一种用于萱藻丝状体快速扩增的培养液及培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属生物技术领域，特别涉及一种用于萱藻丝状体快速扩增的培养液及采用 该培养液的培养方法。
【背景技术】
[0002] 萱藻（隶属褐藻门，系泛温性海藻，在我国广泛分布于 北起辽东半岛，南至广东省海陵岛之间的海域。萱藻因其口味鲜美，营养价值高，具有抗氧 化、抗肿瘤功效及去除海水中过剩营养盐的生态修复功能，而成为一种极具养殖前景的新 型经济海藻。萱藻具有异形世代交替的生活史，叶状体为其配子体阶段，丝状体、类垫状体 和垫状体共同组成其孢子体阶段。丝状体、类垫状体和垫状体可以相互转化，温度是影响转 化的关键因素。其中，丝状体经过诱导后可产生单室孢子囊，成熟孢子囊释放出的孢子进一 步发育成萱藻幼叶状体即萱藻幼苗。因此，丝状体的生物量直接决定了萱藻人工育苗的规 模和产量。
[0003] 如何快速获得足量、高品质的丝状体是开展萱藻人工育苗的重要环节。在萱藻丝 状体的规模化扩增过程中，培养水体中的营养元素往往会成为限制丝状体生物量增加的限 制因子，因此，在扩增过程中必须定期向培养水体中添加培养液以补充丝状体生长的消耗。 培养水体中的营养盐包括大量元素(如氮、磷)、微量元素、维生素等，这些营养元素不仅可 以显著影响丝状体细胞的生长速率而且还能影响细胞的发育质量。据报道，ES培养液可以 促进海带、裙带菜配子体的生长，MAV#3培养液有助于紫菜丝状体的快速扩增，匕培养液可 以促进萱藻丝状体的生长发育。但上述三种及一些常用培养液用于萱藻丝状体扩增时，丝 状体生长速率和发育质量难以满足规模化扩高效增的需求。因此，研制一种能够高效、快速 扩增萱藻丝状体的培养液势在必行。萱藻作为一种新型经济海藻，尚未有特定培养液能使 萱藻丝状体扩增速率达到理想状态。
【发明内容】
[0004] 针对现有培养液配方无法满足萱藻丝状体快速扩增需要的现状，本发明的目的是 提供一种配制简单、使用方便、易于储存的用于萱藻丝状体快速扩增的培养液，为萱藻丝状 体的规模化高效扩增提供技术保障。
[0005] -种用于萱藻丝状体快速扩增的培养液(简称为幻_amp)，其特征在于所述培养液 的组成为： I号液：硝酸钠36. 0-48. 0克，磷酸二氢钠1. 5-3. 0克，硼酸10. 0-20. 0克，以蒸馏水定 容至 1000 mL ; Π 号液：硫酸亚铁0. 10-0. 30克，柠檬酸铁0. 20-0. 50克，硫酸镁0. 10-0. 50克，硫酸锰 0. 10-0. 50 克，硫酸锌 0. 01-0. 20 克，硫酸钴 0. 01-0. 20 克，EDTA-2Na 6. 0-8. 0 克，以蒸馏水 定容至1000 mL ; III号液：维生素 B1 4. OXKT4克，维生素 B2 8. OXKT4克，维生素 H 1.0 XKT4克，以蒸 馏水定容至1000 mL ; IV号液：萘乙酸（NAA)O. 10-0.44克，先以浓度为95%乙醇溶解，再以蒸馏水定容至 lOOOmL。
[0006] 上述组成中，所述I号液的配制方法为：先将硝酸钠36. 0-48. 0克和磷酸二氢钠 1. 5-3. 0克溶解于200-400mL蒸馏水中，再将硼酸10. 0-20. 0克投入500mL蒸馏水中，搅拌 并缓慢加热至其完全溶解，待其冷却至室温后，将两种溶液混合并以蒸馏水定容至l〇〇〇mL。
[0007] 所述Π 号液的配制方法为：将硫酸亚铁0. 10-0. 30克，柠檬酸铁0. 20-0. 50克， 硫酸镁〇. 10-0. 50克，硫酸锰0. 10-0. 50克，硫酸锌0. 01-0. 20克，硫酸钴0. 01-0. 20克， EDTA-2Na 6. 0-8. 0克，以蒸馏水定容至1000mL。
