本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种卡特兰组培快速繁殖方法。
背景技术：
卡特兰，是国际上最有名的兰花之一。原产美洲热带，为巴西、哥伦比亚等国国花。品种在数千个以上，颜色有白、黄、绿、红紫等。繁殖用分株、组织培养或无菌播种，性喜温暖、潮湿和充足的光照。卡特兰高效繁殖的主要手段就是组织培养。国外一些发达国家常常采用工厂化育苗技术以及组织培养快繁技术，不仅可以创造巨大的经济效益，同时也培育了很多优良品种，然而我国关于卡特兰组织培养的快繁技术研究仍然处于初级阶段，在很大程度上阻碍了卡特兰的规模化生产。并且现有的其他兰花品种的组织培养不能直接运用到卡特兰培养上，所以现在目前急需一种卡特兰组培繁殖方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种培养繁殖快、效率高的卡特兰组培快速繁殖方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种卡特兰组培快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好的卡特兰植株，进行5～8d的遮光处理，遮光处理后，选取长势健壮植株上的新芽作为外植体；
(2)外植体预处理：用抗氧化剂溶液洗涤刚切割的外植体花芽伤口表面；
(3)外植体消毒：用软刷毛将选取的外植体花芽在水池中进行初步清洗，去除表面的泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min，然后在超净台上剥除外植体花芽最外面的一层苞叶，在经高温灭菌过的75％酒精中浸泡1～2s，然后在浸泡在10％的次氯酸钠溶液中初次消毒10min，初次消毒后，用无菌水冲洗5遍，再剥去一层苞叶，放入5％的次氯酸钠溶液中再次消毒5min，接着采用重复消毒的方式，每次次氯酸钠的浓度为上次消毒的一半，消毒时间也为上次消毒的一半，直至剥至留下最后的芽体，最后切取5mm左右的芽尖，泡在0.5％的次氯酸钠溶液中消毒1min，用无菌水冲洗6～8次，用消毒滤纸吸干表面水分后放置于培养皿中备用；
(4)诱导培养：将消毒后的外植体，接种在诱导培养基中进行培养，先进行7～10d的弱光照培养，光照强度为500～700lx，然后在进行常规光照培养，光照强度为1500～2000lx，培养温度为24～26℃，光照时间为13h/d；所述诱导培养基为：1/2MS+0.4～0.8mg/L 6-BA+0.05～0.08mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+490～510mg/L柠檬酸+5～7g/L PVP，pH值为5.4～5.5；
(5)超声波处理：将诱导出的原球茎放在频率为25kHz的超声波中处理3～4min；
(6)增殖培养：超声波处理后转移至增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+1～2mg/L 6-BA+0.4～0.6mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+490～510mg/L柠檬酸+2～4g/L PVP，pH值为5.4～5.5；培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；
(7)生根培养：增殖培养后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入第一生根培养基中进行生根前期培养，所述第一生根培养基为：1/4MS+1.4～1.6mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+28～33g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+2～4g/L PVP，pH值为5.4～5.5；培养时间为10d，培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；生根前期培养结束后，转入第二生根培养基中继续培养，所述第二生根培养基为：1/4MS+28～33g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+8～12％香蕉汁+2～4g/L PVP+5～10％土豆泥，pH值为5.4～5.5；培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；
(8)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。
如上所述的一种卡特兰组培快速繁殖方法，进一步说明为，所述诱导培养基为：1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.07mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+500mg/L柠檬酸+6g/L PVP。
如上所述的一种卡特兰组培快速繁殖方法，进一步说明为，所述增殖培养基为：1/2MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+500mg/L柠檬酸+3g/L PVP。
如上所述的一种卡特兰组培快速繁殖方法，进一步说明为，所述第一生根培养基为：1/4MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+3g/L PVP。
如上所述的一种卡特兰组培快速繁殖方法，进一步说明为，所述第二生根培养基为：1/4MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+10％香蕉汁+3g/L PVP+8％土豆泥。
如上所述的一种卡特兰组培快速繁殖方法，进一步说明为，所述抗氧化剂溶液选用谷胱甘肽或抗坏血酸。
本发明的有益效果是：通过本发明能对卡特兰进行快速培养繁殖，效率高，并且培养后的卡特兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养卡特兰提供了技术支持。同时本组培繁殖方法消毒效果好、褐变率低，从而大大提高了成苗率及工作效率，节约了资源。
附图说明
图1为本发明流程示意图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明实施方式做进一步的阐述。
如图1所示，本发明提供的一种卡特兰组培快速繁殖方法，包括以下步骤：材料选取、外植体预处理、外植体消毒、诱导培养、超声波处理、增殖培养、生根培养和移栽，本方法消毒效果好、培养繁殖快、成苗率高及褐变率低，从而能够降低卡特兰在组培过程中的褐变率，增大成苗率，提高工作效率，下面对方法中的每个步骤做详细阐述。
