胺、100mg/L的L-丝氨酸、130000mg/L的鹿糖和10?50mg/L的秋水仙碱。在本发明中，小孢子在含秋水仙碱的胚状体诱导培养液中的密度约为5万个/mL。
[0029]本发明优选在密封条件下、在32°C的恒温箱中暗培养I?2d ;然后将获得的培养物离心，将得到的小孢子沉淀物加入到不含秋水仙碱的胚状体培养液中继续培养，所述不含秋水仙碱的胚状体诱导液包括:125mg/L的KN03、125mg/L的MgSO4.7H20、500mg/L的Ca4NO3.4H20、125mg/L 的 KH2P04、26.4mg/L 的 FeNaEDTA、22.3mg/L 的 MnSO4.4Η20、6.2mg/L 的H3BO3> 8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.025mg/L 的 CuSO4.5Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20、0.025mg/L的CoCI2.6H20、100mg/L的肌醇、5mg/L的烟酸、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、0.5mg/L的盐酸硫胺素、2mg/L的甘氨酸、0.5mg/L的叶酸、0.05mg/L的生物素30mg/L的谷胱甘肽、800mg/L的L-谷酰胺、100mg/L的L-丝氨酸和130000mg/L的鹿糖。
[0030]本发明优选在密封条件下、25°C恒温下在不含秋水仙碱的胚状体诱导培养基中继续培养，培养至可见胚状体后，转到摇床上继续培养至子叶期。在本发明中，在摇床上培养的温度为25 °C，转速为60rpm。
[0031]培养至子叶期后，将其转入胚状体成苗培养基中继续培养至成苗。所述胚状体成苗培养基包括:B5、GA30.1mg.L'6-BA 0.lmg.L'蔗糖2%和琼脂8g.L—1 (pH = 5.8)。具体而言，其包括:2500mg/L 的 KN03、250mg/L 的 MgSO4.7H20、150mg/L 的 CaCl2.2H20、134mg/L 的(NH4)2SO4'150mg/L 的 NaH2PO4.Η20、0.75mg/L 的 ΚΙ、3.0mg/L 的 H3BO3'I Omg/L 的 MnSO4.4Η20、2.0mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20、0.025mg/L 的 CoCl2.6Η20、0.025mg/L的 CuSO4.5Η20、37.3mg/ 的 Na2_EDTA、27.8mg/L 的 FeSO4.7Η20、lOOmg/L 的肌醇、1.0mg/L 的烟酸、1.0mg/L的盐酸卩比B多醇、10mg/L的盐酸硫钱、0.lmg/L的赤霉素、0.lmg/L的6-节氨基腺嘌呤、2%的蔗糖和8g/L的琼脂；所述胚状体成苗培养基的pH值为5.8。
[0032]本发明优选在25°C下在胚状体成苗培养基中进行培养至成苗，形成的小植株可移栽到土中，也可转到新鲜的相同培养基中继代培养。没有成苗的胚状体可转到85培养基继续培养，直至发育成完整的小植株。在立冬后把小苗移栽到田间。
[0033]在培养至成苗过程中，可以根据情况选择在快繁培养基和/或生根培养基中进行培养，以便得到苗。在本发明中，所述快繁培养基包括:MS、6-BA 1.5mg.L'NAA 0.lmg.L'蔗糖30g.L—1和琼脂7g.L -1 (pH = 5.8) ?所述生根培养基包括:1/2MS、IBA0.5mg.L-1、蔗糖30g.Γ1 和琼脂 7g.L (pH = 5.8) ο
[0034]待苗生长至花期时，即可获得加倍成功的可育二倍体DH植株。将该可育二倍体与隐性纯合两型品系中的不育株测交，将获得的测交种在花期时进行育性鉴定，100%不育的即为黄籽隐性核不育临保系。
[0035]在考虑育性时，优选同时考虑种子颜色，选育黄籽隐性核不育临保系，具体方法如下:将该可育二倍体株系套袋自交，并与隐性纯合两型品系中的不育株测交。将获得的测交种在花期时进行育性鉴定，记录测交种的育性表现。种子成熟时，考察二倍体DH株系的种子色泽。若测交种为100%不育，对应的父本DH株系为黄籽，则此黄籽DH株系即为本发明的黄籽隐性核不育临保系，命名为黄籽隐性核不育临保系YSLB-1。
