5?氨基?1H?吡唑[3,4?d]嘧啶?4(5H)?酮类化合物在制备抗植物病毒剂中的应用
【专利摘要】本发明公开了一种5?氨基?1H?吡唑[3,4?d]嘧啶?4(5H)?酮类化合物在制备抗植物病毒剂中的应用。
【专利说明】
5-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮类化合物在制备抗植 物病毒剂中的应用
技术领域
[0001 ] 本发明属于农业用抗病毒剂领域，具体来说涉及一种5-氨基-1H-吡唑[3，4-d]嘧 啶-4(5H)_酮类化合物在制备抗植物病毒剂中的应用。
[0002]
【背景技术】
[0003] 吡唑[3，4-d]嘧啶-4(5H)_酮具有抗癌洲#，川，忽57-幻卯；&·〇. Med. Chem., 2013, 21, 5782-5793 J. Chem. Pharm. Res., 2012, 4, 4097-4106; Bioorg. Med. Chem., 2011, 6808-6817 ；)(J. Net. Chem., 2014, 51, 899-905), 贫炎PAarffiac.，洲认沿，松?)等多种生物活性，是新型医药研究的热点领域 之一。当吡唑[3,4-(1]嘧啶-4(5!〇-酮的5位上含有一个氨基时（8卩 ：5-氨基-1!1-吡唑[3,4-(1] 嘧啶-4(5H)_酮），由于氨基的可修饰性以及其反应的特性，常常作为进一步修饰改造的重 要中间体，氨基是比较常用的修饰位点。因此，5-氨基-1H-吡唑[3，4-d ]嘧啶-4 (5H)-酮一般 情况下被用作中间体使用。迄今为止，还没有任何报道将5-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4 (5H)-酮类化合物作为抗植物病毒剂应用。
[0004]
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供的一种5-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5H)_酮类化合物 在制备抗植物病毒剂中的应用。
[0006] -种5-氨基-1H-吡唑[3，4-d]嘧啶-4( 5H)-酮类化合物在制备抗烟草花叶病毒、马 铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒、黄瓜花叶病毒、番前病毒病、辣椒病 毒病、水稻病毒病等植物病毒剂中的应用。
[0007] 尤其是在抗烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒中的应用。
[0008] 本发明的5-氨基-1H-吡唑[3,4-(1]嘧啶-4(5!〇-酮作在抗植物病毒剂中的应用，化 合物结构如通式I所示：
式中，Ri选自HA-C3的烷基、R2选自甲基、乙基、叔丁基、苯基、取代苯基、芳杂环基;R3 可选自H，C1-C3的烷基。
[0009] 进一步地，通式I所述的化合物中，办选自H、-CH3;R2选自甲基、乙基、叔丁基、苯基、 芳杂环基；R 3可选自H、-CH3、-CH2CH3. 更进一步地，通式I所述的化合物中，较为优选的取代基为:?选自h、-ch3，r2选自甲基、 乙基、叔丁基、苯基、2-氯吡啶基;R3可选自H、-CH3。
[0010]优选化合物的通式I如下：
本发明的通式I化合物可按照以下方法进行制备。具体可以参照文献 [Tetrahedron, 1987/43(18), 4195-202 ； Liebigs Annalen der Chemie 1985, (9), 仍幻所述的方法进行制备。反应式中，中间体及化合物的取代基于上述相同，反应过 程为：
所合成得到的5-氨基-1H-吡唑[3,4-d]嘧啶-4(5H)_酮类化合物核磁数据如下： 化合物la:1!! NMR (500 MHz, CDC13 ) δ 8.29 (s，1H)，8.15 (s，1H)，3.96 (s， 3Η), 2.31 (s, 2H); 13C 匪R 13C 匪R (125 MHz, CDC13) δ 158.25，145.89，144.50， 136.77, 87.06, 37.40. 化合物lb:1!! NMR (500 MHz, CDC13) 8.30 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.45 (s, 2H), 1.92 (s, 3H); 13C 匪R 13C 匪R (125 MHz, CDC13 ) δ 161.24，160.13，148.91， 136.77, 88.46, 37.40, 19.78. 化合物IcjH 匪R (500 MHz, CDC13)S 4.07 (s, 3H), 2.42 (s, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.92 (s, 3H).;13C NMR (125 MHz, CDCI3 )δ 160.09，158.04，149.86，147.59， 106.30, 38.34, 19.78, 14.76. 化合物Id:1!!