鸡柔嫩艾美尔球虫抗性综合选择指数选择育种方法
【专利摘要】本发明涉及家禽抗病育种领域，具体涉及一种建立鸡柔嫩艾美尔球虫抗性综合选择指数筛选抗性鸡个体的选择育种方法。方法是雏鸡在特定的日龄每只鸡灌饲一定数量的鸡柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊，测定感染后3-5天内的增重，以及感染后第8天鸡血浆中过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）和γ干扰素（IFN-γ）的浓度，将上述6个指标数据转化为标准化Z分值，代入所建综合选择指数公式计算每个个体的综合选择指数值，根据值的大小选留抗性鸡个体。
【专利说明】鸡柔嫩艾美尔球虫抗性综合选择指数选择育种方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种建立鸡柔嫩艾美尔球虫抗性综合选择指 数筛选抗性鸡个体的选择育种方法。
【背景技术】
[0002] 鸡球虫病是由一种或多种球虫侵入鸡的肠道上皮细胞而引起的流行性急性寄生 虫病，其中以鸡柔嫩艾美尔球虫的危害最为严重。35?60日龄的青年鸡和10?30日龄的 雏鸡的致死率和发病率高达80%。病鸡对营养的吸收能力下降，生长受到很大影响，且长期 得不到康复。据统计美国因球虫病造成的家禽业经济损失每年超过15亿美元，其中74%是 由亚临床鸡生长阻滞和饲料利用率下降造成，24%是由药物预防和治疗所增加的开支。长期 以来，控制鸡球虫病的主要手段是使用抗生素类和化学药物，虽然鸡球虫病的防治得益于 这些药物，但同时也产生了鸡群的耐药性等问题。此外，抗生素及化学药物的使用最终造成 蛋和鸡肉中的药物残留，降低了鸡产品的安全性和质量。另外，尽管球虫病的预防也可以用 疫苗进行免疫，但要实施无公害生产就必须研究鸡的球虫抗性，利用鸡的球虫病抗性指标 进行选择育种，从而培育鸡球虫病抗病群体用于家禽生产。目前还没有有关鸡柔嫩艾美尔 球虫病抗病育种方法的相关研究报道。本发明的目的就是通过建立"鸡柔嫩艾美尔球虫抗 性综合选择指数选择育种方法"，筛选鸡球虫病抗性个体，通过选择育种培育球虫病抗性鸡 新品种或新品系。
[0003] 目前国内外所用球虫抗性指标分为两类，一类是客观指标，另一类是血液指标。前 者是剖检客观指标，主要是盲肠病变记分。后者数量较多，但没有公认的指标，且可以活体 采血测定，对选择育种有利。所以有效的鸡球虫抗性血液指标的筛选是抗性育种首先要解 决的技术问题。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术存在的问题，本发明筛选了有效的鸡球虫抗性血液指标，在此基础 上研究并建立利用抗性指标综合选择指数，对综合选择指数进行有效性评价，进行鸡球虫 病抗性综合选育，筛选出鸡球虫病抗性个体，通过选择育种，培育球虫病抗性鸡新品种或新 品系。本发明所采用的技术方案是：一种鸡柔嫩艾美尔球虫病抗性综合选择指数选择育种 方法，包括以下步骤：雏鸡在30日龄时每只鸡灌饲灌饲2. 5万个鸡柔嫩艾美尔球虫孢子化 卵囊，测定感染后3-5天内的增重，以及感染后第8天鸡血浆中过氧化氢酶、超氧化物歧化 酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛和Y干扰素的浓度，将上述6个指标数据转化为标准化Z 分值，代入下述综合选择指数公式，计算每个个体的综合选择指数值F，F值越大该个体的 鸡球虫病抗性越好；根据留种率确定选留抗性鸡个体；
[0005] F=-O. 642x^0. 31ζχ2+0. 8ζχ3~0. 05ζχ4~0. 08ζχ5+0. 59ζχ6
[0006] 其中，Zx1是孢子化软囊感染后3-5内增重（g)的标准化Z分值；ζχ2是感染后第8 天鸡血浆中CAT浓度（U/L)标准化Z分值；Zx3是感染后第8天鸡血浆中SOD浓度（U/L)标 准化Z分值；ZX4是感染后第8天鸡血浆中GSH-PX浓度（U/L)标准化Z分值；ZX5是感染后 第8天鸡血浆中MDA浓度（mmol/L)标准化Z分值；Zx6是感染后第8天鸡血浆中IFN- γ浓 度（ng/L)标准化Z分值。
[0007] 本发明方案通过以下研究建立：
