开始，因此在此之前的苗需要继代保存。
[0051]上述过程用到的培养基如下:
[0052](I)小抱子分尚培养基(B5-13)
[0053]B5大量元素+B5微量元素+B5有机添加物+FeNaEDTA 13.2mg.L—1+蔗糖130g.L-1 (pH = 6.0)
[0054](2)胚状体诱导培养基
[0055]NLN-13
[0056]其中，NLN-13培养基的成分如下:
[0057]大量元素:KN03125mg.L'MgSO4.7H20 125mg.L'Ca4NO3.4H20500mg.L'KH2PO4125mg.L-1
[0058]铁盐:FeNaEDTA26.4mg.L-1
[0059]微量元素:MnSO4.4H20 22.3mg.L'Η3Β036.2mg.L'ZnSO4.7Η208.6mg.L'CuSO4.5H20 0.025mg.L \ Na2MoO4.2H20 0.25mg.L \ CoCI2.6H200.025mg.L 1
[0060]有机添加物:肌醇10mg.L'烟酸5mg.L'盐酸卩比卩多醇0.5mg.L'盐酸硫胺素0.5mg.L'甘氨酸2mg.L'叶酸0.5mg.L'生物素0.05mg.L'谷胱甘肽30mg.L-谷酰胺 800mg.U\ L-丝氨酸 10mg.L'鹿糖 130000mg.L-1
[0061](3)胚状体成苗培养基
[0062]B5+GA30.lmg.L_1+6-BA 0.lmg.L-1+ 蔗糖 2% + 琼脂 8g.L-1 (pH = 5.8)
[0063](4)快繁培养基
[0064]MS+6-BA 1.5mg.L-1+NAA 0.lmg.L-1+ 蔗糖 30g.L-1+ 琼脂 7g.L-1 (pH = 5.8)
[0065](5)生根培养基
[0066]1/2MS+IBA0.5mg.L-1+ 蔗糖 30g.L-1+ 琼脂 7g.L-1 (pH = 5.8)
[0067]2014年3月对这68个加倍植株套袋自交同时与纯合两型系SL1AB中的不育株测交。2014年5月考察68个DH株系自交种的种子色泽。2015年3月调查测交种的育性表现，结合DH株系自交种子色泽，发现有两个黄籽DH株系与SL1AB中的不育株测交种表现为隐性全不育，其基因型为ms3ms3rfrf。其中一个黄籽DH株系种子色泽纯黄，长势正常，命名为YSLB-1，即为本发明所描述的甘蓝型黄籽油菜隐性核不育临保系。
[0068]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种选育甘蓝型黄籽油菜隐性核不育临保系的方法，其特征在于，包括: a)以黑籽隐性全不育品系为母本，甘蓝型黄籽品系为父本进行杂交，获得匕代； b)采用甘蓝型油菜小孢子培养技术对Fl代植株的游离小孢子诱导培养，获得DH株系; c)将DH株系与隐性纯合两型品系中的不育株测交，得到甘蓝型黄籽油菜核不育临保系O
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤a)中，黑籽隐性全不育品系为WSL1A0
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤后a)中，甘蓝型黄籽品系为SWU-05R。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b)具体为: bl)以F1代植株为供体，花期从油菜花序上取花蕾，在小孢子分离培养基中研磨、过滤、离心后获得小孢子沉淀物； b2)将步骤bl)获得的小孢子沉淀物在含秋水仙碱的胚状体诱导培养液中培养；然后将获得的培养物离心，离心得到的小孢子沉淀物在不含秋水仙碱的胚状体培养液中培养至可见胚状体，转到摇床上继续培养至子叶期； b3)将步骤b2)获得的子叶期胚状体转入胚状体成苗培养基中继续培养至成苗； b4)步骤b3)获得的苗继续生长至花期，获得DH植株。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤bl)中，所述花蕾的长度为3.5 ?4.0mm ； 所述过滤采用300目滤网； 所述离心的转速为lOOOrpm，时间为3min ； 所述小孢子分离培养基包括:2500mg/L的KN03、250mg/L的MgSO4.7H20、150mg/L的CaCl2.2H20、134mg/L 的(NH4)2S04、150mg/L 的 NaH2PO4.