一种黑木耳新菌种及其人工栽培方法
【专利摘要】本发明涉及一种黑木耳及其人工栽培方法。所述黑木耳新菌种为黑木耳(Auricularia?auricula(L.exHook.)Underw)MCC126001，保藏编号为CGMCC?No.8708。本发明还公开了该黑木耳新菌种CGMCC?No.8708的人工栽培方法，包括组织分离菌种后制作母种，制作原种，制作生产种，培养及出耳管理和生长期管理。本发明的有益效果是：本发明提供一种新的黑木耳菌种，该菌种来自于安徽六安市金寨县沙河乡的青冈栎树，并且还提供了该新菌种的人工栽培方法。经试验证明，本发明发现的该黑木耳新菌种，有效成分如钙、锌、镁的含量高，降血脂效果明显，有益于身体健康，并且具有很高的经济效益。
【专利说明】一种黑木耳新菌种及其人工栽培方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黑木耳新菌种及其人工栽培方法。
【背景技术】
[0002] 黑木耳 Auricularia auricula (L. exHook. ) Underw，属担子菌亚门，担子菌纲，木 耳目，木耳科，木耳属，别名为木耳，黑木耳，细木耳。它是著名的山珍，可食、可药、可补的一 种食药兼用菌，也是我国的传统食品和出口贸易食品，具药食两用价值，有滋补强壮、扶正 固本之功效。黑木耳多糖有着很重要的药理作用，如调节免疫功能、降血脂、抗血栓、抗衰 老、抗肿瘤、抗凝血等作用。
[0003] 中国是木耳的主要生产国，产区主要分布在广西、云南、贵州、四川、湖北、黑龙江、 吉林等地，其中黑龙江省东宁县绥阳镇是中国最大的黑木耳基地。我国直到2006年6月 1日起才开始施行《食用菌菌种管理办法》，菌种管理非常混乱，同物异名、同名异物现象严 重。黑木耳品种名称有100多个，真实存在的品种估计实际上只有几十个。假种、错种等菌 种纠纷经常发生。通过2007、2008年2次国家认定了 22个品种，但是由于是按照食用菌老 品种认定办法认定的，仅做了遗传差异检测.其它农艺性状等信息尚不完善。
[0004] 生产中使用的品种绝大多数为野生菌种直接驯化而来，产量和品质稳定性较差。 国内黑木耳生产主要以塑料袋栽培为主，少量的椴木栽培。管理模式上主要是露天大地栽 培为主，还有少量的塑料大棚栽培。黑木耳的品种从形状上可分为少筋，多筋和无筋三类， 从生育期上可分为早熟，中熟和晚熟三类。具体品种上百种，如德金1号，元宝2号，黑山， 丰收2号，黑状元等等。本申请是在安徽六安市金寨县沙河乡的青网栎树上发现并分离的 新菌种。经研究，未见关于该菌种的研究报道。
【发明内容】
[0005] 针对以上不足，本发明提供一种黑木耳新菌种及其栽培方法。
[0006] 本发明通过以下方案达到上述目的：
[0007] 本发明旨在提供一株木耳菌株，经鉴定为黑木耳，并组织分离获得原始菌株，将该 菌株命名黑木耳MCC126001，该菌株已于2014年3月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编 号为 CGMCC No. 8708 (Auricularia auricula)。
[0008] 上述黑木耳CGMCC NO. 8708的人工栽培方法，包括组织分离菌种后制作母种，制作 原种，制作生产种，培养及出耳管理和生长期管理。
[0009] 优选的，上述黑木耳新菌种的人工栽培方法，包括如下步骤：
[0010] (1)制作母种：采集组织分离的菌种黑木耳MCC126001，将菌种无菌接至母种培养 基斜面，置于25°C培养箱中恒温暗培养，直至菌丝长满斜面即得生产母种，
[0011] (2)制作原种：将生产母种无菌接入原种袋中，置于25°C培养箱中恒温暗培养，至 菌丝吃满料后即得原种；
