本发明涉及植物组织培养快繁及脱毒领域，尤其涉及西农431甘薯的脱毒培育方法。
背景技术：
西农431甘薯是一种优良的甘薯，结薯集中、薯块上纺锤型。薯皮橙黄、肉桔红、薯干鲜红，口感极好，香味浓、甜、面沙，是烤红薯、加工薯脯、罐头、鲜薯干、饴糖等保健食品的好原料。但是由于甘薯容易受多种病毒和病原菌的感染，尤其在大面积种植时，容易发生西农431甘薯受病毒的危害而造成巨大的经济损失，西农431甘薯最初是在1998年育成的，经过多年种植后，容易出现严重的种性退化，易染病，从而造成了产量降低。近年来，利用植物茎尖分生组织携带病毒很少，甚至不带毒的特点，可实现无病毒或去病毒植株的繁育，因此，利用这种技术也可实现品质优良的西农431甘薯苗的培育。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供西农431甘薯的脱毒培育方法。
本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：西农431甘薯的脱毒培育方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)在西农431甘薯的种植大田中选取长势旺盛的健康植株，剪取3cm长的顶芽，对齐进行消毒，消毒方法为：首先用0.1％的洗衣粉浸泡10min，用流水冲洗1～2h，再用75％的酒精浸泡60s，再用2.5％NaOCl消毒5～10min，使用无菌水冲洗5次；
(2)在解剖镜下无菌剥离0.3mm大小的生长点带2个叶原基，接种在预先制备好的培养基中进行培养，培养基为：在MS基本培养基中加入BAP 1mg/L、NAA0.01mg/L和GA30.1mg/L，培养条件为：培养温度为27℃，光照强度2000LX，光照时间13h/d；
(3)当茎尖发育成带有4～5个叶片的小植株时，进行血清法病毒检测，检测程序为：样品采集→在膜上点样→加入封阻液→冲洗→添加特异病毒抗体→冲洗→加入酶标抗体→冲洗→显色→终止反应，得到检测呈阴性的脱毒株系；
(4)对脱毒株系进行快繁培育，在无菌条件下，将茎尖苗剪切成段，每段带一节和一片叶，形态学的下端扦插于培养基中进行培育，培养基为：在MS基本培养基中加入IAA 0.1mg/L和GA3 0.1mg/L，培养温度为27℃，光照强度2000LX，光照时间15h/d，使茎段下端长出根，侧芽向上萌发形成完整植株；
(5)长成完整植株后进行炼苗，方法为：将装有小苗的培养瓶移到15℃的培养室中放置7d，然后打开培养瓶用镊子取出小苗，洗去根部残余的培养基；
(6)将经过炼苗后的植株苗栽入苗圃地，进行盖土、洒水，及时搭建塑料薄膜拱棚，并加盖遮阳网，进行覆盖遮阴保湿30d，然后去除遮阳网及塑料薄膜。
特别的，所述步骤(6)中的盖土厚度为3cm。
特别的，所述步骤(6)中，覆盖遮阴保湿的第3天，打开塑料薄膜拱棚进行二次盖土、洒水，覆盖遮阴保湿的第7天，于塑料薄膜上打孔透气，而后逐渐加大加多透气孔，第30天时撤去塑料薄膜。
本发明的有益效果是：本发明中西农431甘薯的茎尖脱毒苗的培育过程简单，可操作性强，培育步骤合理，可以获得成活率较高的西农431甘薯苗，并且在培育过程中，合理选用加入了生长调节剂的MS培养基，有助于植株幼苗的生长，提高幼苗成活率，植株培育完成后进行了炼苗，在移栽苗圃地后，进行了渐进式的通风透气，提高了植株幼苗的环境适应性和成活率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例1
