透明质素合酶及其制备和应用方法

专利名称：透明质素合酶及其制备和应用方法
对相关申请的交叉引用根据35 U.S.C.119(e)，本申请要求2001年12月3日提交的美国专利申请号60/336,105的优先权和利益，题目为“透明质酸合酶的新动力学性质”，其全部内容在此处明确地引入作为参考。
本申请也要求2001年12月11日提交的美国专利申请号10/011,771的惯例优先权并是其美国继续申请，题目为“透明质素合酶基因及其用途”，其全部内容在此处明确地引入作为参考。
关于美国联邦政府赞助的研究或开发的声明本申请部分由美国国家健康研究所(National Institute of Health)的拨款(GM35978)支持。美国政府依照该资金而在本申请中且对本申请拥有某些权利。
背景技术：
1.发明领域本发明涉及具有编码酶活性透明质酸盐合酶(HAS)的编码区的核酸区段，并涉及该核酸区段在制备重组细胞中的应用，该重组细胞生产透明质酸盐合酶及其透明质酸产物。透明质酸盐也已知为透明质酸或透明质素。更具体地，但绝不是为了限制，在此处公开和申请专利的核酸区段与天然核酸区段相比具有至少一个突变，从而该至少一个突变导致对结果所得的酶的动力学或酶活性的改变/修饰。
2.相关技术简述链球菌感染的发生是全球主要的健康和经济问题，特别是在发展中国家。原因之一是由于链球菌(Streptococcal)细菌可进行由身体的吞噬细胞即巨噬细胞和多形核细胞(PMNs)不可探测的生长的能力。这些细胞负责识别及吞入外源微生物。细菌逃避监视的一个有效途径是通过将自身用多糖被膜进行包被，如透明质酸(HA)被膜。HA的结构在原核生物和真核生物中是相同的。
由于HA通常是非免疫原性的，所以被囊化的细菌不引起免疫反应，因此不被靶向破坏。此外，该被膜在体外给PMNs施加了抗吞噬的作用，且防止链球菌属(Streptococcus)与巨噬细胞的附着。正由于此，在A组和C组链球菌属中，HA被膜是天然和实验室感染中主要的病毒因子。A组链球菌属负责多种人类疾病，包括咽炎、脓疱疮、深组织感染、风湿热和毒性休克样综合症。C组类马链球菌(Streptococcus equisimilis)负责骨髓炎、咽炎、脑脓肿和肺炎。
就结构而言，HA是高分子量重复二糖单元的线性多糖，该二糖单元由N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和葡糖醛酸(GlcUA)组成。HA分子中重复二糖的数目可超过30,000，Mr＞107。HA是唯一由哺乳动物和细菌细胞两者合成的糖胺聚糖，该细菌细胞特别为A和C组链球菌和A型多杀性巴斯德氏杆菌(Pasteurella multocida)。这些菌株生产分泌到培养基中的HA以及HA被膜。这些细菌合成HA的机制具有广泛的医学重要性，这是因为HA被膜的生产是细菌用于逃避免疫系统监视的非常有效和聪明的途径。此外，用HA包被的有机或无机分子具有使得其能够逃脱宿主免疫系统探测和破坏的性质。
HA是由哺乳动物和细菌细胞用透明质酸盐合酶进行合成的，该酶定位于质膜上。人们相信HA在这些生物中的合成是多步骤的过程。起始阶段涉及起始前体、UDP-GlcNAc或UDP-GlcUA的结合。随后进行延伸，包括向生长的寡糖链交错添加两种糖。生长的多聚体从细胞的质膜区域伸出并伸到细胞外空间。
HA已在脊椎动物中的几乎每一种组织中得到了鉴定，且已在多种临床应用中获得了广泛的应用，最引人注目的和适当的是作为关节内基质补加物和在眼外科中。科学文献也显示从最初认为HA主要是少数结缔组织的基质和某些细菌菌株的被膜中的被动结构成分的理解转变为对于该遍在大分子动态地参与许多生物学过程的认识从在胚胎发生过程中调节细胞迁移和分化到细胞外基质组织和代谢的调节到在转移、伤口愈合和炎症的复杂过程中的重要作用。进一步地，渐渐明白的是HA是高度代谢活性的，且细胞非常关注其合成和代谢的过程。例如，组织中HA的半衰期在软骨中为1～3周，在表皮中为＜1天。HA也用于许多技术应用(如润滑化合物)、化妆品和神经药物(neutraceutical)中。
现在明白单独一个蛋白质利用两种糖底物合成HA，即HA合酶是具有双重催化性质的单一的酶。HA合酶的缩写HAS已得到广泛支持以指代该类酶。Markovitz(1959)等人成功地描述了来自化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的HAS活性的特征，并发现了酶的膜定位及其对糖核苷酸前体和Mg2+的需要。Prehm(1983)发现由B6细胞制备的延伸的HA被添加到培养基中的透明质酸酶消化，并提出HAS存在于质膜上。Philipson和Schwartz(1984)也显示小鼠少突胶质细胞瘤细胞中HAS活性与质膜标记共分离。
随着糖胺聚糖合成的进行，HAS装配了高Mr的HA，该HA同时从膜伸出到细胞外空间(或者在细菌的情况中制备细胞被膜)。该合成模式在大分子中是独特的，这是因为核酸、蛋白质和脂质是在细胞核、内质网/高尔基体、胞质或线粒体中合成的。生长的链向细胞外空间的伸出也使得能够进行不受拘束的多聚体的生长，因此实现了HA异常大的大小，而合成局限于高尔基体或高尔基体后区室中限制了形成的多聚体的总量或长度。被限制的腔中高浓度的HA也可形成高粘度的环境，该环境对于其他细胞器的功能可能是有害的。
已有几个研究试图从形成HA被膜覆盖物的链球菌菌株以及从真核细胞中溶解、鉴定及纯化HAS。尽管对链球菌和鼠少突胶质细胞瘤的酶成功地用去污剂进行了溶解并进行了研究，但纯化活性HAS以进一步研究或进行分子克隆的努力在数十年中仍然是不成功的。Prehm和Mausolf(1986)用高碘酸盐氧化的UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc以对链球菌膜中与HAS共纯化的～52kDa的蛋白质进行亲和标记。这导致一个报道宣称已克隆了C组链球菌HAS，不幸的是该报道是错误的。该研究未能证明活性合酶的表达，且可能事实上克隆了一个肽转运蛋白。Triscott和van de Rijn(1986)用毛地黄皂苷使活性形式的来自链球菌膜的HAS溶解。Van de Rijn和Drake(1992)用5-叠氮-UDP-GlcUA对42、33和27kDa的3种链球菌膜蛋白质进行了选择性放射性标记，并认为33-kDa的蛋白质是HAS。然而如在后文所示的，HAS事实上为42-kDa的蛋白质。