Η20、0.83mg/L 的 ΚΙ,3.0mg/L 的H3BO3UOmg/L 的 MnSO4.4Η20、2.0mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20、0.025mg/L 的 CoCl2.6Η20、0.025mg/L 的 CuSO4.5H20、100mg/L 的肌醇、1.0mg/L 的烟酸、1.0mg/L 的盐酸吡哆醇、10mg/L的盐酸硫铵、13.2mg/L的FeNaEDTA和130g/L的蔗糖；所述小孢子分离培养基的pH值为6.0。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤b2)中，胚状体诱导液包括:125mg/L 的 KN03、125mg/L 的 MgSO4.7H20、500mg/L 的 Ca4NO3.4H20、125mg/L 的 ΚΗ2Ρ04、26.4mg/L 的 FeNaEDTA,22.3mg/L 的 MnSO4.4Η20、6.2mg/L 的 H3BO3>8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.025mg/L 的 CuSO4.5Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20、0.025mg/L 的 CoCI2.6H20、100mg/L 的肌醇、5mg/L的烟酸、0.5mg/L的盐酸卩比B多醇、0.5mg/L的盐酸硫胺素、2mg/L的甘氨酸、0.5mg/L的叶酸、0.05mg/L的生物素、30mg/L的谷胱甘肽、800mg/L的L-谷氨酰胺、100mg/L的L-丝氨酸和130000mg/L 的鹿糖； 所述含秋水仙碱的胚状体诱导液中秋水仙碱的浓度为10?50mg/L。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将步骤bl)获得的小孢子沉淀物在含秋水仙碱的胚状体诱导培养液中、密封、32°C暗培养I至2天，小孢子密度为5万个/mL ; 离心得到的小孢子沉淀物在不含秋水仙碱的胚状体培养液中、密封、25°C暗培养至可见胚状体； 所述摇床培养的温度为25°C，转速为60rpm。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤b3)中，所述胚状体成苗培养基包括:2500mg/L 的 KN03、250mg/L 的 MgSO4.7H20、150mg/L 的 CaCl2.2H20、134mg/L 的(NH4)2SO4'150mg/L 的 NaH2PO4.Η20、0.75mg/L 的 ΚΙ、3.0mg/L 的 H3BO3'10mg/L 的 MnSO4.4Η20、2.0mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20、0.025mg/L 的 CoCl2.6Η20、0.025mg/L的 CuSO4.5Η20、37.3mg/ 的 Na2-EDTA,27.8mg/L 的 FeSO4.7H20、lOOmg/L 的肌醇、1.0mg/L 的烟酸、1.0mg/L的盐酸卩比B多醇、10mg/L的盐酸硫钱、0.lmg/L的赤霉素、0.lmg/L的6-节氨基腺嘌呤、2%的蔗糖和8g/L的琼脂；所述胚状体成苗培养基的pH值为5.8 ； 所述培养的温度为25 °C。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述隐性纯合两型品系为SLAB。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤c)具体为: 将DH植株自交，并与隐性纯合两型品系中的不育株测交，得到甘蓝型黄籽油菜核不育临保系。
【专利摘要】本发明提供了一种选育甘蓝型黄籽油菜隐性核不育临保系的方法，包括：a)以黑籽隐性全不育品系为母本，甘蓝型黄籽品系为父本进行杂交，获得F1代；b)采用甘蓝型油菜小孢子培养技术对F1代植株的游离小孢子诱导培养，获得DH株系；c)将DH株系与隐性纯合两型系中的不育株测交，后代鉴定选择得到甘蓝型黄籽油菜核不育临保系。本发明提供的方法能够快速获得性状纯合、遗传稳定的黄籽隐性核不育临保系，方法简单，原始材料容易获得。
【IPC分类】A01H1-08, A01H1-04, A01H1-02
【公开号】CN104871958
【申请号】CN201510312343
【发明人】王瑞, 殷家明, 李加纳, 徐新福, 樊晋华, 曲存民, 卢坤, 唐章林
【申请人】西南大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月9日