(1)在西农431甘薯的种植大田中选取长势旺盛的健康植株，剪取3cm长的顶芽，对齐进行消毒，消毒方法为：首先用0.1％的洗衣粉浸泡10min，用流水冲洗1h，再用75％的酒精浸泡60s，再用2.5％NaOCl消毒5min，使用无菌水冲洗5次；
(2)在解剖镜下无菌剥离0.3mm大小的生长点带2个叶原基，接种在预先制备好的培养基中进行培养，培养基为：在MS基本培养基中加入BAP 1mg/L、NAA0.01mg/L和GA30.1mg/L，培养条件为：培养温度为27℃，光照强度2000LX，光照时间13h/d；
(3)当茎尖发育成带有4个叶片的小植株时，进行血清法病毒检测，检测程序为：样品采集→在膜上点样→加入封阻液→冲洗→添加特异病毒抗体→冲洗→加入酶标抗体→冲洗→显色→终止反应，得到检测呈阴性的脱毒株系；
(4)对脱毒株系进行快繁培育，在无菌条件下，将茎尖苗剪切成段，每段带一节和一片叶，形态学的下端扦插于培养基中进行培育，培养基为：在MS基本培养基中加入IAA 0.1mg/L和GA3 0.1mg/L，培养温度为27℃，光照强度2000LX，光照时间15h/d，使茎段下端长出根，侧芽向上萌发形成完整植株；
(5)长成完整植株后进行炼苗，方法为：将装有小苗的培养瓶移到20℃的培养室中放置7d，然后打开培养瓶用镊子取出小苗，洗去根部残余的培养基；
(6)将经过炼苗后的植株苗栽入苗圃地，进行盖土、洒水，盖土厚度为3cm，及时搭建塑料薄膜拱棚，并加盖遮阳网，进行覆盖遮阴保湿30d，覆盖遮阴保湿的第3天，打开塑料薄膜拱棚进行二次盖土、洒水，覆盖遮阴保湿的第7天，于塑料薄膜上打孔透气，而后逐渐加大加多透气孔，第30天时撤去塑料薄膜。
实施例2
(1)在西农431甘薯的种植大田中选取长势旺盛的健康植株，剪取3cm长的顶芽，对齐进行消毒，消毒方法为：首先用0.1％的洗衣粉浸泡10min，用流水冲洗2h，再用75％的酒精浸泡60s，再用2.5％NaOCl消毒10min，使用无菌水冲洗5次；
(2)在解剖镜下无菌剥离0.3mm大小的生长点带2个叶原基，接种在预先制备好的培养基中进行培养，培养基为：在MS基本培养基中加入BAP 1mg/L、NAA0.01mg/L和GA30.1mg/L，培养条件为：培养温度为27℃，光照强度2000LX，光照时间13h/d；
(3)当茎尖发育成带有5个叶片的小植株时，进行血清法病毒检测，检测程序为：样品采集→在膜上点样→加入封阻液→冲洗→添加特异病毒抗体→冲洗→加入酶标抗体→冲洗→显色→终止反应，得到检测呈阴性的脱毒株系；
(4)对脱毒株系进行快繁培育，在无菌条件下，将茎尖苗剪切成段，每段带一节和一片叶，形态学的下端扦插于培养基中进行培育，培养基为：在MS基本培养基中加入IAA 0.1mg/L和GA3 0.1mg/L，培养温度为27℃，光照强度2000LX，光照时间15h/d，使茎段下端长出根，侧芽向上萌发形成完整植株；
(5)长成完整植株后进行炼苗，方法为：将装有小苗的培养瓶移到20℃的培养室中放置7d，然后打开培养瓶用镊子取出小苗，洗去根部残余的培养基；
(6)将经过炼苗后的植株苗栽入苗圃地，进行盖土、洒水，盖土厚度为3cm，及时搭建塑料薄膜拱棚，并加盖遮阳网，进行覆盖遮阴保湿30d，覆盖遮阴保湿的第3天，打开塑料薄膜拱棚进行二次盖土、洒水，覆盖遮阴保湿的第7天，于塑料薄膜上打孔透气，而后逐渐加大加多透气孔，第30天时撤去塑料薄膜。
上面对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。