本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种民族药鸡矢藤的组培快繁方法。
背景技术：
民族药鸡矢藤(paederiascandens)为茜草科鸡矢藤属植物，以根或全草入药，是彝、苗、土家等24个少数民族常用的中草药之一，具有袪风利湿，消食化积，止咳，止痛等功效，常用于风湿筋骨痛，跌打损伤，外伤性疼痛，肝胆、胃肠绞痛，黄疸型肝炎，消化不良，小儿疳积，肺结核咯血，支气管炎，放疗引起的白血球减少症，农药中毒等疾病的治疗。
鸡矢藤属多为柔弱缠绕性灌木或藤本，全世界约有40种，主产于亚洲热带地区，我国有12种，主要分布于西南、中南至华南地区，以西南部居多，其喜较温暖环境，耐寒，多生于山坡谷地、溪边及路边或林下灌丛。到目前为止对鸡矢藤的研究主要集中在其有效成分和药理及临床应用等方面，而有关其繁殖技术研究甚少。鸡矢藤可通过种子、扦插、压条等方式繁殖，但均存在周期长、繁殖系数低下等缺点。因此，有必要通过组织培养技术建立鸡矢藤的组培快繁体系，为鸡矢藤规模化种植提供优质种苗。本发明选择鸡矢藤带节茎段为外植体，经诱导、增殖、生根、炼苗以及移栽等步骤，建立了民族药鸡矢藤的组培快速繁殖体系。本发明具有周期短、成本低廉、繁殖系数高等特点，可直接用于鸡矢藤种苗的工厂化生产，对于促进民族药鸡矢藤的资源开发具有重要的现实意义。
目前，国内外尚未有鸡矢藤组织培养技术的报道，也未有鸡矢藤组培快繁专利的申请。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种民族药鸡矢藤的组培快繁方法，本发明选择鸡矢藤带节茎段为外植体，经诱导、增殖、生根、炼苗以及移栽等步骤，其诱导高达91.5％以上，达到了非常高的成活率，建立了民族药鸡矢藤的组培快速繁殖体系，从而实现了本发明的目的。
本发明提供的技术方案为：一种民族药鸡矢藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取鸡矢藤的外植体、外植体诱导、增殖培养、生根培养、移栽；
所述的外植体诱导操作的外植体诱导培养基包括：ms培养基、3.0～5.0mg/lkt、0.5～1.0mg/lnaa、25～30g/l蔗糖、3.5～4.0g/l琼脂、0.5～1.0g/l活性炭，外植体诱导培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，所述的外植体诱导操作的方法为：将采集得到的作为外植体的鸡矢藤的带节藤茎消毒后剪切成2.0～2.5cm的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25～28℃进行全暗培养20～25天即可诱导形成不定芽。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，所述的增殖培养操作所用到的增殖培养基包括：ms培养基、3.0～5.0mg/l6-ba、0.5～1.0mg/lnaa、0.1～0.3mg/l2,4-d、20～30g/l蔗糖、3.5～4.0g/l琼脂、0.1～0.5g/l活性炭，增殖培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，所述的增殖培养操作为：将经增殖培养操作得到的不定芽切成长1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养15～20天即可实现不定芽的增殖。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，所述的生根培养操作所用到的生根培养基包括：1/2ms培养基、0.5～1.0mg/lggr-7、0.05～0.1mg/l矮壮素、15～20g/l蔗糖、3.0～4.0g/l琼脂、0.1～0.3g/l活性炭，生根培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，所述的生根培养操作的方法为：从基部切取增殖培养操作得到的长2.0～3.0cm的不定芽并接种到生根培养基中培养20～25天即能实现试管苗的生根。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，所述的移栽操作的具体方法为：将经生根培养操作得到的根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗1～2天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中栽培成苗即得种苗。
在上述的民族药鸡矢藤的组培快繁方法中，增殖培养操作、生根培养操中培养条件均为：培养温度为25～28℃，光照强度为2500～3000lx，光照时间为11～13小时/天。
有益效果：
本发明采用植物组织培养技术建立了民族药鸡矢藤的组培快速繁殖体系，本发明具有周期短、成本低廉、繁殖系数高等特点，可直接用于鸡矢藤种苗的工厂化生产，对于促进民族药鸡矢藤的资源开发具有重要的现实意义。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例一
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的鸡矢藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体先在自来水下冲洗5小时，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒10秒钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒10分钟，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25℃进行全暗培养20天即可诱导形成不定芽，诱导率为95.8％，污染率低于12％。所述的诱导培养基为：ms培养基+5.0mg/lkt+1.0mg/lnaa+25g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.5g/l活性炭，ph为5.4。
