一种线纹海马和三斑海马杂交育种的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于鱼类杂交育种技术领域。更具体地，涉及一种线纹海马和三斑海马的 杂交育种方法。
【背景技术】
[0002]海马，属鱼纲，海龙科、海马属（，是一种名贵海洋中药材，在我国 素有"南方人参"之称，具有补肾壮阳、强心催产、止血镇痛、镇静安神的功效。线纹海马 (//ifloocaw/wserector1)主要分布在大西洋西岸，是典型的热带亚热带型海马种群，其繁殖 力强、个体较大和生长速率快。三斑海马（/ffjOpocaw/ws 主要分布于分布于 印度太平洋区，是我国重要的经济种，占我国海马总交易量的35%，具有生长较快、抗病能力 较强的特点。
[0003] 然而，不管是线纹海马还是三斑海马经过多代的繁殖后，种质退化非常严重。幼体 成活率极低，苗种质量成为限制我国海马养殖业发展的"瓶颈"之一。
[0004] 杂交育种就是利用两个遗传性不同的个体交配产生后代的育种方法。鱼类杂交育 种是培育良种的有效途径，我国已先后培育出丰鲤(兴国红鲤早X散鳞镜鲤(6)、岳鲤(荷 包红鲤早X湘江野鲤鱼纟）、荷元鲤(荷包红鲤早X元江鲤鱼纟）、芙蓉鲤(散鳞镜鲤早X兴 国红鲤纟）及福寿鱼（莫桑比克罗非鱼早X尼罗罗非鱼(6)等具有明显优势的杂交种。然 而，目前国际上还没有关于海马种间杂交的研究和报道。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是克服现有线纹海马以及三斑海马种质衰退、苗种质量 下降的缺陷和不足，提供一种线纹海马和三斑海马杂交育种的方法，从而培育出成活率高 的杂交海马，为海马的抗病育种提供基础。
[0006] 本发明上述目的通过以下技术方案实现： 一种线纹海马和三斑海马杂交育种的方法，包括如下步骤： 51. 线纹海马和三斑海马亲本选择； 52. 对步骤Sl中的线纹海马和三斑海马亲本进行强化培育； 53. 将步骤S2的海马亲本进行正交和反交； 54. 将步骤S3怀孕亲本进行精心培育和产幼管理； 55. 对步骤S4中生产的鱼苗按照相同的饲养方式在相似的环境下饲养； 56. 对步骤S5中的鱼苗分别在1、2和4月龄时进行体重和成活率对比，得到成活率高、 遗传稳定的优质杂交海马种质品系。
[0007] 其中，优选地，步骤Sl是分别选择身体健康、性腺发育良好、年龄为1~2年龄的 线纹海马和三斑海马作为亲本，包括线纹海马雌性和雄性，三斑海马雌性和雄性。
[0008] 步骤S2所述强化培育是将亲本在人工繁殖前分别单独饲养。具体是将亲本分别 饲养于仿生态白桶中，养殖用水保持水温22~30°C，盐度20~32%。，PH值7. 8~8. 4,光 照3000~6000勒，保持微流水刺激，并在白桶中放入少量人工水草和附着物；饵料以冰冻 奸为主，丰年虫为辅，冰冻奸的日投喂量为海马体重的5%~8%。
[0009] 步骤S3所述正交和反交具体是将线纹海马雌性（早）和三斑海马雄性（纟），三斑海 马雌性（早）和线纹海马雄性（纟）两个组分别放入两个仿生态白桶中进行杂交。优选地，每 一个仿生态白桶中分别放入4尾雌性和4尾雄性亲本。
[0010] 更优选地，步骤S3的动作要轻快，尽量减少对海马的惊扰；期间水温在22~30°C 之间，光照2000~6000勒之间，并保持微流水刺激；在放入仿生态白桶中后，海马陆续交 配，期间，投喂冰冻虾，日投喂量为海马总体重的6%~8%，一天投喂4~5次，饵料投喂一小 时后及时吸掉残饵和粪便，保持水质良好。
[0011] 优选地，步骤S4所述精心培育和产幼管理是在雄性怀孕期间，水温控制在26~ 30°C，保持微流水刺激，保持环境安静，精心护养；饵料为冰冻虾，一天投饵4~5次，日投喂 量为海马体重的5%~8%，在投喂1个小时后及时吸掉残饵和粪便；操作要轻快，海马离水 时间不能超过3分钟。
[0012] 优选地，步骤S5是分别将杂交子代在相同的管理方式及相似的条件下饲养。具体 是收集刚孵出的稚鱼，并放入水桶中(优选容积为Im3 )培育，密度为500尾/m3，饵料为人 工孵化的丰年虫，饵料投喂量为在下一次投喂时水中的饵料略有剩余为宜；当鱼苗长到1 月龄时，转入小型水泥池中培育，密度为100尾Ai3，投喂丰年虫和冰冻虾，丰年虫的投喂量 为在下一次投喂时水中仍有少量丰年虫为宜，冰冻虾的日投喂量为海马总体重的5%~8% ; 当长到2~3月龄时，转入成鱼养殖池饲养，密度为20尾/m3，停止投喂丰年虫，只投喂冰冻 虾，日投喂量为海马总体重的5%~8%。
[0013] 最后，步骤S6是分别在1、2、4月龄时，比较每个繁殖组合的子代体重，并统计比较 每一个繁殖合子代的成活率，从而得到成活率高的优质杂交海马种质品系。
[0014] 作为一种优选的可实施方案，上述线纹海马和三斑海马杂交育种方法的具体操作 流程总结如下： (1)亲本选择： 本步骤中，选择身体健康、性腺发育良好、年龄为1~2年龄的线纹海马和三斑海马作 为亲本，包括线纹海马雌性和雄性，三斑海马雌性和雄性。亲本在人工繁殖前分别单独饲 养。