[0008] (1)抗性指标确定通过检索国内外有关鸡球虫病抗性研究的参考文献，初步选择 15个鸡球虫病抗性指标。他们分别是：30日龄的雏鸡第8天盲肠病变记分，0-8天内粪便卵 囊排卵数，感染后0-3天、3-5天、5-8天体增重，以及感染后第8天血浆指标10个，分别是一 氧化氮（N0)、过氧化氢酶（CAT)、超氧化物歧化酶（S0D)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)、丙 二醛（1?六）、白介素2(11^2)、白介素16(几-16)、白介素17(几-17)、￥干扰素（正^￥)、 3-胡萝卜素（3_〇。
[0009] (2)抗性指标的筛选选用京海黄鸡为试验动物，在无球虫的环境下，用不含任何球 虫和抗球虫活性药物的饲料饲养1日龄的雏鸡至30日龄时，人工感染不同剂量的鸡柔能 艾美尔球虫孢子化软囊，以感染后9天内没有个体因感染球虫而出现死亡为条件，筛选到 最佳攻毒剂量(攻毒后雏鸡出现明显的发病症状，但没有出现死亡或几乎没有出现死亡时 的剂量）为每个京海黄鸡个体2. 5万孢子化软囊。然后通过攻毒组和非攻毒组(对照组）抗 性指标的比较，在15个所选指标中筛选到与鸡球虫病抗性关系密切的抗性指标6个，他们 是感染后3-5天内的体增重（g);感染后第8天血浆中γ干扰素（IFN-γ，ng/L);丙二醛 (MDA，mmol/L)，超氧化物歧化酶（SOD，U/L)，谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX，U/L)，过氧化 氢酶（CAT，U/L)的浓度。
[0010] (3)综合选择指数的确定考虑到抗性指标的相关性，用统计软件SPSS中的多元统 计主成份分析的程序，求主成分向量，根据主成分的累积贡献率和主成分分析原理，经综合 分析判断，确定选择贡献率最大的第一主成分表达式为综合选择指数方程。其表达式为：
[0011] F=-O. 642x^0. 31ζχ2+0· 8ζχ3-〇· 05ζχ4-〇· 08ζχ5+0· 59zx6。
[0012] (4)综合选择指数的选择育种将每个个体6个抗性指标测定值的标准化Z分值 代入综合选择指数方程，计算每个个体的主成份得分，将主成份得分进行排序，由综合选择 指数方程所计算的F值越大该个体的鸡球虫病抗性越好；根据留种率确定需淘汰的易感个 体。
[0013] 本方法的有益效果体现在。建立了鸡柔能艾美尔球虫综合选择指数公式(其表达 式为 F=-O. 642x^0. 31ζχ2+0· 8ζχ3-〇· 05ζχ4-0· 08ζχ5+0· 59zx6)，该综合选择指数公式是通过 多元统计主成份分析方法选出的最佳主成份表达式，它综合了 6个经试验选择的、有效的 血液抗性指标信息，且经与球虫病抗性客观指标进行相关性分析，两者关系密切，相关极显 著，表明用本发明建立的方法进行选择育种效果好。而且本方法不需要通过对感染鸡的剖 解观察病变的程度来判断个体抗病性，可以降低劳动强度。经40个京海黄鸡每只鸡灌饲 2. 5万个鸡柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊试验，用建立的综合选择指数计算得到的最高的4 个个体的指数值在2. 01?5. 16之间，最小4个个体的指数在-1. 55?-1. 84之间。其盲肠 解剖特征见附图。附图1?图4、图5?图8和图9?图12分别是指数最大(依次为5. 15、 3. 20、2· 35和2. 01)、指数最小（依次为-1. 55、-1· 68、-1· 70和-1. 84)和对照组（非攻毒组） 的4个个体攻毒后第8天盲肠解剖特征，由图1?图4和对照组图9?图10比较可见，指 数在2. 00以上个体盲肠解剖特征与对照组几乎没有差别，说明这些个体球虫病抗性强。但 指数小于-I. 55的个体其盲肠水肿，内容物血芯粗大，说明这些个体抗性差。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1是选择指数为5. 15个体的盲肠解剖特征。
[0015] 图2是选择指数为3. 20个体的盲肠解剖特征。
[0016] 图3是选择指数为2. 35个体的盲肠解剖特征。
[0017] 图4是选择指数为2. 01个体的盲肠解剖特征。
[0018] 图5是选择指数为-1. 55个体的盲肠解剖特征。
