竹黄孢子的保藏方法
【专利摘要】本发明公开了一种竹黄孢子的保藏方法，将竹黄孢子刮取至干净的牛皮纸袋中待处理；将装有竹黄孢子的牛皮纸袋放入4℃冰箱，保存7天后取出，获得干燥的孢子块；用干净的玻璃瓶装入菜油，将装有菜油的玻璃瓶放入蒸锅蒸1小时，取出后自然冷却至室温备用；将得到的干燥孢子块放入处理好的菜油中进行保存；下一年竹黄接种时期，将保存竹黄孢子的菜油倒掉，加入凉开水洗涤孢子块1～2次，然后用凉开水浸泡2小时便可得到竹黄孢子液。本发明既可以使竹黄孢子顺利度过野外的不良环境，有效保证竹黄孢子的活力，又能克服常规菌种保藏方法不适合竹黄孢子保藏的问题，从而为竹黄人工栽培提供种源保障，解决竹黄人工栽培推广中接种体保藏的关键技术问题。
【专利说明】竹黄孢子的保藏方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其是一种竹黄孢子的保藏方法。 【背景技术】
[0002]竹黄Aaffi/wsicoJa)又名天竹花、淡竹花、竹花、赤团子、竹赤团子、竹苗、竹赤斑菌、淡菊花、竹参、竹三七、血三七等，是长在竹子枝条上的一种药用真菌的子座。其主要成分竹红菌素是竹黄中红色色素部分，是多种花醌(Perylenequinones; PQ)类衍生物的混合物，是一种新型的光敏剂，在我国应用于临床治疗皮肤病、胃病和风湿性关节炎。现代医学研究表明，竹红菌素的药用价值主要体现在抗炎、镇痛、抗菌、抗肿瘤等方面，尤其是近年来的研究已经体现出它在治疗肿瘤等方面的优良特性。我国已经研制的成药有:真菌竹黄胶囊、竹红菌素软膏和竹黄菌颗粒剂，在治疗妇科病、风湿性关节炎和牛皮癣等方面表现出较好的临床疗效。
[0003]竹黄的生长季节一般为4月下旬到6月。通常情况下，竹黄子座每年4月底开始出现在寄主竹子上，随后逐渐膨大，在子座膨大过程中，大量的分生孢子产生并被释放出来。
[0004]由于竹黄孢子只在自然条件下产生，不能通过实验室培养获得，且自然存活率低。通过实验室常规的甘油保存法，_20°C保存2月后竹黄孢子的萌发率为17%，-20°C保存I年后竹黄孢子的萌发率仅为3%。
[0005]竹黄菌在实验条件下很容易被分离出来并获得纯培养，但是至今还未发现该真菌在培养条件下可以产生分生孢子或子囊孢子，甚至在各种诱导条件下也未观察到孢子产生。近年来，竹黄的人工栽培已获得成功(专利受理号:201310056130.2)，但是，目前的接种技术还只限于采用竹黄孢子进行接种，人工栽培竹黄的种源只能依靠野外产生的竹黄孢子。因次，竹黄孢子的收集和保藏对于竹黄人工栽培种源生产和扩大栽培具有很大的影响。竹黄人工栽培的扩大和推广亟需找到简单易行、既能保证孢子萌发率，又能常规推广的竹黄孢子保藏方法。
[0006]常见的真菌孢子保藏方法有低温干燥保存、石蜡油保存、甘油低温保存等，但这些方法都限于在实验室进行。针对竹黄人工栽培所需孢子接种材料的特点及推广需求，亟需解决竹黄孢子的保藏问题，以确保竹黄人工栽培的种源和扩大推广栽培。
[0007]微生物保藏的最终目的是保持菌株的纯度、活性、基因信息的完整性、避免菌株变异和降低退化。适用于真菌的保藏技术方法主要分为三类:
(I)让真菌连续生长的保藏技术，特点是不断地将菌株移植在新鲜的培养基上，并在合适的条件下生长，随后至于一个低温的环境中，一般是4°c~10°C，这类保藏技术主要包括斜面移植、油管保藏和蒸馏水保藏等方法。
[0008](2)利用干燥环境保藏菌株的休眠体，如分生孢子、厚垣孢子等，干燥选用的基质可以是空气、硅胶、土壤、沙子等。
[0009](3)利用抑制菌株代谢活性的办法达到长期保藏，一般是通过脱水降低细胞内水分或低温冷冻，此过程关键环节是避免和降低冰晶细胞造成的伤害，这类保藏工艺包括冷冻干燥法、低温冻结和液氮保藏法等。
[0010]以上方法的保藏效果不仅存在菌株水平上的差异性，同时只适合于实验室菌种保存，尚不能针对竹黄这一真菌种类作为栽培推广过程的接种体保藏工艺技术。
【发明内容】
