罗氏真氧产碱杆菌的发酵产物在动物饲料领域的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开罗氏真氧产碱杆菌的发酵产物在动物饲料领域的应用。PHB是一种完全由生物合成的热塑性高分子材料，在此之前，是作为一种完全生物降解材料用于塑料加工领域。首先对罗氏真氧产碱杆菌的发酵液或发酵液干粉测定蛋白、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶Q10的含量，经测算后以一定比例作为添加剂与动物的饲料均匀混合，得到PHB含量为0.5～5﹪的混合饲料；然后，依照常规的饲料添加方法喂食动物，以达到营养强化的目的。在普通饲料中添加罗氏真氧产碱杆菌的发酵液或发酵液干粉，其所含的蛋白、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶Q10等物质能极大地促进动物的生长和提高其免疫功能。
【专利说明】 罗氏真氧产碱杆菌的发酵产物在动物饲料领域的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于动物饲料领域，涉及罗氏真氧产碱杆菌(RALSTONIA ENTR0PHA)的发酵液或发酵液干粉在动物饲料领域的应用，具体是将罗氏真氧产碱杆菌(RALST0NIAENTR0PHA)的发酵液或发酵液干粉作为动物饲料的添加剂，其所含的蛋白(含有17种氨基酸，其基本组成与鱼粉蛋白相近)、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶QlO等物质能极大地促进动物的生长和提高其免疫功能。
【背景技术】
[0002]罗氏真氧产碱杆菌(RALSTONIA ENTR0PHA)能够以葡萄糖为基料，配以各种氮源、无机盐等，在适当的发酵条件下，可以实现高密度发酵，通过发酵工艺参数的调节(基质流量、发酵时间)，可以控制菌体细胞浓度，由此，可控制发酵液或其干粉中各成分，如菌体蛋白、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶QlO的含量。PHB是一种完全由生物合成的热塑性高分子材料，在此之前，是作为一种完全生物降解材料用于塑料加工领域，如注塑产品，膜制品等。罗氏真氧产碱杆菌的菌体蛋白含有17种氨基酸，其含量(除色氨酸和胱氨酸外)与鱼粉蛋白相近，可以部分替代鱼粉蛋白。而作为生物高分子的PHB，已有研究成果表明，在饲料中添加PHB具有促进欧洲S卢鱼(Dicentrarchus Iabrax)生长的作用[Sinha A K.Theeffect of poly-β -hydroxybutyrate(PHB) on the growth performance of Europeanseabass (Dicentrarchus labrax).[D].Ghent:Gent university, 2008:154]0 因此，米用含有PHB的动物饲料，既可替代抗生素的使用，减少动物疾病的发生，又可大大提高动物的生长速度，这将是促进动物养殖行业发展的前沿技术。申请号201110071523.1的专利阐述的是采用提纯的PHB粉料喂食卤虫的强化方法，由于使用提纯的PHB粉料，所以成本很高，影响了技术的推广；发明专利(专利号ZL200710041442.0)所阐述的辅酶QlO是一种醌类化合物，在动物、植物、微生物等细胞体内与线粒体相结合，作为电子传递链中的递氢体，是体内组成呼吸链的必需成分，能激活细胞呼吸，加速产生腺苷三磷酸(ATP)，抑制线粒体的过氧化，保护生物膜结构完整性，对动物的免疫有特殊的增强作用；发酵液或其干粉含有的其他物质，如葡萄糖、各种盐(包括磷酸盐、硫酸镁、硫酸锌、硫酸锰、硫酸铜、氯化钙、硫酸亚铁、硼酸盐、钥酸盐等)和微量元素，都是动物生长过程中的必需品。本发明采用含有上述营养物质的发酵原液或其干燥物作为饲料添加剂，可完全利用发酵液中的所有营养物质，极具实用价值。
【发明内容】
[0003]本发明针对现有技术的不足，提供了罗氏真氧产碱杆菌的发酵产物在动物饲料领域的应用，具体是将罗氏真氧产碱杆菌(RALSTONIA ENTR0PHA)的发酵液或发酵液干粉作为动物饲料的添加剂，其所含的蛋白、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶QlO等物质能极大地促进动物的生长和提高其免疫功能。
[0004]本发明的具体方法是:[0005]首先对罗氏真氧产碱杆菌(RALSTONIA ENTR0PHA)的发酵液或发酵液干粉测定蛋白、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶QlO的含量，经测算后以一定比例作为添加剂与动物的饲料均匀混合，得到PHB含量为0.5?5 %的混合饲料；然后，依照常规的饲料添加方法喂食动物，以达到营养强化的目的。
[0006]本发明的有益效果是:
[0007]在普通饲料中添加罗氏真氧产碱杆菌(RALSTONIA ENTR0PHA)的发酵液或发酵液干粉，其所含的蛋白、聚羟基丁酸酯PHB和辅酶QlO等物质能极大地促进动物的生长和提高其免疫功能。
【具体实施方式】。
[0008]下面通过实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不局限于实施例所展示的动物和方法，任何基于这些实施例的所展示的材料组合和方法的一般技术人员可轻易联想到的变化，都属于本发明保护范围。