[0008] 所述ΠΙ号液的配制方法为：将维生素&4. OX KT4克，维生素 B 28. OX KT4克，维生 素 H1.0 X KT4克，以蒸馏水定容至1000mL。
[0009] 所述IV号液的配制方法为：室温条件下，称取萘乙酸（NAA) 0. 10-0. 44克，先以浓 度为95%的乙醇进行溶解，再以蒸馏水定容至1000mL。
[0010] 一种将上述培养液（幻-amp)用于萱藻丝状体快速扩增的培养方法，包括以下步 骤：（1)将I、Π、ΠΙ号液均以1:1000的体积比加入萱藻丝状体培养水体中；（2) IV号液以 1:500的体积比加入培养水体中；（3)丝状体扩增过程中，每5-7天全量更换培养水体并按 比例重新加入培养液。
[0011] 本发明的优点主要体现在以下几个方面：（1)可高效快速扩增萱藻丝状体，相同 条件下，使用本培养液的扩增速度（日均生长率)显著高于使用Fi、ES、MAV#3培养液的样本； (2)可提高丝状体品质，使用本培养液扩增丝状体的过程中，丝状体细胞胞质色泽和孢子囊 直径均优于使用Fp ES、MAV#3的样本；（3)本发明的培养液配制过程简单，使用方便，易于 储存，特别适于萱藻丝状体的规模化高效扩增。
【具体实施方式】
[0012] 下面通过具体实施例来详细说明本发明，应理解，下列实施例是用于说明本发明 而不是限制其保护范围的。
[0013] 实施例1:幻-amp培养液用于萱藻丝状体快速扩增 配制幻-amp培养液，配制方法如下： I号液：硝酸钠 42. 0克，磷酸二氢钠 2. 1克，硼酸15. 0克，以蒸馏水定容至1000 mL ; Π 号液：硫酸亚铁0. 15克，柠檬酸铁0. 30克，硫酸镁0. 30克，硫酸锰0. 30克，硫酸锌 0. 05克，硫酸钴0. 01克，EDTA-2Na 6. 0克，以蒸馏水定容至1000 mL ; EI号液：维生素 &4. 0 X 10_4克，维生素 B 28. 0 X 10_4克，维生素 HL 0 X 10 _4克，以蒸馏水 定容至1000 mL ; IV号液：萘乙酸（NAA) 0. 4克，先以浓度为95%乙醇溶解，再以蒸馏水定容至1000mL。
[0014] 将上述培养液（幻-amp)用于萱藻丝状体快速扩增的培养方法，包括以下具体步 骤： (1)选取生长良好的萱藻丝状体在工厂化环境中扩增，以18L种质瓶为扩增容器，接 种密度为〇. 2mg/mL，即单个种质瓶中接入鲜重3. 60g的萱藻丝状体。扩增过程以充气培 养的方式进行，设定环境条件为：温度21°C，光照时长14小时，光照强度54. 0-72. 0 μ mol/ (m2*s)〇
[0015] (2)接种后的种质瓶为一个样本，选取12个样本进行培养，使用本发明培养液(简 称为幻-amp，下同，I -III使用比例1:1000 (V/V)，加入萱藻丝状体培养水体中；IV号液使 用比例为1:500 (V/V)，加入萱藻丝状体培养水体中）进行扩增，每5天全量更换培养水体 并按比例重新加入培养液。
[0016] (3)在扩增的第10、20、30天分别检测丝状体生物量、日均生长率、孢子囊直径、细 胞色泽，以此作为评价培养液扩增效果的指标。
[0017] 使用幻-amp培养液对丝状体进行扩增，样本在生物量、日均生长率、孢子囊直径 和细胞色泽方面的指标统计于表1。
[0018] 表1使用57-amp培养液扩增萱藻丝状体的效果
【主权项】
