本发明涉及一种铁皮石斛的提取方法，特别是一种多糖含量高的铁皮石斛的提取方法。
背景技术：
铁皮石斛别称铁皮兰、吊兰、云南铁皮、铁皮吊兰，是兰科石斛属多年生草本植物，铁皮石斛是石斛类药材的上品，素有“中华仙草-药中黄金”之美称，以茎入药，含有多糖、石斛碱、生物碱等有效成分，具有滋阴清热、生津益胃、润喉明目等功效，在抗肿瘤、提高人体免疫力、治疗胃肠道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治疗白内障等方面均有良好疗效。
现代药理学研究表明，铁皮石斛对非特异性及特异性免疫均有增强作用，在抗肿瘤、抗氧化、降低血糖以及白内障的治疗等方面，药理作用显著。其化学成分较复杂，已确定的化合物类型主要有：生物碱类、多糖类、菲类、联苄母核类，其中生物碱类、多糖类药理活性较为显著。多糖类成分是药用石斛发挥免疫活性作用的重要物质基础，铁皮石斛多糖能显著提高外周白细胞数，促进淋巴细胞产生移动抑制因子，可有效提高机体免疫力。2010版《药典》首次收载了铁皮石斛的质量标准，对多糖以及甘露糖进行含量测定。
现有技术中对铁皮石斛进行加工时，通常是直接将铁皮石斛粉碎成粉，但是发明人在研究过程中发现，采用现有技术对灵芝进行加工时，铁皮石斛的有效成分多糖不易测出，使得灵芝的的药效还不够理想。同时随着铁皮石斛的保健功效被人们广泛的认识和接受，野生铁皮石斛已远远不能满足人们的需求。人们已经开始采用人工栽培铁皮石斛，铁皮石斛的栽培方法中，培养基是铁皮石斛赖以生存的条件，不同的培养原料和配方可对铁皮石斛的生长、产量和活性成分等产生重要的影响。现有技术中铁皮石斛用的培养基及现有栽培方法，不利于产出的铁皮石斛的品质保证。特别是不能保证铁皮石斛中多糖的含量，使得最终得到的铁皮石斛中多糖含量低。
技术实现要素：
本发明的目的，是提供一种铁皮石斛的提取方法，本发明对灵芝的具体加工工艺进行了改进，使得灵芝的有效成分多糖容易测出，且测出的多糖含量高，使得灵芝的药效好。
本发明是这样实现的。一种铁皮石斛的提取方法，取前处理后的铁皮石斛，洗净后用水和柠檬酸，浸泡后，煎煮，均趁热滤过，合并滤液，滤液70-80℃0.06-0.08mpa下减压薄膜浓缩成浸膏，浸膏干燥后粉碎，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法中，取前处理后的铁皮石斛，洗净后加6-10倍量的水和10-12倍量的柠檬酸，浸泡1-3h后，煎煮2-3次，每次1-2h，均趁热滤过，合并滤液，滤液70-80℃0.07mpa下减压薄膜浓缩成浸膏，浸膏干燥后粉碎，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述前处理为：具体包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛种子，洗净后，在超净工作台上采用70-80％的乙醇消毒5-15min后，再用无菌水冲洗3-4次，置于灭菌的滤纸上吸干后，接种到萌发培养基上，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，暗培养，直至种子萌发；
(2)待种子萌发后，将1-2cm高的单苗接种到增殖培养基上，在23-28℃，光强1500-2500lx下每天光照9-10h，直至铁皮石斛苗高为5-8cm；
(3)移栽，移栽时间为4-6月，苗高为5-8cm的铁皮石斛苗，先用清水洗净幼苗根部的培养基，再用0.3-0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒，按行距为10-15cm铁皮石斛苗种于基质中，确保基质覆盖住根系，使根系与基质接触；
(4)种植后每隔3-5天喷施1次菌灵液，连续喷施20-30天；之后采用喷施方式进行浇水，浇水次数为1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次，11月至次年3月，采收，即可。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述步骤(1)中，所述萌发培养基主要由按重量份计算的蔗糖3-6份、琼脂5-15份、黄连10-20份和贝母10-20份按下述方法制成：黄连和贝母加10-12倍量的水煎煮2-3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、琼脂混匀，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述萌发培养基主要由按重量份计算的蔗糖5份、琼脂10份、黄连15份和贝母15份按下述方法制成：黄连和贝母加11倍量的水煎煮2.5h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