件下培养。1周后芽开始分化，30-40天丛生芽生长稳定。
[0022] 表1.不同快繁培养基激素配比及白愉生长情况
其中，所述最适宜的快繁培养基为：DKW + TDZ 0.2 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L+ IBA 0.025111旨/1 +酷40.1111旨/1+薦糖25旨/1+琼脂6.5旨/1+40 0.5旨/1。出芽率为93.3%，扩繁系 数为4.5，平均苗高为6.768cm 在无菌条件下将获得的丛生芽分成单株，切去基部愈伤组织，接种到复壮培养基上，在 25±2°C，光照14~1化，光强30001X条件下培养20~30天，得到茎杆粗壮，叶片开展，叶色浓绿 的健壮组培苗;复壮培养基为:MS培养基+ TDZ 0.025mg/L+6-BA 0.1 mg/L +IBA 0.05mg/L +AC 0.5/L+薦糖25g/L+琼脂6.5g/L，pH值为5.8~6.0。
[0023] 在无菌环境下将复壮后的组培苗剪去基部愈伤组织，接种到含不同激素配比的不 同生根培养基上(见表2)，在25±2°C，光照14~1化，光强30001X条件下培养20~30天，得到生 根组培苗。
[0024] 表2.不同生根培养基激素配比及白愉生根情况
其中：所述最适宜的生根培养基为：1/2MS培养基+IBA 0.05 mg/L+NAA0.025 mg/L+ AC 0.5g/L+薦糖12.5g/L+琼脂6.5g/L，pH值为5.8~6.0。生根率可达96.3%，平均生根条数5.154 条，平均根长5.642cm。
[00巧]将生根组培苗移至遮阴溫室，遮阴法控制室内光照不高于lOOOlx，控制溫度20~25 °C，湿度40%W上，闭瓶炼苗2-3天，开瓶盖炼苗2天，开瓶后瓶内湿度不低于60%，如培养基过 干可用喷雾方式补水。开瓶炼苗结束后，用勺子取出组培苗和培养基，洗净培养基，移栽至 赔石:草炭=1:1的基质中，在溫室内继续炼苗30~40天。基质和育苗容器预先用0.125%高儘 酸钟诱透后静置2天，移栽前再用清水诱透尽量去除基质中高儘酸钟，炼苗期间溫室内湿度 保持在40%~80%，溫度15-30°C。待根系发育正常，苗株生长健壮后移栽至大田，成活率95%。
[0026] 上述DKW培养基组分为:硝酸锭1416. Omg/L，棚酸4.8mg/L，无水氯化巧112.5mg/L， 硝酸巧1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钢45.4mg/L，屯水硫酸铁 33.8mg/L，硫酸儀361.49mg/L，一水硫酸儘33.5mg/L，钢酸钢0.39mg/L，六水硫酸儀 0.005mg/L，憐酸二氨钟265. Omg/L，硫酸钟1559. Omg/L，六水硝酸锋17. Omg/L，盐酸硫胺素 5.22mg/l; 1/2DKW为大量元素减半。
[0027] 上述MS培养基组分为：硝酸锭1650 . Omg/L，硝酸钟1900 . Omg/L，二水合氯化巧 440.0 mg/L，屯水硫酸儀370.0 mg/L，憐酸二氨钟170mg/L，乙二胺四乙酸二钢37.3mg/L，屯水 硫酸铁27.8mg/L，舰化钟0.83mg/L，四水硫酸儘22.3mg/L，二水钢酸钢0.25mg/L，棚酸 6.2mg/L，五水硫酸铜0.025mg/L，六水氯化钻0.025mg/L，肌醇100 . Omg/L，盐酸硫胺素 O.lmg/L，盐酸化唉醇0.5 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L;l/2MS为大量元素减半。
[0028] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限 审IJ，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为 等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种速生白榆的组培快繁方法，其特征在于包括无菌外植体的获得，丛生芽诱导，组 培苗复壮，生根培养和炼苗步骤； 其中所述丛生芽诱导中使用的快繁培养基组成为:DKW培养基+ TDZ 0.075~0.2 mg/L + 6-BA 0.025~0.075 mg/L+ IBA 0.025~0.075 mg/L + ΝΑΑ (Μ). 1 mg/L+蔗糖20~30g/L+ 琼脂6 · 5g/L+AC 0 · 5g/L，pH值为5 · 8~6 · 0。2. 根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于无菌外植体的获得包括以下步骤： 5-6月份采取新生嫩枝和嫩芽为外植体，用饱和洗洁净水浸泡5~lOmin，后用毛笔轻刷 表面，再用流水冲洗30~60min;移至超净工作台，用70~75%酒精消毒20~30s，无菌水冲洗2~3 次，再用1%次氯酸钠溶液消毒8~lOmin，后用无菌水冲洗5~8次，每次不少于3min，最后再置 于无菌水中，防止接种时间过长造成外植体缺水失活，接种时，用无菌滤纸吸去外植体表面 多余水分，获得无菌外植体。3. 