一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法

专利名称：：一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法
技术领域：
：本发明涉及一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法，属于生物工程中免疫酶
技术领域：
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背景技术：
：黄曲霉毒素(简称AFT)是一种真菌毒素，是由真菌黄曲霉和寄生曲霉产生的一种强毒性的次生代谢产物，现已査明凡能孽生黄曲霉真菌的物质，如粮食、油料作物的种子、水果、干果、蔬菜、调味品、烟草、黄麻、乳类、乳制品、肉类、鱼奸类、发酵品类和饲料中均有AFT的污染。AFT理化性质非常稳定，在高温20(TC及紫外线照射下，都不被破坏而且通过食物链的作用能从一种生物体转移到另一种生物体内，凡残留在家禽、家畜的肉、内脏、蛋、奶中毒素可随食物进入人体导致人类中毒或致癌，据世界卫生组织及上海市肿瘤研究所等有关部门报导黄曲霉毒素是引起肝癌的首位致癌因素，因此世界上许多国家对食品中黄曲霉毒素允许量都做了严格的限制。我国规定词料和食品中黄曲霉毒素的允许值分别小于50PPb和20PPb，这就要求测定方法要有很高灵敏度。目前测定方法大致有化学分析法、仪器分析法、生物鉴定法以及酶联免疫吸附法(ELISA)。化学分析法中以薄层层析法最为常用，也作为我国对食品、词料中黄曲霉毒素测定的国标法，其检测限为l-5PPb，但其检测时必须要用己知黄曲霉毒素标准品作对照，必要时通过用生物法作补充证实。仪器分析法一般用高效薄层层析扫描仪或高效液相色谱法，其自动化程度高分辨率好，但仪器较昂贵，技术水平要求高，难以普及推广应用。生物鉴定法由于特异性较差，灵敏度低，一般只作化学分析法的补充验证。以上三种方法样品前处理都较复杂，要提取与净化，排除样品中其它物质干扰以致特异性不强。美国拉韦林(Lawellin)首先提出酶联免疫吸附分析法来测定黄曲霉毒素中毒性最强的结构I^(羧甲基肟)来定性、定量黄曲霉毒素含量。目前国内外都以黄曲霉中毒性最强的结构B,做为检控主要对象。由于此法特异性高，分析时间短，受到广泛的重视，后来有人又研究出用酶联免疫吸附分析法的"药盒"，一盒试剂可测多个检测样品，"药盒"在美国有购买，但价格也比较昂贵。
发明内容本发明的目的是提供一种使用简易、价廉、一体化的准确、快速检测黄曲霉毒素的方法。为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法，其特征在于，其方法为一.标准试样制备第一步，制备黄曲霉毒素AFB,抗体包被反应板将抗黄曲霉毒素AFBt多克隆抗体用50ramol/L—100mmol/L，Na2C03-NaHC03PH9.6缓冲液稀释至3_5Pg/ml的包被液，加入到反应板的48或96孔的试管中，每孔加100—110叱，3"C—5。C冰箱放置过夜，弃去包被液冲洗2次一4次，每孔中加200—250化含1%牛血清白蛋白BSA的100—110mmol/L、ffl7.4磷酸盐PBS缓冲液封闭35。C一40。C放2—4小时，弃其封闭液，将包被板真空包装后置-15T:—-25t:冷冻保存；第二步，制备酶标抗原取0.5lmg黄曲霉毒素Bi—羧甲基肟AFB「omixe溶于20%乙醇溶液中，加入20-50mg乙二胺3.3-二甲胺丙基碳化二亚胺盐酸盐EDCHCL搅拌反应30分钟一60分钟，再以磷酸盐PBS0.01M、ffl7.4溶液透析2天一4天，得到酶标抗原原液；第三步，制备黄曲霉毒素AFBi标准溶液将10%-20%甲醇的磷酸盐PBSPH7.4溶液为溶剂，配制0.lng/ml—10ng/ml的AFB^示准系列溶液；第四步，制备样品稀释液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入l(m—2(^甲醇；第五步，制备酶标抗原稀释液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入0.05—0.2%的牛血清白蛋白BSA;第六步，制备洗涤液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入0.03。