专利名称：一种南极大磷虾粉营养强化轮虫的方法
技术领域：
本发明属于水产生物饵料营养强化技术，特别是用南极大磷虾粉营养强化轮虫的方法。
背景技术：
裙皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis)(以下简称轮虫)是一种小型的多细胞水生动物，广泛分布于温热带地区的半咸水和海水水域，是鱼类、甲壳类的重要的天然生物饵料，一直在海水仔稚鱼培育、虾蟹育苗生产及名贵观赏水族动物的养殖中被广泛应用。目前，在轮虫的大规模生产性培养中，主要以酵母作为适合饵料，而以酵母为饵料所培养的轮虫体内缺乏《3-系列多不饱和脂肪酸(co3-PUFA)，尤其是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(ΕΡΑ)。水产动物营养学的研究结果已表明:o3-PUFA是水产动物幼体所必需的营养物质，也是幼体所需能量的主要来源，其组成和含量直接影响到幼体的正常生长发育和存活。特别是ω 3-PUFA中的DHA和ΕΡΑ，有着维持仔稚鱼的细胞膜正常生理功能和神经发育的重要作用，是维持海洋鱼类正常生长和发育的必需脂肪酸。鉴于轮虫及其营养价值对于水产动物幼体的重要性，在投喂幼体之前，亟需对轮虫进行营养强化。目前，轮虫主要采用微藻、油脂型强化剂和微囊强化剂等营养强化方法。微藻强化是最传统的轮虫营养强化方式，但微藻生产易受培养的环境条件和培养技术等因素的影响，而且有些藻类比如小球藻(Chlorella vulgaris)本身也缺乏DHA,因此微藻强化也存在较多的弊端。油脂型强化剂(如精制鱼油、乳化型鱼油、豆油等)和微囊强化剂(如50DE等)均能起到营养强化作用，但由于油脂性强化剂易氧化，且易污染水质，导致轮虫成活率降低，而微囊化处理工艺复杂且成本昂贵，鉴于这些原因，这些产品在实践应用上受到诸多限制。因此，新型营养强化材料的开发利用仍是一项亟待解决的研究课题。南极大磷虫下(Euphausia superba)隶属节肢动物门，甲壳纲,磷虫下目。南极大磷虫下粉富含蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素等营养物质，但是，目前未见有关南极大磷虾粉营养强化轮虫的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用南极大磷虾粉营养强化轮虫的方法，通过使用南极大磷虾粉提高轮虫体内《3-PUFA，尤其是DHA和EPA含量，提高ω 6系列多不饱和脂肪酸( 6-PUFA)中的花生四烯酸(二十碳四烯酸，ARA)的含量，使强化后的轮虫营养更全面均衡，可满足鱼类、甲壳类幼体对轮虫的营养需求。本发明的技术方案采用南极大磷虾粉作为强化轮虫的营养材料，其特征是先使用Pulverisette 16型交叉搅拌研磨机将南极大磷奸粉进行超微粉碎,使南极大磷奸粉的粒径< 120 μ m，然后按IOOg经超微粉碎的南极大磷虾粉加入到600mL纯净水的配比，并用均质器搅拌，均质器的转速为15500-22000rpm,搅拌时间为2min,然后按相同方法反复搅拌3次，再采用超声波破碎溶解20min，使南极大磷虾粉的粒径< 25 μ m,制得南极大磷虾粉母液，并用纯净水将南极大磷虾粉母液总体积补足至IL后，置于4°C冰箱内储存备用；强化轮虫的步骤是将轮虫收集至盛装清洁海水的桶中，水温(25±0.5) °C，盐度28±1，连续充气，自然光照，轮虫密度为(550 ± 10) inds/mL,桶内施加上述制备的南极大磷奸粉母液,所用南极大磷虾粉的终浓度为50mg/L，即IL海水中，施加南极大磷虾粉的量为50mg，强化时间6 18h0本发明的突出特点是用南极大磷虾粉营养强化轮虫，并具有以下显著技术效果:一是按50mg/L的浓度使用南极大磷虾粉强化轮虫后，轮虫体内的DHA、EPA和ω 3-PUFA的含量显著高于未强化轮虫(见附表1)，尤其是《3-PUFA的含量几乎是未强化轮虫的10倍以上；二是南极大磷虾粉不仅可提高轮虫体内DHA、EPA和co3-PUFA的含量，而且也可提高 6-PUFA中的花生四烯酸(二十碳四烯酸，ARA)的含量，按50mg/L的浓度使用南极大磷虾粉强化轮虫后，轮虫体内的ARA含量几乎是未强化轮虫的1.7倍(见附表I);三是南极大磷虾粉强化轮虫的浓度以50mg/L为优，强化时间以12和18h为最适宜；四是南极大磷虾粉营养价值高且资源丰富，成本尚不及50DE、乳化型鱼油或油脂型鱼油成本的1/3，而且不易污染水质，也不影响轮虫成活率，强化过程操作简单，便于使用。