尽管有这些努力，但在理解HA合成的调节和机制中的进展基本上是停滞的，这是因为没有HAS mRNA或HAS蛋白质的分子探针。1993年当DeAngelis等人(1993a和1993b)报道编码蛋白质HasA的A组链球菌基因的分子克隆或特征时发生了重大的突破。该基因已知为细菌HA合成所需的操纵子的部分，尽管现在称为spHAS(化脓链球菌的HAS)的该蛋白质的功能是未知的。随后证明spHAS负责HA延伸(DeAngelis和Weigel，1994)且是第一个鉴定、克隆及成功表达的糖胺聚糖合酶。化脓链球菌的HA合成操纵子编码2个其他的蛋白质。HasB是UDP-葡萄糖脱氢酶，该酶是UDP-葡萄糖转变为HA合成的底物之一UDP-GlcUA所必需的。HasC是UDP-葡萄糖焦磷酸化酶，该酶是葡萄糖1-磷酸与UTP转变为UDP-葡萄糖所必需的。hasA和hasB基因向无被膜的链球菌菌株或粪肠球菌(Enteroccus faecalis)中的共转染赋予它们合成HA和形成被膜的能力。这提供了关于spHAS(hasA)是HA合酶的第一个有力证据。pHAS已在1998年9月3日提交的美国序列号09/146,893(现在为美国专利号6,455,304)中详细鉴定并公开，在此处将其内容整体明确地引入作为参考。
难捉摸的HA合酶基因最终通过转座子诱变方法进行了克隆，其中形成了无被膜的突变型A组菌株，该菌株的HA合酶操纵子被转座子中断。转座子的已知序列使得能够鉴定与链球菌DNA连接的区域，然后从野生型细胞中克隆。编码的spHAS与酵母几丁质合酶家族具有5-10％的一致性，与非洲爪蟾(Xenopus laevis)蛋白质DG42(在原肠胚形成过程中发育性地表达的)具有30％的一致性，DG42的功能当时是未知的，DeAngelis等人，1994。DeAngelis和Weigel(1994)在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达了活性的重组spHAS，并显示该单一的纯化基因产物当在体外与UDP-GlcUA和UDP-GlcNAc进行温育时合成高Mr的HA，从而显示HA合成所必需的两种糖基转移酶活性是由同一个蛋白质催化的，如首先于1959年提出的。利用下面的知识(i)spHAS是双重作用的单一酶和(ii)spHAS、几丁质合酶和DG42之间的序列同源区，1996年4个实验室同时对真核HAScDNA的鉴定进一步巩固了发明者的蛋白质假说，即HAS是编码不同同工酶的多基因家族。在哺乳动物中很快发现了2个基因(HAS1和HAS2)，后来发现了第3个基因HAS3。在1999年12月21日提交的美国序列号09/469,200中对第2个链球菌seHAS或类马链球菌透明质酸盐合酶进行了详细的鉴定和公开，其内容在此处明确地整体引入作为参考。seHAS蛋白质与spHAS酶具有高水平的一致性(约70％)。然而，该一致性是令人感兴趣的，这是因为seHAS基因与spHAS基因不相互杂交。
当提供两种底物时，从表达重组seHAS的大肠杆菌中制备的膜能合成HA。该结果证实Lansing等人(1993)声称已克隆了C组HAS的较早的报道是错误的。不幸的是，几个研究已应用该未进行表征的52-kDa链球菌蛋白质的抗体以研究据认为是真核HAS的该蛋白。
Itano和Kimata(1996a)用不能合成HA的突变小鼠乳腺癌细胞系中的表达克隆来克隆第一个推定的哺乳动物HAS cDNA(mmHAS1)。HA合成有缺陷的亚克隆分成3个单独的类别，这些类别在体细胞融合实验中对于HA合成是互补的，这提示至少3个蛋白质是必需的。这些类别的2个维持了一些HA合成活性，而1个不显示该活性。将后一个细胞系用于用从亲代细胞中制备的cDNA来进行瞬时转染实验以鉴定恢复HA合成活性的单一蛋白质。序列分析揭示了～65kDa蛋白质的推定的一级结构，该蛋白质具有与spHAS相似的膜拓扑学。mmHAS1与spHAS具有30％的一致性，与DG42具有55％的一致性。在该报道出现的同月，3个其他的研究组提交了论文，该论文描述编码最初认为是相同的小鼠和人的酶的cDNA。然而，通过特别的环境，4个实验室的每一个在两个物种中都发现了单独的HAS同工酶。
利用与Itano和Kimata的相似的功能克隆方法，Shyian等人(1996)鉴定了HAS1的人类同系物。将肠系膜淋巴结cDNA文库用于转染鼠粘膜T淋巴细胞，然后筛选其在花结测定(rosette assay)中粘着的能力。一个转染子的粘着被公知的细胞表面HA-结合蛋白质即CD44的抗血清抑制，并被透明质酸酶的预处理直接取消。因而，该转染子的花结(rosetting)需要HA的合成。对负责的cDNA的克隆和测序鉴定了hsHAS1。Itano和Kimata(1996b)也报道从胎儿脑文库中分离的人类HAS1 cDNA。然而，由这2个组报道的hsHAS1 cDNA在长度上有差异；它们分别编码578或543个氨基酸的蛋白质。仅在较长的形式中证明了HAS活性。
基于spHAS作为真正的HA合酶的分子鉴定和DG42、spHAS和NodC(根瘤菌属(Rhizobium)中的β-GlcNAc转移酶结瘤因子)中几乎一致的区域，Spicer等人(1996)用简并RT-PCR方法克隆编码称为mmHAS2的第二个不同酶的小鼠胚胎cDNA。mmHAS2 cDNA向COS细胞中的转染指导由颗粒排除测定探测的HA细胞外被的从头产生，因而提供了HAS2蛋白质可合成HA的有力证据。利用相似的方法，Watanabe和Yamaguchi(1996)筛选了人胎儿脑cDNA文库以鉴定hsHAS2。Fulop等人独立地用相似的策略鉴定RNA中的mmHAS2，该RNA从活性地合成HA的卵巢丘细胞分离，其中HA合成是排卵前滤泡中正常卵丘延伸的关键过程。紧接在起始排卵周期之后、在HA合成开始之前和在当HA合成刚刚开始(3h)或已经明显(4h)时从小鼠中分离了丘细胞-卵母细胞复合物。RT-PCR显示HAS2 mRNA最初不存在，但3-4h之后高水平表达，提示HAS2的转录调节该过程中的HA合成。两种hsHAS2长度均为552个氨基酸，并为98％一致的。mmHAS1是583个氨基酸长的，且与578个氨基酸长的hsHAS1具有95％的一致性。
最近Spicer等人(1998)用PCR方法在哺乳动物中鉴定了第三个HAS基因。mmHAS3蛋白质是554个氨基酸长的，且分别与mmHAS1、mmHAS2、DG42和spHAS具有71、56和28％的一致性。Spicer等人也将3个人和小鼠基因定位于3个不同的染色体上(HAS1定位于hsChr 19/mmChr 17；HAS2定位于hsChr 8/mmChr 15；HAS3定位于hsChr 16/mmChr 8)。3个HAS基因在不同染色体上的定位和脊椎动物种类中的HA的普通出现提示该基因家族是古老的，且同工酶是在脊椎动物进化早期通过重复而出现的。细菌和真核HAS之间的高一致性(～30％)也提示它们两者之间具有共同的祖先基因。可能在真核基因变得更大更复杂之前，原始的细菌从早期脊椎动物祖先中夺取HAS基因。或者，细菌获得较大的脊椎动物HAS基因并删除了对于酶活性非关键的调节序列。