/。一0.07%的吐温-20TW-20;第七步，制备底物液a:在乙酸钠——柠檬酸缓冲液PH=5.0中加入0.1%—0.4%四甲基联苯胺TMB;第八步，制备底物液b:在乙酸钠一柠檬酸缓冲液PH=5.0中加入0.Ol—O.03%过氧化氢H202;第九步，制备终止液即2mol/L硫酸液；第十步，提取液即甲醇水为h1;二，检测第一步，待测液前处理，称取5g粉碎过20目筛的样品于磨口的50ml试管中，加入提取液20—30ml，加塞振荡5分钟一10分钟，过滤即为待测样液；第二步，试剂准备在标准试样制备第二步准备的酶标抗原原液中加l一2ml酶标抗原稀释溶液，充分溶解，配成酵标抗原工作溶液；第三步，试管编号根据实验需要将反应板框架上的试管编号，设定1号试管为仪器凋零试管，2-7号试管为黄曲霉毒素AFBi标准对照试管，其余试管为样品试管；第四步，依次加入配置好的溶液及待测样液(1)，在1号试管中加入40—6(mL样品稀释液，在2-7号试管中分别加入黄曲霉毒素AFBi标准溶液40—60化，在其余试管中分别加入待测样液；(2)，在1号试管中加入40—60叱酶标抗原稀释液，其余试管中分别加入40一60化酶标抗原工作溶液，轻轻地振荡，使各试管中的反应物混匀；(3)，然后将反应板放入35X:—4(TC恒温培养箱中孵育20分钟一40分钟；(4)，取出反应板，甩掉反应液，拍干，每试管加入200PL—300叱洗涤液，放置1分钟一3分钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板3—5次;(5)，在每试管中分别加入底物液a和底物液b各50叱，摇匀，将反应板放入35。C一4(TC恒温培养箱中，显色10分钟一20分钟；(6)，取出反应板，在每个试管中分别加入终止液40—60PL，用黄曲霉毒素测定仪在360mm-450mm波长处测定各孔的吸光度A值；(7)，将测得的吸光度A值，黄曲霉毒素测定仪内自动建立方程A二MC+N回归计算，计算待测样品孔A值与A。n^的比值，査标准曲线，可得到相应待测样液浓度C的常用对数值LgC，对其求反对数，可求得待测样液的AFB1浓度C，按下列公式计算出样品中AFB1的含量AFB!含量(~/紐)=-式中C--一从标准曲线上査得的AFBi的含量(ng/ml)F-—样品提取液体积(ml);仏-一样品稀释倍数；^-一样品的质量(g)所述的黄曲霉毒素测定仪包括单片机和稳压电源，所述的单片机分别与只读存储器、键盘、显示器、随机存储器、接口和数码转换器连接，数码转换器通过前置放大器与模数转换器连接，模数转换器通过接口和打印驱动与打印机连接，稳压电源通过光源与干涉滤光片连接，干涉滤光片通过样品池与硅光电池连接，硅光电池与前置放大器连接。本发明先用含黄曲霉毒素特异抗体的免疫球蛋白附着于载体表面，含抗原溶液和酶标记抗原溶液以不同比例混合，然后与致敏的载体表面保温，再通过酶的特殊底物的水解量来确定未知液中是否有黄曲霉毒素及含量，酶底物水解量就由测定仪器进行计数含量。物质中的原子和分子所含能量以多种方法与相互作用而产生对光的吸收效应，而物质透光率变化与被测物质浓度有一定的函数关系，在一定范围内它符合郎伯——比耳定律。因此在测定仪器内计算机即可根据郎伯——比耳定律，设有一个线性回归方程A=MC+N的计算程序，所以只要输入标准试样的浓度值或A二MC+N方程中M、N系数就可直接测定未知浓度试样的浓度位置，测定波长选择范围450mm360mm。本仪器微机采用8位机中最先进的MCS—51系列单片机，操作者只要将自己要做的事通过键盘告诉单片机，单片机将各种处理结果通过显示器或打印机告诉操作者。本发明的主要技术在于标准试样的制备，这是黄曲霉毒素测定准确性的关键，而标准试样制备中关键技术为二个方面抗黄曲霉毒素I^抗体的制备和酶标抗原的制备。1,抗黄曲霉毒素抗体的制备。此抗体必需具备高效应、敏感、特异性强的特点，由于黄曲霉毒素是半抗原，不具有免疫原性，需首先制成复合抗原，然后利用抗原免疫家兔获得含有抗体血清，经过生化提纯、分离含抗黄曲霉毒素AFB,抗体的免疫球蛋白，再将免疫球蛋白包被于载体上，并制成包被反应板。2，酶标记抗原的制备由于黄曲霉毒素(AFB》不能直接与酶结合，必须先将AFB,引入一个活性基团，然后与酶反应，使其具有酶的活性，能溶化底物的显色反应。