[0015] (2)亲本产前培育： 将亲本分别饲养于仿生态白桶中（约Im3 )，养殖用水保持水温22~30°C，盐度20~ 32%。，PH值7. 8~8. 4,光照3000~6000勒，并保持微流水刺激。同时，在白桶中放入少量 人工水草和附着物，可供海马附着栖息。饵料主要以冰冻虾为主，丰年虫为辅，冰冻虾的日 投喂量为海马体重的5%~8%。
[0016] (3)人工配组繁殖： 将线纹海马雌性（早）和三斑海马雄性（纟），三斑海马雌性（早）和线纹海马雄性（纟）两 个组分别放入两个仿生态白桶中，每一个桶中分别放入4尾雌性和4尾雄性亲本。在放入 白桶后，雌雄亲本发情，相互追逐，雌性将卵子排入雄性的育儿袋中，并完成受精。
[0017] (4)怀孕亲本的培育及产幼护理： 在雄性怀孕期间，水温控制在26~30°C，保持微流水刺激，饵料为冰冻虾，日投喂量为 海马体重的5%~8%，一天投t耳4~5次，在投喂1个小时后及时吸掉残t耳和奠便。同时，保 持环境安静，减少对海马的刺激；操作要轻快，离水时间不能超过3分钟。受精卵在雄性的 育儿袋中发育15~22d后，雄性将其排出。
[0018] (5)鱼苗培育： 杂交子代和自交子代在相同的管理方式及相似的条件下饲养。收集刚孵出的稚鱼，并 放入水桶中（容积为Im3 )培育，密度为500尾/m3，饵料为人工孵化的丰年虫，饵料投喂量 为在下一次投喂时水中的饵料略有剩余为宜。当鱼苗长到1月龄时，转入小型水泥池中培 育，密度为100尾/m3，投喂丰年虫和冰冻虾，丰年虫的投喂量为在下一次投喂时水中仍有 少量丰年虫为宜，冰冻虾的日投喂量为海马总体重的5%~8%。当长到2~3月龄时，转入 成鱼养殖池饲养，密度为20尾/m3，停止投喂丰年虫，只投喂冰冻虾，日投喂量为海马总体 重的5%~8%。
[0019] (6)杂交子代和自交子代生长和成活率对比： 分别在1、2、4月龄时，对每个繁殖组合的子代进行称重，并统计每一个繁殖组的成活 率。
[0020] 种间杂交育种涉及到两种不同物种，其遗传差异较大、生活习性或适宜的生活环 境等等因素，都不完全相同，因此，是否能够成功的完成杂交育种，以及子代的成活率，受海 马本身的生物学特性、人工操作水平及养殖环境等多种因素的影响。本发明经过大量的研 究和探索得到本发明上述线纹海马和三斑海马杂交育种的方法，能够成功、高效地实现线 纹海马和三斑海马的杂交育种。通过本发明的杂交选育方法，可显著提高幼海马的成活率， 促进海马抗病品种的培育，对提高海马苗种的种质水平、促进优良品系的选育有重要的意 义。
[0021] 本发明具有以下有益效果： (1)本发明弥补了现有海马种间杂交育种技术的空白，研究出了一种线纹海马和三斑 海马杂交育种的方法，获得的杂交子代的成活率比自交子代有很大程度的提高，可为培育 海马抗病品系提供基础，促进海马养殖产业发展。
[0022] (2)通过本发明的种间杂交选育方法，可显著提高幼海马的成活率，促进海马抗病 品种的培育，对提高海马苗种的种质水平、促进优良品系的选育有重要的意义。
【附图说明】
[0023] 图1为线纹海马和三斑海马杂交子代与自交子代的成活率对比。
【具体实施方式】
[0024] 以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明 做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试 剂、方法和设备。
[0025]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0026] 实施例1 线纹海马和三斑海马杂交育种方法，步骤如下： 1、线纹海马和三斑海马亲本的选择和产前强化培育 (I)亲本选择 2014年4月15日，从湛江养殖基地随机分别选取1~2龄的30尾线纹海马早、线纹海 马古、三斑海马早和三斑海马纟亲本，线纹海马早和三斑海马早亲本体重在7~9g之间，线 纹海马6和三斑海马6的体重在8~IOg之间。
[0027] 选择身体健康、性腺发育良好的线纹海马和三斑海马作为亲本，包括线纹海马雌 性和雄性，三斑海马雌性和雄性。
[0028] (2)产前强化培育 将亲本分别单独饲养于仿生态白桶(约IHl3 )中进行产前培育。仿生态白桶放置人工水 草和附着物，可供海马附着休息，保持水温在22~30°C之间，并保持微流水刺激，盐度20~ 32%。，PH值7. 8~8. 4,光照3000~6000勒。培育期间，投喂桡足类、丰年虫和冰冻虾，并 以冰冻虾为主，日投喂量为海马体重的5%~8%。
[0029] 2、线纹海马和三斑海马亲本的人工交配繁殖 2014年5月1日，亲本经过半个月强化培育后，分别从随机选取4尾雌雄亲本放入仿生 态白桶中，即线纹海马早和三斑海马纟、三斑海马早和线纹海马纟、线纹海马早和线纹海马 古、三斑海马早和三斑海马纟这四种组合。
[0030] 上述杂交过程以自交实验为对照实验。
[0031] 在操作过程中，动作要轻快，尽量减少对海马的惊扰。期间水温在22~30°C之间， 光照2000~6000勒之间，并保持微流水刺激。在放入仿生态白桶中后，海马陆续交配。期 间，投喂冰冻虾，日投喂量为海马总体重的6