本发明属于大樱桃组培方法领域，具体涉及一种大樱桃快速繁殖的组培方法。
背景技术：
大樱桃是一种蔷薇科、李属植物，我国北方落叶果树中继中国樱桃之后果实成熟最早的果树树种。中医药学认为，大樱桃具有调中补气，祛风湿的功能。
高等植物的组织培养技术是指分离一个或数个体细胞或植物体的一部分进行培养的技术。通常我们所说的广义的组织培养，是指通过无菌操作分离植物体的一部分，接种到培养基上，在人工控制的条件进行培养，使其生成完整的植株。组织培养按培养对象可分为组织或愈伤培养、器官培养、植株培养、细胞和原生质体培养等。其中，植株培养是对完整植株材料的培养，如幼苗及较大植株的培养。
用植物组织培养的方法进行快速繁殖是生产上最有潜力的应用，包括花卉观赏植物、蔬菜、果树、大田作物及其他经济作物。快繁技术不受季节等条件的限制，生长周期短，而且能使不能或很难繁殖的植物进行增殖。快速繁殖可用下列手段进行：通过茎尖、茎段、鳞茎盘等产生大量腋芽；通过根、叶等器官直接诱导产生不定芽；通过愈伤组织培养诱导产生不定芽。试管快速繁殖应用在下列生产或研究中：(1)繁殖杂交育种中得到的少量杂交种，以及保存自交系、不育系等。(2)繁殖脱毒培养得到的少量无病毒苗。(3)繁殖生产上急需的或种源较少的种苗。由于组织培养周期短，增殖率高及能全年生产等特点，加上培养材料和试管苗的小型化，这就可使有限的空间培养出大量的植物，在短期内培养出大量的幼苗。组织培养突出的优点是“快”，通过这一方法在较短时期内迅速扩大植物的数量。
在申请号为cn201510565330.x，公开日为2015.11.11的专利中公开了一种大樱桃的控根控冠栽培方法，涉及果树栽培技术领域。该方法包括下述顺序的步骤：(1)选地：选择海拔在1800-2400m高原温凉地区的栽植场地；(2)种苗选择；(3)控根定植；(4)第一次定干；(5)第一层结果枝组培养；(6)第二次定干；(7)第二层结果枝组培养；(8)第三次定干；(9)第三层结果枝组培养；(10)第四次定干；(11)第四层结果枝组培养；(12)定形。本发明具有可以调控根系、使侧根形状粗而短、树冠光合作用充分、结果枝组培养时间缩短1-2年、而且种植密度高、节约土地面积、能显著提高樱桃产量等有益效果。该发明虽然具有以上优点，但是在大樱桃的组织培养过程中，仍存在生长缓慢等问题，因此，需要对该方案进行改进。
技术实现要素：
针对现有技术中的不足，本发明提供一种大樱桃快速繁殖的组培方法，该方法中通过取用所需樱桃砧木幼树顶芽，将其依次接种在含有不同组分的诱导培养基、增殖培养基与生根培养基上，最后再施加营养液，使得大樱桃不仅能快速生长，还可以提高大樱桃的成活率，另外营养液中的糖分还会增加大樱桃的食用口感。
为了实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案：
一种大樱桃快速繁殖的组培方法，包括以下步骤：
(1)取所需樱桃砧木幼树顶芽，消毒后接种在诱导培养基上培养；
(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖，接种到增殖培养基上培养；
(3)将步骤(2)中幼苗切下，接种生根培养基中培养；
(4)当小苗在生根培养基上培养10天，根长达到1-1.5cm时，取出小苗并洗去根部培养基，移至营养土中，用0.1％的多菌灵喷透，置于塑料棚内，每2天喷洒一次营养液，当叶片开始生长，七天后移出塑料棚，通风、增加光照，移入大田即可。
优选的，所述步骤(1)诱导培养基配方及各原料配比为：在1升1/2ms培养基中加入下述原料及其配比制成：琼脂0.5～0.9mg、白砂糖0.2～0.5mg、6-苄氨基腺嘌呤0.02～0.05mg、萘乙酸0.01～0.03mg、羧苄青霉素0.05～0.09mg、椰子汁10～15mg、活性炭0.8～1.2mg。
优选的，所述步骤(1)培养条件：温度为23±1℃，光强为2000～2500lx、时间18小时/天。
优选的，所述步骤(2)增殖培养基配方及各原料配比为：在1升ms培养基中加入下述原料及其配比制成：卡拉胶0.6～0.8mg、蔗糖3.2～5.0mg、肌醇0.02～0.06mg和naa0.015mg。
优选的，所述步骤(2)培养条件：温度25±2℃，光强2500～3000lx、时间16小时/天。
优选的，所述步骤(3)生根培养基配方及各原料配比为：基本培养基1/3ms、吲哚丁酸0.9-1.2mg、1-萘乙酸0.05-0.1mg、蔗糖30-45mg、琼脂粉45-50mg。
