地被银桦组织培养的方法_3

文档序号:9403101阅读:来源:国知局
素。
[0071] 为了研究激素浓度对地被银桦增殖苗的影响,对增殖培养基中的激素6-BA浓度 设计了 0· 2mg/L、0. 3mg/L、0. 4mg/L、0. 5mg/L 4个浓度梯度,各浓度每次处理10瓶,每瓶接 种增殖芽4个,培养30天后,统计增殖结果。
[0072] 表1激素浓度对地被银桦增殖苗的影响
[0074] 研究表明6-BA的浓度对增殖倍数、增殖苗的高度、增殖苗玻璃化的程度都有显著 影响(见表1)。虽然当6-BA浓度为0. 5mg/L时,增殖倍数可达到2倍,但增殖苗的高度太 低,不利于后期的生根诱导,而且增殖苗玻璃化的比例也偏高,会导致健康苗的比例下降。 综合考虑各方面的因素,6-BA的浓度在0. 2~0. 3mg/L,是最适合地被银桦组培苗的增殖培 养。
[0075] 综上所述,继代增殖培养时需适当降低6-BA的浓度(表1),最终获得最佳继代增 殖培养基的配方为:含0. 2~0. 3mg/L 6-BA和0. 05mg/L IBA的改良MS培养基;
[0076] 继代增殖培养基具体配方为:412. 5mg/LNH4N03、1900mg/L KN03、85mg/L ΚΗ2Ρ04、 370mg/L MgSO4 · 7H02、132mg/L CaCl2 · 2Η02、22· 3mg/L MnSO4 · 4Η02、8· 6mg/L ZnSO4 · 7H02、 6. 2mg/L H3B03、0. 25mg/LNa2Mo04 · 2H02、27. 8mg/L FeSO4 · 7H02、37. 3mg/L Na2 · EDTA · 2H02、 0.83mg/L KI、0.025mg/L CuSO4 ·5Η02、0·025π^/1 CoCl2 ·6Η02、2π^/1 甘氨酸、0.1mg/L 盐酸 硫胺素、〇· 5mg/L盐酸吡咳醇、0· 5mg/L烟酸、100mg/L肌醇、lg/L PVP、0. 2 ~0· 3mg/L 6-BA、 0· 05mg/L IBA、30g/L 鹿糖、7 ~8g/L 卡拉胶,ρΗ5· 8 (见表 2)。
[0077] (5)生根诱导
[0078] 在增殖苗每一次进行转接时,将增殖培养中高度达2cm以上的地被银桦组培单芽 切下接入生根诱导培养基,培养10~15天,培养温度24~26°C、光照8~IOh · d \光照 强度25001x。为了配置出适合地被银桦组培苗生根的生根诱导培养基,本实施例对相关营 养元素进行了深入的研究。
[0079] 通过对生根培养基中大量元素、微量元素、激素的含量进行研究,发现当大量元素 含量为0. 25MS、微量元素含量为0. 5MS、NAA浓度为0. 7mg/L时,最适合诱导地被银桦组培 苗生根(见图1、图2、图3)。
[0080] 根据图1~3的实验结果,最适合诱导地被银桦组培苗生根的生根培养基配方 为:412. 5mg/L NH4N03、475mg/L KN03、42.5mg/L KH2P04、92.5mg/L MgSO4 ·7Η02、110π^/ L CaCl2 · 2H0^11. 15mg/L MnSO4 · 4H0^4. 3mg/L ZnSO4 · 7H0^3. lmg/L H3BO3^O. 125mg/L Na2MoO4 *2H0^ 13. 9mg/L FeSO4 *7H0^ 18. 65mg/L Na2 *EDTA *2H0^0. 415mg/L KK0.0 125mg/ L CuSO4 · 5H02、0. 0125mg/L CoCl2 · 6H02、2mg/L 甘氨酸、0· lmg/L 盐酸硫胺素、0· 5mg/L 盐酸 口比咳醇、〇· 5mg/L 烟酸、lOOmg/L 肌醇、0· 7mg/LNAA、20g/L 鹿糖、7 ~8g/L 卡拉胶,ρΗ5· 8 (见 表2)。
[0081] 表2地被银桦组培快繁的培养基配方
CN 105123519 A 说明书 8/10 页
[0084] 注:卡拉胶的使用量可根据不同厂家的产品进行调整。
[0085] (6)炼苗
[0086] 当至少60%的增殖苗开始生根后即可转入炼苗阶段。适宜地被银桦生根组培苗 炼苗条件为:光照强度为6000~80001x,温度26~30°C,适宜的炼苗时间为15~20天。 经过炼苗,生根苗高可达4~5cm,根系发达,苗木粗壮,叶色翠绿,可以直接移植在苗圃的 营养袋中。
[0087] (7)移植及管理
[0088] 将完成炼苗的有根苗木小心从培养瓶中取出,用清水漂洗净苗木基部的培养 基,当天移植入含质量百分比为50%黄泥和50%泥炭土基质的营养袋中,营养袋规格为 6X Ilcm0
[0089] 地被银桦组培苗移植初期在遮阳率为90~95 %,相对湿度为85 %~90 %,温度为 25~33°C的条件下培养7~8天;然后将苗木置于遮阳率为75 %~80%,湿度为75 %~ 80%,温度为25~33°C的条件下培养8~20天;以后按常规育苗进行遮阳及淋水管理,苗 木移植成活率大于85 %。
[0090] 具体操作如下:
[0091] 1)苗木移植第1~7天:苗床加盖薄膜,在薄膜上加盖1层遮阳率为95%的遮荫 网;晴天每天喷雾5~6次,阴天每天喷雾4~5次,雨天每天喷雾2~3次;温度高时,在 遮荫网上淋降温水,控制苗床温度为25~33°C。
