本发明属于植物种植
技术领域：
：，尤其是涉及一种促进干旱胁迫条件下通关藤种子萌发的方法。
背景技术：
：：通关藤为萝藦科牛奶菜属植物，具有清热解毒、保肝利尿，散结止痛等功效，广泛用于治疗肝癌、肺癌、乳腺癌等。由于通关藤具有良好的抗癌效果，市场需求量逐年增加，野生资源已遭到严重采挖，通关藤的人工种植面积在逐步加大。通关藤种子在萌发阶段对水分敏感，逆境胁迫条件下，种子萌发的时间延长，发芽率降低，后期幼苗生长不整齐。因此，如何提高种子在旱地中的萌发率及幼苗的长势是一个关键问题，本试验以通关藤种子为实验材料，研究在干旱胁迫下不同引发剂引发对通关藤种子萌发和幼苗生长特性的影响，旨在探索适宜的通关藤种子引发技术，以期提高通关藤种子在干旱胁迫条件下的抗逆性，为通关藤高产优质栽培提供理论依据。技术实现要素：本发明的目的是提供一种促进干旱胁迫条件下通关藤种子萌发的方法，可提高通关藤种子在干旱胁迫条件下的抗逆性。本发明的技术方案是：一种促进干旱胁迫条件下通关藤种子萌发的方法，包括以下步骤：(1)利用70％酒精溶液浸泡通关藤种子5min，进行灭菌，灭菌后用自来水冲洗、沥干；(2)利用渗透引发剂浸种24h；(3)置于28℃的恒温培养箱内引发处理，放置24h后再取出；(4)取出后用清水冲洗干净，室温下回干24h。优选的，所述步骤(2)中的渗透引发剂为浓度为15％的peg-6000或浓度为1％的kno3-kh2po4。优选的，于15％peg-6000胁迫下的通关藤种子的发芽率、发芽势、和发芽指数分别提高了41％、23.5％和7.1％。本发明具有的优点和积极效果是：1、利用渗透引发剂对通关藤种子进行引发处理后播种，可有效提高通关藤种子的发芽率、发芽势和幼苗的相关生长指标。2、于15％peg-6000胁迫下的通关藤种子的发芽率、发芽势、和发芽指数分别提高了41％、23.5％和7.1％。具体实施方式1.1材料本实验的材料为低温保存的通关藤种子，由云南信通植物药业有限公司提供。1.2方法1.2.1peg-6000模拟干旱胁迫浓度筛选挑选籽粒饱满的通关藤种子，放入大烧杯中，加70％酒精溶液浸泡5min进行灭菌。灭菌后用自来水冲洗。实验以peg-6000模拟干旱胁迫，设置15％、25％、35％、45％的4个处理，每个处理3次重复，筛选模拟干旱胁迫的浓度。1.2.2引发处理挑选籽粒饱满的通关藤种子，放入大烧杯中，加70％酒精溶液浸泡5min进行灭菌。灭菌后用自来水冲洗、沥干。采用peg-6000、sa、kno3-kh2po4、h2o4种引发剂进行引发处理，每个引发剂设置4个处理，每个处理3次重复，每个重复50粒种子。每天跟换滤纸，每次加入4ml筛选出的peg-6000进行干旱胁迫。引发剂处理浓度分别为：peg-6000引发浓度分别为15％、20％、25％、30％；sa引发浓度分别为0.25mmol/l、0.5mmol/l、0.75mmol/l、1mmol/l；kno3-kh2po4引发浓度分别为0.5％、1％、1.5％、2％；水引发时间分别为6h、12h、18h、24h。引发剂浸种后，每个处理都置于28℃的恒温培养箱内引发处理，放置24h后再取出，取出后用清水冲洗干净，(水引发处理的按照实验设计，到相应的引发时间取出)。本实验设置2个对照，以未经引发处理，用蒸馏水浸泡24h，加蒸馏水进行种子萌发实验为对照(ck1)，以未经引发处理，蒸馏水浸种24，用筛选出的peg-6000对应浓度进行胁迫的萌发实验为对照(ck2)。1.2.3种子萌发指标的测定测定发芽势、发芽率、发芽指数3项发芽指标，胁迫实验初期统计天数为第10天，终期统计天数为第16天。发芽势为第10天萌发的幼苗数占全部种子数的百分率，3次重复。发芽率为第16天萌发的幼苗数占全部种子数的百分率，3次重复。