本发明涉及一种羊肚菌还原菌种的制作方法及栽培应用，属于食用菌制种、栽培技术领域。
背景技术：
羊肚菌（morchellaspp.）肉质鲜美脆嫩、营养和药用价值极高，是一种珍贵的食药用菌，深受各国人们喜爱。目前在生产上，通常利用固体栽培种进行接种培养，需要的固体栽培种量大而且菌龄差异大，播种效率低。更加突出的问题在于，羊肚菌菌种活力极其旺盛，又不耐高温，固体菌种由于菌丝体与固体基质混合在一起，菌丝体发热的温度无法有效传导出去，造成烧菌现象的发生，难以满足羊肚菌菌种质量和长途运输的需求。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种羊肚菌还原菌种的制作方法及栽培应用。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：一种羊肚菌还原菌种的制作方法，包括下列步骤：
第一步：将羊肚菌母种转接到一容纳有pda培养基的平板上进行活化，使羊肚菌母种的菌丝活力恢复，然后分割得到羊肚菌原种pda菌块；
第二步：将所述羊肚菌原种pda菌块接种到灭菌后的pdb液体培养基，在20-25℃条件下，用摇床培养箱于暗处培养5-7天，得到羊肚菌一级种；
第三步：将所述羊肚菌一级种接种到容纳有羊肚菌液体栽培种培养基的发酵罐中，接着，将接种后的发酵罐以20-25℃培养5-7天；所述羊肚菌液体栽培种培养基的制备方法为：向1升蒸馏水加入其质量1.0-2.0%的蔗糖，0.10-0.50%的蛋白粉、0.20-0.30%的酵母粉，0.6-0.7%的豆粕粉，0.05-0.10%的k2hpo4，0.05-0.20%的kh2po4和0.05-0.10%的mgso4，混合均匀后调节ph值至6.3-6.8，再经灭菌、冷却步骤后制得；
第四步：利用真空抽滤机对第三步培养得到的羊肚菌液体菌种进行浓缩，即得羊肚菌纯栽培菌种；
第五步：将羊肚菌纯菌种用无菌自封袋分装，然后在4-8℃条件下进行保藏和运输；
第六步：运输到目的地后，将所述羊肚菌纯菌种与菌种还原液按照1：0.9-1.1的体积比加入粉碎机，搅拌粉碎后再加入羊肚菌纯菌种体积8-10倍的菌种还原液，得到羊肚菌还原菌种。
优选的技术方案为：所述菌种还原液的制备方法为：在1l的蒸馏水中加入其质量0.01-0.05%的酵母粉，0.03-0.08%的k2hpo4，0.03-0.08%的kh2po4，0.01-0.05%的mgso4，0.8-1.2%的复合维生素溶液。
优选的技术方案为：所述复合维生素溶液由1g盐酸硫胺素和0.1g核黄素溶于水中，定容至1l后，于104℃灭菌30分钟，再于70℃保温2小时，冷却后制得。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：一种羊肚菌还原菌种的栽培应用，将上述方法制得的羊肚菌还原菌种，用喷洒设备对待接种的大田或者林下进行喷洒。
优选的技术方案为：所述喷洒设备为水泵。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：
本发明针对传统的羊肚菌固体菌种，运输过程极易发生烧菌、操作复杂成本高和菌龄差异大等缺点，采用羊肚菌液体发酵获得栽培种，再进行纯菌种与液体培养基分离，低温保藏运输，到达目的地添加菌种还原液还原菌丝体，进行喷洒羊肚菌纯菌种的栽培方法，得到一种羊肚菌还原菌种的制作方法及其在栽培生产中的应用方法。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
实施例一：一种羊肚菌还原菌种的制作方法及栽培应用
（1）羊肚菌原种的准备
将试管中的羊肚菌母种转接到pda平板上进行活化，这样继续转接活化3次，待母种的菌丝活力恢复。
（2）羊肚菌液体一级种的制备
250ml的三角瓶中加入100mlpdb液体培养基，在温度为121℃，压力0.15mpa的条件下灭菌15min。
（3）在经过灭菌冷却后，接入直径为1cm的活化后的羊肚菌原种pda菌块6块，置于23℃摇床培养箱150rpm的速度暗处培养7天。
（4）羊肚菌液体栽培种的培养基配方是：液体培养基的配方是:在1l的蒸馏水中加入蒸馏水质量2.0%的蔗糖，0.5%的蛋白粉，0.3%的酵母粉，0.7%的豆粕粉，0.1%的k2hpo4，0.2%的kh2po4和0.10%的mgso4，ph为6.8，在在温度为121℃，压力0.15mpa的条件下灭菌20min，冷却。
（5）将步骤（2）培养好的羊肚菌的一级液体种接种到灭菌冷却好的装有步骤（4）的羊肚菌液体栽培种的发酵罐中。然后，将接种后的发酵罐以23℃培养7天。
