一种利用2‑壬酮抑制黄曲霉的方法与流程

本发明属于食品加工领域，具体涉及一种黄曲霉抑制方法、及黄曲霉抑制剂。
背景技术：
：2-壬酮：英文名，2-nonanone，为无色油状液体，不溶于水，溶于乙醇等有机熔剂。天然存在于乳酪、白脱油、草莓、椰子中。具有果香、甜香、蜡香、皂香、青香及椰子、奶油的气味。用于调配菠萝蜜、椰子、乳酪等食用香精。2-壬酮的fema编号为2785，fda编号为172.515，coe编号为154。中国gb2760－1996批准为允许使用的食品香料。黄曲霉(aspergillusflavus)是一种比较常见的腐生真菌，属半只菌类。黄曲霉(a.flavus)易在收获前后和储藏过程中侵染花生、玉米和坚果等粮油产品，引起粮油产品霉变，破坏粮油营养价值，导致粮油品质劣变，造成巨大的经济损失(leeandchuang,1992；kayodeetal.,2013；kamalaetal.,2015)；更为重要的是产生具有强毒性和致癌性的黄曲霉毒素威胁人畜健康(cotty,1990；hornandabbas,2003；frisvadetal.,2006a；frisvadetal.,2006b)。因此，筛选和开发能够高效抑制黄曲霉生长安全、无毒的天然活性物质，加强黄曲霉毒素防控研究已成为保障我国粮食安全和食品安全的迫切需求。技术实现要素：针对本领域存在的不足之处，本发明的目的是提供2-壬酮在抑制黄曲霉中的应用。本发明的另一目的是提出一种利用2-壬酮抑制黄曲霉的方法。本发明的第三个目的是提出一种黄曲霉抑制剂。实现本发明上述目的的技术方案为：2-壬酮在抑制黄曲霉中的应用，包括对黄曲霉生长的抑制，和对黄曲霉孢子萌发的抑制。一种利用2-壬酮抑制黄曲霉的方法，将农产品置于含有2-壬酮的气氛中；所述农产品包括坚果、花生、粮食。本发明的一种优选技术方案为，将农产品置于封闭容器中，容器中放置有2-壬酮，每2～3l容器体积放置1～10ml2-壬酮。或，将农产品置于封闭容器中，用2-壬酮熏蒸所述农产品。或，将黄曲霉菌落与2-壬酮接触；接触的方式为置于含有2-壬酮的气氛中，或接触浸有2-壬酮的多孔材料。可选地，每50～90cm2面积的多孔材料浸有50μl2-壬酮，所述多孔材料为脱脂棉、滤纸、棉布、无纺布、毛毡、海绵中的一种。一种黄曲霉抑制剂，其有效成分包括2-壬酮。进一步地，其有效成分包括2-壬酮、2-壬酮类似物和2-壬酮衍生物中的一种或多种。本发明的有益效果在于：本发明提出2-壬酮在抑制黄曲霉中的应用。2-壬酮为允许使用的食品香料，无毒无害，用于食品中可以同时增加食品的香味，且具有价廉易得的优点。本发明的实验证明，2-壬酮可抑制黄曲霉的生长、孢子的萌发、菌丝形成和毒素产生，作为黄曲霉的生物防治材料，该化合物具有开发新的生物农药或者抑菌剂的应用前景。附图说明图1为2-壬酮对黄曲霉生长的抑制试验照片。图2为2-壬酮对黄曲霉孢子萌发的抑制试验照片。图3为2-壬酮对花生上黄曲霉生长的抑制试验照片。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。所采用的方法如无特别说明均为常规方法。实施例1：2-壬酮抑制黄曲霉生长效果的测定pda培养基：去皮马铃薯200g煮沸30min后取滤液，加入葡萄糖20g、琼脂16g，用蒸馏水定容至1000ml，加去离子水补足1l，115℃高压灭菌30分钟。