匪R (500 MHz, CDC13)S8.15 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 2.33 (brs, 2H), 1.98 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDCb )δ 160.09, 158.04, 149.86, 147.59, 106.30, 38.34, 19.78, 14.76. 化合物Ie:1!!匪R (500 MHz, CDC13) δ 8.42 - 8.34 (m, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.94 - 7.76 (m, 3H) ; 13C NMR (125 MHz, , CDCb) δ 158.25, 151.62, 141.48, 141.17, 140.69, 129.30, 129.07, 125.47, 86.29. 化合物IfVH NMR (500 MHz, CDCl3)S8.39 (dt, /= 4.6，2.3 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.85 (d, /= 40.0 Hz, 3H), 2.46 (s, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.92 (s, 3H). ; 13C 匪R (125 MHz, , CDCI3) δδ 160.09, 155.54, 152.70, 151.66, 140.81, 128.97， 128.97, 125.03, 108.35, 19.78, 14.76. 化合物Ig^H NMR (500 MHz, CDC13) δ 8.43 (d, /= 1.2 Hz, 1H), 8.37 (d, / = 1.3 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.89 (t, /= 7.4 Hz, 2H), 7.84 - 7.78 (m, 1H), 2.45 (s, 2H), 1.92 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDCI3) δ161·24, 158.21， 153.08， 141.17, 140.69, 129.30, 129.07, 125.47, 82.20, 19.78. 化合物Ih:1!! NMR (500 MHz, CDCl3)S8.38 (s, 1H), 8.37 (d, /= 1.3 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.89 (s, 2H), 7.81 (s, 1H), 2.37 (s, 2H), 1.98 (s, 3H).; 13C NMR (125 MHz, CDCI3) δ160·45, 152.70， 152.14， 140.81， 140.33， 128.97， 128.97， 125.03， 104.75， 14.76. 化合物Ii^H NMR (500 MHz, CDC13) δ 8.30 (s，2H)，8.15 (s，2H)，3.97 (q，/ =12.6 Hz, 4H)， 2.31 (brs， 4H)， 1.29 (s， 3H); 13C 匪R (125 MHz, CDCI3) δ 158.25， 149.04， 144.22， 137.74， 90.00， 46.32， 12.41. 化合物IjVH NMR (500 MHz, CDC13) δ 3.97 (q，/= 12.6 Hz, 2H), 2.42 (d，/ =2.8 Hz, 2H)，1.98 (s，3H)，1.92 (s，3H)，1.29 (t，/= 12.6 Hz, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDCI3) δ 160.09， 158.60， 152.65， 150.68， 107.82， 47.06， 19.78， 14.76, 12.45. 化合物Ik:1!! NMR (500 MHz, CDCl3)S 8.33 (s, 1H), 3.97 (s, 2H), 2.41 (d, / =2.5 Hz, 2H), 1.92 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).; 13C NMR (125 MHz, CDCb) δ 161.24, 160.82, 149.91, 137.74, 91.40, 46.32, 19.78, 12.44. 化合物 11:? NMR (500 MHz, CDC13)S 8.15 (s, 1H), 3.97 (s, 2H), 2.33 (d, / =1.5 Hz, 2H)， 1.98 (s， 3H)， 1.29 (s， 3H); 13C Mffi (125 MHz, CDC13) δ160·45， 152.80, 150.68, 143.61, 104.89, 47.06, 14.76, 12.47. 