甜茶组织培养培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种甜茶组织培养培养基。
【背景技术】
[0002] 广西甜茶，学名Rubus Suavissmus S, Gee.英文名Sweet tea，是蔷薇科悬钩子 属植物中的一种，为多年生有刺落叶灌木，高l_2m，单叶，矩圆状卵形，长5-10m，叶柄长 1.5-4cm。花单生叶腋，白色，直径2-3cm，垂生；萼裂片长矩圆状卵形，渐尖，无毛。聚合果 球形、黄色。它和普通悬钩子不同之处是叶子味甜。甜茶全身是宝，根、茎、叶、果实均可入 茶入药。甜茶叶常用来作为甜味剂加工食品，民间入药用于补肾降压，被誉为神茶，与罗汉 果、合浦珍珠、广西香料等齐名为广西十大名品。甜茶鲜果别名树莓，营养丰富，红里透亮， 果肉甜，清香味鲜，肉味独特，特别是富含抗癌物质一鞣花酸，被称为第三代水果；其干果实 可作为中药覆盘子（或覆盆子）使用。甜茶叶虽然在广西民间应用已久，但我国八十年代 初药物调查时才发现这个新变种。广西甜茶生长在海拔800-1000m左右的荒山上，主产区 在广西大瑶山地区，主要分布在广西其它地区及广东、湖南、江西等省。悬钩子在我国其它 地方都可见到，却没有这种甜味。因此，学者们认为甜茶应定为一个新变种。据《广西中药 标准》记载，广西甜茶有"清热降火、润肺、祛痰、止咳的功效"。被誉为"神茶"，其药用性和 食用性已为地方医药和民间所证实，广西甜茶中还含有3. 2%以上的黄酮、8. 94%的甜茶茶 多酚和4-5%的甜茶素。甜茶茶多酚有明显抗氧化、抗突变、防癌、降低胆固醇、降低血液中 低密度脂蛋白、抑制血压上升、抑制血糖上升、抑制血小板凝集、抗菌、抗食物过敏、改善肠 胃微生物环境、消臭的作用，是目前发现最理想的纯天然抗氧化剂，用途十分广泛。
[0003] 目前甜茶繁殖育苗主要采用以下几种方法：⑴分株繁殖：3-4月挖取母株支根上 萌发的幼株进行移植，此时幼株叶片尚未展开，但长有须根，挖取时要保证幼株有约IOcm 长的支根和较完整的须根；（2)分根繁殖：春季气温回升时，在支根上出现许多突起的白色 不定芽，把这种支根挖出，按长l〇-15cm切成根段，斜插或平埋于沙床中，淋水保湿，半个月 后根段即可长成幼株；（3)无性繁殖：主要是用长穗一茎带两节间一叶长约8-lOcm，土壤选 用石灰消毒，再铺心土、用生根剂浸泡的育苗方法。
[0004] 广西甜茶多为野生，目前采用繁殖育苗方法有一定的效果，但是成活率等不稳定， 这就大大制约了甜茶的繁殖，成为加快开发利用甜茶的瓶颈。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种甜茶组织培养培养基，该培养基 包括继代培养基和生根培养基，其中：
[0006] 每升（L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
[0007] (1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢 钾 325mg/L、氯化钙 500mg/L ;
[0008] (2)微量元素：一水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水钼 酸钠 (λ 025mg/L、五水硫酸铜(λ 025mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、钠盐37. 3mg/L、七水硫酸 亚铁 27. 8mg/L、碘化钾(λ 83mg/L ;
[0009] (3)有机物：甘氨酸2. Omg/L、盐酸硫胺素10.0 mg/L、盐酸吡哆醇0· 5mg/L、烟酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0010] (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0· 35-0. 45mg/L、萘乙酸0· 15-0. 25mg/L、荔枝 汁 0· 3-0. 5mg/L ;
[0011] 余量为蒸馏水；
[0012] 每升（L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
[0013] (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸按1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢 钾 222mg/L、氯化钙 490mg/L ;
[0014] (2)微量元素：一水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水钼 酸钠 (λ 025mg/L、五水硫酸铜(λ 025mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、钠盐37. 3mg/L、七水硫酸 亚铁 27. 8mg/L、碘化钾(λ 83mg/L ;
[0015] (3)有机物：甘氨酸2. Omg/L、盐酸硫胺素10.0 mg/L、盐酸R比B多醇0. 5mg/L、烟酸 0· 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ;
[0016] (4)植物生长调节剂：萘乙酸0· 1-0. 2mg/L、吲哚丁酸L 0-2. 0mg/L、荔枝汁 0. 3-〇. 5mg/L ；
[0017] (5)其他添加物：活性炭2. 0-3. 0mg/L ;
[0018] 余量为蒸馏水。
[0019] 本发明所述荔枝汁为新鲜荔枝去除枝叶、病虫果、烂果、腐果、未成熟果，清洗、去 除果皮果核，果肉压榨，得到的果汁，灭菌得到。
[0020] 本发明甜茶培养基中的继代培养基的配制方法为：
[0021] (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液；
[0022] (2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；
