专利名称：盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种生物技术领域的组织培养方法，具体地，涉及一种盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法。
背景技术：
菊花(Chrysanthemum morifolium)为菊科属多年生草本植物，原产中国，有3000多年的栽培历史，是中国的传统名花，也是世界四大切花之一。菊花品种繁多，花型及花色丰富多彩，观赏价值极高，是优良的盆花、花坛、花境用花及重要的切花材料。Chin-Yi Iu(1990)等研究表明菊花‘Royal Purple’茎尖的芽诱导率最高，成熟茎段的再生能力降低。陈龙清等(1995)研究发现‘日本早小菊’随继代次数的增加玻璃化苗现象逐渐加重。叶小曲等(1999)研究表明不同菊花品种在相同组培条件下生长差异大。李辛雷等(2004)发现不同菊花品种、不同外植体对相同激素水平的反应不同，茎段分化率高于叶片，叶片基部分化率高于中上部。吕晋慧等(2005)发现基因型是影响不定芽再生的重要因素，不同品种的外植体适宜再生的培养基不同。毛红玉等(2005)研究发现地被菊的幼嫩花瓣是诱导愈伤组织的良好材料，花瓣基部组织培养芽的分化率高于中、上部组织。魏星等(2008)发现不同光质对菊花组培苗的形态、生根、色素含量、酶活性和碳氮代谢的影响不同。Han B.H等(2009)发现不同品种、培养基和外植体的芽诱导效果不同。Snjezana等(2012)发现叶柄是菊花品种‘Palisade White’组织培养最适宜的外植体。组织培养是快速繁殖优良品种的重要途径之一，尽管前人在菊花组培方面已经做了很多工作，但培养过程中内生菌、玻璃化苗和褐变现象的控制，以及不同品种和不同部位诱导培养基的差别等问题仍需要克服，不同菊花品种的组织培养快速繁殖方法不同，因此不同品种仍然需要进一步研究，形成专用的组织培养快速繁殖技术体系。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法。本发明涉及一种盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，所述繁殖方法包括如下步骤:步骤一，将灭菌处理后的外植体进行诱导培养，获得不定芽；步骤二，将诱导培养出的不定芽进行增殖培养；步骤三，将增殖培养后的不定芽进行生根培养，得到生根苗；步骤四，将生根苗炼苗，移栽到基质中培养，获得再生植株，即可。优选地，步骤一中，所述灭菌处理包括如下步骤:取菊花嫩茎段水洗，放入饱和洗衣粉溶液中浸泡，再水洗处理后，置于超净工作台上，再放入酒精浸泡，无菌水冲洗，消毒处理，无菌水冲洗，干燥，即可。
优选地，步骤一中，所述饱和洗衣粉溶液中的浸泡时间为2 3min ;所述酒精的体积分数为70 75%，其浸泡时间为25 30s ;所述消毒处理为用质量分数为0.1%的汞进行消毒，其消毒时间为8 IOmin ;所述干燥具体为用无菌滤纸吸干材料表面水分。优选地，步骤一中，所述诱导培养所使用的培养基为MS基本培养基，所述MS基本培养基含有30g/L的蔗糖、7g/L的琼脂、2.0mg/L6-BA、0.lmg/L NAA，所述诱导培养的温度24 26°C，光照10 15h/d，光照强度2000 30001x，时间为25 30d。优选地，步骤二中，所述增殖培养所使用的培养基为MS基本培养基:所述MS基本培养基含有30g/L的蔗糖、7g/L的琼脂、1.0mg/L6-BA、0.lmg/L NAA，所述诱导培养的温度24 26°C，光照10 15h/d，光照强度2000 30001x，时间为25 30d。优选地，步骤三中，所述生根培养所使用的培养基为1/2MS基本培养基，所述1/2MS基本培养基含有30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂、0.lmg/L NAA,所述生根培养的温度24 26°C，光照10 15h/d，光照强度2000 30001x，时间为13 16d。优选地，步骤四中，所述生根苗炼苗的温度为24 26°C，其时间为2 3d。优选地，所述外植体为菊花茎段。优选地，步骤四中，所述移栽基质为河沙。与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果:(I)本发明采用的方法繁育的盆栽菊花，3个月内不定芽诱导率可达91.7%，增殖系数可达12.1，生根率可达100%，移栽成活率可达98%以上；提高了盆栽菊花繁殖系数，缩短了成苗周期，大大提高了育苗生产能力，本发明具有较强的可实施性与重复性，可为大面积园林应用和工厂化育苗提供有效的方法；(2)本发明采用的外植体为菊花嫩茎段，取材方便，材料来源充足；(3)本发明方法形成的组培苗生长健壮，病虫害少，生长势整齐，适应性强，易管理；(4)本发明方法采用盆栽菊花品种‘Breeze Ivory’，可不受季节及气候限制。
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显:图1为实施例中茎段外植体上诱导产生不定芽的照片示意图；图2为实施例中增殖培养30d的照片示意图；图3为实施例中生根培养15d的照片示意图；图4为实施例中移栽成活苗的照片示意图。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。实施例本实施例涉及一种盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其繁殖方法包括如下步骤:步骤一，将灭菌处理后的外植体进行诱导培养，获得不定芽，具体步骤如下:取盆栽菊花品种‘Breeze Ivory’当年生健壮、无病虫害的带有6 7个腋芽的幼嫩半木质化的茎段，剪掉叶片，取带腋芽的茎段(可包括顶芽)用自来水冲洗表面灰尘，然后放入饱和洗衣粉溶液中浸泡3min，再用自来水冲洗干净，在超净工作台上用体积分数为75%的酒精浸泡30s，用无菌水冲洗5次，再用质量分数为0.1 %的升汞溶液浸泡lOmin，再经无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干材料表面水分。