化合物Im:1!!匪R (500 MHz, CDC13)S 8.94 (dd, /= 7.5，1.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.85 (t, /= 7.5 Hz, 1H), 7.20 (dd, /= 7.4, 1.5 Hz, 1H); 13CNMR (125MHz, CDC13) δ158·25, 156.46， 150.81， 148.82， 145.99， 141.48， 139.93， 128.06， 124.28， 99.76. 化合物In:1!!匪R (500 MHz, CDCl3)S 8.92 (dd, /= 15.0，2.9 Hz, 1H), 7.85 (t, /= 15.0 Hz, 1H), 7.18 (dd, /= 15.0, 2.9 Hz, 1H), 2.46 (s, 2H), 1.97 (s, 3H), 1.95 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDC13) δ 160.09, 155.54, 154.71, 153.62, 149.84, 148.96, 139.18, 127.96, 125.46, 102.54, 19.78, 14.76. 化合物 10:? 匪R (500 MHz, CDCl3)S 8.91 (dd, /= 15.0，2.9 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.82 (t, /= 15.0 Hz, 1H), 7.19 (dd, /= 14.9, 3.0 Hz, 1H), 2.42 (s, 2H), 1.91 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, CDC13) δ 161.24, 158.21, 156.46, 150.52, 148.82, 145.99, 139.93, 128.06, 124.28, 92.47, 19.78. 化合物Ip^H 匪R (500 MHz, CDCl3)S 8.92 (dd, /= 14.9，3.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.81 (t, /= 14.9 Hz, 1H), 7.16 (dd, /= 14.9, 3.0 Hz, 1H), 2.34 (s, 2H), 1.98 (s, 3H).;13C NMR (125 MHz, CDC13) δ 160.45， 154.71， 153.62， 148.96， 148.31， 140.33， 139.18， 127.96， 125.46， 101.56， 14.76. 化合物Iq^H 匪R (500 MHz, CDC13)S 8.32 (s，1H)，8.15 (s，1H)，2.31 (s， 2H), 1.20 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, CDCb) δ 158.22, 145.41, 145.24, 141.43, 93.27, 60.29, 28.13. 化合物Ir:1!!匪R (500 MHz, CDC13)S 2.42 (s, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.20 (s, 9H); 13C 匪R (125 MHz, CDCh) δ 160.12， 159.74， 157.21， 147.05， 106.54， 61.12， 28.12， 19.38， 14.76. 化合物Is:1!!匪R (500 MHz, CDC13)S 8.32 (s，1H), 2.41 (s，2H), 1.92 (s， 3H), 1.20 (s, 9H).; 13C NMR (125 MHz, CDCb); 13C NMR (125 MHz, CDCb) δ 160.21, 159.73, 157.24, 147.38, 106.25, 61.12, 28.11, 19.72, 14.73. 化合物It:1!!匪R (500 MHz, CDC13)S 8.15 (s, 1H), 2.33 (s, 2H), 1.98 (s, 3H), 1.20 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, CDCb) δ 160.46, 157.22, 148.04, 144.32, 106.00, 61.12, 28.12, 本发明的化合物制备的植物病毒抑制剂，主要用于包括烟草、黄瓜、番茄、辣椒、水稻、 马铃薯等作物，可抑制的病毒包括烟草花叶病毒、马铃薯Υ病毒、马铃薯X病毒、马铃薯S病 毒、马铃薯Α病毒、黄瓜花叶病毒、番前病毒病、辣椒病毒病、水稻病毒病等。
[0011]
【具体实施方式】
[0012] 以抗烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus，TMV)及黄瓜花叶病毒病(CNV)的活性 为例，但并不限定本发明化合物抗其它病毒的应用。