Dawid及其同事对非洲爪蟾DG42的发现在这些最近的发展中起重要的作用，即使不知道该蛋白质是HA合酶。但是DG42和spHAS有30％的一致性对于设计寡核苷酸是关键的，该寡核苷酸使得能够鉴定哺乳动物HAS2。有讽刺意味的是，DG2是真正的HA合酶的确定证据仅在发现哺乳动物同工酶之后才报道，当时DeAngelis和Achyuthan(1996)在酵母(不能合成HA的生物)中表达了重组蛋白质，并显示当给分离的膜提供两种底物时它们可合成HA。Meyer和Kreil(1996)也显示来自用DG42的cDNA转染的细胞的裂解产物合成增高水平的HA。既然其功能已知了，因此DG42可命名为xlHAS。
所有HAS蛋白质共享共同的预测的结构特征，该特征包括大的中央结构域和蛋白质氨基和羧基末端的2-3个跨膜或膜结合结构域。构成高达～88％的预测的细胞内HAS蛋白质序列的中央结构域可能含有酶的催化区。该预测的中央结构域在spHAS中为264个氨基酸长(总蛋白质的63％)，在真核HAS成员中为307-328个氨基酸长(总蛋白质的54-56％)。已对spHAS的膜结构域的准确数目和方向以及细胞外及细胞内环的拓扑组织已对spHAS进行了实验确定，并将在此处结合

图14进行详细描述。
spHAS是已进行纯化和部分进行表征的HAS家族成员。用spHAS/碱性磷酸酶融合蛋白质的最初研究显示spHAS的N末端、C末端和大的中央结构域事实上位于细胞中。spHAS具有6个半胱氨酸，而HAS1、HAS2和HAS3分别具有13、14和14个Cys残基。spHAS中6个Cys残基中的2个是保守的且在HAS1和HAS2中是相同的。在所有HAS家族成员的相同位置(spHAS中的Cys-225)仅发现了一个保守的Cys残基。这可能是一个基本的Cys，由巯基毒药对它的修饰部分地抑制酶活性。对于HAS家族的任何成员尚未阐明二硫键的可能存在或对关键Cys残基的鉴定，该Cys残基是下文提及的多重HAS功能的任何一种所需要的。
除所提出的在质膜合成的独特模式之外，HAS酶家族在HA的全部多聚化所必需的大量功能方面是高度不寻常的。在HAS酶中存在至少6种独立的活性2个不同的糖核苷酸前体(UDP-GlcNAc和UDP-GlcUA)的每一个的结合位点，2种不同的糖基转移酶活性，将生长的HA多聚体锚定到酶上的一个或多个结合位点(可能涉及B-X7-B基元)，以及以一次一个或两个糖的方式移动生长的多聚体的棘齿样转运机制。这后一种活性可能与多聚体通过膜的逐步前进一致。所有这些功能以及可能尚未知道的其他功能存在于大小在417(seHAS)到588(xlHAS)个氨基酸的相对小的蛋白质中。
尽管所有可用的证据支持仅有spHAS蛋白质是细菌或体外HA生物合成所必需的结论，但可能的是较大的真核HAS家族成员是多成分复合物的部分。由于真核HAS蛋白质比spHAS大～40％，它们额外的蛋白质结构域可参与更精巧的功能，如细胞内运输和定位、酶活性调节及介导与其他细胞成分的相互作用。
关于有多个编码不同合酶的脊椎动物HAS基因存在的意外发现有力地支持形成这样的一致意见，即HA是细胞行为的重要调节剂，而不简单地是组织中的结构成分。因而，在少于6个月中，该领域从一个已知的克隆的HAS(spHAS)发展为多基因家族的识别，这保证在我们对HA合成和生物学的理解的快速、大量和激动人心的未来进展。
例如，在此处公开的是来自类马链球菌(分别为SEQ ID NO1和2)、化脓链球菌(分别为SEQ ID NO3和4)、乳房链球菌(Streptococcusuberis)(分别为SEQ ID NO5和6)、多杀性巴斯德氏杆菌(分别为SEQ ID NO7和8)、非洲爪蟾(分别为SEQ ID NO9和10)、缘草履虫(Paramecium bursaria)小球藻(Chlorella)病毒(PBCV-1；分别为SEQ ID NO11和12)和硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobus solfataricus)(分别为SEQ ID NO13和14)的HAS基因的核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列。这些系统中透明质素合酶的存在和来自这些不同的系统的透明质素合酶的纯化和应用显示了在许多不同的真核和病毒来源中纯化和分离编码酶活性透明质素合酶的核酸序列的能力，事实上，一般是从微生物来源的。
C组类马链球菌菌株D181合成并分泌透明质酸(HA)。研究人员用该菌株和A组化脓链球菌菌株如S43和A111研究HA的生物合成，并在其二价阳离子需求、前体(UDP-GlcNAc和UDP-GlcUA)利用和最适pH方面对HA-合成活性进行了表征。
传统上，HA已通过从公鸡鸡冠或来自链球菌培养物的细胞外培养基中分离而商业地制备。为制备HA已发展的一种方法是通过应用生产HA的链球菌细菌的培养物。在此处整体引入作为参考的美国专利号4,517,295描述了这样一种程序，其中生产HA的链球菌是在富含CO2的生长培养基中于厌氧条件下进行发酵的。在这些条件下，HA得到生产并可从液体培养基中提取。通常感觉HA从公鸡鸡冠中的分离是费力且困难的，这是因为人们以较不纯的HA开始。从公鸡鸡冠分离的优点是生产的HA具有较高的分子量。然而，通过细菌发酵制备HA是较容易的，这是因为HA以较高的纯度开始。然而，通常以这种方式生产的HA的分子量比从公鸡鸡冠得到的小。此外，通过链球菌发酵制备的HA时常引起与从公鸡鸡冠中获得的HA一样的免疫反应。因此，使得能够通过细菌发酵生产高分子量HA的技术对于现有的程序是明显的改进。
如在前文所述的，高分子量的HA具有多种有用的应用——从美容到眼外科。由于其高粘度及其高生物相容性的潜力，HA在眼外科中作为玻璃体液的替代具有特别的应用。由于其高粘度及其在长的时间段中保持湿润能力的物理化学性质，HA也已用于通过HA的关节内注射治疗赛马的创伤性关节炎、用于作为剃须膏的润滑剂及用于多种化妆品产品。事实上，1997年8月，美国食品和药品局(Food andDrug Agency)批准在几种关节炎的治疗中使用高分子量的HA，该治疗是通过将这种高分子量的HA直接注射入患病的关节中。通常，所用的HA的分子量越高则越好。这是因为HA溶液的粘度随溶液中单独的HA多聚体分子的平均分子量而增加。不幸的是，非常高分子量的HA如高达107的已难以通过现有可用的分离程序获得。然而，此处所公开的重组生产方法使得能够生产具有分子量高达107或更大的HA。
为了解决这些或其他的困难，需要可用于生产HA的新方法和构建体，该HA具有一种或多种改进的性质，如更大的纯度或制备的方便性或所需的产物大小。特别地，有发展方法学的需要，该方法学用于生产更大量的比现有商业可用的具有相对更高分子量和相对更纯的HA。仍然有另一种需要以能够发展生产具有修饰的大小分布的HA(HAΔsize)以及具有修饰的结构的HA(HAΔmod)的方法学。