辣根过氧化物酶(冊P)作为标记抗原的酶，成功地合成了酶标记抗原(AFB「0-HRP)满足了酶联免疫法(ELISA)中对酶标记抗原中结合酶的要求。本发明的优点是1.简便、快速本发明比化学分析法、仪器分析法、生物鉴定法前处理的提取和纯化步骤简单，一次前处理仅花1020分钟即可完成，样品测定也仅需510分钟可完成，比目前国标法提高工作效率3040倍，而其结果与国标法相吻合；2.准确、灵敏度高本发明用仪器设备配套了试剂盒，其准确性与灵敏度均比单试剂盒目测法要高、重复性也好，本发明限量检测达5PPb、20PPb、50PPb，达到食品、词料国家规定最小允许检测量，最低限量为2.5Pg超过国标法，其灵敏度是国标法的160倍；3.价廉由于本发明是试剂与测定仪器一体化，其特异性、灵敏度、精确度均比国标法高，而其成本却大大低于国标法，仅是国标法的l/30;4、本发明比美国"试剂盒"的优越性表现在①析速度更快、特异性增强、稳定性有所提高。黄曲霉毒素B卜羧甲基肟最高产率达84%，AFB:抗体最高效价达1:800000，回收率在90%以上；②提高了标记酶一辣根过氧化物酶与黄曲霉毒素交联；由于选择的交联剂(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HC1))更有利于标记酶一辣根过氧化物酶与黄曲霉毒素交联使测定的数据准确性加大、灵敏度提高，是国标法灵敏度160倍；③保温的时间与温度控制更好，提高了检测结果的重复性、精确度；④试剂与检测仪器一体化生产，不但提高分析效率还降低了成本，适应现场检测。图1为一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法程序流程图；图2为黄曲霉毒素测定仪结构示意图；图3为光路结构图4为黄曲霉毒素测定仪计算程序流程图。具体实施例方式以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。实施例如图1所示，为一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法程序流程图，一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法为一.标准试样制备第一步，制备黄曲霉毒素AFBi抗体包被反应板将抗黄曲霉毒素AFB!多克隆抗体用70mmol/L，Na2C03-NaHC03PH9.6缓冲液稀释至4Pg/ml的包被液，加入到反应板的48或96孔的试管中，每孔加100A，4T:冰箱放置过夜，弃去包被液冲洗3次，每孔中加200A含1%牛血清白蛋白BSA的100mraol/L、PH7.4磷酸盐PBS缓冲液封闭37°C放3小时弃其封闭液将包被板真空包装后置-2(TC冷冻保存；第二步，制备酶标抗原取lmg黄曲霉毒素Bi——羧甲基肟AFB「omixe溶于20%乙醇溶液中加入30mg乙二胺3.3-二甲胺丙基碳化二亚胺盐酸盐EDCHCL搅拌反应40分钟，再以磷酸盐PBSO.OIM、PH7.4溶液透析3天，得到酶标抗原原液；第三步，制备黄曲霉毒素AFBd示准溶液将20%甲醇的磷酸盐PBSPH7.4溶液为溶剂配制0.lng/ml10ng/ml的AFB,标准系列溶液；第四步，制备样品稀释液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入2(^甲醇；第五步，制备酶标抗原稀释液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入0.1%的牛血清白蛋白BSA;第六步，制备洗涤液在磷酸盐PBSra7.4溶液中加入0.05%的吐温-20TW-20;第七步，制备底物液a:在乙酸钠——柠檬酸缓冲液PH=5.0中加入0.2%四甲基联苯胺TMB;第八步，制备底物液b:在乙酸钠——柠檬酸缓冲液PH=5.0中加入0.01%过氧化氢H202;第九步，制备终止液即2mol/L硫酸液；第十步，提取液即甲醇水为1:1;二，检测第一步，待测液前处理，称取5g粉碎过20目筛的样品于磨口的50ml试管中，加入提取液20—30ml，加塞振荡5分钟一10分钟，过滤即为待测样液；第二步，试剂准备在标准试样制备第二步准备的酶标抗原原液中加1.5ml酶标抗原稀释溶液，充分溶解，配成酶标抗原工作溶液；第三步，试管编号根据实验需要将反应板框架上的试管编号，设定1号试