（6）待羊肚菌的液体栽培种培养结束后，利用真空抽滤机对羊肚菌液体菌种进行浓缩，将浓缩后的羊肚菌纯菌种置于4℃的保温箱内，运输到播种地点，将所述羊肚菌纯菌种与菌种还原液按照1：1的体积比加入粉碎机，搅拌粉碎后再加入羊肚菌纯菌种体积9倍的菌种还原液，得到羊肚菌还原菌种。
将上述方法制得的羊肚菌还原菌种，用喷洒设备对待接种的大田进行喷洒。
优选的技术方案为：所述喷洒设备为水泵。
所述菌种还原液的制备方法为：在1l的蒸馏水中加入其质量0.03%的酵母粉，0.055%的k2hpo4，0.055%的kh2po4，0.03%的mgso4，0.1%的复合维生素溶液。所述复合维生素溶液由1g盐酸硫胺素和0.1g核黄素溶于水中，定容至1l后，于104℃灭菌30分钟，再于70℃保温2小时，冷却后制得。
实施例二：一种羊肚菌还原菌种的制作方法及栽培应用
一种羊肚菌还原菌种的制作方法，包括下列步骤：
第一步：将羊肚菌母种转接到一容纳有pda培养基的平板上进行活化，使羊肚菌母种的菌丝活力恢复，然后分割得到羊肚菌原种pda菌块；
第二步：将所述羊肚菌原种pda菌块接种到灭菌后的pdb液体培养基，在20℃条件下，用摇床培养箱于暗处培养5天，得到羊肚菌一级种；
第三步：将所述羊肚菌一级种接种到容纳有羊肚菌液体栽培种培养基的发酵罐中，接着，将接种后的发酵罐以20℃培养5天；所述羊肚菌液体栽培种培养基的制备方法为：向1升蒸馏水加入其质量1%的蔗糖，0.1%的蛋白粉、0.2%的酵母粉，0.6%的豆粕粉，0.05%的k2hpo4，0.05%的kh2po4和0.05%的mgso4，混合均匀后调节ph值至6.3，再经灭菌、冷却步骤后制得；
第四步：利用真空抽滤机对第三步培养得到的羊肚菌液体菌种进行浓缩，即得羊肚菌纯栽培菌种；
第五步：将羊肚菌纯菌种用无菌自封袋分装，然后在4℃条件下进行保藏和运输；
第六步：运输到目的地后，将所述羊肚菌纯菌种与菌种还原液按照1：0.9的体积比加入粉碎机，搅拌粉碎后再加入羊肚菌纯菌种体积8倍的菌种还原液，得到羊肚菌还原菌种。
将上述方法制得的羊肚菌还原菌种，用喷洒设备对待接种的林下进行喷洒。
优选的技术方案为：所述喷洒设备为水泵。
优选的实施方式为：所述菌种还原液的制备方法为：在1l的蒸馏水中加入其质量0.01%的酵母粉，0.03%的k2hpo4，0.03%的kh2po4，0.01%的mgso4，0.8%的复合维生素溶液。
优选的实施方式为：所述复合维生素溶液由1g盐酸硫胺素和0.1g核黄素溶于水中，定容至1l后，于104℃灭菌30分钟，再于70℃保温2小时，冷却后制得。
实施例三：一种羊肚菌液体栽培菌种的制作方法及栽培应用
一种羊肚菌还原菌种的制作方法，包括下列步骤：
第一步：将羊肚菌母种转接到一容纳有pda培养基的平板上进行活化，使羊肚菌母种的菌丝活力恢复，然后分割得到羊肚菌原种pda菌块；
第二步：将所述羊肚菌原种pda菌块接种到灭菌后的pdb液体培养基，在25℃条件下，用摇床培养箱于暗处培养7天，得到羊肚菌一级种；
第三步：将所述羊肚菌一级种接种到容纳有羊肚菌液体栽培种培养基的发酵罐中，接着，将接种后的发酵罐以25℃培养7天；所述羊肚菌液体栽培种培养基的制备方法为：向1升蒸馏水加入其质量2%的蔗糖，0.5%的蛋白粉、0.3%的酵母粉，0.7%的豆粕粉，0.1%的k2hpo4，0.2%的kh2po4和0.1%的mgso4，混合均匀后调节ph值至6.8，再经灭菌、冷却步骤后制得；
第四步：利用真空抽滤机对第三步培养得到的羊肚菌液体菌种进行浓缩，即得羊肚菌纯栽培菌种；
第五步：将羊肚菌纯菌种用无菌自封袋分装，然后在8℃条件下进行保藏和运输；
第六步：运输到目的地后，将所述羊肚菌纯菌种与菌种还原液按照1：1.1的体积比加入粉碎机，搅拌粉碎后再加入羊肚菌纯菌种体积10倍的菌种还原液，得到羊肚菌还原菌种。
优选的实施方式为：所述菌种还原液的制备方法为：在1l的蒸馏水中加入其质量0.05%的酵母粉，0.08%的k2hpo4，0.08%的kh2po4，0.05%的mgso4，1.2%的复合维生素溶液。
优选的实施方式为：所述复合维生素溶液由1g盐酸硫胺素和0.1g核黄素溶于水中，定容至1l后，于104℃灭菌30分钟，再于70℃保温2小时，冷却后制得。
将上述方法制得的羊肚菌还原菌种，用喷洒设备对待接种的大田进行喷洒。
优选的技术方案为：所述喷洒设备为水泵。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。