学