尽管链球菌HA合酶相对较小，为＜49kDa，但它们介导至少6种独立的功能与2种不同糖核苷酸前体结合的能力，催化2种不同的糖基转移酶反应，与HA受体多聚体结合和使生长的HA链通过酶和细胞膜转位。
来自脊椎动物或原核生物的所有重组HAS均已显示可在体外合成高分子量的HA。I型HAS蛋白质可能在其N-末端区域具有基本相同的拓扑学组织，这与spHAS的高度同源，该spHAS是其膜拓扑学已进行实验确定的唯一HAS。
在spHAS中有6个Cys残基，其中4个在seHAS和suHAS中是完全保守的(图1)；后面这2种酶均仅具有4个Cys残基(Kumari和Weigel，1997；Ward等人，2001)。这4个Cys残基一般在3个脊椎动物HAS同工酶中保守(Weigel等人，1997和图1)。然而，迄今为止尚未确定这些保守的Cys残基的一个或多个是否参与酶活性或二硫键形成。
本发明解决了本领域中的一个或多个缺点。利用重组DNA技术，公开并申请专利保护产生具有至少一个突变(与天然的酶相比)的酶活性HAS的方法，以及产生HAS的重组细胞的制备及其透明质酸产物。
发明概要本发明涉及应用重组DNA技术以在透明质酸(HA)制备领域中解决一种或多种问题。这些问题是通过分离和应用具有编码酶活性透明质酸盐合酶(HAS)基因的编码区的核酸区段解决的，该基因为负责HA链生物合成的基因，如来自A或C组链球菌、多杀性巴斯德氏杆菌、硫磺矿硫化叶菌、非洲爪蟾和Ectocarpus siliculosus病毒的HAS基因。在此处公开的HAS基因是从适当的微生物来源的DNA克隆的，并在其中通过基因工程进行一个或多个突变，以提供具有新的或修饰的酶活性的HAS酶。
术语“透明质酸合酶”、“透明质酸盐合酶”、“透明质素合酶”和“HA合酶”在此处是可互换使用的，以描述使糖胺聚糖多糖链多聚化的酶，该多糖链由β1，3和β1，4连接的交替的葡糖醛酸和N-乙酰葡糖胺糖组成。例如术语“seHAS”描述源自类马链球菌的HAS酶，其中编码seHAS酶的基因的表达通过提供逃避内吞作用和免疫监视的方式而与链球菌的A组和C组菌株的毒性相关。
发明概述本发明涉及一种功能活性的透明质素合酶，该合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比具有至少一个修饰的氨基酸残基。如在此处所用的术语“修饰的氨基酸残基”将理解为包括突变的氨基酸残基以及对氨基酸残基的其他修饰，包括，但不局限于对氨基酸残基的翻译后修饰，如磷酸化、糖基化、甲基化、异戊二烯化等。当通过突变修饰氨基酸残基时，该突变可由随机诱变或靶向的或“定点”诱变技术产生。例如，预期可将突变靶向于透明质素合酶的特定氨基酸残基以确定酶的特定性质是否受影响。具体而言，预期可将突变导靶于透明质素合酶的一个或多个半胱氨酸以确定其是否参与透明质素合酶的二硫键形成或酶活性。可选择地，不考虑突变的氨基酸，人们可使编码透明质素合酶的基因随机突变，然后筛选或选择与相应的野生型HAS相比产生改变量的HA(即更大或更小量的HA)的透明质素合酶突变体，或者与相应的野生型HAS相比产生改变大小的HA(即更大或更小的HA)的透明质素合酶突变体。
在本发明的一个实施方案中，相应的功能活性透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS。相应的功能活性透明质素合酶可具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
在本发明另一个实施方案中，至少一个修饰的目标氨基酸残基是半胱氨酸，且其后修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。在不同的实施方案中，在其中具有至少一个修饰的目标氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有包含SEQ ID No15-92中至少一个的氨基酸序列。
此外，本发明涉及一种功能活性的透明质素合酶，该合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性。如在此处所定义的术语“改变的酶活性”将理解为指增加的或降低的酶活性，或比天然的酶更快或更慢的酶活性。此外，如在此处所用的术语“改变的酶活性”也将理解为包括产生具有改变大小的HA的酶，即，一种具有比天然的酶产生的HA多聚体的平均分子量更大或更小的平均分子量的HA多聚体。
在本发明的一个不同实施方案中，具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS，且与相应功能活性的透明质素合酶相比其具有至少一个修饰的目标氨基酸残基。进一步地，在本发明的该实施方案中，至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。该至少一个修饰的目标氨基酸残基修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。进一步地，在其中具有至少一个修饰的目标氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
此外，本发明涉及一种宿主细胞，该宿主细胞具有在其中整合的与相应功能活性的天然透明质素合酶相比酶活性改变的功能活性透明质素合酶，从而该宿主细胞能够产生透明质素。在本发明的一个独立实施方案中，具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS。进一步地，该功能活性透明质素合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的目标氨基酸。该至少一个修饰的目标氨基酸残基是半胱氨酸并随后修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
此外，本发明涉及具有包含SEQ ID NO15-92的氨基酸序列的功能活性透明质素合酶。同样地，本发明涉及具有基本如在SEQ IDNO15-92中提出的氨基酸序列的功能活性透明质素合酶。
此外，本发明涉及一种提供功能活性透明质素合酶的方法，该合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性。该方法包括提供一种透明质素合酶，并在透明质素合酶的至少一个目标氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶。在本发明的一个独立实施方案中，该透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS，且至少一个修饰的目标氨基酸残基是半胱氨酸。该目标氨基酸残基随后可修饰为丙氨酸或丝氨酸或任何其他所需的氨基酸。该具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