各指标计算方法如下：种子发芽势(％)＝初期发芽种子数/供试种子数×100％；种子发芽率(％)＝终期发芽种子数/供试种子数×100％；发芽指数(gi)＝∑gt/dtgt为当天的发芽种子数，dt为相应发芽天数1.2.4幼苗相关形态指标的测定经培养箱内萌发过的种子播种到土壤，2016年1月4日的早上9点对发芽的种子进行移栽，2016年3月10日下午1点在实验室分别测量每种处理下的株高、根长、分根数等指标。1.2.5数据分析本实验采用microsoftexcel2007软件对数据进行处理，采用spssstatistics17.0软件分析软件对数据进行差异显著性检验。2.结果与分析2.1不同浓度peg-6000模拟干旱胁迫对通关藤种子萌发的影响随着peg-6000浓度的增加，通关藤种子的发芽势、发芽率和发芽指数都呈现显著性下降的趋势(表1)，说明peg-6000溶液模拟干旱胁迫对通关藤种子的萌发有显著抑制作用。当peg-6000浓度为15％时，发芽势、发芽率及发芽指数等每个指标都与对照呈现显著性差异，发芽率为42.2％。本研究选取15％peg-6000为干旱胁迫浓度。表1不同peg-6000模拟干旱胁迫对通关藤种子萌发的影响(x±s，n＝3)table1theeffectsofseedgerminationofm.tenacissimaunderpeg-6000stress(x±s，n＝3)2.2不同浓度的sa溶液引发对通关藤种子萌发和幼苗形态特性的影响在15％peg-6000的干旱胁迫下，ck2的发芽率、发芽势和发芽指数均比ck1显著降低(表2)。经4个不同浓度的sa引发处理后，种子的发芽率、发芽势、发芽指数等较ck2均有不同程度的增加，且随sa引发浓度的升高呈现先降低后增加的趋势。其中，当sa的引发浓度为0.25mmol/l时效果最好，其发芽率、发芽势和发芽指数分别比ck2提高了14.4％、10.4％、1.9％，与ck2间呈显著性差异。同时，0.25mmol/lsa引发下的通关藤各项生长指标也达到引发处理中的最大值，与ck2间达显著性差异(p＜0.05)，说明适宜浓度的引发剂能够显著促进幼苗的生长，但引发处理后的各指标都显著低于ck1。说明适宜浓度的sa溶液引发能减缓干旱胁迫对于通关藤幼苗生长的抑制作用。综合各指标，sa引发处理通关藤种子最适宜的浓度为0.25mmol/l。表2不同浓度的sa引发对通关藤种子萌发及幼苗生长的影响(x±s，n＝3)table2theeffectsofseedgerminationandseedinggrowthofm.tenacissimabydifferentconcentrationinitiateagentsofsa(x±s，n＝3)注：ck1表示水对照，ck2表示15％-peg6000干旱胁迫。同列不同小写字母表示差异显著，p＜0.05(表2-6同)。2.3不同浓度的peg-6000溶液引发对通关藤种子萌发和幼苗形态特性的影响随peg-6000引发剂浓度的增加，发芽率、发芽势和发芽指数都呈不断下降的趋势，当引发浓度为30％时各指标与ck2间无显著性差异。从表3可以看出，当peg-6000浓度为15％时，引发效果最好，种子发芽率高达83.3％，各指标与ck2相比都呈显著增加(p＜0.05)，发芽率、发芽势和发芽指数分别比ck2增加了41.1％，23.5％，7.1％。此处理下的通关藤幼苗株高、根长和分根数与ck2相比均有显著增加(p＜0.05)，说明适宜浓度的peg-6000溶液引发能减缓干旱胁迫对于通关藤幼苗生长的抑制作用，因此，15％peg-6000引发可有效减缓干旱胁迫对通关藤种子萌发的影响。表3不同浓度的peg-6000引发对通关藤种子萌发及幼苗生长的影响(x±s，n＝3)table3theeffectsofseedgerminationandseedinggrowthofm.tenacissimabydifferentconcentrationinitiateagentsofpeg-6000(x±s，n＝3)2.4不同浓度的kno3-kh2po4溶液引发对通关藤种子萌发和幼苗形态特性的影响经0.5～2％浓度的kno3-kh2po4引发处理后，通关藤种子的发芽率、发芽势及发芽指数与ck2相比均有不同程度的增加(表4)，且随浓度的升高呈现先增加后下降的趋势。