备的乙酯化的ω-3浓缩物中和从软体动物和鱼的混合物制备的乙酯 ω-3浓缩物中（图2、3Α、图3B、5C、6A和6Β)。存在于长链〇-3PUFA油的乙酯浓缩物中的 酯化形式的SPM前体和SPM本身的存在证实，这些SPM前体和SPM最初以酰化形式存在于 粗制的海洋生物油和从其提取粗制油的生物体中。在精制油与乙醇的酯交换过程中，这些 酰化的SPM前体和SPM也被酯交换成对应的乙酯。该发现具有非常重要的且意外的性质， 因为不知道SPM和SPM前体以酰化形式存在于用于制备含有U-3PUFA的油的生物体的细 胞和组织中，所述油被制备用作例如营养补剂和药物成分。本发明的该方面不排除SPM和 SPM前体作为游离羧酸在含有长链〇-3PUFA的油中的存在或富集，所述游离羧酸是以前在 文献中描述的在细胞和生物体内从长链《-3PUFA底物形成的SPM和SPM前体的化学形式。 另外，含有SPM或SPM前体的油可以含有长链ω -3PUFA，诸如EPA和DHA。
[0095] 本发明的另一个方面是一种用于生产油的方法，所述油具有抗炎或刺激消退活性 且含有可测量水平的SPM和/或SPM前体。所述方法包括下述步骤：i)测量SPM或SPM前 体在含有长链U-3PUFA的油中的存在或浓度。这可以是例如粗制的、精制的或浓缩的含有 长链U-3PUFA的油；ii)将所述油分级分离成多个级分；iii)测量所述级分的抗炎或刺激 消退活性；iv)和，任选地，重复所述3个步骤，以便得到具有抗炎或刺激消退活性且含有或 富集至少一种SPM或SPM前体的油。
[0096] 测量SPM和SPM前体在油中的存在，允许评估或计量要分级分离的油的适合性，以 便得到这样的油：其含有至少一种SPM或SPM前体，具有合乎需要的SPM和SPM前体的组合， 或其富集至少一种SPM或SPM前体。通过分析化学技术，诸如液相色谱法与电喷射电离串联 质谱法联用仏(：/^1-1^/^)和气相色谱法/质谱法邮/^)加叩，2011)，可以确定5?皿和 SPM前体在给定的样品或级分中的存在和绝对水平。可能使用的用于检测和/或定量SPM 和SPM前体的其它技术包括免疫测定，诸如由Cayman Chemical Company (Ann Arbor, MI) 销售的消退素 D1ELISA测定和Neogen Corporation的LXAjP AT-LXA 4测定试剂盒。
[0097] 将粗制的、精制的或浓缩的含有长链〇-3PUFA的油分级分离为多个级分，允许生 产这样的油：其含有比其它级分更高浓度的至少一种SPM或SPM前体，或含有期望的SPM或 SPM前体的组合。油的分级分离可以用分离和提取方法实现。因为存在于得自天然来源的 油中的SPM和/或SPM前体随从其中得到所述粗制油的天然来源而异，所以不同的方法将 产生用于成品制备的不同油中的SPM和SPM前体的不同组合物。
[0098] 几种提取和分离技术可用于得到含有或富集至少一种SPM或SPM前体的油。这样 的技术可以作用于在其中分离出SPM和/或SPM前体的分子形式，诸如在鱼和植物油中的 甘油三酯，或存在于磷虾油中的磷脂和甘油三酯，或在转化成不同的化学形式以后，特别是 脂肪酸乙酯。由脂肪酸乙酯组成的油随后可以用于制备改造的甘油三酯或含有高水平的游 离脂肪酸的组合物。通过一种技术或几种技术的组合，可以从作为起始原料的这里提及的 含有长链《-3PUFA的粗制油得到含有SPM和/或SPM前体的油。将在下文中解释合适的 方法。
[0099] 提取方法包括：将含有长链ω -3PUFA的原料（例如，鱼、磷虾、乌贼或藻类）加热 至最高95°C的温度。该热处理步骤会产生含有水和脂肪的"预压榨"液体。随后在130-170 巴压力的压榨（在热处理中得到的剩余固体材料）和伴随的用螺旋压榨机的压榨会产生压 榨液体。可以将预压榨液体和压榨液体组合（"压榨水"），然后供料进2-相倾析器中以除 去固体并得到澄清的"压榨水"。通过在分离器中离心，将压榨水"脱油"，从而产生浑浊油。 然后可以借助于另一个使用分离器的离心步骤将浑浊油"精制"，以得到"粗制的"油。一种 替代方法采用两相倾析器替代螺旋压榨机，这会通过从含有油的流体直接分离固体而简化 该方法，通过油分离器从所述固体分离油（精制）。在第三种方法中，使用倾析器将热凝固 的原料直接分离成固体、水和油。然后可以用分离器精制油，以除去痕量的水。在分离过程 中的温度维持在95°C至98°C之间。优选地，将热的施用限于从热凝固的蛋白和水分离脂肪 所需的最短时间。通过这些提取方法中的任一种得到的粗制油中的大多数SPM和/或SPM 前体是呈酰化形式，作为在甘油酯和磷脂内的酯，和作为酰胺。