[0036]在本发明中，所述隐性纯合两型品系为SL1AB,系西南大学王瑞副研宄员从皖油23杂种后代与德国NPZ公司MSL不育材料相互杂交选育，连续多代兄妹交，于2009年定型为稳定遗传的隐性纯合两型系。SL1AB两型系芥酸含量0.1%，硫苷含量30.21umol/go本发明利用上述隐性纯合两型系SL1AB中的不育株对DH株系进行基因型鉴定。
[0037]参见图1，图1为本发明实施例提供的选育方法的流程示意图，以黑籽隐性不育(基因型为ms3ms3Rfrf)为母本，黄籽品系(基因型为Ms3Ms3rfrf)为父本进行杂交，获得的Fl代基因型为Ms3ms3Rfrf和Ms3ms3rfrf。取Fl代植株的花蕾，分离游离小孢子后在含有秋水仙碱的培养基中培养诱导其加倍得到胚状体，然后在不含秋水仙碱的培养基中培养扩大其数量，最终获得加倍的二倍体可育DH植株。最后以隐性纯合两型品系中的不育株与DH株系测交，根据其育性结合种子色泽，获得甘蓝型黄籽油菜核不育临保系，其基因型为 ms3ms3rfrf0
[0038]本发明具有如下优点:
[0039](I)由于黑籽隐性全不育与黄籽品系的杂交种易于得到和收集，不受隐性纯合两型系、临保系和黄籽纯系材料的商业保密限制，只需对黑籽隐性全不育与黄籽品系的杂交匕代小饱子培养的DH株系进行选择和基因型鉴定，就可快速获得性状纯合遗传稳定的黄籽隐性核不育临保系。
[0040](2)拓宽了甘蓝型黄籽隐性核不育临保系的基因库，为甘蓝型黄籽油菜杂交育种亲本创制提供了一种新途径。除此之外，本方法对快速获得其它目标性状的临保系同样适用，比如高含油量、长角果、适合机收等性状的临保系。
【附图说明】
[0041]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0042]图1为本发明实施例提供的选育方法的流程示意图。
【具体实施方式】
[0043]下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0044]实施例1
[0045]WAL1A为甘蓝型黑籽隐性全不育，其基因型为mS3mS3Rfrf，系西南大学王瑞副研宄员选育而成，并于2013年4月通过重庆市品种委员会的鉴定。SWU-05R为甘蓝型黄籽纯系，其基因型为Ms3Ms3rfrf，系西南大学李加纳教授选育而成，于2013年4月通过重庆市品种审定委员会的鉴定。
[0046]2012年3月油菜花期以WAL1A为母本与父本SWU-05R杂交，获得F1R种子。
[0047]在2013年3月油菜花期，对F1进行小孢子培养，共获得150个胚状体，经诱导培养获得125个单株，2013年10月栽入大田，2014年3月鉴定加倍植株为68个。具体过程如下:
[0048]1、从生长健壮的植株F1I，摘取主花序或一次分枝花序顶端部分3.5?4mm的花蕾，用75%的酒精浸泡0.5-lmin，无菌水冲洗3次，再用0.1%的HgCl2浸泡12min，无菌水冲洗3次，每次大约5min ；
[0049]2、将消毒后的花蕾转入无菌小烧杯中，加入小孢子分离培养基，用玻璃注射器内筒挤压花蕾，再经300目的滤网过滤，将滤液转入带刻度的容积为1ml的离心管中，100rpm离心3min，离心后倒掉上清液，重新加入小孢子分离培养基，离心3次，最后获得小孢子沉淀物。将含有秋水仙碱的胚状体诱导液加到小孢子沉淀物中，使小孢子密度约5万个/ml。然后把含有小孢子的培养基分装到培养皿中密封，并放在32°C的培养箱中暗培养l-2d之后，进行离心去掉含秋水仙碱的胚状体诱导液培养液，并在培养皿中加入没有秋水仙碱的胚状体诱导液，随后把培养皿密封放到25°C的培养箱暗培养。当培养皿中出现肉眼可见的球形胚时，再把培养皿放到摇床震荡培养(60rpm，25°C )。
[0050]3、当震荡培养的胚状体发育到子叶期时，将其转入胚状体成苗培养基中，并置于25 0C进行培养，形成的小植株可移栽到土中，也可转到新鲜的相同培养基中继代培养。没有成苗的胚状体可转到B5培养基继续培养，直至发育成完整的小植株。在立冬后把小苗移栽到田间。成苗之后，继代、保存用1/2MS培养基(即快繁培养基)，生根时用生根培养基，生根是在移栽前20?30天