本发明属于植物生长微生物制剂技术领域，具体涉及一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法。
背景技术：
中国石灰岩分布广、面积大。主要分布在西部地区，面积为91～130万平方千米。其中以广西、贵州和云南东部所占的面积最大，是世界上最大的石灰岩区之一；西藏和北方一些地区也有分布。石灰岩母质可发育成石灰土(calcareoussoil)，石灰土一般质地都比较粘重，剖面上或多或少都有石灰泡沫反应。常有红、黄、棕、黑等颜色。由于岩石风化淋溶和土壤侵蚀交迭发生的致使土壤没有充分淋溶，土壤中钙离子较多，呈微酸性到微碱性，土层薄，岩石碎屑多，细土物质粘粒含量高的土壤。
石灰土一方面会降低作物的发芽率。另一方面，石灰土中钙离子、盐离子等浓度较高，高浓度的钙离子、盐离子易造成土壤水势下降，因此对植物产生水分胁迫，同时还产生离子胁迫，破坏细胞内的离子平衡；还会导致植物体内活性氧的积累，从而伤害细胞甚至将它杀死；另外，石灰土也使植物产生营养胁迫，这样植物的生长发育就会不正常，对植物生长发育的整体表现为抑制组织和器官的生长，加速发育过程，缩短营养生长和生殖期。
所以人们试图从农业、化学、生物等方向对石灰岩土地进行开发利用。依据改良措施的不同，对于石灰岩区的开发利用可以取得不同的效果。改良石灰岩土地可以通过排水、洗盐等措施，或用种植绿肥、施有机肥等农作物对其盐进行改良。这些方法对石灰岩土的改良虽然有一定的效果，但是效果不稳定，并且在实践应用中，大量的人力、物力以及财力的投入无形中极大增加了该项措施的成本。近年来通过改良石灰岩土微生物群落结构和功能来改善石灰岩土植物生长等生物措施表现出了强大优势。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法。
一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂，包括淀粉、火山灰、腐殖酸、微生物菌剂和海藻多糖，按重量份数计，淀粉45-60份、火山灰5-10份、腐殖酸2-5份、微生物菌剂8-10份、海藻多糖20-30份；
所述微生物菌剂为源于青藏高原的短杆菌brevibacteriumsp.ts22经过低海拔和常温驯化而得，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc16576，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间2018.10.12。
所述低海拔和常温驯化的驯化条件为：将分离自青藏高原土壤的ts22菌株接种到lb培养基中，于室温条件下反复传代培养，lb培养基配方如下：胰蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、氯化钠10g/l，用naoh调节ph至7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min；
使用时，须经过与即将使用区主要环境条件相对应条件的再驯化，再驯化的条件为：将经过低海拔和常温驯化的ts22菌株接种到lb培养基中，于室温20-25℃条件下反复传代培养，lb培养基配方如下：胰蛋白胨10g/l、酵母提取物5g/l、氯化钠10g/l，用naoh调节ph至7.4，121℃高压蒸汽灭菌20min。
所述微生物菌剂还包括解磷微生物，所述解磷微生物为巨大芽孢杆菌bacillusmegaterium(cicc20665，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心)、假单胞菌pseudomonassp.(cgmcc10242，购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)、土壤杆菌agrobacteriumsp.(cicc10214，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心)菌种中的一种或多种；
使用时，须经过与即将使用区主要环境条件相对应条件的驯化，驯化的条件为：将解磷菌株分别接种到无机磷培养基，于室温环境20-25℃下进行菌株传代培养，所用无机磷培养基配方为：葡萄糖10g/l，(nh4)2so40.5g/l，nacl3g/l，mgso4·7h2o0.5g/l，kcl0.5g/l，feso4·7h2o0.03g/l，mnso40.03g/l，ca3(po4)25g/l，ph7.2，115℃灭菌20min。所述解磷微生物的重量占微生物菌剂的0-20％。
本发明还提供上述促进石灰岩区植物生长的微生物制剂的制备方法，具体步骤为：按比例将淀粉、火山灰、腐殖酸、微生物菌剂和海藻多糖投入到搅拌机进行混匀，搅拌机的转速设定为100-300r/min，温度为室温，反应时间为10-30min，制得促进石灰岩区植物生长的微生物制剂。
本发明所述的一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂用于促进石灰岩区植物生长的用途，所述促进石灰岩区植物生长的微生物制剂单独使用或复合农林有机肥使用，在复合农林有机肥使用时，促进石灰岩区植物生长的微生物制剂和农林有机肥的质量比为2-4：98-96。
本发明所述brevibacteriumsp.ts22序列信息为：
ccccgccatcggcttcgttcgaatgccatgcatagcgactcgcacgccaagcgtgcgtccctgagccatgatcaaactctatgagtaacacgtgggcaacctgcctataagactgggataacttcgggaaaccggagctaataccggatacgttcttttctcgcatgagagaagatggaaagacggtttacgctgtcacttatagatgggcccgcggcgcattagctagttggtgaggtaatggctcaccaaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgaacgaagaaggccttcgggtcgtaaagttctgttgttagggaagaacaagtaccagagtaactgctggtaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggtggttccttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagaggaaagtggaattccaaagtgtagcggtgaaatgcgtagagatttggaggaacaccagtggcgaaggcgactttctggtctgtaactgacactgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgcagctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgacaaccctagagatagggctttccccttcgggggacagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccagcattcagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggatggtacaaagggctgcaaacctgcgaaggtaagcgaatcccataaagccattctcagttcggattgcaggctgcaactcgcctgcatgaagccggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcc
本发明的有益效果为：