[0092] 2)苗木移植第8~30天:苗床上两头及侧边的薄膜每间隔1米设置一个通风口, 白天盖遮阳率为85%的遮阳网。晴天时,每天淋水4~5次;阴天每天淋水3~4次;若是 雨天,则全天仅盖薄膜,每天淋水0~1次。
[0093] 3)苗木移植31~60天:无需再盖薄膜,但在晴天的白天仍需盖50%的遮阳网,每 天淋水2~3次;阴天不需盖遮阳网,每天淋水1~2次;小雨天,不需盖遮阳网,也不需淋 水;大雨天需盖薄膜,但在苗床的两头及侧边需设置通风口,不需盖遮阳网,也不需淋水。
[0094] 在苗木移植前,移植介质以1/1000的高锰酸钾溶液消毒,移植后每个星期用 1/800的百菌清和多菌灵轮流喷施,防止杂菌滋生。移植后15天开始施肥,采用1/1000的 复合肥溶液每1周喷施一次。
[0095] 在广东的3~6月或9~11月均可移植地被银桦组培苗,其中3~4月为地被银 桦组培苗的最佳移植季节,且温度、湿度均适合苗木的进一步培养,达到造林高度和要求。 7~8月份,温度过高,移植成活率偏低,通过强度施肥,苗木可以达到造林高度。10~11 月份移植成活也比较高,但苗木生长季节已过,次年春季苗木尚无法达到造林高度。
[0096] 由于目前具有应用价值原产澳大利亚的地被银桦多为人工培育或天然的杂交品 种,多数自交不育,因此,地被银桦的种子很难获得;另一方面种子繁育也难以保持杂交新 品种的优良特性,引进少量的母株后,只有通过组培这种无性繁育技术繁育苗木,才能推广 应用这些新品种。本发明方法获得地被银桦无性系苗木的产率高,时间快,且所获得的苗木 健壮,这些苗木解决了种植业地被银桦苗木缺乏的问题。
[0097] 实施例2 -种地被银桦组织培养的方法
[0098] 1)外植体的采集:于每年6~9月中天气持续晴朗6天后的上午9点~10点,采 集新萌条顶梢的25~30cm部分,并剪去叶片;
[0099] 2)外植体的消毒:将采集的枝条清洗干净,剪切成3~4cm长、带1~2个叶腋的 茎段,在无菌环境中用0. 08~0. 12% v/v的取(:12浸泡消毒3~7min,期间不断摇动确保 消毒液与枝条充分接触,然后用无菌水清洗干净,最后将茎段两端各切去〇. 4~0. 6cm,留 下中间含叶腋茎段作为无菌外植体。
[0100] 3)丛芽诱导培养:将上步消毒后的外植体接种至丛芽诱导培养基中,诱导培养4 个月,期间需转接至新丛芽诱导培养基4次,每培养一个月换一次培养基,外植体即可被诱 导出多个丛芽;培养条件为:温度25°C、光照IOh · d \光照强度2500Lx ;
[0101] 上述丛芽诱导培养基的配方为:412~413mg/L NH4N03、1898~1902mg/L ΚΝ03、 84. 5 ~85. 5mg/L KH2P04、369 ~371mg/L MgSO4 · 7H02、131 ~133mg/L CaCl2 · 2H02、22 ~ 22. 5mg/L MnSO4 · 4Η02、8· 4 ~8. 8mg/L ZnSO4 · 7H02、6 ~6. 4mg/L Η3Β03、0· 22 ~0· 27mg/L Na2MoO4 ·2Η02、27· 5 ~28mg/L FeSO4 ·7Η02、37 ~37. 5mg/L Na2 .EDTA ·2Η02、0· 8 ~0· 85mg/ L ΚΙ、0· 023 ~0· 027mg/L CuSO4 ·5Η02、0· 023 ~0· 027mg/L CoCl2 ·6Η02、1· 8 ~2. 2mg/L 甘 氨酸、0· 08~0· 12mg/L盐酸硫胺素、0· 48~0· 52mg/L盐酸吡哆醇、0· 48~0· 52mg/L烟酸、 99 ~101mg/L 肌醇、0· 8 ~I. 2g/L PVP、0. 48 ~0· 52mg/L 6-ΒΑ、0· 048 ~0· 052mg/L IBA、 27 ~32g/L 蔗糖、7 ~8g/L 卡拉胶,ρΗ5· 75 ~5· 85。
[0102] 4)继代增殖培养:将上步诱导出丛芽的地被银桦组培苗接种到继代增殖培养基 中,每培养28~32天将地被银桦增殖苗转接至新的继代增殖培养基中继续培养;培养条件 为:温度25°C、光照IOh · d \光照强度2500Lx ;
[0103] 上述继代增殖培养基的配方为:412~413mg/L NH4N03、1898~1902mg/L ΚΝ03、 84. 5 ~85. 5mg/L KH2P04、369 ~371mg/L MgSO4 · 7H02、131 ~133mg/L CaCl2 · 2H02、22 ~ 22. 5mg/L MnSO4 · 4Η02、8· 4 ~8. 8mg/L ZnSO4 · 7H02、6 ~6. 4mg/L Η3Β03、0· 22 ~0· 27mg/L Na2MoO4 ·2Η02、27· 5 ~28mg/L FeSO4 ·7Η02、37 ~37. 5mg/L Na2 .EDTA ·2Η02、0· 8 ~0· 85mg/ L ΚΙ、0· 023 ~0· 027mg/L CuSO4 · 5Η02、0· 023
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