[0013] 实施例1:对烟草花叶病(TMV)的活体保护作用 选取长势一致5-6叶期的心叶烟，用毛笔轻轻在左半叶涂施药剂，右半叶涂施对应剂量 的溶剂作对照。在光照培养箱中保湿培养，控制温度23±1 〇C，光照10000 Lux，12 h后用磷 酸缓冲液将TMV病毒液稀释至适宜浓度，用排笔人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶片上，全叶 接种病毒，自然晾干后清水冲洗叶片。随后在光照培养箱中保湿培养，控制温度23±1 °C， 光照10000 Lux。每药剂处理设3株，每株3-4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。
[0014] 结果调查与分析:参照文献(Fa/3 Z.J. a入上命ric.Fooc/ .之㈨6?万杯5入· 2630-2636和Zuo X. ;et al.J.Agric. Food Chem. 2010，58(5):2755-2762)等所攝述你]方 法进行化合物对烟草花叶病毒的保护评价。当空白对照的半叶上呈现明显枯斑，约在实验 2-3 d后就可调查，分别记录每片叶的左右半叶的枯斑数，按下列计算出供试化合物对烟草 花叶病毒的抑制率，即相对效果。
[0015] Y=(C-A)/C X100% 其中:Y为化合物对对烟草花叶病毒的抑制率； C为对照组(右半叶）枯斑数，单位:个； A为化合物处理组(左半叶）枯斑数，单位:个。
[0016] 对照组（右半叶）枯斑数和化合物处理组（左半叶）枯斑数都可以参用各组重复 的平均数或各组重复的枯斑总数。每个处理都是用自己的另一半作为对照。当空白对照的 半叶上呈现明显枯斑，约在实验2-3 d后就可调查，分别记录每片叶的左右半叶的枯斑数， 按下列计算出供试化合物对烟草花叶病毒的抑制率，即相对效果。
[0017] Y=(C-A)/C X100% 其中:Y为化合物对对烟草花叶病毒的抑制率； C为对照组(右半叶）枯斑数，单位:个； A为化合物处理组(左半叶）枯斑数，单位:个。
[0018] 对照组（右半叶）枯斑数和化合物处理组（左半叶）枯斑数都可以参用各组重复 的平均数或各组重复的枯斑总数。每个处理都是用自己的另一半作为对照。
[0019] 经过测试:在500 mg/L的浓度下，化合物Ia，Ib，Ic，Id，Ie，If，Ig，Ih，Im，In，Io 对烟草活体保护达到68%-90%。
[0020] 实施例2:对烟草花叶病(TMV)病毒粒子的钝化作用 选取长势一致的5-6叶期的心叶烟，用磷酸缓冲液将TMV病毒液稀释至6 Χ10-3 mg / mL，将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30 min，用排笔人工摩擦接种于撒有金刚砂的左 半叶，对应剂量的溶剂与病毒汁液混合接种右半叶，自然晾干后用清水冲洗。随后在光照培 养箱中保湿培养，控制温度23±1 °C，光照10000 Lux，2-3d后观察并记录产生枯斑的数目。 每药剂处理设3株，每株3- 4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。
[0021] 结果调查与分析:参照文献(Fa/3 ZJ. a入上命ric.Fooc/ .之㈨6?万杯5入· 2630-2636和Zuo X. ;et al.J.Agric. Food Chem. 2010，58(5):2755-2762)等所攝述你]方 法进行化合物对烟草花叶病毒的钝化进行评价。当空白对照的半叶上呈现明显枯斑，约在 实验2-3 d后就可调查，分别记录每片叶的左右半叶的枯斑数，按下列计算出供试化合物对 烟草花叶病毒的抑制率，即相对效果。
[0022] Y=(C-A)/C X100% 其中:Y为化合物对对烟草花叶病毒的抑制率； C为对照组(右半叶）枯斑数，单位:个； Α为化合物处理组(左半叶）枯斑数，单位:个。
[0023]对照组（右半叶）枯斑数和化合物处理组（左半叶）枯斑数都可以参用各组重复 的平均数或各组重复的枯斑总数。每个处理都是用自己的另一半作为对照。
[0024] 经过测试:在500 mg/L的浓度下，化合物la，lb，Ic，Id，Ie，If，Ig，Ih，Im，In，Ιο，11 对TMV钝化活性达到85%以上。
[0025] 实施例3:对烟草花叶病(TMV)的治疗作用 选长势一致的5-6叶期的心叶烟，用磷酸缓冲液将TMV病毒液稀释至适宜的浓度，全叶 撒匀金刚砂，用排笔全叶接种病毒，自然晾干后用清水冲洗。待叶片干后，在左半叶用毛笔 涂施药剂，右半叶涂施对应剂量的溶剂作对照。随后在光照培养箱中保湿培养，控制温度23 ±1 〇C，光照10000 Lux，2-3 d后观察并记录产生枯斑的数目。每药剂处理设3株，每株3-4 片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。