本发明促进石灰岩区植物生长的微生物制剂的核心成分是源于青藏高原的短杆菌经过低海拔和常温驯化而得菌种，再复合经过与即将使用区主要环境条件相对应条件的再驯化而得的解磷菌及相关辅料，具有促进石灰岩区植物生长的多重持久复合功效。
具体实施方式
以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
实施例1
一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法
准备原料：淀粉60份、火山灰6份、腐殖酸4份、微生物菌剂10份、海藻多糖20份。其中微生物菌剂为源于青藏高原的短杆菌经过再驯化而得、解磷微生物为驯化的芽孢杆菌(两者9:1)。
将物料投入到搅拌机进行混匀，搅拌机的转速设定为180r/min，温度为室温，反应时间为22min，制得促进石灰岩区植物生长的微生物制剂。
施用时按1:99均匀混合农林有机肥。
实施例2
一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法
准备原料：淀粉50份、火山灰10份、腐殖酸2份、微生物菌剂8份、海藻多糖30份。其中微生物菌剂为源于青藏高原的假单细胞菌经过再驯化而得、解磷微生物为驯化的土壤杆菌(两者8:2)。
将物料投入到搅拌机进行混匀，搅拌机的转速设定为200r/min，温度为室温，反应时间为20min，制得促进石灰岩区植物生长的微生物制剂。
施用时按2:98均匀混合农林有机肥。
实施例3
一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法
准备原料：淀粉58份、火山灰7份、腐殖酸5份、微生物菌剂8份、海藻多糖22份。其中微生物菌剂为源于青藏高原的假单细胞菌经过再驯化而得、解磷微生物为驯化的芽孢杆菌(两者8:2)。
将物料投入到搅拌机进行混匀，搅拌机的转速设定为100r/min，温度为室温，反应时间为30min，制得促进石灰岩区植物生长的微生物制剂。
实施例4
一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法
准备原料：淀粉55份、火山灰9份、腐殖酸3份、微生物菌剂5份、海藻多糖28份。其中微生物菌剂为源于青藏高原的假单细胞菌经过再驯化而得、解磷微生物为驯化的假单胞菌(两者9:1)。
将物料投入到搅拌机进行混匀，搅拌机的转速设定为250r/min，温度为室温，反应时间为15min，制得促进石灰岩区植物生长的微生物制剂。
实施例5
一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法
准备原料：淀粉53份、火山灰7份、腐殖酸5份、微生物菌剂9份、海藻多糖26份。其中微生物菌剂为源于青藏高原经过再驯化而得的短杆菌。
将物料投入到搅拌机进行混匀，搅拌机的转速设定为280r/min，温度为室温，反应时间为12min，制得促进石灰岩区植物生长的微生物制剂。
实施实例效果
田间试验对肥料功能验证：
夏季于在贵州贵阳选取条件比较一致的试验田(相对低温低氧环境)，分割成18个1米×1米地块，按上述5个实施实例和空白对照各三个重复设计，实验地块各实施实例分别使用相同份量(即100克)均匀混入土中，播种青菜种子各100粒，正常浇水灌溉，10天后统计出苗率，再10天后间苗，各留50株；再30天后收获随机选择各20株称总重。统计结果如下表1所述。
表1实施实例效果统计表
从上述表1中可以看出，采用实施例1-5的效果相对于空白对照组的要优异很多。植物的出苗率提高30％以上，植物的生物量提高30％以上，这说明在本发明的配方下能够达到促进石灰岩区植物生长。另外，从表1结果也可以发现适当添加农林有机肥可以明显提高植物促生效果。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110>江苏大学
<120>一种促进石灰岩区植物生长的微生物制剂及其制备方法
<160>1
<170>siposequencelisting1.0
<210>1
<211>1384
<212>dna
<213>短杆菌(brevibacteriumsp.)
<400>1
ccccgccatcggcttcgttcgaatgccatgcatagcgactcgcacgccaagcgtgcgtcc60
ctgagccatgatcaaactctatgagtaacacgtgggcaacctgcctataagactgggata120
acttcgggaaaccggagctaataccggatacgttcttttctcgcatgagagaagatggaa180
agacggtttacgctgtcacttatagatgggcccgcggcgcattagctagttggtgaggta240
atggctcaccaaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggac300
tgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaa360
agtctgacggagcaacgccgcgtgaacgaagaaggccttcgggtcgtaaagttctgttgt420
tagggaagaacaagtaccagagtaactgctggtaccttgacggtacctaaccagaaagcc480
acggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaatt540
attgggcgtaaagcgcgcgcaggtggttccttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaa600
ccgtggagggtcattggaaactggggaacttgagtgcagaagaggaaagtggaattccaa660
agtgtagcggtgaaatgcgtagagatttggaggaacaccagtggcgaaggcgactttctg720
gtctgtaactgacactgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggt780
agtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgca840
gctaacgcattaagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaat900
tgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaacc960
ttaccaggtcttgacatcctctgacaaccctagagatagggctttccccttcgggggaca1020
gagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtccc1080
gcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccagcattcagttgggcactctaaggtgact1140
gccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacct1200
gggctacacacgtgctacaatggatggtacaaagggctgcaaacctgcgaaggtaagcga1260
atcccataaagccattctcagttcggattgcaggctgcaactcgcctgcatgaagccgga1320
atcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacac1380
cgcc1384