、琼脂混匀，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述步骤(2)中，所述增殖培养基主要由按重量份计算的蔗糖3-6份、红薯泥10-20份、黄豆渣5-15份、naa5-10份、当归10-20份和麻黄10-20份按下述方法制成：当归和麻黄加10-12倍量的水煎煮2-3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、黄豆渣和naa混匀，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述增殖培养基主要由按重量份计算的蔗糖5份、红薯泥15份、黄豆渣10份、naa8份、当归15份和麻黄15份按下述方法制成：当归和麻黄加11倍量的水煎煮2.5h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、黄豆渣和naa混匀，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述步骤(3)中，所述基质主要由按重量份计算的蔗糖3-6份、红薯泥10-20份、土豆泥10-20份、玉米糊5-15份、黄豆渣5-15份、熟地10-20份、丹皮5-15份、苦参10-20份、女贞子5-15份和吴茱萸10-20份按下述方法制成：熟地、丹皮、苦参、女贞子和吴茱萸加10-12倍量的水煎煮2-3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、土豆泥、玉米糊和黄豆渣混匀，即得。
前述的铁皮石斛的提取方法，所述基质主要由按重量份计算的蔗糖5份、红薯泥15份、土豆泥15份、玉米糊10份、黄豆渣10份、熟地15份、丹皮10份、苦参15份、女贞子10份和吴茱萸15份按下述方法制成：熟地、丹皮、苦参、女贞子和吴茱萸加10-12倍量的水煎煮2-3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、土豆泥、玉米糊和黄豆渣混匀，即得。
申请人对本发明进行了大量的实验研究，部分实验如下：
实验例1多糖含量考察.
1材料与方法
1.1材料
1.1.1铁皮石斛1：按实施例1进行提取。
1.1.2铁皮石斛2：按实施例1进行提取，前处理时萌发培养基中不含黄连和贝母，增殖培养基中不含当归和麻黄，基质中不含熟地、丹皮、苦参、女贞子和吴茱萸，其余方法同实施例1。
1.2仪器和试剂
葡萄糖标准品[d一(+)一葡萄糖]：kayon公司；甲醇(色谱纯)：天津市科密欧化学试剂有限公司；其余试剂均为分析纯；苯酚：上海凌峰化学试剂有限公司；硫酸：上海凌峰化学试剂有限公司。
2方法
2.1供试品溶液的制备
2.1.1供试品溶液1的制备：
取本发明铁皮石斛(铁皮石斛1)样品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，过三号筛，取过滤后药材粉末，挥干溶剂，加水2000ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加入95％乙醇，摇匀，冷藏1小时，取出，离心20分钟，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液1。
2.1.2供试品溶液2的制备
取铁皮石斛2样品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，过三号筛，取过滤后药材粉末，挥干溶剂，加水2000ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加入95％乙醇，摇匀，冷藏1小时，取出，离心20分钟，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液2。
2.2对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，加水制成99mg/l溶液，备用。
2.3标准曲线制备
精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml置10ml具塞试管中，加水至1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1ml(i临用前现配制)，摇匀，再精密加入硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，放入冰水浴中冷却5分钟，以相应的试剂为空白，在488nm波长处测定吸光度，以吸光度y为纵坐标，浓度x(g/l)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：y＝11.772x-0.1492，r＝0.9995。结果表明多糖在0.02-0.10g/l范围内线性关系良好。