[0100] 通过化学"提纯"方法，可以清洁粗制油。该步骤包括：用碱溶液和酸溶液洗涤油以 便中和油，用分离器分离以从油除去水性洗液，热水洗绦，用硅藻土、活性炭或硅胶对油的 "漂白"处理，随后过滤以便通过吸附除去杂质（诸如有色的类胡萝卜素、金属、污染物），和 真空干燥。通常，在提纯过程中维持95°C至98°C之间的温度。可以施加另一个除臭步骤， 其包括将油加热至最高200°C以除去挥发性的物质。
[0101] 可替换地，可能使用冷萃取技术得到含有SPM和/或SPM前体的油。
[0102] 油的冬化是这样的方法：其使油以受控的速率冷却，从而允许不同脂质基于熔点 差异的差别结晶一一从而允许分离不同的脂质类别。该分离技术可以用于从含有较高含量 的SPM和/或SPM前体或其酰化形式的脂质（经常是甘油三酯）级分中分离富含饱和脂肪 酸的蜡类和脂质。
[0103] 一种或多种分子蒸馏技术也可能用于该目的。分子蒸馏方法包括薄膜蒸馏、擦膜 蒸馏和短路径蒸馏。在薄膜蒸发和蒸馏中，通过密闭容器内的旋转风扇或滚筒产生油膜。 通过低压条件和加热的组合施加，实现不同脂质组分的差别蒸发，从而允许目标脂质级分 (即，含有较高SPM和/或SPM前体水平的那些级分）的相对富集。在擦膜蒸馏中，用旋转 桶将油在加热的表面上主动擦成膜。
[0104] 短路径蒸发蒸馏是一种分子蒸馏技术，其通过在进行蒸发或蒸馏的容器内引入内 部冷凝器，对于对空气氧化敏感的化合物的分级分离而言是特别有用的。象薄膜蒸发和蒸 馏一样，在减压和加热下进行分级分离。在该构型中的压力损失减少，并且通过该技术可以 实现更低或更短的加热时间。短路径蒸馏工厂包括供给罐、蒸发器、真空泵、脱气器、滚筒、 热交换器、冷凝器、热调节罐以及连续的且封闭的回路。
[0105] 可以以连续次序进行分子蒸馏步骤，以从油浓缩一定范围的结构上类似的脂肪 酸，得到目标油级分。与分子蒸馏互补的另一种技术是真空精馏，其包括在较高接触时间不 便时实现较高浓度水平的外部回流方法。借助于选择性的沉淀步骤，通过加入选择性地络 合饱和与单不饱和脂肪酸的脲，可以进一步浓缩油中的脂肪酸。其它浓缩技术包括采用阳 离子和阴离子交换树脂的离子交换。可以允许基于分子大小和重量进行选择性浓缩的另一 种技术是超滤。
[0106] 对于SPM和SPM前体的提取而言特别有用的一种提取技术是超临界流体萃取 (SFE)。超临界流体萃取工厂包括供给罐、泵、溶剂罐、连续且闭合的回路、萃取柱、大气罐和 分离器。通过达到压力和温度的特定组合，可以使流动相达到它的超临界点以上。在逆流 条件下通常采用SFE，由此达到稳态，从而允许选择性地富集从萃取柱的顶部或底部洗脱的 组分。SFE允许选择性富集。SFE因而允许制备这样的油：其为后续分离技术的合适起始原 料，所述后续分离技术用于选择性地分离和纯化各种脂肪酸，例如作为它们的对应乙酯，从 而允许浓缩直到可以接近几乎纯度的水平。
[0107] 色谱技术可用于实现各种乙酯化脂肪酸的显著分离水平，且适合用于得到选择性 地富集SPM和SPM前体的油。这些包括通过高压操作进行的常规色谱法、移动带色谱法、 逆流色谱法和超临界流体色谱法（SFC)。一种高压色谱法采用水性溶剂和有机溶剂的混合 物，所述混合物在高压下被泵送穿过含有固定相的柱。所述固定相可以具有不同的极性和 颗粒大小和几何形状。通过选择流动相、固定相、温度的最佳组合，可以实现可接受的脂肪 酸-乙酯的分离。
[0108] 超临界流体色谱法（SFC)采用超临界流体（经常是二氧化碳）作为溶剂和流动 相。通过经由压力和温度小心地调节超临界流体密度，可以优化用于分离样品内的各种脂 质的洗脱条件。该技术的优点是，采用接近环境温度且在色谱规程中排除氧以消除非故意 氧化的风险。设备包括供给容器、泵、流动相罐、连续且闭合的回路、色谱柱、大气罐和分离 器。SFC允许脂肪酸-乙酯的色谱分离。流动相由于在环境压力和温度为气体而容易地从 最终油级分除去。