[0011]本发明的目的是:提供一种竹黄孢子的保藏方法，它能有效缩短输电线路的等效长度，实现在相同融冰电压下对更长距离的输电线路进行融冰操作，以克服现有技术的不足。
[0012]本发明是这样实现的:竹黄孢子的保藏方法，包括以下步骤:
(1)竹黄孢子的收集:在竹黄生长中期，用经过消毒处理的工具将竹黄孢子刮取至干净的牛皮纸袋中待处理；
(2)孢子预处理:将装有竹黄孢子的牛皮纸袋放入4°C冰箱，保存7天后取出，获得干燥的孢子块；
(3)菜油预处理:用干净的玻璃瓶装入菜油，将装有菜油的玻璃瓶放入蒸锅蒸I小时，取出后自然冷却至室温备用；
(4)竹黄孢子保存:将步骤(2)所得到的干燥孢子块放入步骤(3)处理好的菜油中进行保存；菜油体积为孢子块体积的5~10倍，存放竹黄孢子块的容器放到避光处常温保存；
(5)取用竹黄孢子:下一年竹黄接种时期，将保存竹黄孢子的菜油倒掉，加入凉开水洗涤孢子块I~2次，然后用凉开水浸泡2小时便可得到竹黄孢子液。
[0013]步骤(I)中所述的经过消毒处理的工具是，用质量百分比浓度为75%医用酒精浸泡消毒的镊子或竹签。
[0014]由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明将收集的竹黄孢子经过简单干燥处理后采用菜油进行保存，I年后孢子萌发率大于40%，结果既可以使竹黄孢子顺利度过野外的不良环境，有效保证竹黄孢子的活力，又能克服常规菌种保藏方法不适合竹黄孢子保藏的问题，从而为竹黄人工栽培提供种源保障，解决竹黄人工栽培推广中接种体保藏的关键技术问题。通过对2012年收集的竹黄孢子进行该方法保存，并于2013年在贵州赤水实施接种实验，已获得竹黄子座，证明了本发明的有效性。
【具体实施方式】
[0015]本发明的实施例:竹黄孢子的保藏方法，包括以下步骤:
(1)竹黄孢子的收集:在竹黄生长中期，用质量百分比浓度为75%医用酒精浸泡消毒的镊子将竹黄孢子刮取至干净的牛皮纸袋中待处理；
(2)孢子预处理:将装有竹黄孢子的牛皮纸袋放入4°C冰箱，保存7天后取出，获得干燥的孢子块；
(3)菜油预处理:用干净的玻璃瓶装入菜油，将装有菜油的玻璃瓶放入蒸锅蒸I小时，取出后自然冷却至室温备用；
(4)竹黄孢子保存:将步骤(2)所得到的干燥孢子块放入步骤(3)处理好的菜油中进行保存；菜油体积为孢子块体积的5~10倍，存放竹黄孢子块的容器放到避光处常温保存；
(5)取用竹黄孢子:下一年竹黄接种时期，将保存竹黄孢子的菜油倒掉，加入凉开水洗涤孢子块1~2次，然后用凉开水浸泡2小时便可得到竹黄孢子液。
【权利要求】
1.一种竹黄孢子的保藏方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)竹黄孢子的收集:在竹黄生长中期，用经过消毒处理的工具将竹黄孢子刮取至干净的牛皮纸袋中待处理； (2)孢子预处理:将装有竹黄孢子的牛皮纸袋放入4°C冰箱，保存7天后取出，获得干燥的孢子块； (3)菜油预处理:用干净的玻璃瓶装入菜油，将装有菜油的玻璃瓶放入蒸锅蒸I小时，取出后自然冷却至室温备用； (4)竹黄孢子保存:将步骤(2)所得到的干燥孢子块放入步骤(3)处理好的菜油中进行保存；菜油体积为孢子块体积的5~10倍，存放竹黄孢子块的容器放到避光处常温保存； (5)取用竹黄孢子:下一年竹黄接种时期，将保存竹黄孢子的菜油倒掉，加入凉开水洗涤孢子块I~2次，然后用凉开水浸泡2小时便可得到竹黄孢子液。
2.根据权利要求1所述的竹黄孢子的保藏方法，其特征在于:步骤(I)中所述的经过消毒处理的工具是，用质量 百分比浓度为75%医用酒精浸泡消毒的镊子或竹签。
【文档编号】A01G1/04GK103461007SQ201310467772
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年10月10日 优先权日:2013年10月10日
【发明者】刘永翔, 刘作易, 周德群, 陈艺萌, 朱英, 黄永会 申请人:贵州省生物技术研究所