[0023] (3)称量白糖和琼脂，其中白糖30g/L，琼脂3. 0g/L ;
[0024] (4)加热白糖和琼脂至完全溶解；
[0025] (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；
[0026] (6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5. 8 ;
[0027] (7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；
[0028] (8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121. 6 °C，0· IMPa下灭菌20分钟；
[0029] (9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。
[0030] 本发明甜茶组织培养培养基中的生根培养基的配制方法为：
[0031] (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液、活性 炭；
[0032] (2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；
[0033] (3)称量白糖和琼脂，其中白糖15g/L，琼脂3. 2g/L ;
[0034] (4)加热白糖和琼脂至完全溶解；
[0035] (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；
[0036] (6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5. 8 ;
[0037] (7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；
[0038] (8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121. 6 °C，0.1 MPa下灭菌20分钟；
[0039] (9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。
[0040] 本发明甜茶组织培养培养基中继代培养的方法为：
[0041] (1)先弱光培养7至8天，继代苗切口愈合，顶芽上挺，分化出侧芽，苗木恢复长 势；
[0042] (2)然后强光培养8至12天，顶芽侧芽高3厘米以上，叶片舒展，茎干半木质化。 此时的芽即可用于生根培养。培养温度保持在25-30°C。
[0043] 本发明甜茶培养基生根培养的方法为：
[0044] (1)暗培养5至7天，生根苗基部膨胀，形成根原基。温度要求比较粗放，不低于 15°C即可，最佳温度25-30°C ;
[0045] (2)强光培养10至15天，室温培养即可；
[0046] (3)此时生根苗高4-5厘米，根系5条以上，叶片舒展，苗茎木质化，即可出圃移植。
[0047] 与目前现有技术的甜茶组织培养基相比，本发明的优点是：
[0048] 与目前现有技术相比，本发明的优点是：
[0049] 1、增殖和生根培养通过添加合适量的荔枝汁，能促进甜茶不定芽的生长，繁殖系 数高，且在增殖的同时诱导生根，缩短培育周期。
[0050] 2、生根率和移栽成活率达到99. 5%以上，遗传稳定性好。
【具体实施方式】
[0051] 下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0052] 实施例1 :
[0053] 甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
[0054] 每升（L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
[0055] (1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢 钾 325mg/L、氯化钙 500mg/L ;
[0056] (2)微量元素：一水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水钼 酸钠 (λ 025mg/L、五水硫酸铜(λ 025mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、钠盐37. 3mg/L、七水硫酸 亚铁 27. 8mg/L、碘化钾(λ 83mg/L ;
[0057] (3)有机物：甘氨酸2. Omg/L、盐酸硫胺素10.0 mg/L、盐酸吡卩多醇0· 5mg/L、烟酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0058] (4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0· 35mg/L、萘乙酸0· 25mg/L、荔枝汁0· 3mg/ L ；
[0059] 余量为蒸馏水；
[0060] 每升（L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
[0061] (1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸按1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢 钾 222mg/L、氯化钙 490mg/L ;
[0062] (2)微量元素：一水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水钼 酸钠 (λ 025mg/L、五水硫酸铜(λ 025mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、钠盐37. 3mg/L、七水硫酸 亚铁 27. 8mg/L、碘化钾(λ 83mg/L ;
[0063] (3)有机物：甘氨酸2. Omg/L、盐酸硫胺素10.0 mg/