一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法与流程

文档序号:12309421阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法,包括:

(1)无菌外植体的获取:选择芥菜型油菜成实饱满的种子,在超净工作台上灭菌,将灭菌后的种子播种到种子萌发培养基;播种后,暗培养;然后将伸长的下胚轴在无菌的条件下切成7mm-12mm的小段外植体;

所述的种子萌发培养基包括:MS培养基+琼脂粉6.0~8.0g/L,pH值为5.8~6.0;

(2)诱导外植体脱分化形成愈伤组织:在无菌的条件下,将切好的外植体放入愈伤诱导培养基中,诱导外植体形成愈伤组织;

愈伤诱导培养基的配方包括:MS培养基 +蔗糖28~32g/L +甘露醇16~20g/L + 2,4-D 0.8~1.2mg/L + Kinetin 0.25~0.35mg/L +琼脂粉6g/L,pH值为5.8~6.0;

(3)诱导愈伤组织再分化形成不定芽点:在无菌的条件下,将步骤(2)中所获得的愈伤组织插入不定芽点诱导培养基中,诱导形愈伤组织形成不定芽点;

不定芽点诱导培养基的配方包括:MS培养基 +蔗糖28~32g/L + TDZ1.2~1.8g/L + NAA 0.08~1.2g/L +硝酸银4.8~5.2mg/L +琼脂粉7.0~7.4g/L,pH值为5.8~6.0;

(4)不定芽的生长培养:在无菌条件下,将步骤(3)中获得的带有不定芽点的愈伤组织转移到不定芽生长培养基中,进行不定芽的生长培养;

不定芽生长培养基的配方包括:MS培养基 +葡萄糖8.0~12g/L +木糖0.23~0.27g/L + MES 0.5~0.7g/L +反式-Zeatin 1.8~2.2mg/L + IAA 0.08~0.12mg/L +琼脂粉5.8~6.2g/L,pH值为5.8~6.0;

(5)生根培养:在无菌条件下,将步骤(4)获得的不定芽切割成单株,接种到生根培养基上进行生根培养;

生根培养基的配方包括:MS培养基 +蔗糖8~12g/L +琼脂粉8~12g/L,pH值为5.8~6.0;

(6)增殖培养:接种到生根培养基上的不定芽长成具有多个侧枝生长点的完整植株,将该植株切成2-3段带有侧枝生长点的茎段后,接种到增值培养基中进行增值培养,扩繁植株;两周继代一次;

所述的增殖培养基的配方与生根培养基相同;

(7)小苗炼苗移栽:将步骤(6)中获得的已生根的小苗进行炼苗,然后按常规技术移栽到大田或温室里。

2.根据权利要求1所述的方法,步骤(2)-(6)的培养温度为20~24℃,光照度2000-2500lx,光照15~18小时/天。

3.根据权利要求1所述的方法,所述的灭菌是用75%酒精将种子浸泡处理3min后,放入无菌水中冲洗1min,然后放入0.1%升汞中浸泡10min后,无菌水冲洗6-7次。

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