[0012] (3)制作生产种：将原种无菌接入生产种袋中，置于25°C培养箱中恒温暗培养，至 菌丝吃满料后即得生产种；
[0013] (4)培养：选择培养用段木，在段木上打穴，对步骤（3)的生产种进行消毒外表 面（例如使用75 %的酒精进行消毒），刮去表面老皮为宜，再将菌种掰成小块，填满孔穴 后轻轻按压，按紧后盖上预制的树皮，接种后的段木以"井"字形上堆，温度控制在25? 29°C，恒温遮光培养，堆内空间相对湿度大于80%，直至菌丝萌发并长出后，将温度控制在 20-25°C，恒温遮光培养，直到菌丝长满段木；再控制温度为25-29°C，4-6周后，菌丝完成后 熟期，段木的表面轻按有弹性，此时进入出耳阶段；
[0014] (5)出耳管理：出耳时菌棒疏散排放，控制温度在15-25°C之间，并且有约10°C的 温差为宜，空气相对湿度85-90%之间，光照为100-2001ux，二氧化碳含量控制在lOOOppm 以下，直至子实体长至直径〇. 5厘米至1厘米大小时；
[0015] (6)生长期管理：控制相对湿度在95%以上，采用干干湿湿的管理方法，待木耳成 熟时采收。
[0016] 其中，上述步骤￠)的木耳成熟时是指木耳耳片充分展开，边缘开始收缩，颜色由 深变浅，腹面产生白色的孢子粉，肉质肥厚，耳根收缩、变细时，表明木耳成熟。
[0017] 优选的，上述干干湿湿的管理方法是指在子实体生长一定的程度（通常是子实体 生长直径0. 5厘米-1厘米）时停止浇水，然后晒菌棒3-7天，然后再浇水，再在子实体生长 一定的程度时（通常是子实体生长直径〇. 5厘米-1厘米）停止浇水，再晒菌棒3-7天直至 收获。其中，浇水通常采用阴天少浇水（1-2次），睛天多浇水（3-4次），雨天不浇水的方式。
[0018] 优选的，上述母种培养基的原料组成按质量百分比为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼 脂2 %、磷酸二氢钾0. 3 %、硫酸镁0. 15 %、维生素 B1微量，其余为水。
[0019] 优选的，上述原种培养基的原料组成按质量百分比为高粱78-82 %，小米 16-20 %，CaC03l-2 %，含水量55-60 %，将所述原种培养基装入菌种袋中，制得原种袋。
[0020] 优选的，上述生产种培养基的原料组成可以为可选的两种，第一种按质量百分比 为：棉籽壳87-89 %，麸皮10-12 %，CaC03l-2 %，含水量55-60 %;第二种按质量百分比为：： 棉籽壳48-52 %，木屑25-30 %，麸皮18-20 %，碳酸钙1-2 %，硫酸钙1-2 %，含水量55-60 %; 将生产种培养基装入菌种袋中，制得生产种袋。
[0021] 优选的，上述培养用段木是指长为0. 8米-1. 2米，直径为5-15厘米的短段木，含 水量 40-45%。
[0022] 优选的，常用的培养用段木有壳斗科和桦木科、杨柳科的树种等，也可以采用其他 阔叶树，在选择培养用段木时，通常选用直径在5?12cm的枝条，砍伐后做成1?1. 2m的 长段，然后置于通风向阳处架晒。
[0023] 优选的，将生产种接种到段木上时，选择晴天在阴凉处操作为宜，打穴时通常在段 木上用电钻以穴距7cm垂直打深1. 5cm的穴。
[0024] 优选的，接种后的段木以"井"字形上堆，堆高约lm左右，段木间留一定的间隔。
[0025] 优选的，生产种接种到段木后20天左右，检查发菌情况，如发现漏点或菌丝坏死， 应及时补种。
[0026] 该黑木耳CGMCC N0. 8708子实体具有以下的形态特征：