管为仪器凋零试管，2-7号试管为黄曲霉毒素AFBi标准对照试管，其余试管为样品试管；第四步，依次加入配置好的溶液及待测样液(1)，在1号试管中加入50化样品稀释液，在2-7号试管中分别加入黄曲霉毒素AFBi标准溶液50礼，在其余试管中分别加入待测样液；(2)，在1号试管中加入5(￥L酶标抗原稀释液，其余试管中分别加入酶标抗原工作溶液，轻轻地振荡，使各试管中的反应物混匀；(3)，然后将反应板放入37'C恒温培养箱中孵育30分钟；(4)，取出反应板，甩掉反应液，拍干，每试管加入25(￥L洗涤液，放置2分钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板4次；(5)，在每试管中分别加入底物液a和底物液b各501^L，摇匀，将反应板放入37'C恒温培养箱中，显色15分钟；(6)，取出反应板，在每个试管中分别加入终止液50叱，用黄曲霉毒素测定仪在450nm波长处测定各孔的吸光度A值；(7)，将测得的吸光度A值，黄曲霉毒素测定仪内自动建立方程A二MC+N回归计算，计算待测样品孔A值与A。^的比值，査标准曲线，可得到相应待测样液浓度C的常用对数值LgC，对其求反对数，可求得待测样液的AFB1浓度C，按下列公式计算出样品中AFB1的含量式中C-一-从标准曲线上査得的AFBL的含量(ng/ml)K----样品提取液体积(ml);仏-一样品稀释倍数；^一-样品的质量(g)如图2所示，为黄曲霉毒素测定仪结构示意图，所述的黄曲霉毒素测定仪包括单片机和稳压电源，所述的单片机分别与只读存储器、键盘、显示器、随机存储器、接口和数码转换器连接，数码转换器通过前置放大器与模数转换器连接，模数转换器通过接口和打印驱动与打印机连接，稳压电源通过光源与干涉滤光片连接，干涉滤光片通过样品池与硅光电池连接，硅光电池与前置放大器连接。黄曲霉素酶标测量仪根据相对测量原理工作的，即选定某一溶剂(蒸馏水、空气或试样)作为标准溶液，并设定它的透射比t(即透光率T)为100.0%，而被测试样的透射比t(即透光率T)是相对于标准溶液而得到的，透射比t(即透光率T)的变化和被测物质的浓度有一函数关系，在一定范围内，它符合郎伯—比耳定律。t(T)=I/I。A=KCL=—lgI/I0其中t_透射比A—吸光度C一浓度K—溶液的吸光系数L—液层在光路中的长度I—光透过被测试样后照射到光电转换器上的强度I。一光透过标准试样后照射到光电转换器上的强度本仪器内的计算机根据郎伯一比耳定律设有一个线性回归方程A:MC+N的计算程序，采用C语言编制，如图4所示，所以只要输入标准试样的浓度值或线性回归方程中的系数M和N，就能直接测定未知浓度试样的浓度位置，可广泛用于黄曲霉素、免疫病理、微生物抗原及抗体检测、寄生虫病诊断、血液病诊断、植物病虫研究等领域。其主要技术指标1、波长范围330—900nM(本仪器只配450nM干涉滤光片在仪器中)，用户也可以向厂方定购340，380，405，492，510，546，578，650nM的干涉滤光片；2、干涉滤光片的半宽度为10nM;3、亮电流稳定性《0.3t(T)/5分钟；4、暗电流稳定性《0.2%t(T)/5分钟；5、透光比范围0.0%t(T)一llO.0°/。t(T);6、吸光度范围一0.041—1.999(A);7、浓度范围0.000—99998、(T)转换精度《士0.004A9、使用环境a、温度5—35。Cb、湿度《85%10、工作电源220V土22V，频率20HZ如图3所示，为光路结构图，所述的样品池中设有反射镜3、聚光透镜4和光栏5，本仪器采用溴钨灯作为光源，稳压电源为光源提供高稳定度的电压，避免外界电压的波动影响光源的能量，光源1发出的连续辐射光束，经滤光片2后射至反光镜3，经反光镜3射至聚光透镜4上，然后变成特定波长的光射向样品池中的反应板，最后射至硅光电池7。本仪器的单片机外购采用8位机中最先进的MCS—51系列单片机，随机存储器(RAM)和接口PIO0采用8155，模数转换器(A/D)为14433，数码转换器(D/A)为7520，只读存储器(ROM)为2764，前置放大器为7650，打印机为16列打印机。光电池将光信号转为电信号，经前置放大器的放大，信号进入模数转换器，模数转换器将模拟信号转换为数字信号送往单片机进行数据处理。