2.4测定法
分别精密量取供试品溶液1和供试品溶液2各0.5ml，置10ml具塞试管中，加水至1ml，按“2.3”标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得。
2.5精密度试验
精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，每份0.6ml，按照“2.4”项下的方法测定吸光度。测定结果，rsd分别为1.60％和1.62％，精密度良好。
2.6重复性试验
按上述方法制备6份供试品溶液1和供试品溶液2，照按上述方法测定吸光度。测定结果，rsd分别为2.70％和2.71％，重复性良好。
2.7稳定性试验
分别取同一供试品溶液1和供试品溶液2，在室温下放置，分别于10min、30min、1h、2h、4h、6h后按上述方法测定吸光度。测定结果，rsd分别为2.70％和2.73％，表明供试品溶液1和供试品溶液2均在6小时内稳定。
2.8加样回收率试验
称取已知含量(12.5％)的铁皮石斛1粉末6份，每份约1.65g，精密称定。准确加入葡萄糖对照品溶液(浓度为0.099g/l)2ml，按上述方法制备供试品溶液1，按上述方法测定，计算多糖含量，结果平均回收率为94.9％，rsd为2.7％。
称取已知含量(12.5％)的铁皮石斛2粉末6份，每份约1.65g，精密称定。准确加入葡萄糖对照品溶液(浓度为0.099g/l)2ml，按上述方法制备供试品溶液2，按上述方法测定，计算多糖含量，结果平均回收率为93.9％，rsd为2.6％。
2.9样品测定
按上述供试品溶液1和供试品溶液2的制备方法和测定条件，测定6份铁皮石斛1样品和6份铁皮石斛2样品中多糖的含量，记录结果，结果取平均值，结果见表1。
表1多糖含量测定结果
由表可知，本发明方法进行提取得到的铁皮石斛多糖的含量较高。铁皮石斛的品质好。
与现有技术相比，本发明对灵芝的具体加工工艺进行了改进，使得灵芝的有效成分多糖容易测出，且测出的多糖含量高，使得灵芝的药效好。
具体实施方式
实施例1。
一种铁皮石斛的提取方法：取前处理后的铁皮石斛，洗净后加8倍量的水和11倍量的柠檬酸，浸泡2h后，煎煮2次，每次1.5h，均趁热滤过，合并滤液，滤液70-80℃0.07mpa下减压薄膜浓缩成浸膏，浸膏干燥后粉碎，即得。
所述前处理为：具体包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛种子，洗净后，在超净工作台上采用75％的乙醇消毒10min后，再用无菌水冲洗3次，置于灭菌的滤纸上吸干后，接种到萌发培养基上，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，暗培养，直至种子萌发；所述萌发培养基由蔗糖5kg、琼脂10kg、黄连15kg和贝母15kg按下述方法制成：黄连和贝母加11倍量的水煎煮2.5h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、琼脂混匀，即得；
(2)待种子萌发后，将1-2cm高的单苗接种到增殖培养基上，在23-28℃，光强1500-2500lx下每天光照8h，直至铁皮石斛苗高为5-8cm；所述增殖培养基由蔗糖5kg、红薯泥15kg、黄豆渣10kg、naa8kg、当归15kg和麻黄15kg按下述方法制成：当归和麻黄加11倍量的水煎煮2.5h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、黄豆渣和naa混匀，即得；
(3)移栽，移栽时间为4-6月，苗高为5-8cm的铁皮石斛苗，先用清水洗净幼苗根部的培养基，再用0.4％的高锰酸钾稀释液浸根消毒，按行距为10-15cm铁皮石斛苗种于基质中，确保基质覆盖住根系，使根系与基质接触；所述基质由蔗糖5kg、红薯泥15kg、土豆泥15kg、玉米糊10kg、黄豆渣10kg、熟地15kg、丹皮10kg、苦参15kg、女贞子10kg和吴茱萸15kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦参、女贞子和吴茱萸加11倍量的水煎煮2.5h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、土豆泥、玉米糊和黄豆渣混匀，即得；
(4)种植后每隔4天喷施1次菌灵液，连续喷施25天；之后采用喷施方式进行浇水，浇水次数为1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次，11月至次年3月，采收，即可。
实施例2.
