地被银桦组织培养的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组织培养的方法，具体涉及一种地被银桦组织培养的方法。
【背景技术】
[0002] 银桦（Grevillea)是山龙眼科（Proteaceae)能绽放大型花序的植物，原产于澳大 利亚、新几内亚、新喀里多尼亚岛和印度尼西亚中部的苏拉威西岛。银桦是澳大利亚本土植 物中近次于相思和桉树的第三大树种，分布范围广，从年降雨3000mm的热带雨林到年降雨 200_的沙漠地区，从高山到沿海和干旱的内陆都有分布。基因型多种多样，大约360种，品 种变化从小于0. 5m的地被银桦到1~5m灌木和高达35m的乔木。银桦容易实现种间杂交 和自然变异，因此自然产生或人为培育了上百种栽培变种和杂交种。
[0003] 地被银桦是有名的耐干旱树种，大多分布于澳大利亚中、西部沙漠地区，该地区常 年干旱少雨，因此地被银桦的很多品种具有很强的抗旱能力。地被银桦根系结构中有许多 细小密集的须根，这也是长期生存在贫瘠立地下的进化结果，这样的结构有利于吸收贫瘠 土壤中的养分，因此地被银桦也是耐瘠薄树种。栽种地被银桦只需要施低肥效的缓释肥，或 者不施肥。因此，地被银桦具有管护成本低的特点。
[0004] 地被银桦花为总状花序，其花型奇特，大多呈毛刷状或蜘蛛状，花形大，花色多，从 红橙黄色到乳黄、乳白甚至绿色都有，花期长，有的品种全年开花，地被银桦叶形丰富，从针 状，叶片浅裂和深裂，叶色多为深绿、灰绿，在园艺上具有很高的观赏价值。地被银桦适合强 度修剪，可塑造出形态各异的园艺树形。地被银桦嫁接到灌木银桦和乔木银桦的砧木上成 活率高，可培育出新型的垂枝银桦，因此地被银桦已被澳大利亚广泛应用于庭院绿化和景 观工程中。地被银桦花含丰富的花蜜，能为人类和鸟类、蜂类提供食物，因此地被银桦是有 名的招鸟和养鸟的树种。
[0005] 我国目前大量生产地被银桦苗木的技术还不成熟，难以做到经营的集约化，生产 的高效性，也无法满足市场对地被银桦种苗的大量需求。建立方法简单、生根率高、成活率 高的地被银桦组织培养方法，将对地被银桦的推广应用起到重要的作用。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述存在的问题，本发明在引进项目"地被银桦新品种及繁育技术引进" 的支撑下开展了地被银桦组织培养研究，建立了成熟的地被银桦组织培养技术平台及工厂 化育苗的工艺流程，并已经成功繁殖了 3万株地被银桦组培苗。
[0007] 本发明的目的在于提供一种地被银桦组织培养的方法。
[0008] 本发明所采取的技术方案是：
[0009] 一种地被银桦组织培养的方法，包括以下步骤：
[0010] 1)外植体的采集；
[0011] 2)外植体的消毒；
[0012] 3)丛芽诱导培养：将上步消毒后的外植体接种至丛芽诱导培养基中，诱导培养 3~5个月，期间需转接至新丛芽诱导培养基3~5次，外植体即可被诱导出多个丛芽；
[0013] 4)继代增殖培养：将上步诱导出丛芽的地被银桦组培苗接种到继代增殖培养基 中，每培养28~32天将地被银桦增殖苗转接至新的继代增殖培养基中继续培养；
[0014] 5)生根诱导培养：将增殖培养中高度达2cm以上的单芽切下接入生根培养基中， 培养10~15天；
[0015] 6)炼苗：当至少60%的增殖苗开始生根后进入炼苗阶段，将获得的地被银桦生根 组培苗在光强3000~6000Lx、温度26~30°C条件下炼苗15~20天；
[0016] 7)移植及管理：将炼苗后的苗木移植到移植介质中，进行田间栽培管理。
[0017] 进一步的，步骤1)中外植体采集的时间为6~9月，采集新萌条顶梢的25~30cm 部分，并剪去叶片。
[0018] 进一步的，步骤2)中外植体消毒处理的具体方法为：将采集的枝条清洗干净，剪 切成3~4cm长、带1~2个叶腋的茎段，在无菌环境中用0.08~0. 12% v/v的取(：12浸 泡消毒3~7min，期间不断摇动确保消毒液与枝条充分接触，然后用无菌水清洗干净，最后 将茎段两端各切去〇. 4~0. 6cm，留下中间含叶腋茎段作为无菌外植体。
[0019] 进一步的，步骤3)中丛芽诱导培养基的配方为：412~413mg/L NH4N03、1898~ 1902mg/L ΚΝ03、84·5 ~85.5mg/L KH2P04、369 ~371mg/L MgS04,7H02、131 ~133mg/ L CaCl2*2H02、22 ~22.5mg/L MnS04*4H02、8.4 ~8.8mg/L ZnS04*7H02、6 ~6.4mg/ L H3B03、0. 22 ~0· 27mg/L Na2MoO4 · 2H02、27. 5 ~28mg/L FeSO4 · 7H02、37 ~37. 5mg/L Na2 .EDTA · 2H02、0. 8 ~0· 85mg/L KI、0. 023 ~0· 027mg/L CuSO4 · 5H02、0. 023 ~0· 027mg/ L CoCl2 · 6H02、I. 8 ~2. 2mg/L 甘氨酸、0· 08 ~0· 12mg/L 盐酸硫胺素、0· 48 ~0· 52mg/L 盐 酸吡哆醇、〇· 48 ~0· 52mg/L 烟酸、99 ~101mg/L 肌醇、0· 8 ~I. 2g/L PVP、0. 48 ~0· 52mg/ L 6-ΒΑ、0· 048 ~0· 052mg/L IBA、27 ~32g/L 蔗糖、7 ~8g/L 卡拉胶，ρΗ5· 75 ~5· 85。