优选的，所述步骤(4)营养土为含有蛭石基质、细砂、腐熟有机肥组成的混合物。
优选的，所述步骤(4)营养液中含有硝酸铵1650mg、硝酸钾1900mg、磷酸二氢钾170mg、硫酸镁370mg、氯化钙440mg，碘化钾0.41mg、硼酸3.1mg、硫酸锰11.1mg、硫酸锌4.3mg、钼酸钠0.125mg、硫酸铜0.0125mg、氯化钴0.0125mg，吲哚丁酸0.5mg、吲哚乙酸0.4mg。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
该方案中通过取用所需大樱桃砧木幼树顶芽，将其依次接种在含有不同组分的诱导培养基、增殖培养基与生根培养基上，最后再施加营养液，使得大樱桃不仅能快速生长，还可以提高大樱桃的成活率，另外营养液中的糖分还会增加大樱桃的食用口感；诱导培养基的各组分配合，不仅可以提高大樱桃的成活率，而且具有成本低、可有效提高灭菌后外植体成活率的特点；增殖培养基显著缩短了增殖培养时间，提高了增殖培养效率，生根培养基的改良使得大樱桃的生根时间从15天缩短至10天，营养土为大樱桃小苗根系生长创造了较好的条件，加之含有多种植物必需元素的营养液，促进了叶片的生长。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件按照说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
一种大樱桃快速繁殖的组培方法，包括以下步骤：
(1)取所需樱桃砧木幼树顶芽，消毒后接种在诱导培养基上培养；
(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖，接种到增殖培养基上培养；
(3)将步骤(2)中幼苗切下，接种生根培养基中培养；
(4)当小苗在生根培养基上培养10天，根长达到1cm时，取出小苗并洗去根部培养基，移至营养土中，用0.1％的多菌灵喷透，置于塑料棚内，每2天喷洒一次营养液，当叶片开始生长，七天后移出塑料棚，通风、增加光照，移入大田即可。
具体的，诱导培养基配方及各原料配比为：在1升1/2ms培养基中加入下述原料及其配比制成：琼脂0.5mg、白砂糖0.5mg、6-苄氨基腺嘌呤0.02mg、萘乙酸0.03mg、羧苄青霉素0.05mg、椰子汁15mg、活性炭0.8mg；培养条件中温度为24℃，光强为2500lx、时间18小时/天。
增殖培养基配方及各原料配比为：在1升ms培养基中加入下述原料及其配比制成：卡拉胶0.6mg、蔗糖3.8mg、肌醇0.03mg和naa0.015mg，培养条件：温度25℃，光强2500lx、时间16小时/天。
生根培养基配方及各原料配比为：基本培养基1/3ms、吲哚丁酸0.9mg、1-萘乙酸0.09mg、蔗糖35mg、琼脂粉50mg。
营养土为含有蛭石基质、细砂、腐熟有机肥组成的混合物。
营养液中含有硝酸铵1650mg、硝酸钾1900mg、磷酸二氢钾170mg、硫酸镁370mg、氯化钙440mg，碘化钾0.41mg、硼酸3.1mg、硫酸锰11.1mg、硫酸锌4.3mg、钼酸钠0.125mg、硫酸铜0.0125mg、氯化钴0.0125mg，吲哚丁酸0.5mg、吲哚乙酸0.4mg。
实施例2
一种大樱桃快速繁殖的组培方法，包括以下步骤：
(1)取所需樱桃砧木幼树顶芽，消毒后接种在诱导培养基上培养；
(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖，接种到增殖培养基上培养；
(3)将步骤(2)中幼苗切下，接种生根培养基中培养；
(4)当小苗在生根培养基上培养10天，根长达到1cm时，取出小苗并洗去根部培养基，移至营养土中，用0.1％的多菌灵喷透，置于塑料棚内，每2天喷洒一次营养液，当叶片开始生长，七天后移出塑料棚，通风、增加光照，移入大田即可。
具体的，诱导培养基配方及各原料配比为：在1升1/2ms培养基中加入下述原料及其配比制成：琼脂0.6mg、白砂糖0.3mg、6-苄氨基腺嘌呤0.03mg、萘乙酸0.025mg、羧苄青霉素0.06mg、椰子汁13mg、活性炭0.9mg；培养条件中温度为22℃，光强为2200lx、时间18小时/天。
增殖培养基配方及各原料配比为：在1升ms培养基中加入下述原料及其配比制成：卡拉胶0.7mg、蔗糖3.5mg、肌醇0.04mg和naa0.015mg，培养条件：温度26℃，光强2800lx、时间16小时/天。