根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于所述丛生芽诱导的方法是： 将无菌外植体剪成l±〇. lcm带腋芽小段接种于快繁培养基上，在25±2°C，光照14~ 16h，光强30001x条件下培养20~30天，获得丛生芽，其中DKW培养基中含有硝酸铵1416. Omg/ L，硼酸4 · 8mg/L，无水氯化|丐112 · 5mg/L，硝酸|丐1367 · Omg/L，五水硫酸铜0 · 25mg/L，乙二胺 四乙酸二钠45 · 4mg/L，七水硫酸铁33 · 8mg/L，硫酸镁361 · 49mg/L，一水硫酸猛33 · 5mg/L，钼 酸钠0 · 39mg/L，六水硫酸镍0 · 005mg/L，磷酸二氢钾265 · Omg/L，硫酸钾1559 · Omg/L，六水硝 酸锌17 · 0mg/L，盐酸硫胺素5 · 22mg/L。4. 根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于快繁培养基组成为：DKW + TDZ 0.2 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L+ IBA 0.025mg/L + NAA0.1 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L + AC 0.5g/L〇5. 根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于组培苗复壮的方法是:在无菌条件 下将获得的丛生芽分成单株，切去基部愈伤组织，接种到复壮培养基上，在25±2°C，光照14 ~16h，光强30001x条件下培养20~30天，得到茎杆粗壮，叶片开展，叶色浓绿的健壮组培苗。6. 根据权利要求5所述的组培快繁方法，其特征在于复壮培养基为:MS培养基+ TDZ 0.02511^/1+6-8厶0.111^/1+18厶0.0511^/1+厶(：0.5/1+蔗糖258/1+琼脂6.58/1，？!1值为5.8 ~6 · 0〇7. 根据权利要求1或6所述的组培快繁方法，其特征在于其中MS培养基中含有硝酸铵 1650 · Omg/L，硝酸钾1900 · Omg/L，二水合氯化钙440 · Omg/L，七水硫酸镁370 · Omg/L，磷酸二 氢钾170mg/L，乙二胺四乙酸二钠37 · 3mg/L，七水硫酸铁27 · 8mg/L，碘化钾0 · 83mg/L，四水硫 酸锰22 · 3mg/L，二水钼酸钠0 · 25mg/L，硼酸6 · 2mg/L，五水硫酸铜0 · 025mg/L，六水氯化钴 0 · 025mg/L，肌醇100 · 0mg/L，盐酸硫胺素0 · lmg/L，盐酸吡咳醇0 · 5 mg/L，甘氨酸2 · 0 mg/L。8. 根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于所述生根培养的方法是:在无菌环 境下将复壮后的组培苗剪去基部愈伤组织，接种到生根培养基上，在25 ± 2°C，光照14~16h， 光强30001x条件下培养20~30天，得到生根组培苗;生根培养基组成为DKW或1/2DKW或1/2MS 培养基 + IBA 0.01~0.05 mg/L + NAA 0~0.05 mg/L + AC 0.5g/L+蔗糖 12.5g/L+琼脂 6.58/14田直为5.8~6.0。9. 根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于生根培养基组成为1/2MS培养基+ 18八0.05 11^/1+熟厶0.025 11^/1+八(：0.58/1+蔗糖12.58/1+琼脂6.58/14!1值为5.8~6.0。10.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于所述炼苗的方法是:将获得的生 根组培苗移至遮阴温室，遮阴法控制自然光500-10001X，室内温度20~25°C，湿度40%以上， 闭瓶炼苗2-3天，开瓶盖炼苗2-3天，取出小苗，洗净培养基后，移栽至蛭石:草炭=1:1的基质 中，在温室内继续炼苗30-40天，待根系发育正常，苗株生长健壮后移栽至大田。
【专利摘要】本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种速生白榆的组培快繁方法，由无菌外植体的获得，丛生芽诱导，组培苗复壮，生根培养和炼苗步骤组成。步骤中没有初代培养，得到无菌苗直接进行快繁，快繁后经壮苗再进行生根，提高了组培苗生根质量和炼苗成活率，经检索在目前公开的能找到的快繁方法的文献中，本发明的快繁出苗率是最高的，即速生白榆扩繁系数可达到4.5，生根率达到96.3%，炼苗成活率95%。利用改良培养基即在DKW培养基基础上添加不同浓度的和不同种类的激素提高繁殖效率，解决了速生白榆快繁难题，较常规步骤扩繁系数高、出苗质量好，为速生工厂化育苗或规模化生产及推广奠定了良好基础。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105494108
【申请号】CN201610110234
【发明人】韩义, 张占彪, 李文清, 解孝满, 韩彪, 鲁仪增, 杨海平, 刘鵾, 王倩
【申请人】山东省林木种质资源中心
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2016年2月29日