单片机根据不同的基准信号，向模数转换器发出命令，从而改变前置放大器的放大倍数，即自动调零、调满度，操作者只要将自己要做的事通过键盘告诉单片机，单片机将各种处理结果通过显示器或打印机告诉操作者。仪器可以按照两种方法建立计算方程A:MC+N，这是一个线性回归方程，一旦仪器内建立了这个方程，操作者就可以直接得到试样的浓度值。第一种方法操作者配置l一n个不同农奴的标准试样，把它们一一转入光路，同时一一通过键盘输入对应试样的浓度值，只要将(l_n)个试样的浓度值输入，仪器内就自动建立方程A:MC+N，然后把未知推入光路就能直读浓度。第二种方法是己知待测试样的方程A=MC+N中的系数M和N，只要通过键盘将M和N输入仪器内，仪器也可以立即建立该试样的浓度计算方程A=MC+N。1、通过培植标准试样建立方程a)浓度值输入范围O.000—9999b)标准试样最多为99个。2、通过输入系数M和建立方程a)必须先输入M，然后再输入N;b)输入的M、N值，相关系数R反映浓度C和吸光度A之间的线性关系，R越接近于l，浓度值C和吸光度A之间线性关系越好，反之越差。第一种凡是输入标样，自动建立A4C+N线性回归方程，如果仅输入一点标样它的浓度曲线就是O点与这点标样建立曲线，称之为一点法，输入二点标样我们就称之为二点法。以此类推，根据用户的需要可以培植l一n个不同的标准试样，测量要求不高，配的标样可以少一些，测量要求愈高配的样品数也愈多。本发明通过检测1.中国疾控中心营养与食品安全所，在2007年10月21日对测试盒与检测仪器进行技术性能指标质检，质检分析报告(编号20070705)表明用该方法测定其结果与国家标准薄层分析法(TLC)无差异，其测定结果为有效、可靠。黄曲霉毒素Bi酶联免疫测试盒质检结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>B:lng/mlAFB！标准孔(2-4号孔)的OD值均值B0:Ong/mlAFBi标准孔(5-12号孔)的OD值均值(以下空白)因此在日常检测中可代替烦琐的国标法进行现场检测，方便推广使用。2.天津市、上海市产品质量监督检验所分别于2006年12月23日、2006年2月15日其质检分析报告也都符合国家标准与TLC测定结果无差巳升o<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>3.江西、江苏、四川兽药饲料监察所分别在2006年4月29日、2006年10月8日、2006年10月27日检测报告。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>权利要求1.一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法，其特征在于，其方法为一.标准试样制备第一步，制备黄曲霉毒素AFB1抗体包被反应板将抗黄曲霉毒素AFB1多克隆抗体用50mmol/L-100mmol/L，Na2CO3-NaHCO3PH9.6缓冲液稀释至3-5μg/ml的包被液，加入到反应板的48或96孔的试管中，每孔加100-110μL，3℃-5℃冰箱放置过夜，弃去包被液冲洗2次-4次，每孔中加200-250μL含1％牛血清白蛋白BSA的100-110mmol/L、PH7.4磷酸盐PBS缓冲液封闭35℃-40℃放2-4小时弃其封闭液将包被板真空包装后置-15℃--25℃冷冻保存；第二步，制备酶标抗原取0.5～1mg黄曲霉毒素B1-羧甲基肟AFB1-omixe溶于20％乙醇溶液中加入20-50mg乙二胺3.3-二甲胺丙基碳化二亚胺盐酸盐EDC·HCL搅拌反应30分钟-60分钟，再以磷酸盐PBS0.01M、PH7.4溶液透析2天-4天，得到酶标抗原原液；第三步，制备黄曲霉毒素AFB1标准溶液将10％-20％甲醇的磷酸盐PBSPH7.4溶液为溶剂配制0.1ng/ml-10ng/ml的AFB1标准系列溶液；第四步，制备样品稀释液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入10％-20％甲醇；第五步，制备酶标抗原稀释液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入0.05-0.2％的牛血清白蛋白BSA；第六步，制备洗涤液在磷酸盐PBSPH7.4溶液中加入0.03％-0.07％的吐温-20TW-20；第七步，制备底物液a在乙