专利名称：生物蝶呤的生产方法
技术领域：
本发明涉及转化的细胞，其中有一种或多种参与四氢生物蝶呤生物合成的酶的基因导入，以及还涉及利用该转化地细胞生产生物蝶呤化合物的方法。
背景技术：
在本说明书中，四氢生物蝶呤(L-赤型-5，6，7，8-四氢生物蝶呤；下文称为THBP)、7，8-二氢生物蝶呤(L-赤型-7，8-二氢生物蝶呤；下文称为DHBP)或生物蝶呤(下文称为BP)或它们中的任何两种或多种的组合整体上都称为生物蝶呤化合物。
THBP是生物物质，其广泛分布于动物中，并于1963年由Kaufman揭示是大鼠肝脏中的苯丙氨酸羟化酶的辅酶。此后，又揭示出THBP通常是作用于酪氨酸羟化酶和色氨酸羟化酶的辅酶，并且发现在参与神经递质的生物合成中发挥重要作用。近年来，还发现其作为一氧化氮(NO)合成酶的辅酶起作用，并作为用于各种生物物质的生物合成酶的辅酶已受到公众的关注。人们一直认为人中THBP的缺陷导致上述氨基酸羟化酶的活性的减少，诱发异常高的苯酮尿以及异常高的苯丙尿，并将THBP用作治疗如腐蝶呤氢氯化物(sapropterinhydrochloride)的先天的代谢错误病。
人们一直认为动物中的THBP是利用如
图1所示的GTP环化脱水酶I(下文简称GCH)、6-丙酮酰基四氢蝶呤合成酶(6-pyruvoyltetrahydropterin synthase)(下文简称PTPS)和墨蝶呤还原酶(下文简称SPR)通过三步酶反应自鸟苷三磷酸生物合成而成。同时，除动物以外，已有报道THBP存在于果蝇(Weisberg，E.P.和O’Donnell，J.M.J.Biol.Chem.2611453-1458，1996)、蚕(Iino，T.，Sawada，H.，Tsusue，M.和Takikawa，S.-I.，Biochim.Biophys.Acta1297191-199，1996)、真核微生物如Euglena gracillis、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)和Pycomyces blakesleeanus(Maier，J.，Ninnemann，H.Photochamishtry和Photobiology 6143-53，1995)以及原核微生物的诺卡菌种(Son，J.K.，Rosazza J.P.J.Bacteriol.1823644-3648，2000)。同样，尽管有许多生命体其中报道了THBP的存在，但是由于进化原因，微生物与动物尤其大有区别，所以人们认为THBP整体上不是微生物中通常可得到的生物物质。
THBP是分子中具有三个不对称碳原子的化合物，因此，其是化学合成困难的化合物，关于其主要的合成方法，一直已知的是其中L-赤-生物蝶呤(BP)的合成利用鼠李糖或脱氧阿拉伯糖作为起始物质，然后进行化学不对称的还原以合成该产物。然而，这些化学合成方法有许多反应步骤，并在反应步骤过程中，存在反应产率低的过程。还有困难的是鼠李糖和脱氧阿拉伯糖作为起始物质价格昂贵，因此，依据操作、产率、成本等，据说它们不是有利的生产方法。
在这些条件下，kagamiyama等尝试了通过酶法反应合成THBP，纯化了三种参与THBP合成的酶的每一个，并利用三种酶在含有GTP和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(还原型)(下文简称NADPH)的反应器中成功地合成了THBP(日本专利
发明者薮田雅之, 古川和明, 宫本伸江, 山本克彦, 大末和广 申请人:第一三得利制药株式会社