[0020] 进一步的，步骤4)中继代增殖培养基的配方为：412~413mg/L ΝΗ4Ν03、1898~ 1902mg/L ΚΝ03、84·5 ~85.5mg/L ΚΗ2Ρ04、369 ~371mg/L MgS04,7H02、131 ~133mg/ L CaCl2*2H02、22 ~22.5mg/L MnS04*4H02、8.4 ~8.8mg/L ZnS04*7H02、6 ~6.4mg/ L H3B03、0. 22 ~0· 27mg/L Na2MoO4 · 2H02、27. 5 ~28mg/L FeSO4 · 7H02、37 ~37. 5mg/L Na2 .EDTA · 2H02、0. 8 ~0· 85mg/L KI、0. 023 ~0· 027mg/L CuSO4 · 5H02、0. 023 ~0· 027mg/ L CoCl2 · 6H02、I. 8 ~2. 2mg/L 甘氨酸、0· 08 ~0· 12mg/L 盐酸硫胺素、0· 48 ~0· 52mg/L 盐 酸吡哆醇、〇· 48 ~0· 52mg/L 烟酸、99 ~101mg/L 肌醇、0· 8 ~I. 2g/L PVP、0. 2 ~0· 3mg/L 6-ΒΑ、0· 048 ~0· 052mg/L IBA、27 ~32g/L 蔗糖、7 ~8g/L 卡拉胶，ρΗ5· 75 ~5· 85。
[0021] 进一步的，步骤5)中生根诱导培养基的配方为：412~413mg/LNH4N0 3、473~ 477mg/L KN03、42 ~43mg/L KH2P04、92 ~93mg/L MgSO4 ·7Η02、108 ~112mg/L CaCl2 ·2Η02、 11 ~11. 5mg/L MnSO4 · 4H02、4 ~4. 5mg/L ZnSO4 · 7Η02、2· 8 ~3. 4mg/L Η3Β03、0· 12 ~ 0· 13mg/L Na2MoO4 ·2Η02、13. 5 ~14. 5mg/L FeSO4 ·7Η02、18. 3 ~18. 9mg/L Na2 .EDTA ·2Η02、 0· 41 ~0· 42mg/L ΚΙ、0· 012 ~0· 013mg/L CuSO4 · 5Η02、0· 012 ~0· 013mg/L CoCl2 · 6H02、 I. 8~2. 2mg/L甘氨酸、0· 08~0· 12mg/L盐酸硫胺素、0· 45~0· 55mg/L盐酸吡咳醇、 0· 45 ~0· 55mg/L 烟酸、99 ~101mg/L 肌醇、0· 65 ~0· 75mg/L NAA、18 ~22g/L 蔗糖、7 ~ 8g/L 卡拉胶，ρΗ5· 75 ~5. 85。
[0022] 进一步的，步骤3)和步骤4)中丛芽诱导和继代增殖培养的培养条件均为：温度 23~27°C、光照9~Ilh ·(! \光照强度2200~2700Lx ;步骤5)中生根诱导培养的培养条 件为：温度24~26°C、光照8~IOh · d \光照强度2200~2700Lx。
[0023] 进一步的，步骤7)中所述移植介质含有45~55 %黄泥和45~55 %泥炭土基质。
[0024] 进一步的，步骤7)中所述田间栽培管理的具体方法为：移植后先在遮阳率为90~ 95 %，相对湿度为85 %~90 %，温度为25~33 °C的条件下培养7~8天；然后将苗木置于 遮阳率为75 %~80 %，湿度为75 %~80 %，温度为25~33 °C的条件下培养8~20天；以 后按常规育苗进行遮阳及淋水管理。
[0025] 进一步的，步骤7)中移植的时间为3~6月或9~11月。
[0026] 本发明的有益效果是：
[0027] 本发明建立了一种能够获得大量地被银桦无性系苗木的组织培养方法，其中，本 发明通过研究改善地被银桦的丛芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，尤其是体现在 对这三种培养基中的激素种类、浓度的选择，微量及大量元素浓度的改良，才确保了地被银 桦无性系苗木的高产率，生长快，且苗木健壮的理想结果。
[0028] 本发明方法获得地被银桦无性系苗木的产率高，时间快，且所获得的苗木健壮，这 些苗木解决了种植行业地被银桦苗木缺乏的问题。
[0029] 本发明方法是通过组织培养这种无性繁殖的方法获得大量优质健康的地被银桦 苗木，这种无性繁殖的方法能确保苗木完全继承并保持原有母株一切的优良品质。
【附图说明】
[0030] 图1为含不同浓度大量元素的生根培养基对地被银桦组培苗生根的影响；
[0031] 图2为含不同浓度微量元素的生根培养基对地被银桦组培苗生根的影响；
[0032] 图3为不同NAA浓度（mg/L)对地被银桦组培苗生根的影响。
【具体实施方式】
[0033] 一种地被银桦组织培养的方法，包括以下步骤：
[0034] 1)外植体的采集；
[0035] 2)外植体的消毒；<