酸钠——柠檬酸缓冲液PH＝5.0中加入0.1％-0.4％四甲基联苯胺TMB；第八步，制备底物液b在乙酸钠-柠檬酸缓冲液PH＝5.0中加入0.01-0.03％过氧化氢H2O2；第九步，制备终止液即2mol/L硫酸液；第十步，提取液即甲醇∶水为1∶1；二，检测第一步，待测液前处理，称取5g粉碎过20目筛的样品于磨口的50ml试管中，加入提取液20-30ml，加塞振荡5分钟-10分钟，过滤即为待测样液；第二步，试剂准备在标准试样制备第二步准备的酶标抗原原液中加1-2ml酶标抗原稀释溶液，充分溶解，配成酶标抗原工作溶液；第三步，试管编号根据实验需要将反应板框架上的试管编号，设定1号试管为仪器凋零试管，2-7号试管为黄曲霉毒素AFB1标准对照试管，其余试管为样品试管；第四步，依次加入配置好的溶液及待测样液(1)，在1号试管中加入40-60μL样品稀释液，在2-7号试管中分别加入黄曲霉毒素AFB1标准溶液40-60μL，在其余试管中分别加入待测样液；(2)，在1号试管中加入40-60μL酶标抗原稀释液，其余试管中分别加入40-60μL酶标抗原工作溶液，轻轻地振荡，使各试管中的反应物混匀；(3)，然后将反应板放入35℃-40℃恒温培养箱中孵育20分钟-40分钟；(4)，取出反应板，甩掉反应液，拍干，每试管加入200μL-300μL洗涤液，放置1分钟-3分钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，重复洗板3-5次；(5)，在每试管中分别加入底物液a和底物液b各50μL，摇匀，将反应板放入35℃-40℃恒温培养箱中，显色10分钟-20分钟；(6)，取出反应板，在每个试管中分别加入终止液40-60μL，用黄曲霉毒素测定仪在360mm-450mm波长处测定各孔的吸光度A值；(7)，将测得的吸光度A值，黄曲霉毒素测定仪内自动建立方程A＝MC+N回归计算，计算待测样品孔A值与AOng/ml的比值，查标准曲线，可得到相应待测样液浓度C的常用对数值LgC，对其求反对数，可求得待测样液的AFB1浓度C，按下列公式计算出样品中AFB1的含量id="icf0001"file="S2008100384190C00031.gif"wi="83"he="11"top="46"left="41"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>式中C----从标准曲线上查得的AFB1的含量(ng/ml)V----样品提取液体积(ml)；D----样品稀释倍数；m----样品的质量(g)。2.根据权利要求1所述的一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述的黄曲霉毒素测定仪包括单片机和稳压电源，所述的单片机分别与只读存储器、键盘、显示器、随机存储器、接口和数码转换器连接，数码转换器通过前置放大器与模数转换器连接，模数转换器通过接口和打印驱动与打印机连接，稳压电源通过光源与干涉滤光片连接，干涉滤光片通过样品池与硅光电池连接，硅光电池与前置放大器连接。3.根据权利要求l所述的一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述的样品池中设有反射镜(3)、聚光透镜(4)和光栏(5)，稳压电源(1)发出的连续辐射光束，经滤光片(2)后射至反光镜(3)，经反光镜(3)射至聚光透镜(4)上，然后射向样品池中的反应板(6)，最后射至硅光电池(7)。全文摘要本发明涉及一种准确、快速检测黄曲霉毒素的方法，其特征在于，其方法为第一步，制备酶标抗原、黄曲霉毒素AFB₁标准溶液、样品稀释液、酶标抗原稀释液、洗涤液制备底物液a、底物液b、终止液即2mol/L硫酸液和提取液，第二步，进行待测液前处理、试剂准备、反应板试管编号、依次加入配置好的溶液、待测样液和终止液，反应板装入用黄曲霉毒素测定仪测定各孔的吸光度A值；将测得的吸光度A值，黄曲霉毒素测定仪内自动建立方程A＝MC+N回归计算，计算出样品中AFB₁的含量。本发明的优点是简便、快速、准确、灵敏度高。文档编号G01N21/25GK101285834SQ200810038419公开日2008年10月15日申请日期2008年6月2日优先权日2008年6月2日发明者成恒嵩,潘中华,葛其德,赵晓联申请人:上海纤检仪器有限公司