具体实施例方式本发明采用南极大磷虾粉作为强化轮虫的营养材料，南极大磷虾粉所含的DHA、EPA、ARA和w3-PUFA在·脂肪酸组成中的含量分别为(16.86±2.12) %、(23.54±2.36)%、(0.17±0.02) % 和(42.56±4.25) % ；南极大磷虾粉母液制备步骤是先使用交叉搅拌研磨机将南极大磷虾粉进行超微粉碎，例如选用Pulverisette 16型交叉搅拌研磨机(德国FRITSCH GmbH公司生产)将南极大磷虾粉进行超微粉碎，使南极大磷虾粉的粒径< 120 μ m，然后按IOOg经超微粉碎的南极大磷虾粉加入到600mL纯净水的配比用均质器搅拌，均质器的转速为15500-22000rpm，搅拌时间为2min,然后按相同方法反复搅拌3次,再采用超声波破碎溶解20min,使南极大磷虾粉的粒径< 25 μ m，制得南极大磷虾粉母液，并用纯净水将南极大磷虾粉母液总体积补足至IL后，置于4°C冰箱内储存备用；强化轮虫的步骤是将酵母培养的轮虫收集至盛清洁海水的桶中，水温(25±0.5)°C，盐度28±1，连续充气，自然光照，轮虫密度为(550±10)inds/mL,桶内施加上述制备的南极大磷奸粉母液,所用南极大磷奸粉的终浓度为50mg/L(即IL海水中，施加南极大磷虾粉的量为50mg)，强化时间6 18h。本发明通过下述方式进行验证:一个桶内不施加南极大磷虾粉母液，另一个桶内施加终浓度为50mg/L的南极大磷虾粉母液,于第6、12和18h分别收集两桶内的轮虫,用纯净水漂洗干净，冷冻干燥后，用Agilent6890型气相色谱仪分析测定轮虫体内脂肪酸，以色谱峰峰面积归一法计算出DHA、EPA、ARA和ω 3-PUFA的含量，即可以见到强化后轮虫体内的DHA,EPA,ARA和ω 3-PUFA的含量显著高于未强化轮虫，尤其是50mg/L浓度强化的轮虫，其体内《3-PUFA的含量几乎是未强化轮虫的10倍以上，ARA含量几乎是未强化轮虫的1.7倍(见附表I);而比较在不同取样时间点的DHA、EPA、ARA和ω 3-PUFA的含量，50mg/L浓度的强化时间以12和18h为最适宜。附表1.南极大磷虾粉强化轮虫后体内重要脂肪酸含量(％)的测定数据:
权利要求
1.一种南极大磷虾粉营养强化轮虫的方法，本发明的技术方案采用南极大磷虾粉作为强化轮虫的营养材料，其特征是先使用Pulverisettel6型交叉搅拌研磨机将南极大磷虾粉进行超微粉碎，使南极大磷虾粉的粒径< 120 μ m，然后按IOOg经超微粉碎的南极大磷虾粉加入到600mL纯净水的配比，并用均质器搅拌，均质器的转速为15500-22000rpm，搅拌时间为2min，然后按相同方法反复搅拌3次，再采用超声波破碎溶解20min，使南极大磷虾粉的粒径< 25 μ m，制得南极大磷虾粉母液，并用纯净水将南极大磷虾粉母液总体积补足至IL后，置于4°C冰箱内储存备用；强化轮虫的步骤是将轮虫收集至盛装清洁海水的桶中，水温(25±0.5)°C，盐度28±1，连续充气，自然光照，轮虫密度为(550±10)inds/mL，桶内施加上述制备的南极大磷虾粉母液，所用南极大磷虾粉的终浓度为50mg/L，即IL海水中，施加南极大磷虾粉的量为50mg，强化时间6 18h。
全文摘要
一种南极大磷虾粉营养强化轮虫的方法，本发明采用南极大磷虾粉作为强化轮虫的营养材料，其特征是用交叉搅拌研磨机将南极大磷虾粉超微粉碎使粒径＜120μm，然后按100g经超微粉碎的南极大磷虾粉加入到600mL纯净水的配比，用均质器搅拌，再用超声波破碎溶解，使虾粉的粒径＜25μm，制得南极大磷虾粉母液，并用纯净水将母液总体积补足至1L后，置于4℃冰箱内储存；强化轮虫的步骤是将轮虫收集至盛装清洁海水的桶中，水温(25±0.5)℃，盐度28±1，连续充气，自然光照，轮虫密度为(550±10)inds/mL，桶内施加上述制备的南极大磷虾母液，所用南极大磷虾粉的终浓度为50mg/L，强化时间6～18h。
文档编号A01K67/033GK103155905SQ20121040609
公开日2013年6月19日 申请日期2012年10月23日 优先权日2012年10月23日
发明者陆建学, 林听听, 高露姣, 黄艳青 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所