pdb培养基：去皮马铃薯200g煮沸30min后取滤液，加入葡萄糖20g，用蒸馏水定容至1000ml，加去离子水补足1l，115℃高压灭菌30分钟。wa培养基：琼脂(15g/l)，加去离子水补足1l，121℃高压灭菌20分钟。菌种活化：接种黄曲霉于pda培养基上，28℃下生长7天，4℃储藏。2-壬酮对黄曲霉生长抑制试验采用培养皿(直径9cm)对扣培养法进行。将黄曲霉孢子接种于pdb培养基摇培3天生成菌丝团，提取白色的菌丝团，接种于pda中央。wa培养基中央放置灭菌滤纸片，将50μl的2-壬酮缓慢加入滤纸片上，为试验组；空白组为wa培养基中央的不添加2-壬酮的滤纸片，每组设置3个平行。装菌丝团的pda培养基的培养皿去掉盖、另一个装试验或空白的wa培养基培养皿去掉盖，两个培养皿对扣，培养基接触，用封口膜密封后放入自封袋中，置于培养箱中28℃培养，培养3天后观察黄曲霉的生长情况。结果如图1所示，a为对照组，b为实验组。结果表明，2-壬酮可完全抑制黄曲霉的生长。实施例22-壬酮抑制黄曲霉孢子萌发效果的测定制备孢子:用灭菌棉签蘸取适量活化好的黄曲霉孢子至无菌的0.1％的吐温80中，涡旋震荡制成均匀的孢子液，血球计数板计数，根据需要将孢子浓度稀释到1×105个/ml备用。2-壬酮对黄曲霉孢子萌发抑制作用采用培养皿(直径9cm)对扣培养法进行。100μl黄曲霉孢子1×105涂布于pda培养基，wa培养基中央放置灭菌滤纸片，将50μl的2-壬酮缓慢加入滤纸片上；空白组的滤纸片不添加2-壬酮，每组设置3个平行，培养皿用封口膜密封后放入自封袋中，置于培养箱中28℃培养，培养1天后观察黄曲霉的孢子萌发情况。结果图2所示，a为对照组，b为实验组。2-壬酮可完全抑制黄曲霉孢子萌发和菌丝形成。实施例32-壬酮对花生黄曲霉的抑制效果测定制备孢子:用灭菌棉签蘸取适量活化好的黄曲霉孢子至无菌的0.1％的吐温80中，涡旋震荡制成均匀的孢子液，血球计数板计数，根据需要将孢子浓度稀释到5×105个/ml备用。称取200g花生籽粒存于500ml三角瓶中，在121℃高压灭菌20分钟。接种黄曲霉孢子液2ml，充分震荡10min混匀。摇匀后将三角瓶中的籽粒随机倒入6cm培养皿中，每个培养皿中玉米籽粒25-30g。在两个2.5l干燥器中进行抑制效果实验。每个干燥器内的隔板上培养3份花生样品。在实验组干燥器底部加入6ml的2-壬酮。盖好盖，置于培养箱中28℃培养7天。黄曲霉毒素的提取：培养后的花生，将其进行121℃灭菌30min后用万能粉碎机磨粉，研磨后于60℃下烘干处理5d，参照免疫亲和柱使用说明书，采用免疫亲和柱检测黄曲霉毒素的含量。黄曲霉毒素的检测：用hplc(柱后光化学衍生)对净化提取得到的样品进行检测，同时对黄曲霉毒素b1标准品进行hplc分析。hplc检测条件为流动相甲醇∶水＝1∶1(体积比)；流速1ml/min；色谱柱c18(150mm×4.6mm，0.5μm)；激发波长350nm，检测波长450nm；柱温：30℃；进样量20μl。结果图3所示，a为对照组，b为实验组。2-壬酮可完全抑制黄曲霉在花生上的生长和产毒(表1)。表1花生中的黄曲霉毒素含量组别黄曲霉毒素含量(μg/kg)对照组未检出实验组38.8±8.4以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。当前第1页12