此外，本发明涉及生产透明质酸的方法。该方法包括提供一种具有至少一个表达构建体的宿主细胞，该构建体包含在其中插入的编码功能活性透明质素合酶的透明质素合酶基因，从而该宿主细胞能够产生透明质素，其中该功能活性的透明质素合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性。然后将该宿主细胞于适合于透明质酸生产的条件下进行培养。该方法可进一步包括从宿主细胞中分离透明质酸。功能活性透明质素合酶的改变的酶活性可为增加的或降低的酶活性，或者该透明质素合酶可产生如下透明质酸，该透明质酸具有比由相应功能活性的天然透明质素合酶产生的透明质酸的平均分子量更大或更小的平均分子量。
相应的功能活性的天然透明质素合酶可具有基本如在SEQ IDNO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列，而具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶可具有基本如在SEQ IDNO15-92中至少一个提出的氨基酸序列。具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比可以在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基，且该至少一个修饰的氨基酸残基可为将修饰为丝氨酸或丙氨酸的半胱氨酸。
在生产透明质酸的方法的另一个实施方案中，表达构建体可进一步包括至少一个编码合成透明质酸糖前体的酶的基因。任选地，编码合成透明质酸糖前体的酶的该基因可存在于独立的表达构建体上或整合入染色体中。用于合成透明质酸糖前体的酶选自能够产生UDP-GlcNAc或UDP-GlcUA的焦磷酸酶、转移酶、变位酶、脱氢酶或差向异构酶。
在生产透明质酸的方法的另一个实施方案中，在相同或不同的表达构建体中，或者以整合入宿主细胞的染色体中的方式，可提供至少一个透明质酸糖前体生物合成途径基因或至少一个编码用于透明质酸糖前体合成的酶的基因。在本发明方法的进一步可选择的实施方案中，透明质酸糖前体可通过宿主细胞的内源基因而表达于宿主细胞中。
在生产透明质酸的方法的另一个实施方案中，给宿主细胞施用或提供用于透明质酸糖前体生物合成途径的养分或供应透明质酸糖前体生物合成途径的养分。
附图简述图1.I型HAS蛋白质家族中seHAS中的4个半胱氨酸的大致保守性。HAS蛋白质序列(及其访问号)显示为类马链球菌(seHAS，AAB87874，SEQ ID NO2)、粪链球菌(suHAS，CAB46918，SEQID NO6)、化脓链球菌(spHAS，AAA17981，SEQ ID NO4)、鸡(ggHAS2，AF106940_1)、小鼠(mmHAS1，BAA11654；mmHAS2，AAC53309；mmHAS3，AAC53128)、人(hsHAS1，NP_001514；hsHAS2，NP_005319；hsHAS3，AF232772_1)、兔(ocHAS2，BAB63264；ocHAS3，BAB63265)、牛(btHAS2，CAA06239)、大鼠(rnHAS2，NP_037285)、小球藻病毒(cvHAS2，AF113757_1)和蛙(xlHAS1，AF106940)。应用DNAsis多重比对软件(v4.0)对序列进行比对。包括seHAS中在所有3个链球菌酶中均保守的4个的Cys残基为黑体。条状物突出了更大的HAS家族中这4个保守的Cys残基的序列区。在3个HAS中和在一些其他家族成员中相同的残基以深灰色来突出。seHAS中在所有其他HAS家族成员中保守的残基以浅灰色来突出。在所有β-糖基转移酶的活性位点中保守的残基以点来显示。
图2.NEM浓度和温育时间对seHAS和spHAS活性的影响。实验组A将含有重组seHAS或spHAS的大肠杆菌膜于4℃单独与磷酸缓冲盐水(PBS)(N-乙基马来酰亚胺(NEM)负对照)或含有不同浓度NEM的PBS温育1小时。通过添加二硫赤藓糖醇(DTE)至终浓度1-6mM而粹灭未反应的NEM，并如在下文所述的测定样品的HAS活性。实验组B温育时间对seHAS和spHAS活性的影响通过将膜与5mM NEM于4℃温育所示的时间而进行测定。将等份试样移入到含有5mM DTE的测定缓冲液中，并测定HAS活性。对照的未处理的膜中HAS活性在4℃在1小时中是稳定的。将HAS活性的抑制表示为相对于对照的百分比。
图3.NEM或亚砷酸钠处理对野生型seHAS利用UDP-GlcUA和UDP-GlcNAc的影响。将含有seHAS蛋白质的大肠杆菌膜于4℃在含有5mM NEM或10mM亚砷酸钠(SodArs)的PBS中温育1小时，并将对照膜单独在PBS中温育。从在各种浓度的UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc时seHAS的活性计算了米-曼氏常数(Km)。
图4.SeHAS的Cys到Ala或Cys到Ser的单个Cys-突变体的相对酶活性。在时间和蛋白质浓度的线性条件下测定了来自大肠杆菌(SURE)细胞的膜的HAS活性，该细胞表达野生型seHAS或所示的seHAS的单Cys-突变体，并如下文所述确定了每一种膜制剂中表达的HAS蛋白质的量。归一化的seHAS比活性计算为每小时每pmol HAS所整合的UDP-GlcUA的nmol量。seHAS突变体的比活性以相对于野生型活性(100％)的百分比给出。
图5.seHAS的Cys到Ala的多重Cys-突变体的相对酶活性。如在图4中描述的，对表达野生型seHAS的、所示的seHAS的多重Cys突变体或seHASCys-null的膜进行了测定和归一化。
图6.底物保护seHAS的三重Cys-突变体免受NEM的失活。无添加物(对照；100％的值)或单独具有5mM NEM且在UDP、UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc存在时，将含所示的seHAS三重Cys-突变体的大肠杆菌膜(每一个均具有单个剩余的Cys残基)于4℃温育10分钟。粹灭未反应的Nem并确定HAS活性。对仅含有Cys367的突变体未显示结果，这是因为该突变体的NEM失活为～10％，且所有值基本相同。