[0027] 担子果具有弹性，胶质，半透明，干后革质。有菌盖，呈耳壳状，圆形或贝壳状。单 生至簇生。朵宽4. 5厘米，高3. 5厘米，皱耳状或不规则，褐带绿色。子实层体生于耳的 外侧。不孕面具基部为褪色、往上渐浅色的毛，25-30*5-7μπι无髓层。上位亚致密层厚 60-75 μ m。子实层厚45-60 μ m。中间层菌丝排列疏松，黄褐色，厚272-309 μ m。下位亚致密 层厚60-75 μ m。子实层厚45-60 μ m。孢子肾形，9-10 (-12) *5-6 μ m，光滑，无色至微黄色。
[0028] 将该菌种菌丝经培养后，进行DNA提取和纯化，采用真菌核糖体基因间隔区 通过引物对对ITS1/ITS4进行PCR扩增后进行序列测定，经比对与木耳Auricularia auricula(L. exHook. )Underw的ITS序列相似性=100%，可以认定其菌种为木耳菌种。
[0029] 本发明的有益效果是：本发明提供一种新的黑木耳菌种，该菌种来自于安徽六安 市金寨县沙河乡的青R栎树，并且还提供了该新菌种的人工栽培方法。经试验证明，本发 明发现的该黑木耳新菌种，有效成分如钙、锌、镁的含量高，降血脂效果明显，有益于身体健 康，并且具有很高的经济效益。
【具体实施方式】
[0030] 以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
[0031] 实施例1
[0032] 黑木耳新菌种CGMCC N0. 8708的人工栽培方法，包括以下步骤：
[0033] (1)制作母种：采集组织分离的菌种黑木耳MCC126001，将菌种无菌接至母种培养 基斜面，置于25°C培养箱中恒温暗培养，直至菌丝长满斜面即得生产母种，
[0034] (2)制作原种：将生产母种无菌接入原种袋中，置于25°C培养箱中恒温暗培养，至 菌丝吃满料后即得原种；
[0035] (3)制作生产种：将原种无菌接入生产种袋中，置于25°C培养箱中恒温暗培养，至 菌丝吃满料后即得生产种；
[0036] (4)培养：接种常用的段木有壳斗科和桦木科、杨柳科的树种，也可以采用其他阔 叶树。宜选直径在5?12cm的枝条，砍伐后做成1?1. 2m的长段，然后置于通风向阳处架 晒。生产种接种选择晴天在阴凉处操作，先在段木上用电钻以穴距7cm垂直打深1. 5cm的 穴。生产种接种前要用75%的酒精消毒其外表面。接种时刮去表面老皮，用无菌镊子把菌 种掰成小块，填满孔穴后轻轻按压，按紧后盖上预制的树皮；
[0037] 接种后的段木以"井"字形上堆，堆高约lm，段木间留一定的间隔，温度控制在 25?29°C，恒温遮光培养，堆内空间相对湿度大于80%。直至菌丝萌发并长出后，将温度控 制在20-25°C，恒温遮光培养，直到菌丝长满段木后，控制温度为25-29°C，约4-6周后，菌丝 完成后熟期，段木的表面轻按有弹性，此时进入出耳阶段；
[0038] 此外，在生产种接种20天后，检查发菌情况，如发现漏点或菌丝坏死，应及时补 种。
[0039] (5)出耳管理：出耳时菌棒疏散排放，控制温度在15-25°C之间，空气相对湿度 85-90%之间，光照为100-2001ux，二氧化碳含量控制在lOOOppm以下，直至子实体长至直 径0. 5厘米至1厘米大小时；
[0040] (6)生长期管理：控制相对湿度在95%以上，在子实体生长一定的程度时停止浇 水，然后晒菌棒3-7天，然后再浇水（阴天少浇水（1-2次），睛天多浇水（3-4次），雨天不 浇水），在子实体生长一定的程度时停止浇水，再晒菌棒3-7天直至木耳成熟时收获，所谓 木耳成熟是指耳片充分展开，边缘开始收缩，颜色由深变浅，腹面产生白色的孢子粉，肉质 肥厚，耳根收缩、变细，说明木耳已经成熟，需要及时采收。子实体生长一定的程度通常是指 子实体直径生长〇. 5厘米-1厘米。
[0041] 上述步骤中的培养基如下：
[0042] 母种培养基的原料组成按质量百分比为马铃薯20%、葡萄糖2%、琼脂2%、磷酸 二氢钾0. 3%、硫酸镁0. 15%、维生素&微量，其余为水。