(1)材料选取：选取无病虫害长势良好的卡特兰植株，进行5～8d的遮光处理，遮光处理后，选取长势健壮植株上的新芽作为外植体；采用无病虫害长势良好的卡特兰植株能够降低苗株的发病率，保证在组培过程中不受其他因素的干扰，增加外植体成活率，并且经过遮光处理，能够降低褐变率。
(2)外植体预处理：用抗氧化剂溶液洗涤刚切割的外植体花芽伤口表面；能够最大程度地减少氧气与外植体切面接触的机会，同时充分的析出外植体中水溶性的多酚物质和醌类物质，较少酚类物质的氧化，从而有效地减轻卡特兰外植体在组织培养过程中的褐变，作为优选，所述抗氧化剂选用谷胱甘肽溶液，还可以选用抗坏血酸，还可以将几种抗氧化剂结合在一起使用。
(3)外植体消毒：用软刷毛将选取的外植体花芽在水池中进行初步清洗，去除表面的泥沙，然后用洗洁精清洗干净，置于流水下冲洗30min，然后在超净台上剥除外植体花芽最外面的一层苞叶，在经高温灭菌过的75％酒精中浸泡1～2s，然后在浸泡在10％的次氯酸钠溶液中初次消毒10min，初次消毒后，用无菌水冲洗5遍，再剥去一层苞叶，放入5％的次氯酸钠溶液中再次消毒5min，接着采用重复消毒的方式，每次次氯酸钠的浓度为上次消毒的一半，消毒时间也为上次消毒的一半，直至剥至留下最后的芽体，例如接下来用2.5％的次氯酸钠溶液再次消毒2.5min，冲洗后剥去一层苞叶，再用1.25％的次氯酸钠溶液再次消毒1.25min，依次类推；最后切取5mm左右的芽尖，泡在0.5％的次氯酸钠溶液中消毒1min，用无菌水冲洗6～8次，用消毒滤纸吸干表面水分后放置于培养皿中备用。采用阶梯式消毒法，在不断剥去苞衣的同时，采用不同浓度的次氯酸钠溶液进行消毒，可以使消毒效果更好，减少细菌污染的同时，提高成活率。
(4)诱导培养：将消毒后的外植体，接种在诱导培养基中进行培养，先进行7～10d的弱光照培养，光照强度为500～700lx，然后在进行常规光照培养，光照强度为1500～2000lx，培养温度为24～26℃，光照时间为13h/d。表1为采用弱光照培养对外植体的影响：
将上述两组放置在相同的培养基中进行培养，培养条件均一致，只是采用弱光照培养的一组开始前8天先进行弱光照培养，光照强度为500～700lx，没有采用弱光照培养的一组直接进行常规光照培养，光照强度为1500～2000lx，从表1中可以看出先进行一段时间的弱光照培养，能够使外植体在培养过程中逐渐适应培养条件，有利于存活，同时抑制褐变的发生。
本步骤中所述的诱导培养基为：1/2MS+0.4～0.8mg/L 6-BA+0.05～0.08mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+490～510mg/L柠檬酸+5～7g/L PVP，pH值为5.4～5.5；表2为诱导培养基的多种实施例：
作为优选，所述诱导培养基为：1/2MS+0.6mg/L 6-BA+0.07mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+500mg/L柠檬酸+6g/L PVP，即为表2中培养基1的成分及用量。
(5)超声波处理：将诱导出的原球茎放在频率为25kHz的超声波中处理3～4min；通过超声波处理后原球茎的增值率比不进行任何处理的原球茎高45％，从而提高了成苗率，加快了卡特兰组培的繁殖速率，大大提高了工作效率，为企业快速化培养卡特兰提供了技术支持。
(6)增殖培养：超声波处理后转移至增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+1～2mg/L 6-BA+0.4～0.6mg/L NAA+10～15g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+490～510mg/L柠檬酸+2～4g/L PVP，pH值为5.4～5.5；培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；表3为增殖培养基的多种实施例：
作为优选，所述增殖培养基为：1/2MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+500mg/L柠檬酸+3g/L PVP，即为表3中培养基7的成分及用量。
(7)生根培养：增殖培养后，选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入第一生根培养基中进行生根前期培养，所述第一生根培养基为：1/4MS+1.4～1.6mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+28～33g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+2～4g/L PVP，pH值为5.4～5.5；培养时间为10d，培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；生根前期培养结束后，转入第二生根培养基中继续培养，所述第二生根培养基为：1/4MS+28～33g/L蔗糖+6～8g/L琼脂+10～15％椰汁+8～12％香蕉汁+2～4g/L PVP+5～10％土豆泥，pH值为5.4～5.5；培养条件：培养温度25～28℃，光照时间为13h/d，光照强度为1500～2000lx；将生根培养分成两步进行，能使根系发育更好，表4为不同的生根处理对苗株根系的影响：
将第一组按照步骤中分两步进行生根培养，将第二组直接放置在第二生根培养基中进行培养，培养外部条件一致，相同的培养时间后对根系进行的统计，从表4中可以看出分成两步进行培养，可以提高生根率，同时根系更加发达，长势更加良好。
表5为第一生根培养基的多种实施例：
作为优选，所述第一生根培养基为：1/4MS+1.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+3g/L PVP，即为表5中培养基13的成分及用量。
表6为第二生根培养基的多种实施例：
作为优选，所述第二生根培养基为：1/4MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+13％椰汁+10％香蕉汁+3g/L PVP+8％土豆泥，即为表6中培养基19的成分及用量。
(8)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天；然后取出培养苗，用清水洗净附着在根部的培养基，清洗时注意不要损害根部，然后移栽至培养基质中，保持湿度和通风，空气湿度为75～85％，温度为20～25℃。通过本发明能对卡特兰进行快速培养繁殖，效率高，并且培养后的卡特兰苗株成苗率高，苗株品质好，栽培后适应性强，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养卡特兰提供了技术支持。同时本组培繁殖方法消毒效果好、褐变率低，从而大大提高了成苗率及工作效率，节约了资源。
本发明并不限于上述实例，在本发明的权利要求书所限定的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可做出的各种变形或修改均受本专利的保护。