[0109] 用于通过含有长链co-3PUFA的油的分级分离得到含有SPM和/或SPM前体的油的 优选技术是超临界流体萃取（SFE)和超临界流体色谱法（SFC)。这些技术可以任选地用一 个或多个其它分级分离步骤补充，所述其它分级分离步骤允许富集一种或多种确定的SPM 和/或SPM前体。下面描述了实施例。可以采用SFE和SFC条件的下述范围：在27-60°C 之间的温度范围，在80-180巴之间的压力范围，使用硅胶、改性硅胶、反相、手性和银化 (argentated)固定相，和10-800的溶剂/进料比（Kg/Kg)。
[0110] SFE和SFC的组合允许富集一种或几种特定的SPM和/或SPM前体。此外，分离 SPM和/或SPM前体的能力允许重组特定油级分以便得到通用范围的比率和组合。
[0111] 采用非常专门的富集技术诸如手性分离和金属-亲和色谱法诸如使用固定化银 盐的银化色谱法，可以进行额外色谱步骤。
[0112] 作为用于制备含有或富集SPM和/或SPM前体的油的技术的结果，这些分子的化 学形式通常是下述之一：乙酯，当存在于ω-3浓缩物中时；在粗制油和精制油的典型甘油 酯和磷脂内酰化；或作为溶解在油中的游离羧酸存在。SPM和SPM前体的其它化学形式可以 存在于粗制油和精制油中，诸如酰胺。在另一个实施方案中，根据已知方法，可以进一步转 化SPM和SPM前体分子。例如，可以用甘油三酯或磷脂再次转酯化（化学地或酶促地）含 有SPM-乙酯的油以分别形成改造的甘油三酯或磷脂。还可以水解酯化的SPM和SPM前体 以得到对应的游离脂肪酸形式作为盐或共轭酸。
[0113] 在一个特定实施方案中，本发明此外可以最终允许将天然存在的SPM和/或SPM 前体纯化至同质性或接近同质性（例如，按重量计超过80%、90%、95%、96%、97%、98% 或99%的纯度）。
[0114] 此外，可以组合源自相同或不同的含有长链《-3PUFA的生物体的粗制油，并用作 随后富集规程的起始原料以得到含有SPM和SPM前体的油。
[0115] 含有与其它级分相比更高浓度的至少一种SPM或SPM前体或含有期望的SPM或 SPM前体的组合的级分的抗炎或刺激消退活性的确定，将会确立所述油用于制备治疗性抗 炎或刺激消退组合物的有用性。这可以优选地在体内在炎症实验模型中进行，所述炎症实 验模型允许评估抗炎效力和效能或测量油级分的消退活化活性（Bannenberg, 2005)。为此 目的可以采用体外模型和细胞模型，以便测量抗炎或促消退活性对体内炎症应答的特定细 胞或分子方面。
[0116] 本发明的另一个方面是，故意制备含有或富集SPM和SPM前体的油，其具有抗炎和 消退增强活性，可以用于在受试者中减轻炎症或刺激炎症消退，所述方法包括施用有效量 的油的步骤。所述油可以用于治疗炎症或与炎症有关的疾病，或预防炎症或与炎症有关的 疾病。油的分级分离允许得到具有特定抗炎或刺激消退活性的油。通过分级分离可以实现 功能分化，一些油级分具有抗炎活性和/或刺激消退的（促消退的）活性，其它油级分不具 有显著的抗炎活性，和/或甚至可以得到具有促炎症活性的油级分。因此，通过分级分离得 到的特定油具有明确地调节炎症应答的能力。
[0117] 含有天然SPM、SPM前体、或SPM和/或SPM前体的混合物的特定油和油级分可以 特别好地适合于治疗或预防特定炎性病症。例如，可能选择含有或富集特定SPM和/或SPM 前体、或超过一种SPM或SPM前体的组合的油用于治疗类风湿性关节炎，这基于证实以下内 容的研宄：对于治疗类风湿性关节炎而言，这些特定分子是比当前使用的含有《-3PUFA的 油或其它SPM、SPM前体、或SPM和/或SPM前体的混合物、或已知抗炎药更有益的。基于研 宄，可能选择其它含有SPM和/或SPM前体的油用于制备组合物，所述组合物用于治疗不同 的炎性病症，例如，哮喘。该方法包括以下步骤：给所述受试者施用有效量的油，所述油含有 或富集至少一种SPM或SPM前体且具有抗炎或刺激消退活性。
[0118] 含有SPM和/或SPM前体的油可能进一步包含载体或赋形剂。