[0043] 原种培养基的原料组成按质量百分比为高粱78-82 %，小米16-20 %，CaC03l_2 %， 含水量55-60 %，将所述原种培养基装入菌种袋中，制得原种袋。
[0044] 生产种培养基的原料组成为以下两种的任意一种，第一种按质量百分比为：棉籽 壳87-89 %，麸皮10-12%，CaC03l-2 %，含水量55-60 % ;第二种按质量百分比为：棉籽壳 48-52 %，木屑25-30 %，麸皮18-20 %，碳酸钙1-2 %，硫酸钙1-2 %，含水量55-60 % ;将生 产种培养基装入菌种袋中，制得生产种袋。
[0045] 实施例2
[0046] 黑木耳新菌种CGMCC N0. 8708的有效成分分析
[0047] 本实施例共采用包括本发明的新菌种在内的5种不同的样品进行有效成分分析， 5种样品分别如下所示，有效成分分析包括：蛋白质含量，总糖含量，钙含量，铁含量，锌含 量肩含量7钾含量7镁含量。
[0048] 五种样品如下：
[0049] 样品1 :东北秋木耳（元宝2号），其栽培时间为五月接种，七月出耳，栽培地点为 黑龙江省东宁县；
[0050] 样品2 :东北黑木耳（元宝2号），其栽培时间为一月接种，三月出耳，栽培地点为 黑龙江省东宁县；
[0051] 样品3 :西藏野生木耳6号，其栽培时间为一月接种，三月出耳，栽培地点为西藏林 芝地区八一镇；
[0052] 样品4 :西藏木耳（元宝2号），其栽培时间为一月接种，三月出耳，栽培地点为西 藏林芝地区八一镇；；
[0053] 样品5 :黑木耳MCC126001，其栽培时间为一月接种，三月出耳，栽培地点为安徽六 安市金寨县。
[0054] 其中，有效成分分析的检测方法分别来自于：中华人民共和国卫生部.GB/T 5009. 5-2010食品中蛋白质的测定[S].北京：中国标准出版社，2010 ;中华人民共和国卫 生部.GB/T15672 · 2009食用菌中总糖含量的测定[S].北京：中国标准出版社，2009 ;食品 卫生检验方法.理化部分（一）.GB/T 5009. 92- 2003食品中钙的测定[S].北京：中国标 准出版社，2003 ;食品卫生检验方法.理化部分（一）.GB/T 5009. 90. 2003食品中铁、镁、 锰的测定[S].北京：中国标准出版社，2003;食品卫生检验方法.理化部分（一）.GB/T 5009. 14- 2003食品中锌的测定[S].北京：中国标准出版社，2003 ;食品卫生检验方法.理 化部分（一）.GB/T5009. 87. 2003食品中磷的测定[S].北京：中国标准出版社，2003 ;食品 卫生检验方法.理化部分（一）.GB/T 5009. 14- 2003食品中钾的测定[S].北京：中国标 准出版社，2003 ;食品卫生检验方法.理化部分（一）.GB/T 5009. 90. 2003食品中铁、镁、锰 的测定[S].北京：中国标准出版社，2003。
[0055] 五种样品的有效成分分析结果如表1-表3所示。
[0056] 表1五种样品的蛋白质含量和总糖含量测定结果
[0057]
【权利要求】
1. 一种黑木耳新菌种，其特征在于，所述黑木耳新菌种为黑木耳（Auricularia auricula(L. exHook. )Underw)MCC126001，保藏编号为 CGMCC No. 8708。
2. -种人工栽培如权利要求1所述的黑木耳新菌种的方法，其特征在于，包括组织分 离菌种后制作母种，制作原种，制作生产种，培养、出耳管理和生长期管理。