1. 一种用于萱藻丝状体快速扩增的培养液，其特征在于包括以下组分： I号液：硝酸钠36. 0-48. 0克，磷酸二氢钠1. 5-3. 0克，硼酸10. 0-20. 0克，以蒸馏水定 容至 1000mL; II号液：硫酸亚铁〇. 10-0. 30克，柠檬酸铁0. 20-0. 50克，硫酸镁0. 10-0. 50克，硫酸锰 0. 10-0. 50 克，硫酸锌 0. 01-0. 20 克，硫酸钴 0. 01-0. 20 克，EDTA-2Na6. 0-8. 0 克，以蒸馏水 定容至1000mL; III号液：维生素& 4. 0X10_4克，维生素1 8. 0X10_4克，维生素H1.0X10_4克，以蒸馏 水定容至l〇〇〇mL; IV号液：萘乙酸0. 10-0. 44克，先以浓度为95%乙醇溶解，再以蒸馏水定容至1000mL。
2. 根据权利要求1所述的培养液的配制方法，其特征在于所述I号液的配制方法为：先 将硝酸钠36. 0-48. 0克和磷酸二氢钠1. 5-3. 0克溶解于200-400mL蒸馏水中，再将硼酸 10. 0-20. 0克投入500mL蒸馏水中，搅拌并缓慢加热至其完全溶解，待其冷却至室温后，将 两种溶液混合并以蒸馏水定容至l〇〇〇mL;所述II号液的配制方法为：将硫酸亚铁0. 10-0. 30 克，柠檬酸铁〇. 20-0. 50克，硫酸镁0. 10-0. 50克，硫酸锰0. 10-0. 50克，硫酸锌0. 01-0. 20 克，硫酸钴〇. 01-0. 20克，EDTA-2Na6. 0-8. 0克，以蒸馏水定容至1000mL;所述HI号液的配 制方法为：将维生素&4. 0X10_4克，维生素B28. 0X10_4克，维生素H1. 0X10 _4克，以蒸馏水 定容至1000mL;所述IV号液的配制方法为：室温条件下，称取萘乙酸0. 10-0. 44克，先以浓 度为95%的乙醇进行溶解，再以蒸馏水定容至1000mL。
3. -种权利要求1所述的培养液用于萱藻丝状体快速扩增的培养方法，其特征在于该 培养方法包括以下步骤：（1)将I、11、11丨号液均以1:1000的体积比加入萱藻丝状体培养水体 中；（2)将IV号液以1:500的体积比加入萱藻丝状体培养水体中；（3)丝状体扩增过程中， 每5-7天全量更换培养水体并按比例重新加入培养液。
【专利摘要】本发明涉及一种用于萱藻丝状体快速扩增的培养液及培养方法，其特征在于所述培养液包括： 号液：硝酸钠36.0-48.0克，磷酸二氢钠1.5-3.0克，硼酸10.0-20.0克，以蒸馏水定容至1000mL；号液：硫酸亚铁0.10-0.30克，柠檬酸铁0.20-0.50克，硫酸镁0.10-0.50克，硫酸锰0.10-0.50克，硫酸锌0.01-0.20克，硫酸钴0.01-0.20克，EDTA-2Na 6.0-8.0克，以蒸馏水定容至1000mL；号液：维生素B14.0×10-4克，维生素B28.0×10-4克，维生素H1.0×10-4克，以蒸馏水定容至1000mL；Ⅳ号液：萘乙酸0.10-0.44克，先以浓度为95%乙醇溶解，再以蒸馏水定容至1000mL。、、号液均以1:1000的体积比加入萱藻丝状体培养水体中，Ⅳ号液以1:500的比例加入培养水体中；每5-7天全量更换培养水体。本发明可高效快速扩增萱藻丝状体，并提高丝状体品质，特别适于萱藻丝状体的规模化高效扩增。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104686369
【申请号】CN201510152610
【发明人】宫相忠, 高伟
【申请人】中国海洋大学
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年4月2日