(3)增殖培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养15天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到7.0倍。所述的增殖培养基为：ms培养基+5.0mg/l6-ba+1.0mg/lnaa+0.3mg/l2,4-d+20g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.1g/l活性炭，ph为5.4。
(4)生根培养：从基部切取步骤(3)增殖得到的长约2.0～3.0cm的不定芽并接种到生根培养基中培养20天即能实现试管苗的生根，生根率为98％。所述的生根培养基为：1/2ms培养基+1.0mg/lggr-7(生根粉)+0.1mg/l矮壮素+15g/l蔗糖+3.0g/l琼脂+0.1g/l活性炭，ph为5.4。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗1天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率96.5％。
上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2500lx，光照时间为11小时/天。
实施例二
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的鸡矢藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体先在自来水下冲洗6小时，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒12秒钟，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒14分钟，无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于26℃进行全暗培养23天即可诱导形成不定芽，诱导率为93.1％。污染率低于10％。所述的诱导培养基为：ms培养基+4.0mg/lkt+0.8mg/lnaa+27g/l蔗糖+3.8g/l琼脂+0.8g/l活性炭，ph为5.6。
(3)增殖培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养17天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到6.2倍。所述的增殖培养基为：ms培养基+4.0mg/l6-ba+0.8mg/lnaa+0.2mg/l2,4-d+25g/l蔗糖+3.7g/l琼脂+0.3g/l活性炭，ph为5.6。
(4)生根培养：从基部切取步骤(3)增殖得到的长约2.0～3.0cm的不定芽并接种到生根培养基中培养22天即能实现试管苗的生根，生根率为94.8％。所述的生根培养基为：1/2ms培养基+0.8mg/lggr-7(生根粉)+0.08mg/l矮壮素+18g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.2g/l活性炭，ph为5.6。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗1.5天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率为97％。
上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为27℃，光照强度为2700lx，光照时间为12小时/天。
实施例三
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的鸡矢藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)外植体诱导：当步骤(1)采集回实验室外植体先在自来水下冲洗7小时，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒15秒钟，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒15分钟，无菌水冲洗7次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于28℃进行全暗培养25天即可诱导形成不定芽，诱导率为91.7％，污染率低于8％。所述的诱导培养基为：ms培养基+3.0mg/lkt+0.5mg/lnaa+30g/l蔗糖+4.0g/l琼脂+1.0g/l活性炭，ph为5.8。
(3)增殖培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1.5～2.0cm的茎段并接种到增殖培养基中培养20天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到5.1倍。所述的增殖培养基为：ms培养基+3.0mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+0.1mg/l2,4-d+25g/l蔗糖+3.8g/l琼脂+0.3g/l活性炭，ph为5.6。
(4)生根培养：从基部切取步骤(3)增殖得到的长约2.0～3.0cm的不定芽并接种到生根培养基中培养23天即能实现试管苗的生根，生根率为92.9％。所述的生根培养基为：1/2ms培养基+0.5mg/lggr-7(生根粉)+0.05mg/l矮壮素+20g/l蔗糖+4.0g/l琼脂+0.3g/l活性炭，ph为5.8。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗2天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、泥炭土混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率为95.6％。
上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为3000lx，光照时间为13小时/天。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。