3. 如权利要求2所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，包括： (1) 制作母种：采集组织分离的菌种黑木耳MCC126001，将菌种无菌接至母种培养基斜 面，置于25°C培养箱中恒温暗培养，直至菌丝长满斜面得到生产母种； (2) 制作原种：将生产母种无菌接入原种袋中，置于25°C培养箱中恒温暗培养，至菌丝 吃满料后得原种； (3) 制作生产种：将原种无菌接入生产种袋中，置于25°C培养箱中恒温暗培养，至菌丝 吃满料后得生产种； (4) 培养：选择培养用段木，在段木上打穴，对步骤（3)的生产种进行外表面消毒，再将 菌种掰成小块，填满孔穴后轻轻按压，按紧后盖上预制的树皮，接种后的段木以"井"字形上 堆，温度25?29°C，恒温遮光培养，堆内空间相对湿度大于80%，直至菌丝萌发并长出后， 将温度控制在20-25°C，恒温遮光培养，直到菌丝长满段木；再控制温度为25-29°C，4-6周 后，菌丝完成后熟期，段木的表面轻按有弹性，此时进入出耳阶段； (5) 出耳管理：出耳时菌棒疏散排放，控制温度在15-25°C之间，空气相对湿度85-90% 之间，光照为100-2001u X，二氧化碳含量控制在lOOOppm以下，直至子实体长至直径0. 5厘 米至1厘米大小时进行下一步骤； (6) 生长期管理：控制相对湿度在95 %以上，采用干干湿湿的管理方法，待木耳成熟时 米收。
4. 如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述步骤（6) 的木耳成熟时是指木耳耳片充分展开，边缘开始收缩，颜色由深变浅，腹面产生白色的孢子 粉，肉质肥厚，耳根收缩、变细时。
5. 如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述干干湿 湿的管理方法是指在子实体每长直径〇. 5厘米-1厘米时停止浇水，然后晒菌棒3-7天，然 后再浇水，再待其再生长〇. 5厘米-1厘米时再停止浇水，晒菌棒3-7天，重复晒菌棒和浇水 步骤直至收获。
6. 如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述步骤（5) 出耳管理中将菌棒疏散排放的立杆角度为45度至60度。
7. 如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述母种培 养基的原料组成按质量百分比为马铃薯20 %、葡萄糖2 %、琼脂2 %、磷酸二氢钾0. 3 %、硫 酸镁0. 15%、维生素 B1微量，其余为水。
8. 如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述原种培 养基的原料组成按质量百分比为高粱78-82 %，小米16-20 %，CaC03l-2 %，含水量55-60 %， 将所述原种培养基装入菌种袋中，制得原种袋。
9. 如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述生产种 培养基的原料组成按质量百分比为：棉籽壳87-89%，麸皮10-12%，CaC0 3l-2%，含水量 55-60%;或为：棉籽壳48-52%，木屑25-30%，麸皮18-20%，碳酸钙1-2%，硫酸钙1-2%， 含水量55-60% ;将生产种培养基装入菌种袋中，制得生产种袋。
10.如权利要求3所述的一种黑木耳新菌种的人工栽培方法，其特征在于，所述培养用 段木是指长为〇. 8米-1. 2米，直径为5-15厘米的段木，含水量40-45 %。
【文档编号】A01G1/04GK104094770SQ201410186411
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年5月5日 优先权日:2014年5月5日
【发明者】胡惠萍, 谢意珍, 黄龙花, 丁银润, 刘远超, 曹仁润 申请人:广东省微生物研究所, 广东粤微食用菌技术有限公司