专利名称：一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种昆虫病原线虫的活体培养方法。
背景技术：
昆虫病原线虫(Entomopathogenic Nematode, EPN)是害虫的重要天敌，具有广泛的寄主昆虫，是目前害虫生物防治的重要手段。由于昆虫病原线虫能够低成本、高效地大量培养，它的繁殖技术在不断地发展，从活体培养法到离体培养法，从离体培养中的无菌培养法到单菌培养法，单菌培养法又分为固相培养法和液相培养法，使其走向工厂化生产规模。但在实验室研究时一直采用White trap活体繁殖法，即利用线虫的趋水性，当线虫耗尽了寄主体内的有机质时,侵染期线虫(IJs)从寄主尸体内钻出，向水源移动，将含有线虫的水收集起来即得到扩繁后的大量线虫。寄主昆虫多数采用大蜡螟(Galleria mellonellaLinnaeus)和黄粉虫(Tenebrio moIitor),但用大腊螟成本较高,用黄粉虫繁殖出来的线虫产量低，致病力差。
发明内容
本发明的目的要解决现有昆虫病原线虫的活体培养方法存在繁殖成本高或产量低、致病力差的问题，而是提供一种昆虫病原线虫活体繁殖方法。一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的首先按培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在培养皿A的皿盖中，再将8 12头5龄斜纹夜蛾幼虫放在培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用O. 4mL O. 6mL的5500条/mL 6500条/mL侵染期线虫的水悬液浸润培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至8 12头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于培养皿A皿盖上沿，并在24°C 26°C下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。本发明优点采用本发明生产异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏线虫Steinernema carpocapsae_All,每克寄主繁殖出的侵染期病原线虫数的产量与大蜡螟的产量分别高27% 29%和21% 23%，斜纹夜蛾体积大，体内有机质含量高，繁殖出的线虫产量高，价格又低，降低了活体繁殖成本，通过成本核算可知繁殖上述两种线虫的成本均降低53 %以上，且病原线虫对寄主昆虫的致病力没有下降。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式是一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的首先按培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在培养皿A的皿盖中，再、将8 12头5龄斜纹夜蛾幼虫放在培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用O. 4mL O. 6mL的5500条/mL 6500条/mL侵染期线虫的水悬液浸润培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至8 12头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于培养皿A皿盖上沿，并在24°C 26°C下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。采用本实施方 式生产异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora-NJ和斯氏线虫Steinernema carpocapsae_All,每克寄主繁殖出的侵染期病原线虫数的产量与大腊螟的产量分别高27 % 29 %和21 % 23 %，斜纹夜蛾体积大，体内有机质含量高，繁殖出的线虫产量高，价格又低，降低了活体繁殖成本，通过成本核算可知繁殖上述两种线虫的成本均降低53%以上，且病原线虫对寄主昆虫的致病力没有下降。
具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一的不同点是所述的5500条/mL 6500条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为异小杆线虫Heterorhabditisbacteriophora-NJ和斯氏线虫Steinernema carpocapsae-All。其他与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二之一不同点是所述培养皿A的直径为60mm,所述培养皿B的直径为90mm。其他与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同点是向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水的量为9mL llmL。其他与具体实施方式
一至三相同。采用下述试验验证本发明效果试验一一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的首先按直径为60mm培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在直径为60mm培养皿A的皿盖中，再将10头5龄斜纹夜蛾幼虫放在直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用0. 5mL的6000条/mL侵染期线虫的水悬液浸润直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将直径为60_培养皿A的皿底扣在直径为60mm培养皿A的皿盖上，至10头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去直径为60mm培养皿A皿底，并将直径为60mm培养皿A皿盖置于直径为90mm培养皿B中，然后向直径为90mm培养皿B与直径为60mm培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A皿盖上沿，并在25°C下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。本试验所述的6000条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora—NJ。通过计算可知本试验每克斜纹夜蛾幼虫能繁殖出约5. 6万条异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora—NJ。试验二 一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，具体是按以下步骤完成的首先按直径为60mm培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在直径为60mm培养皿A的皿盖中，再将10头5龄斜纹夜蛾幼虫放在直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用O. 5mL的6000条/mL侵染期线虫的水悬液浸润直径为60mm培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将直径为60_培养皿A的皿底扣在直径为60_培养皿A的皿盖上，至10头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去直径为60mm培养皿A皿底，并将直径为60mm培养皿A皿盖置于直径为90mm培养皿B中，然后向直径为90mm培养皿B与直径为60mm培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A皿盖上沿，并在25°C下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于直径为60mm培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。本试验所述的6000条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为斯氏线虫Steinernema carpocapsae—Allο通过计算可知本试验每克斜纹夜蛾幼虫能繁殖出约6.9万条斯氏线虫Steinernema carpocapsae—All。
权利要求
1.一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于昆虫病原线虫的活体繁殖方法是按以下步骤完成的 首先按培养皿A的皿盖大小裁剪两张中速定性滤纸，并垫在培养皿A的皿盖中，再将8 12头5龄斜纹夜蛾幼虫放在培养皿A皿盖中的中速定性滤纸上，然后采用O. 4mL O. 6mL的5500条/mL 6500条/mL侵染期线虫的水悬液浸润培养皿A皿盖中的中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至8 12头5龄斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，且无菌水的高度低于培养皿A皿盖上沿，并在24°C 26°C下恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫 为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，且收集后补充无菌水，每次补充的无菌水的高度低于培养皿A上沿，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。
2.根据权利要求I所述的一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于所述的5500条/mL 6500条/mL侵染期线虫的水悬液中的线虫为异小杆线虫Heterorhabditisbacteriophora-NJ 和斯氏线虫 Steinernema carpocapsae-All。
3.根据权利要求I或2所述的一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于所述培养皿A的直径为60mm，所述培养皿B的直径为90mm。
4.根据权利要求3所述的一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，其特征在于向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水的量为9mL llmL。
全文摘要
一种昆虫病原线虫的活体繁殖方法，它涉及一种昆虫病原线虫的活体培养方法。本发明的目的要解决现有昆虫病原线虫的活体培养方法存在繁殖成本高或产量低、致病力差的问题。方法首先剪两张中速定性滤纸垫在培养皿A的皿盖中，再放入斜纹夜蛾幼虫，然后采用侵染期线虫的水悬液浸润中速定性滤纸，再将培养皿A的皿底扣在培养皿A的皿盖上，至斜纹夜蛾幼虫全部死亡，然后移去培养皿A皿底，并将培养皿A皿盖置于培养皿B中，然后向培养皿B与培养皿A之间的空隙中注入无菌水，并恒温培养至无菌水中出现侵染期线虫为止，然后每天收集有侵染期线虫的无菌水，并补充无菌水，即完成昆虫病原线虫的活体繁殖。本发明主要用于活体繁殖昆虫病原线虫。
文档编号A01K67/033GK102640730SQ201210108069
公开日2012年8月22日 申请日期2012年4月13日 优先权日2012年4月13日
发明者司兆胜, 李春杰 申请人:中国科学院东北地理与农业生态研究所