[0019] 图6是选择指数为-1. 68个体的盲肠解剖特征。
[0020] 图7是选择指数为-1. 70个体的盲肠解剖特征。
[0021] 图8是选择指数为-1. 84个体的盲肠解剖特征。
[0022] 图9是对照组(非攻毒组）个体1的盲肠解剖特征。
[0023] 图10是对照组(非攻毒组）个体2的盲肠解剖特征。
[0024] 图11是对照组(非攻毒组）个体3的盲肠解剖特征。
[0025] 图12是对照组(非攻毒组）个体4的盲肠解剖特征。
[0026] 图13是SPSS统计软件选择"Descriptves"程序的操作示意图。
[0027] 图14是保存数据标准化后作为变量的操作图。
[0028] 图15是在数据视窗中标准化后变量前加有Z的示意图。
[0029] 图16是SPSS统计软件选择"Factor"程序的操作过程示意图。
[0030] 图17是主成分分析变量选择对话框。
[0031] 图18是主成分分析提取主成分按钮图。
[0032] 图19是主成分分析提取主成分选项对话框。
[0033] 图20是SPSS统计软件双变量相关系数计算程序选择操作过程示意图。
[0034] 图21是相关系数计算有关选项对话框。
【具体实施方式】 [0035] 1、嫩艾美尔球虫孢子化卵囊攻毒剂量的确定
[0036] 2010年5月，1日龄京海黄鸡60只购买于江苏海门集团，未落地前饲养于汽油喷 灯火焰消毒的无球虫笼舍中（单笼饲养)，所用饲料不含任何球虫和抗球虫活性药物，30日 龄时随机分成3组每组20只，第一组每只鸡分别灌饲2. 0万个、第二组2. 5万个、第三组 3. 0万个嫩艾美尔球虫孢子化卵囊，攻毒后0-9天内第三组鸡出现了由于球虫病引起的死 亡，死亡率为25. 0%，而第一、二组没有出现死亡。确定最佳存活攻毒剂量为2. 5万/只。
[0037] 2、有效球虫抗性指标的筛选确定
[0038] 2011年11月，1日龄京海黄鸡66只购买于江苏海门集团，未落地前饲养于汽油喷 灯火焰消毒的无球虫笼舍中（单笼饲养)，所用饲料不含任何球虫和抗球虫活性药物，而且 试验鸡在预试期内经粪检无球虫后，用于试验。京海黄鸡66只随机分成两组，试验组44只， 对照组22只，30日龄时实验组每只鸡灌饲2. 5万柔嫩艾美尔球虫卵囊，对照组灌饲等量生 理盐水。分别测定感染后〇d、3d、5d、8d每个个体的体重，计算0-3, 3-5, 5-8和0-8d内的体 增重，其他测定指标和统计分析结果见下表1和2。感染后每天观察记录各组鸡的精神、食 欲、粪便状况。
[0039] 表1感染后3d试验组和对照组各指标统计分析结果
【权利要求】
1.鸡柔嫩艾美尔球虫病抗性综合选择指数选择育种方法，其特征在于包括以下步骤： 雏鸡在30日龄时每只鸡灌饲2. 5万个鸡柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊，测定感染后3-5天内 的增重，以及感染后第8天鸡血浆中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、 丙二醛和Y干扰素的浓度，将上述6个指标数据转化为标准化Z分值，代入下述综合选择 指数公式，计算每个个体的综合选择指数值F，F值越大该个体的鸡球虫病抗性越好；根据 留种率确定选留抗性鸡个体； F=-〇. 642x^0. 31ζχ2+0. 8ζχ3~0. 05ζχ4~0. 08ζχ5+0. 59ζχ6 其中，ζΧι是孢子化软囊感染后3-5内增重（g)的标准化Ζ分值；ζχ2是感染后第8天 鸡血浆中CAT浓度（U/L)标准化Ζ分值；ζχ3是感染后第8天鸡血浆中SOD浓度（U/L)标准 化Z分值；zx 4是感染后第8天鸡血浆中GSH-PX浓度（U/L)标准化Z分值；zx5是感染后第 8天鸡血浆中MDA浓度（mmol/L)标准化Z分值；zx 6是感染后第8天鸡血浆中IFN- γ浓度 (ng/L)标准化Z分值。
【文档编号】A01K67/02GK104221995SQ201310248614
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年6月20日 优先权日:2013年6月20日
【发明者】戴国俊, 孙明明, 尉浩华, 林雨鑫, 孙大辉, 王金玉, 张根喜, 谢恺舟, 侍苗苗, 王成丽 申请人:扬州大学