图7.由野生型seHAS和seHAS的Cys-突变体合成的HA的相对大小。将含有野生型或seHAS的19个Cys-突变体的大肠杆菌膜与UDP-[14C]GlcUA和下文所述的其他成分进行温育以测定HAS活性。然后回收14C-标记的HA产物，并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析，及如下文所述进行放射自显影。应用的分子量标记是具有限定长度(kb)的所示的DNA片段。7kb的DNA片段相应于分子量约为106的HA(32)。seHAS突变体显示如下。实验组A泳道1，C226A；泳道2，C262A；泳道3，C281A；泳道4，C367A；泳道5，野生型；泳道6，C226S；泳道7，C262S；泳道8，C281S；泳道9，C367S。实验组B泳道1，C(226，262)A；泳道2，C(226，281)A；泳道3，C(226，367)A；泳道4，C(262，281)A；泳道5，C(262，367)A；泳道6，C(281，367)A；泳道7，野生型；泳道8，(Δ3C)C262；泳道9，(Δ3C)C281；泳道10，(Δ3C)C367；泳道11，seHASCys-null.泳道12，(Δ3C)C226。
图8.14C-NEM与seHAS的Cys到Ala的双重突变体的反应性。在两个独立的实验中将含有野生型或seHAS的双重Cys-突变体的大肠杆菌膜与2.5mM14C-NEM(8×106dpm)于4℃温育10分钟。通过添加40mM DTE并于4℃温育5分钟使过量的14C-NEM粹灭。添加三氯乙酸至终浓度为10％，并将样品于4℃温育过夜。通过离心3次用5％的TCA将膜沉淀洗涤3次，悬浮于20μl SDS-聚丙烯酰胺(Laemmli)样品缓冲液(33)中，并用氢氧化钠中和。将样品于95℃加热3分钟，并进行SDS-PAGE。如下文所述对凝胶进行加工和分析。
图9.由巯基试剂共价修饰的seHAS-His6衍生物的MALDI-TOF质谱分析。将野生型seHAS-His6(实验组A)或seHAS-His6Cys-null(实验组B)与生物素-PEO-马来酰亚胺(每一个实验组中的上部踪迹)或不与生物素-PEO-马来酰亚胺(每一个实验组中的下部踪迹)进行温育，然后如下文所述将洗脱的蛋白质制备以用于质量分析。每个野生型酶分子中含有2、3或4个生物素-PEO-马来酰亚胺基团的共价加合物的预测质荷比(在括号中的)和观察的面心(centroid)质荷比在峰上显示。未修饰的seHASCys-null-His6(具有替代4个Cys残基的4个Ala残基)的(MH)+离子的预测m/z比为48,473.1。
图10.spHAS的Cys-突变体利用UDP-GlcUA的动力学分析。如下文所述对从表达所示的spHAS突变体的细胞制备的膜进行测定以估计UDP-GlcUA的米-曼氏常数野生型(□)、C(124、366、402)A(_)、C(124、261、280、366、402)A(▲)和Cys-null突变体(○)。
图11.spHAS的Cys-突变体利用UDP-GlcNAc的希尔(Hill)氏分析。在如在图10中进行的对野生型和几个突变体spHAS蛋白质的Km测定中获得数据的希尔图证明UDP-GlcNAc利用的协同性质不受Cys残基改变的影响。spHAS变体显示如下野生型(□)、C(124、366、402)A(_)、C(124、261、280、366、402)A(▲)和Cys-null突变体(○)。
图12.NEM对野生型和spHAS的Cys-突变体的抑制。在室温用20mM NEM(灰色条状物)或不用20mM NEM(黑色条状物)预先处理90分钟之后，估计了膜中所示的spHAS酶的活性。野生型和许多具有多个Cys残基突变的spHAS的Cys-突变体仍然对NEM抑制是敏感的。仅在Cys225含有1个Cys残基的突变体和Cys-null突变体对NEM抑制不敏感。
图13.由巯基试剂共价修饰的spHAS-His6衍生物的MALDI-TOF质谱分析。使野生型spHAS-His6(实验组A)或spHAS-His6的Cys-null突变体(实验组B)与Ni+2-NTA树脂结合，洗涤，并于4℃与10mg/ml生物素-PEO-马来酰亚胺(每一个实验组中的上部踪迹)或不与10mg/ml生物素-PEO-马来酰亚胺(每一个实验组中的下部踪迹)温育2小时。将柱子进行洗涤，然后洗脱蛋白质以用于如下文所述的质量分析。面心质荷比在观察的峰上显示，而每个野生型酶分子中含有2、3、4、5或6个生物素-PEO-马来酰亚胺基团的共价加合物的预测质荷比在括号中显示。未修饰的spHASCys-null-His6(具有替代6个Cys残基的6个Ala残基)的(MH)+离子的预测m/z比为48,484.4。
图14.seHAS、spHAS和suHAS序列的比对(图14A)，以及spHAS和几乎所有I型HAS的拓扑学组织(图14B)。膜结构域(MD)从N-末端开始编号为1-6。
图15.K48和E327的seHAS突变体的活性。实验组A序列比对显示seHAS的K48位于MD2中(应用图14中的命名法)。应注意到seHAS和spHAS分别含有417和419个氨基酸，且其编号不相同。spHAS中的类似位置也是Lys，且在真核生物HAS中，这是保守的极性残基Gln，该残基可参与一个或多个氢键。在I型HAS家族中MD4含有绝对保守的Gln残基，该残基在seHAS中是E327。K48或E327向带相反电荷的残基的改变导致HAS活性的基本丧失(图15B)。如此处所述将活性对HAS表达进行归一化。HAS活性在“双交换(double-switch)”突变体中基本得到补救，其中K48E和E327K突变在其各自位置交换了两个带电荷的残基。
图16.由seHAS的K48和E327突变体制备的HA的大小分布与野生型的不同。支持图16的数据详细描述于下文中。
图17.可改变由seHAS的突变体造成的HA大小分布。如由Tlapak-Simmons等人(1999)描述的，将来自野生型seHAS(WT)和seHAS(E327K/K48E)双交换(DS)突变体的膜与1mMUDP-GlcNAc和UDP-GlcUA于30℃温育1小时。通过在冰上冷却使反应结束，于4℃以20,000×g离心20分钟，并向上清液中添加EDTA至终浓度为40mM。在GPC-MALLS分析之前，将样品于100℃加热1分钟。在购自TOSO BIOSEP(Montgomeryville，PA)的TSK-GELG4000PWXL上然后在TSK-GEL G6000PWXL柱(7.8×30cm)上进行GPC分级分离。层析缓冲液为50mM pH7.0的Na2HPO4，150mMNaCl，且流速为0.5ml/分钟。应用具有Optilab DSP折光计的DAWNDSP激光光度计(WYATT Technology，Santa Barbara，CA)进行MALLS。
发明详述在详细解释本发明的至少一个实施方案之前，应理解的是本发明在其应用中不限于在下面的描述中提出的或在附图中阐明的成分的构建和组织的细节。本发明能够用于其他实施方案或能够以各种途径实践或实现。同样地，应理解的是在此处应用的措词和术语是为了描述的目的，而不应该认为是限制性的。