其中，当kno3-kh2po4质量浓度为1.0％时，该浓度引发处理下的通关藤种子发芽率、发芽势、发芽指数、株高、根长和分根数均为引发处理中的最大值，与ck2间均达显著性差异(p＜0.05)。综上所述，1.0％kno3-kh2po4能减缓干旱胁迫对发芽率以及发芽势的抑制作用。表4不同浓度的kno3-kh2po4引发对通关藤种子萌发及幼苗形态的影响(x±s，n＝3)table4theeffectsofseedgerminationandseedinggrowthofm.tenacissimabydifferentconcentrationinitiateagentsofkno3-kh2po4(x±s，n＝3)2.5不同时间的水引发对通关藤种子萌发和幼苗形态特性的影响随着水引发时间的增加，各发芽指标都呈现出不断降低的趋势，当引发时间为6h时，引发效果最好，3个发芽指标都处于最高值，与ck2相比都有显著增加，同时该引发时间与水12～24h相比对发芽指数的影响更显著。从后期幼苗的生长来看，当引发处理为6h时，处理效果最好，株高、根长和分根数分别比ck2增加了10％，17％，174％，与ck2间达显著性差异。水引发时间为6h时对减缓干旱胁迫对种子的危害的效果最显著。表5不同时间的水引发对通关藤种子萌发及幼苗生长的影响(x±s，n＝3)table5theeffectsofseedgerminationandseedinggrowthofm.tenacissimabywaterinitiateagentsunderdifferenttimes(x±s，n＝3)2.6不同引发剂对通关藤种子萌发和幼苗形态特性的影响对上述4个单因素试验筛选出的最佳引发处理进行综合比较分析，15％peg-6000引发的发芽率、发芽指数均显著高于其余3个引发处理(表6)，1％k-k引发处理下的发芽势最高，显著高于其余3个引发处理，说明1％k-k引发可提高通关藤种子的发芽整齐度。从后期幼苗的生长状况来看，15％peg-6000引发下的幼苗株高、根长及分根数均与ck1无显著性差异，综合各指标来看，引发效果最好的是15％peg-6000，其次是1％k-k，最差的是0.25mmol/lsa。表6不同引发剂对通关藤种子萌发及幼苗生长的影响(x±s，n＝3)table6theeffectsofseedgerminationandseedinggrowthofmtenacissimaunderdifferentinitiateagentstreated(x±s，n＝3)种子引发是控制种子缓慢吸收水分，让种子进行预发芽的生理代谢和修复作用，促进细胞膜、dna的修复和酶的活化，使其处于准备发芽的代谢状态的一项技术。种子引发的方法很多，主要包括水引发、滚筒引发、膜引发、渗调引发、激素引发、固体基质引发等。本实验主要采用了水引发、渗调引发和激素引发。本试验通过不同浓度的引发剂对通关藤种子进行引发，结果表明15％peg-6000和1.00％k-k引发效果较好，peg-6000和kno3-kh2po4均为渗透引发剂，说明通过改变通关藤种子的渗透势可有效抵抗外界干旱胁迫的影响，促进了通关藤种子内细胞膜的修复，增强逆境条件下相关酶活性，防止细胞内溶质向外渗透。综合各引发处理结果来看，本研究认为，渗调引发对提高通关藤发芽指标和幼苗形态指标最显著，其次是水引发，而激素引发对通关藤种子在干旱胁迫下的引发效果最差。因此，建议在通关藤种子进行播种前，可选用15％peg-6000和1％kno3-kh2po4进行引发处理。以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。当前第1页12当前第1页12