[0026] 结果调查与分析:参照文献Foot/ 万杯幻·· 2630-2636和Zuo X. ;et al. J.Agric. Food Chem. ,2010，58(5):2755-2762)等所攝述施 方法进行化合物对烟草花叶病毒的治疗作用进行评价。当空白对照的半叶上呈现明显枯 斑，约在实验2-3 d后就可调查，分别记录每片叶的左右半叶的枯斑数，按下列计算出供试 化合物对烟草花叶病毒的抑制率，即相对效果。
[0027] Y=(C-A) / C X100% 其中:Y为化合物对对烟草花叶病毒的抑制率； C为对照组(右半叶）枯斑数，单位:个； A为化合物处理组(左半叶）枯斑数，单位:个。
[0028]对照组（右半叶）枯斑数和化合物处理组（左半叶）枯斑数都可以参用各组重复 的平均数或各组重复的枯斑总数。每个处理都是用自己的另一半作为对照。
[0029] 经测试:在500 mg/L的浓度下，化合物Ia，Ib，Ic，Id，Ie，Im，In，Io，Iq，Is，I1^tTMV 治疗活性达到54-70%。
[0030] 实施例4:抗黄瓜花叶病毒活性(保护活性） 采用文献(华南农业大学学报，1995，16: 74-79)所描述的半叶枯斑法，对所合成的 化合物进行了抗CMV生物活性测试。
[0031] 选取长势一致的苋色藜，用毛笔轻轻在左半叶涂施药剂，右半叶涂施灭菌水作对 照，24小时后接种病毒。用排笔蘸取病毒汁液(浓度为6ΧΠΓ 3 mg / mL)，在叶面(全叶)沿 其支脉方向人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶片上，左右叶片的接种力度尽量保持一致，叶 片下方用平整木板支撑。待病毒液干后，用流水冲洗掉叶片上面的金刚砂。每药剂处理设3 株，每株5-6片叶，随后将植株放在光照培养箱中保湿培养，控制温度23±1°C，光照 10000 Lux，6-7 d后观察并记录产生枯斑的数目。按上述方法每药剂进行3次重复，计算 抑制率。
[0032] 部分测试结果如下： 经过测试:在500 mg/L的浓度下，化合物la，Ic，Id，Ie，If，Im，In，Io，Ir对CMV保护活性 达到60-88%。
[0033] 实施例5:抗黄瓜花叶病毒活体治疗活性 选取长势一致的苋色藜，先用排笔蘸取病毒液(浓度为6ΧΠΓ3 mg / mL)，在叶面(全 叶)沿其支脉方向人工摩擦接种于撒有金刚砂的叶片上，左右叶片的接种力度尽量保持一 致，叶片下方用平整木板支撑。待病毒液干后，用流水冲洗掉叶片上面的金刚砂。待叶片干 后，在左半叶涂施药剂，右半叶涂施灭菌水作对照。每药剂处理设3株，每株5-6片叶，随 后将植株放在光照培养箱中保湿培养，控制温度23±1 °C，光照10000 Lux，6-7 d后观 察并记录产牛枯斑的数目。桉h沭方法毎药剂讲行3次重复，计筧抑制率。
[0034]经过测试:在500 mg/L的浓度下，化合物 Ib，Ic，Id，Ie，If，In，Io，Ip，Ir对CMV治 疗活性达到50-72 %。
[0035] 实施例6:药剂对CMV侵染的活体钝化作用 将药剂与等体积的病毒汁液混合钝化30 min，用排笔蘸取药剂与病毒的混合液，人工 摩擦接种于撒有金刚砂的叶片左半边叶片上，叶片下方用平整木板支撑。灭菌水与病毒汁 液混合接种右半叶。每药剂处理设3株，每株5-6片叶，随后将植株放在光照培养箱中保 湿培养，控制温度23±1 °C，光照10000 Lux，6-7 d后观察并记录产生枯斑的数目。按上 述方法每药剂进行3次重复，计算抑制率。
[0036] 测试结果表明：在500 mg/L的浓度下，化合物Ia，Ib，Ic，Id，Ie，If，Ig，Ih，Ip， Ir，Is，It对CMV治疗活性达到82%以上。
[0037] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未 脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等 同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
【主权项】
1. 一种5-氨基-IH-化挫[3,4-d]喀晚-4(5H)-酬类化合物在制备抗植物病毒剂中的应 用。2. 如权利要求1所述的5-氨基-1H-化挫[3,4-d]喀晚-4(5H)-酬类化合物在制备抗烟草 花叶病毒、马铃馨Y病毒、马铃馨X病毒、马铃馨S病毒、马铃馨A病毒、黄瓜花叶病毒、番茄病 毒病、辣椒病毒病、水稻病毒病等植物病毒剂中的应用。3. 如权利要求1或2所述5-氨基-1H-化挫[3,4-d]喀晚-4(5H)-酬类化合物在制备的在 抗烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒中的应用。4. 如权利要求1所述的5-氨基-1H-化挫[3,4-d]喀晚-4(5H)-酬类化合物，化合物结构 如通式I所示：式中，町选自H、Ci-C3的烷基、R2选自甲基、乙基、叔下基、苯基、取代苯基、芳杂环基;R3可 选自H，C1-C3的烷基。
【文档编号】A01P1/00GK106070263SQ201610463022
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月23日
【发明人】吴剑, 徐方舟, 薛伟, 刘登曰, 陈吉祥
【申请人】贵州大学