将消毒后材料切成带I个节的茎段，接种在诱导培养基中。使用的诱导培养基具体为:MS、2.0mg/L6-RA、0.lmg/L NAA ;培养条件为:温度25°C ±1°C，光照时间为12h/d，光照强度为30001x，诱导时间为30d，诱导效果见图1，其中不定芽的诱导率可达91.7%。步骤二，将诱导培养出的不定芽进行增殖培养，具体步骤如下:在超净台上将步骤一中诱导出的不定芽移至植物组织培养瓶中进行增殖培养，使用的增殖培养基具体为MS、1.0mg/L6-RA、0.lmg/L NAA ;培养条件为:温度25°C ±1°C，光照时间为12h/d，光照强度为30001x，培养时间为30d，增殖速度较快，增殖系数可达12.1，效果见图2。步骤三，将增殖培养后的不定芽进行生根培养，得到生根苗，具体步骤如下:将增殖培养后得到的植株进行生根培养，生根培养基为1/2MS、0.lmg/L NAA,培养条件为:25°C 土1°C，光照时间为12h/d，光照强度为30001x，培养时间为15d，生根率可达100%，效果见图3。步骤四，将生根苗炼苗，移栽到基质中培养，获得再生植株，即可，具体步骤如下:
经过15d生根培养后，打开瓶盖放在25°C ±1°C环境中炼苗2 3d，然后取出组培苗，清水洗去培养基，移栽到河沙中，前I 2周需覆盖薄膜，温度控制在18 25°C，每2 3d喷I次清水，28d可获得菊花再生植株，移栽成活率可达98%，见图4。实施效果:以上所述为本发明优选实施方法，不定芽的诱导率最高可达91.7%，增殖速度快，增殖系数可达12.1，生根率可达100%，移栽成活率可达98%以上；本发明的方法具有很强的可实施性与重复性，大大提高了育苗生产能力，缩短了成苗周期，降低了生产成本，可为盆栽菊花品种‘Breeze Ivory’大面积园林应用和工厂化育苗提供有效的方法。以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。
权利要求
1.一种盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述繁殖方法包括如下步骤: 步骤一，将灭菌处理后的外植体进行诱导培养，获得不定芽； 步骤二，将诱导培养出的不定芽进行增殖培养； 步骤三，将增殖培养后的不定芽进行生根培养，得到生根苗； 步骤四，将生根苗炼苗，移栽到基质中培养，获得再生植株，即可。
2.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤一中，所述灭菌处理包括如下步骤:取菊花嫩茎段水洗，放入饱和洗衣粉溶液中浸泡，再水洗处理后，置于超净工作台上，再放入酒精浸泡，无菌水冲洗，消毒处理，无菌水冲洗，干燥，即可。
3.根据权利要求2所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤一中，所述饱和洗衣粉溶液中的浸泡时间为2 3min ;所述酒精的体积分数为70 75%，其浸泡时间为25 30s ;所述消毒处理为用质量分数为0.1 %的汞进行消毒，其消毒时间为8 IOmin ;所述干燥具体为用无菌滤纸吸干材料表面水分。
4.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤一中，所述诱导培养所使用的培养基为MS基本培养基，所述MS基本培养基含有30g/L的蔗糖、7g/L的琼脂、2.0mg/L6-BA、0.lmg/L NAA，所述诱导培养的温度24 26°C，光照10 15h/d，光照强度2000 30001x，时间为25 30d。
5.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤二中，所述增殖培养所使用的培养基为 MS基本培养基:所述MS基本培养基含有30g/L的蔗糖、7g/L的琼脂、1.0mg/L6-BA、0.lmg/L NAA，所述诱导培养的温度24 26°C，光照10 15h/d，光照强度2000 30001x，时间为25 30d。
6.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤三中，所述生根培养所使用的培养基为1/2MS基本培养基，所述1/2MS基本培养基含有30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂、0.lmg/L NAA,所述生根培养的温度24 26°C，光照10 15h/d，光照强度2000 30001x,时间为13 16d。
7.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤四中，所述生根苗炼苗的温度为24 26°C，其时间为2 3d。
8.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述外植体为菊花茎段。
9.根据权利要求1所述的盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤四中，所述移栽基质为河沙。
全文摘要
本发明公开了一种盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法；所述方法包括如下步骤步骤一，将灭菌处理后的外植体进行诱导培养，获得不定芽；步骤二，将诱导培养出的不定芽进行增殖培养；步骤三，将增殖培养后的不定芽进行生根培养，得到生根苗；步骤四，将生根苗炼苗，移栽到基质中培养，获得再生植株，即可。本发明取材方便，材料来源充足，不定芽的诱导率最高可达91.7％，增殖速度快，增殖系数可达12.1，生根率可达100％，移栽成活率可达98％以上。本发明大大提高了育苗生产能力，缩短了成苗周期，降低了生产成本，可为盆栽菊花品种‘Breeze Ivory’大面积园林应用和工厂化育苗提供有效的方法。
文档编号A01H4/00GK103141384SQ201310062339
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月27日 优先权日2013年2月27日
发明者曾丽, 汪晓沙, 林登贵, 彭勇政, 赵子刚 申请人:上海交通大学