如在此处所用的，术语“核酸区段”和“DNA区段”是互换使用的，且指已分离的不含特定物种的总基因组DNA的DNA分子。因此，如在此处所使用的“纯化的”DNA或核酸区段指含有透明质酸盐合酶(“HAS”)编码序列的DNA区段，然而该编码序列是从源细胞的无关基因组DNA分离的或是纯化的不含后者的。包括于术语“DNA区段”中的是DNA区段和这种区段的较小片段以及重组载体，该载体包括如质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。
相似地，包含分离的或纯化的HAS基因的DNA区段指包括HAS编码序列的DNA区段，该区段基本与其他天然存在的基因或蛋白质编码序列中分离。在这方面，为简单起见将术语“基因”用于指功能蛋白质、多肽或肽编码单位。如本领域的技术人员将理解的，该功能术语包括基因组序列、cDNA序列或其组合。“基本与其他编码序列分离的”指目标基因(在本情况下为HAS)，形成了DNA区段编码区的重要部分，且该DNA区段不含有大的天然存在的编码DNA部分，如大的染色体片段或其他功能基因或DNA编码区。当然，这指的是最初分离的DNA区段，但不排除后面加入的或由人们在区段中有意留下的基因或编码区。
由于某些与原核来源的应用相关的优点，人们很可能认识到从原核生物分离HAS基因的最大优点。具体而言，人们可选择利用I类或II类HAS，如来自类马链球菌或化脓链球菌的I类HAS或来自多杀性巴斯德氏杆菌的II类HAS。
链球菌基于不同的细胞壁糖类抗原而在分类学上细分为兰斯非尔德类群。有18个不同的类群，但最普通的病原体是A、B、C和D。以历史的眼光看，最普通的病原体也经常有特定的物种名字，但统一的兰斯非尔德检验方法被认为是确定类型的明确方法并因而是有用的分类方案。可用作HAS基因来源的链球菌物种包括A组链球菌，如化脓链球菌和溶血链球菌(S.haemolyticus)，以及C组链球菌，如马链球菌(S.equi)、类马链球菌、兽瘟链球菌(S.zooepidemicus)、乳房链球菌(S.uberis)和停乳链球菌(S.dysgalactiae)。
从原核生物中分离HAS基因的一个这样的优点是真核生物的酶一般可能需要重要的翻译后修饰，该修饰仅可在真核宿主中实现。这将倾向于限制获得的任何真核HA合酶基因的应用性。此外，本领域的技术人员很可能认识到在应用原核生物的酶基因时，在时间和基因操作的容易性方面的额外的优点。这些额外的优点包括(a)原核基因由于相对小的基因组大小而较容易分离，且因此在筛选相应的基因组文库时减少工作量，和(b)操作的容易性，这是因为由于不含有内含子，原核基因的编码区总大小是显著较小的。此外，如果HAS基因的产物(即酶)需要翻译后修饰，那么这将最好在该基因来自的相似的原核细胞环境(宿主)中实现。
优选地，根据本发明的DNA序列将进一步包括基因控制区，该控制区使得该序列能够在选择的重组宿主中表达。当然，应用的控制区的特性一般依赖于所要的特定用途(如克隆宿主)而有变化。
在特定的实施方案中，本发明涉及分离的DNA区段和整合了编码HAS基因的DNA序列的重组载体，该基因在其氨基酸序列中包括根据SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14-92中至少一个的氨基酸序列。此外，在其他特定的实施方案中，本发明涉及分离的DNA区段和整合了编码基因的DNA序列的重组载体，该基因在其氨基酸序列中包括HAS基因或DNA的氨基酸序列，且具体而言为相应于类马链球菌HAS、化脓链球菌HAS、乳房链球菌HAS、多杀性巴斯德氏杆菌HAS、非洲爪蟾HAS和硫磺矿硫化叶菌HAS的HAS基因或cDNA。例如，当DNA区段或载体编码全长的HAS蛋白质时，或想要用于表达HAS蛋白质时，优选的序列是那些基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14-92的至少一个中提出的。
具有HA合酶活性的核酸区段可通过在此处描述的方法分离。术语“基本如在SEQ ID NOX中提出的序列”或“如在SEQ ID NOX中提出的序列”指基本相应于SEQ ID NOX的部分的序列并且其中只有很少几个氨基酸不与SEQ ID NOX的氨基酸序列相同或不是其生物学功能等价物。术语“生物学功能等价物”是本领域中众所周知的，并进一步在此处详细定义为具有基本如在SEQ ID NOX中提出的序列或包含SEQ ID NOX的序列的基因，并且其与真核生物或原核生物生产HA或透明质酸被膜的能力相关。
例如，seHAS和spHAS编码序列为约70％相同的且富含碱基腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T)。SeHAS的碱基含量为A-26.71％、C-19.13％、G-20.81％和T-33.33％(A/T＝60％)，而spHAS为A-31.34％、C-16.42％、G-16.34％和T-35.8％(A/T＝67％)。本领域的技术人员惊讶的是seHAS编码序列不与spHAS基因杂交，反之亦然，尽管它们是70％相同的。该意想不到的不能相互杂交可归因于在可读框中错配碱基的短的中断。SeHAS和spHAS编码序列共有的相同核苷酸的最长一段仅20个核苷酸。此外，十分富含A-T的序列将形成比富含G-C的序列不稳定的杂交复合物。另一个可能的解释是在两个序列中均有几个As或Ts区段，该区段可以以错误排列和不稳定的方式杂交。这将使得seHAS和spHAS基因序列相互错位，因而降低了有效杂交的概率。
由于70％相同的两个编码蛋白质的基因不能够相互杂交的独特现象，有益的是依照其功能考虑申请专利的核酸区段；即编码酶活性透明质酸盐合酶的核酸区段。本领域的技术人员之一可理解编码酶活性透明质酸盐合酶的核酸区段可含有对在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14-92中提出的序列的保守的或半保守的替代，且仍然在本发明的范围之内。