[0119] 在本发明中使用的术语"受试者"或"患者"表示动物，包括哺乳动物，优选人类。
[0120] 在本发明中使用的术语"施用"或"给药"在本文中用于表示给受试者或患者直接 地施用油或含油的组合物，这将会给受试者的或患者的身体递送有效量的活性化合物或物 质。
[0121] 在本发明中使用的术语"有效量"或"有效地……的量"是指，足以治愈或至少部分 地改善病症、疾病或它的并发症的征状的量。
[0122] 本发明的另一个方面包括含有SPM或SPM前体的抗炎或刺激消退油，其中这些油 也含有长链《-3PUFA。这些可以是EPA和DHA，以及其它长链〇-3PUFA诸如十八碳四烯酸 或二十二碳五烯酸。
[0123] 本发明的另一个方面涉及营养补剂、药物制剂和化妆品制剂的制备，其包含有效 量的含有或富集SPM和SPM前体的油，所述油具有抗炎或消退增强活性，得自含有长链 ω-3PUFA的生物体。得到含有或富集一种或多种天然地存在的SPM和/或SPM前体且具有 抗炎或刺激消退活性的油或油级分以后，所述油可以用于制备营养补剂、药物制剂或化妆 品制剂。
[0124] 在本发明中使用的术语"药学上可接受的"表示这样的化合物、物质、组合物、补 剂、制剂和/或剂型：其在合理的医学判断范围内，适合用于与人类和动物的组织接触，而 没有过度的毒性、刺激、变应性应答或其它问题并发症，与合理的收益/风险比相称。
[0125] 除了含有SPM和/或SPM前体的油以外，营养补剂和药物和化妆品制剂可能含有 其它成分。例如，在优选的实施方案中，将含有SPM和/或SPM前体的油混合、溶解、乳化 (例如，在水包油乳剂、油包水乳剂或双乳剂中），或悬浮于基体或基质中。所述基体或基质 可以是例如食用油诸如含有ω -3PUFA的油，含有高水平的EPA或DHA、或EPA和DHA的混合 物的《-3PUFA浓缩物，或适合用于消费或施用的另一种食用油。所述基体或基质也可能是 水或水性缓冲液。也可能在脂质体、纳米颗粒或微米颗粒中制备含有SPM和/或SPM前体 的油。
[0126] 为了增加贮存期限，所述补剂和制剂还可能含有一种或多种稳定剂，包括抗氧化 剂诸如一种或几种生育酚、抗坏血酸和抗坏血酸基-脂肪酸衍生物，和常用于稳定饮食油 的其它抗氧化剂，诸如迷迭香提取物。所述油此外可能包装在容器中，所述容器使向氧、热 和入射光的暴露最小化。这些条件将通过阻止或限制双键的氧化和异构化而特别地增强 SPM和SPM前体的稳定性。大批（bulk)油或配制油的稳定性也将受益于这些条件，因为SPM 和SPM前体被溶解在油中，所述油含有显著水平的对氧化敏感的PUFA。
[0127] 所述补剂和制剂还可能包括一种或多种活性成分诸如阿司匹林、其它的非留体类 抗炎药、维生素、抗氧化剂、类黄酮、矿物质、痕量元素、脂肪酸、番茄红素、S-腺苷基甲硫氨 酸、橄榄油刺激醛、白藜芦醇、紫檀芪、生物活性蛋白和肽诸如菠萝蛋白酶、寡糖、硫代葡萄 糖酸盐和植物提取物诸如齿叶乳香（Boswellia serrata),山竹子、辣椒、姜黄根、姜、茶叶、 印度楝树（neem)和/或柳树树皮提取物。成分不限于这里提及的例子。
[0128] 可以制备特定营养补剂以支持特定健康状况，包括鱼油、磷虾油或长链《-3PUFA 浓缩物，其补充了含有SPM或SPM前体的油，以及葡糖胺和软骨素（用于关节炎），或补充了 锌、叶黄素和玉米黄素（用于眼健康）。
[0129] 包含含有SPM和SPM前体的油的其它营养补剂是多维生素制剂、运动营养物、强 化的鱼油胶囊剂、口腔健康护理产品诸如牙膏和漱口液、和用作食品（诸如糊状食品、调味 品、烹饪油、零食、营养饮料、软凝胶、口香糖和在婴儿配方中）的特殊油。
[0130] 本文描述的油可能与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂一起包含，以制 备可以通过多种途径施用的药物制剂，所述途径包括口服、直肠、阴道、局部、透皮、舌下、 皮下、静脉内、肌肉内、吹入法、鞘内和鼻内施用。用在本发明中的合适制剂可以参见： Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 第 17 版（1985)。