本发明属于植物组织培养研究领域，具体涉及一种蜈蚣兰组培快繁方法。
背景技术：
蜈蚣兰（Cleiso-stamascolopendrifolium(Makino)Garay）属兰科隔距兰属，是国家Ⅱ级保护植物，主要分布于我国中东部的河南、浙江、福建、重庆等13个省、直辖市，附生于海拔1000米的山涧两侧的岩石或树皮上。蜈蚣兰全株可入药，有清热解毒、润肺止咳和利水通淋等功效，具有广泛的药用价值，主要用于治疗气管炎、胆囊炎、咽喉炎、急性扁桃体炎、慢性副鼻窦炎、小儿惊风等症，在湖北武当山地区被民间作为还阳草入药，认为对某些疾病患者有起死回生的作用。因其分布区域较窄、生境独特、种群较小，易受人类活动影响等原因，影响了该物种资源的开发和利用，组织培养技术为蜈蚣兰种质资源的保存和开发开辟了新途径。由于蜈蚣兰植株内具有内生真菌，在组织培养初代培养时内生菌丝迅速蔓延，严重影响组培快繁体系的建立，至今没有蜈蚣兰组培快繁方法的研究报道。
技术实现要素：
本发明提供一种蜈蚣兰组培快繁方法，目的在于解决现有技术存在的问题，降低内生菌的污染率，其特征在于包括以下步骤：（1）外植体采集及消毒：春季剪取长2～3cm带茎尖的蜈蚣兰茎段，剥去叶片，用清水冲洗1～2h，在超净工作台上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗5～6次；（2）芽诱导培养：将经步骤（1）消毒后的茎段切下茎尖，接种至芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，培养25～35d得到丛生芽，培养条件为：光照10～12h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；（3）增殖培养：将步骤（2）芽诱导培养得到的丛生芽切取单芽，接种至增殖培养基进行增殖培养，培养30～40d后切取生长健壮的单芽，备用，培养条件为：光照12～16h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖培养中获得的单芽接种至壮苗培养基进行壮苗培养，培养15～20d后得到无根苗，培养条件为：光照12～16h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；（5）生根培养：将步骤（4）壮苗培养中获得的无根苗接种至生根培养基进行生根培养，培养25～35d得到生根的试管苗，培养条件为：光照10～12h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；（6）炼苗移栽：将步骤（5）生根培养得到的试管苗，挑选苗高6～8cm的壮苗带瓶移至温度25±2℃、空气相对湿度75～80%、光强2000～2500Lx的环境下，逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后取出组培苗，洗净培养基，栽至温度16～26℃，空气相对湿度80％～85％，光强2000～2500Lx环境下的苗床中，苗床基质由泥炭土、珍珠岩、松树皮按体积比3：1：1混合而成。前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（2）所述的芽诱导培养基成分为：MS+6-BA3.0～5.0mg/L+IAA0.5～0.8mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+CM10%，pH为5.5～6.5。前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（3）所述的增殖培养基成分为MS+6-BA4.0～6.0mg/L+NAA0.6～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+CM10%，pH5.5～6.5。前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（4）所述的壮苗培养基成分为MS+GA31.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+椰汁15%，pH5.5～6.5。前述的一种蜈蚣兰组培快繁方法，其中步骤（5）所述的生根培养基成分为：MS+IBA1.0～3.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+香蕉泥10%，pH5.5～6.5。本发明的有益效果体现在：提供了蜈蚣兰的组织培养和快速繁殖技术，通过培养基中添加多菌灵可有效抑制蜈蚣兰内生菌及其他杂菌的污染，本方法重复性良好，培养周期短，有效增殖率高，生根苗生长健壮、整齐，生根率为85%～90%，移栽成活率为94%～98%，可进行大规模商品化育苗生产，对于保护蜈蚣兰种质资源及其开发利用具有重要意义。具体实施方式实施例1（1）外植体采集及消毒：春季剪取长2～3cm带茎尖的蜈蚣兰茎段，剥去叶片，用清水冲洗1～2h，在超净工作台上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗5～6次；（2）芽诱导培养：将经步骤（1）消毒后的茎段切下茎尖，接种至芽诱导培养基，进行丛生芽诱导培养，芽诱导培养基成分为：MS+6-BA3.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+CM10%，pH为5.5～6.5，光照培养25～35d得到丛生芽，光照培养条件为：光照10～12h/d，光照强度1500～2000Lx，温度25±2℃；（3）增殖培养：将步骤（2）芽诱导培养得到的丛生芽切取单芽，接种至增殖培养基进行增殖培养，增殖培养基成分为MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.6mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+CM10%，pH5.5～6.5，光照培养30～40d后切取生长健壮的单芽，备用，光照培养条件为：光照12～16h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；（4）壮苗培养：将步骤（3）增殖培养中获得的单芽接种至壮苗培养基进行壮苗培养，壮苗培养基成分为MS+GA31.0mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+椰汁15%，pH5.5～6.5，光照培养15～20d后得到无根苗，光照培养条件为：光照12～16h/d，光照强度2000～2500Lx，温度25±2℃；（5）生根培养：将步骤（4）壮苗培养中获得的无根苗接种至生根培养基进行生根培养，生根培养基成分为：MS+IBA1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉胶8.0～10.0g/L+50%多菌灵1～1.5g/L+香蕉泥10%，pH5....