生根培养基配方及各原料配比为：基本培养基1/3ms、吲哚丁酸1.0mg、1-萘乙酸0.05mg、蔗糖40mg、琼脂粉48mg。
营养土为含有蛭石基质、细砂、腐熟有机肥组成的混合物。
营养液中含有硝酸铵1650mg、硝酸钾1900mg、磷酸二氢钾170mg、硫酸镁370mg、氯化钙440mg，碘化钾0.41mg、硼酸3.1mg、硫酸锰11.1mg、硫酸锌4.3mg、钼酸钠0.125mg、硫酸铜0.0125mg、氯化钴0.0125mg，吲哚丁酸0.5mg、吲哚乙酸0.4mg。
实施例3
一种大樱桃快速繁殖的组培方法，包括以下步骤：
(1)取所需樱桃砧木幼树顶芽，消毒后接种在诱导培养基上培养；
(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖，接种到增殖培养基上培养；
(3)将步骤(2)中幼苗切下，接种生根培养基中培养；
(4)当小苗在生根培养基上培养10天，根长达到1cm时，取出小苗并洗去根部培养基，移至营养土中，用0.1％的多菌灵喷透，置于塑料棚内，每2天喷洒一次营养液，当叶片开始生长，七天后移出塑料棚，通风、增加光照，移入大田即可。
具体的，诱导培养基配方及各原料配比为：在1升1/2ms培养基中加入下述原料及其配比制成：琼脂0.7mg、白砂糖0.4mg、6-苄氨基腺嘌呤0.04mg、萘乙酸0.01mg、羧苄青霉素0.07mg、椰子汁12mg、活性炭1.1mg；培养条件中温度为24℃，光强为2200lx、时间18小时/天。
增殖培养基配方及各原料配比为：在1升ms培养基中加入下述原料及其配比制成：卡拉胶0.75mg、蔗糖4.5mg、肌醇0.05mg和naa0.015mg，培养条件：温度24℃，光强2600lx、时间16小时/天。
生根培养基配方及各原料配比为：基本培养基1/3ms、吲哚丁酸1.1mg、1-萘乙酸0.08mg、蔗糖45mg、琼脂粉45mg。
营养土为含有蛭石基质、细砂、腐熟有机肥组成的混合物。
营养液中含有硝酸铵1650mg、硝酸钾1900mg、磷酸二氢钾170mg、硫酸镁370mg、氯化钙440mg，碘化钾0.41mg、硼酸3.1mg、硫酸锰11.1mg、硫酸锌4.3mg、钼酸钠0.125mg、硫酸铜0.0125mg、氯化钴0.0125mg，吲哚丁酸0.5mg、吲哚乙酸0.4mg。
实施例4
一种大樱桃快速繁殖的组培方法，包括以下步骤：
(1)取所需樱桃砧木幼树顶芽，消毒后接种在诱导培养基上培养；
(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖，接种到增殖培养基上培养；
(3)将步骤(2)中幼苗切下，接种生根培养基中培养；
(4)当小苗在生根培养基上培养10天，根长达到1cm时，取出小苗并洗去根部培养基，移至营养土中，用0.1％的多菌灵喷透，置于塑料棚内，每2天喷洒一次营养液，当叶片开始生长，七天后移出塑料棚，通风、增加光照，移入大田即可。
具体的，诱导培养基配方及各原料配比为：在1升1/2ms培养基中加入下述原料及其配比制成：琼脂0.9mg、白砂糖0.2mg、6-苄氨基腺嘌呤0.05mg、萘乙酸0.01mg、羧苄青霉素0.09mg、椰子汁10mg、活性炭1.2mg；培养条件中温度为24℃，光强为2500lx、时间18小时/天。
增殖培养基配方及各原料配比为：在1升ms培养基中加入下述原料及其配比制成：卡拉胶0.8mg、蔗糖3.2mg、肌醇0.06mg和naa0.015mg，培养条件：温度27℃，光强2900lx、时间16小时/天。
生根培养基配方及各原料配比为：基本培养基1/3ms、吲哚丁酸0.9mg、1-萘乙酸0.09mg、蔗糖45mg、琼脂粉47mg。
营养土为含有蛭石基质、细砂、腐熟有机肥组成的混合物。
营养液中含有硝酸铵1650mg、硝酸钾1900mg、磷酸二氢钾170mg、硫酸镁370mg、氯化钙440mg，碘化钾0.41mg、硼酸3.1mg、硫酸锰11.1mg、硫酸锌4.3mg、钼酸钠0.125mg、硫酸铜0.0125mg、氯化钴0.0125mg，吲哚丁酸0.5mg、吲哚乙酸0.4mg。
以上所述，仅是本发明较佳的实施例而已，并非对本发明的技术范围作任何限制，故凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何细微修改、等同变化和修饰，均属于本发明技术方案的范围内。