[0009]实施例1.[0010]取IOOmL发酵35小时的罗氏真氧产碱杆菌发酵液，测定干重为104.2g/L，其中:蛋白含量为42.3g/L，PHB含量为45.8g/L，辅酶QlO含量为98.lmg/L。
[0011]实施例2.[0012]取IOOmL发酵45小时的罗氏真氧产碱杆菌发酵液，测定干重为105.lg/L，其中:蛋白含量为30.7g/L，PHB含量为65.2g/L，辅酶QlO含量为78.6mg/L。
[0013]实施例3.[0014]取IOOmL发酵72小时的罗氏真氧产碱杆菌发酵液，测定干重为170.9g/L，其中:蛋白含量为20.5g/L， PHB含量为119.3g/L，辅酶QlO含量为43.8mg/L。
[0015]实施例4.[0016]取IOOmL发酵60小时的罗氏真氧产碱杆菌发酵液，喷雾干燥后测定干粉重为15.lg，其中:蛋白含量为2.9g，PHB含量为10.5g，辅酶QlO含量为4.6mg。
[0017]实施例5.[0018]取IOOmL发酵82小时的罗氏真氧产碱杆菌发酵液，喷雾干燥后测定干粉重为
18.4g，其中:蛋白含量为3.5g，PHB含量13.1g,辅酶QlO含量2.8mg。
[0019]实施例6.[0020]取IOOmL发酵95小时的罗氏真氧产碱杆菌发酵液，喷雾干燥后测定干粉重为
19.4g，其中:蛋白含量为3.3g，PHB含量为13.8g，辅酶QlO含量为2.1mgo
[0021]实施例7.[0022]取实施例1所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵液与910g市售的粒径小于60目的沼虾饲料混合均匀，烘干得到混合饲料(发酵液干重约占1.13 %，PHB含量约0.50 % )，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(记为对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料外，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱1、对照箱2喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖5天后，在各培养箱内按103CFU/ml的浓度接种溶藻弧菌，继续养殖5天后，观察到对照箱1、2的平均虾存活率只有15 %，而实验箱的存活率高达58 %。[0023]实施例8.[0024]取实施例2所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵液与650g市售的粒径小于60目的沼虾饲料混合均匀，烘干得到混合饲料(发酵液干重约占1.6 %，PHB含量约0.99 %)，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料外，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱1、对照箱2喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖4天后，在各培养箱内按104CFU/ml的浓度接种溶藻弧菌，继续养殖5天后，观察到对照箱1、2的平均虾存活率只有12 %，而实验箱的存活率高达48 %。
[0025]实施例9.[0026]取实施例3所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵液IOOml与795g市售的粒径小于60目的沼虾饲料混合均匀，烘干得到混合饲料(发酵液干重约占2.1 %，PHB含量约1.47 %),备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料夕卜，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱1、对照箱2喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖5天后，在各培养箱内按105CFU/ml的浓度接种溶藻弧菌，继续养殖5天后，观察到对照箱1、2的平均虾存活率只有5 %，而实验箱的存活率高达54 %。
[0027]实施例10.[0028]取实施例4所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵干粉与510g市售的粒径小于60目的南美白对虾饲料混合均匀，得到混合饲料(发酵干粉干重约占2.9 %，PHB含量约2.0 %)，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料夕卜，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖4天后，在各培养箱内按106CFU/ml的浓度接种溶藻弧菌，继续养殖6天后，观察到对照箱1、2的平均虾存活率只有3 %，而实验箱的存活率闻达42 % 0
[0029]实施例11:
[0030]取实施例5所述发酵干粉与511克(PHB含量约3.5 % )市售的粒径小于60目的南美白对虾饲料混合均匀后备用.。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料外，三个养殖箱的养殖条件(PH，温度，溶氧，投料量，换水次数等)保持一致。对照箱为普通饲料，实验箱喂相同量的混合了发酵液干粉的饲料。养殖4天后，在各培养箱内按106CFU/ml的浓度接种发光弧菌，继续养殖6天后，观察到对照箱1、2的虾平均存活率只有2 %，而实验箱的存活率高达35 %。
[0031]实施例12:
[0032]取实施例6所述发酵干粉与446克(发酵液干重约占4.2 % )市售的粒径小于60目的南美白对虾饲料混合均匀后备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料外，三个养殖箱的养殖条件(PH，温度，溶氧，投料量，换水次数等)保持一致。对照箱为普通饲料，实验箱喂相同量的混合了发酵液干粉的饲料。养殖4天后，在各培养箱内按107CFU/ml的浓度接种发光弧菌，继续养殖5天后，观察到对照箱I的虾存活率只有2 %，而实验箱的存活率高达39 %。
[0033]实施例13.[0034]取实施例5所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵干粉与500g市售的粒径小于60目的南美白对虾饲料混合均匀，得到混合饲料(发酵干粉干重约占3.48 %，PHB含量约2.52 %)，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料夕卜，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱1、对照箱2喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖10天后，观察到且实验箱的虾长平均比对照箱1、2的虾长37 %。
[0035]实施例14.[0036]取实施例6所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵干粉与400g市售的粒径小于60目的南美白对虾饲料混合均匀，得到混合饲料(发酵干粉干重约占4.17 %，PHB含量约3.31 %)，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料夕卜，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱1、对照箱2喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖9天后，观察到实验箱存活的虾长平均比对照箱1、2的虾长35 %。
[0037]实施例15.[0038]取实施例3所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵液IOOml与600g市售的粒径小于60目的沼虾饲料混合均匀，烘干得到混合饲料(发酵液干重约占2.78 %，PHB含量约1.94 %)，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料夕卜，三个养殖箱的养殖条件(PH、温度、溶氧、投料量、换水次数等)保持一致。对照箱1、对照箱2喂普通饲料，实验箱喂相同量的混合饲料。养殖10天后，观察实验箱的虾长平均比对照箱1、2的虾长32 %。
[0039]实施例16.[0040]取实施例2所述的罗氏真氧产碱杆菌发酵液IOOml与500g市售的粒径小于60目的沼虾饲料混合均匀，烘干得到混合饲料(发酵液干重约占2.06 %，PHB含量约1.34 %)，备用。将各50尾同批虾苗养在三个养殖箱内(对照箱1、对照箱2和实验箱)，除喂养的饲料夕卜，三个养殖箱的养殖条件(PH，温度，溶氧，投料量，换水次数等)保持一致。对照箱为普通饲料，实验箱喂相同量的混合了发酵液的饲料。养殖10天后，观察到实验箱的虾长平均比对照箱1、2的虾长30 %。
[0041]实施例17?21对猪、鸡、鸭、罗非鱼、5月龄的山羊进行喂养实验:
[0042]实施例17.猪的喂养试验
[0043]1.仔猪(前3周)试验
[0044]实验动物(仔猪)为24只三周龄二元种猪(LandraceXYorkshire),随机分成二个组，分别为对照组和试验组，试验组添加0.63 % PHB的添加剂。饲养周期为3周，每周称量猪只体重与饲料量，评估增重、饲料采食量和饲料效率。试验结果见表I。
[0045]由表I的试验结果通过数据分析，试验组比对照组有较大的增重幅度(5 %以上)，饲料报酬有明显提高，料肉比1.48 < 1.67，明显小于对照组，饲料报酬提高11.3 %。
[0046]2.中、大猪试验
[0047]实验动物选择40头日龄、胎次相近，体重30Kg左右的“杜长大”三元健康猪，按公母比例一致的原则随机分成二个组，对照组和试验组。饲养试验按猪的体重分为中猪(30?55Kg) (27天)，大猪(55?90Kg) (45天)二个阶段一共72天。中猪(30?55Kg)阶段喂添加PHB含量2.65 %添加剂的饲料；大猪(55?90Kg)阶段喂添加PHB含量4.87%添加剂的饲料。试验期间采用人工喂料，每天投料二次，每天准确记录投料量、剩料量和耗料量。在二个饲养阶段试验开始和结束时的早晨以栏为单位进行空腹称重，以考察每个阶段猪的平均日增重、平均采食量、料肉比。试验结果见表I。
[0048]试验结果分析，由表I可知中猪(30?55Kg)阶段，试验组比对照组增重提高8.5%，饲料报酬提高9.7 %。大猪(55?90Kg)阶段，试验组比对照组增重提高5.7 %，饲料报酬提高10.1 %。
[0049]表I猪的喂养试验结果
【权利要求】
1.罗氏真氧产碱杆菌的发`酵液或发酵液干粉在动物饲料领域的应用。
【文档编号】A23K1/00GK103431161SQ201310332518
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年8月1日 优先权日:2013年8月1日
【发明者】陈学军, 沈华, 凌东鹰 申请人:宁波天安生物材料有限公司