一种铁皮石斛的提取方法：取前处理后的铁皮石斛，洗净后加10倍量的水和12倍量的柠檬酸，浸泡3h后，煎煮3次，每次2h，均趁热滤过，合并滤液，滤液70-80℃0.07mpa下减压薄膜浓缩成浸膏，浸膏干燥后粉碎，即得。
所述前处理为：具体包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛种子，洗净后，在超净工作台上采用80％的乙醇消毒15min后，再用无菌水冲洗4次，置于灭菌的滤纸上吸干后，接种到萌发培养基上，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，暗培养，直至种子萌发；所述萌发培养基由蔗糖6kg、琼脂15kg、黄连20kg和贝母20kg按下述方法制成：黄连和贝母加12倍量的水煎煮3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、琼脂混匀，即得；
(2)待种子萌发后，将1-2cm高的单苗接种到增殖培养基上，在23-28℃，光强1500-2500lx下每天光照10h，直至铁皮石斛苗高为5-8cm；所述增殖培养基由蔗糖6kg、红薯泥20kg、黄豆渣15kg、naa10kg、当归20kg和麻黄20kg按下述方法制成：当归和麻黄加12倍量的水煎煮3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、黄豆渣和naa混匀，即得；
(3)移栽，移栽时间为4-6月，苗高为5-8cm的铁皮石斛苗，先用清水洗净幼苗根部的培养基，再用0.5％的高锰酸钾稀释液浸根消毒，按行距为10-15cm铁皮石斛苗种于基质中，确保基质覆盖住根系，使根系与基质接触；所述基质由蔗糖6kg、红薯泥20kg、土豆泥20kg、玉米糊15kg、黄豆渣15kg、熟地20kg、丹皮15kg、苦参20kg、女贞子15kg和吴茱萸20kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦参、女贞子和吴茱萸加12倍量的水煎煮3h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、土豆泥、玉米糊和黄豆渣混匀，即得；
(4)种植后每隔3-5天喷施1次菌灵液，连续喷施30天；之后采用喷施方式进行浇水，浇水次数为1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次，11月至次年3月，采收，即可。
实施例3.
取前处理后的铁皮石斛，洗净后加6倍量的水和10倍量的柠檬酸，浸泡1h后，煎煮2次，每次1h，均趁热滤过，合并滤液，滤液70-80℃0.07mpa下减压薄膜浓缩成浸膏，浸膏干燥后粉碎，即得。
所述前处理为：具体包括以下步骤：
(1)取铁皮石斛种子，洗净后，在超净工作台上采用70％的乙醇消毒5min后，再用无菌水冲洗3次，置于灭菌的滤纸上吸干后，接种到萌发培养基上，在昼温为20-25℃，夜温18-20℃条件下，暗培养，直至种子萌发；所述萌发培养基由蔗糖3kg、琼脂5kg、黄连10kg和贝母10kg按下述方法制成：黄连和贝母加10倍量的水煎煮2h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、琼脂混匀，即得；
(2)待种子萌发后，将1-2cm高的单苗接种到增殖培养基上，在23-28℃，光强1500-2500lx下每天光照9h，直至铁皮石斛苗高为5-8cm；所述增殖培养基由蔗糖3kg、红薯泥10kg、黄豆渣5kg、naa5kg、当归10kg和麻黄10kg按下述方法制成：当归和麻黄加10倍量的水煎煮2h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、黄豆渣和naa混匀，即得；
(3)移栽，移栽时间为4-6月，苗高为5-8cm的铁皮石斛苗，先用清水洗净幼苗根部的培养基，再用0.3％的高锰酸钾稀释液浸根消毒，按行距为10-15cm铁皮石斛苗种于基质中，确保基质覆盖住根系，使根系与基质接触；所述基质由蔗糖3kg、红薯泥10kg、土豆泥10kg、玉米糊5kg、黄豆渣5kg、熟地10kg、丹皮5kg、苦参10kg、女贞子5kg和吴茱萸10kg按下述方法制成：熟地、丹皮、苦参、女贞子和吴茱萸加10倍量的水煎煮2h后，过滤，取滤渣，干燥，粉碎成粗颗粒，粗颗粒与蔗糖、红薯泥、土豆泥、玉米糊和黄豆渣混匀，即得；
(4)种植后每隔3天喷施1次菌灵液，连续喷施20天；之后采用喷施方式进行浇水，浇水次数为1-3月份2-3天1次，3-6月份1-2天1次，6-9月份5-6天1次，9-12月份2-3天1次，11月至次年3月，采收，即可。