特别地，本领域充满从业者对核酸区段做结构改变(即编码保守的或半保守的氨基酸替代)并仍然保持其酶或功能活性的例子。参见例子(1)Risler等人“结构相关蛋白质中的氨基酸替代。模式识别方法。(Amino Acid Substitutions in Structurally Related Proteins.APattern Recognition Approach.)”J.Mol.Biol.2041019-1029(1988)；(2)Niefind等人“蛋白质模型的氨基酸相似系数和源自主链折叠Anoles的序列比对(Amino Acid Similarity Coefficients for ProteinModeling and Sequence Alignment DeriVed from Main-Chain FoldingAnoles.)”J.Mol.Biol.219481-497(1991)[相似性参数使得能够设计氨基酸替代]；和(3)Overington等人“环境特异性氨基酸替代表蛋白质折叠的三级模板和预测(Environment-Specific Amino AcidSubstitution TablesTertiary Templates and Prediction of ProteinFolds，)”Protein Science 1216-226(1992)[“观察到的替代作为局部环境的函数的分析显示有不同的模式…”可做相容的改变。]，每一个的内容都明确地在此处整体引入作为参考。
这些参考文献和无数其他的显示在给出核酸序列后，本领域的技术人员可对该核酸序列进行替代和改变而不改变其功能性。同样地，替代的核酸区段可与其未改变的亲代酶高度相同，且保持其未改变的亲代的酶活性，并仍然不能与其进行杂交。
本发明公开了编码酶活性透明质酸盐合酶的核酸区段，如seHAS、spHAS、suHAS、xlHAS和pmHAS。尽管seHAS与spHAS具有70％相同且均编码酶活性透明质酸盐合酶，但它们不相互杂交。因而，本领域的技术人员可理解可对在SEQ ID NO1、3、5、7、9、11和13中列出的HAS核酸区段进行替代而不背离本发明的范围和权利要求。标准化的和可接受的功能等价氨基酸替代显示于表I中。
表I
本发明另一个优选的实施方案是进一步定义为重组载体的纯化的核酸区段，该区段编码根据SEQ ID NO2、4、6、8、10、12或14-92的蛋白质。如在此处所用的，术语“重组载体”指已进行修饰以含有编码HAS蛋白质或其片段的核酸区段的载体。该重组载体可进一步限定为包含启动子的表达载体，该启动子可操作地连接到该编码HAS的核酸区段上。
本发明进一步优选的实施方案是一种宿主细胞，该宿主细胞用包含HAS基因的重组载体制备为重组体。该优选的重组宿主细胞可为原核细胞。在另一个实施方案中，该重组宿主细胞可为真核细胞。如在此处所用的，术语“基因工程处理的”或“重组”细胞是要指向其中引入了重组基因如编码HAS的基因的细胞。因此，基因工程处理的细胞与不含有重组引入的基因的天然存在的细胞有区别。因而，基因工程处理的细胞是具有通过人工引入的基因或多个基因的细胞。重组引入的基因将为cDNA基因的形式，基因组基因的拷贝，或者包括位于启动子附近的基因，该启动子天然地与引入的特定基因不相关。
重组宿主细胞可进一步含有至少一种编码用于合成HA糖前体的酶的基因。该HA糖前体可选自焦磷酸酶、转移酶、变位酶、脱氢酶或差向异构酶，从而能够产生UDP-GlcNAc或UDP-GlcUA或其组合。该重组宿主细胞可进一步含有HA糖前体的生物合成途径基团或用于HA糖前体合成的酶。该一种或多种基因可与HAS基因存在于相同的表达构建体上或存在于不同的表达构建体上。任选地，这些基因可为染色体整合的，如在下文中更加详细描述的。
当人们想要用除链球菌之外的宿主时，如可用于生产重组HA合酶的，有利的是应用原核系统如大肠杆菌、芽孢杆菌菌株、乳球菌属(Lactococcus sp.)，或者甚至用真核系统如酵母或中国仓鼠卵巢细胞、非洲绿猴肾细胞、VERO细胞等。当然，在着手该工作时，通常需要的是使HA合酶基因在选择的替代宿主中有功能的序列的控制之下。该适当的DNA控制序列以及其构建和使用通常是本领域中众所周知的，如在下文中更加详细讨论的。例如，在一个优选的实施方案中，宿主细胞可为芽孢杆菌细胞，如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)细胞，且在其中引入的载体含有与has基因可操作地连接的芽孢杆菌相容性启动子。
在更优选的实施方案中，宿主细胞是芽孢杆菌细胞，如嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、Bacillus clausii、凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacilluslautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌、Bacillusmetaterium、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringienisis)。
在优选的实施方案中，编码HA合酶的DNA区段进一步包括本领域中公知的功能为复制起点或“复制子”的DNA序列，该序列使得能够由特定的宿主进行连续的序列的复制。这种起点使得能够制备染色体外定位的且复制的嵌合体区段或质粒，在其中连接了HA合酶DNA序列。在更优选的的例子中，所用的起点是能够在适合于生物技术应用的细菌宿主中复制的。然而，对于更加多功能的克隆DNA区段，预期可选择地甚至额外地应用由其他宿主系统识别的起点(如在穿梭载体中)。
其他复制起点如SV40、多形瘤或牛乳头状瘤病毒(bovinepapilloma virus)起点的分离和应用是本领域的技术人员众所周知的，该起点可应用于许多高等生物的克隆或表达。在某些实施方案中，本发明因而可按照重组转化载体而定义，该载体包括编码HA合酶的基因序列和适当的复制起点，并在选择的控制区的控制之下。
因而，本领域的技术人员可理解的是按照本发明的公开内容，可使用其他方式获得HAS基因或cDNA。例如，可获得聚合酶链反应或RT-PCR生产的DNA片段，该片段含有来自许多来源的基因或cDNA的全长互补链，该来源包括链球菌的其他菌株，或者来自真核来源如cDNA文库。事实上可将任何分子克隆方法用于生成根据本发明的DNA片段。因而，通常对用于DNA分离的特定方法的唯一限制是分离的核酸应该编码生物学功能性等价物HA合酶。
一旦已分离了DNA，则将其与选择的载体连接在一起。事实上可应用根据本发明的任何克隆载体以实现该优点。一般有用的载体包括用于原核生物的质粒和噬菌体，及甚至用于真核生物的病毒载体。例子包括pKK223-3、pSA3、重组λ、SV40、多形瘤、腺病毒(adenovirus)、牛乳头状瘤病毒和反转录病毒。然而，人们相信当应用能够在乳球菌属或芽孢杆菌菌株和大肠杆菌两者中复制的载体时，最终可实现特定的优点。
如这些由Dao和Ferretti的pSA3载体或Trieu-Cuot等人的pAT19载体所示例的载体使得人们能够在容易操作的宿主如大肠杆菌中进行克隆群体选择，并随后转运回食品等级的乳球菌属或芽孢杆菌菌株中以生产HA。这些是用于生产某些食品和生物技术产品的良性和充分研究的生物。这些优点在于，人们可通过基因剂量作用(即通过扩增而提供额外拷贝的HA合酶基因)和/或包括额外的基因来增加乳球菌属或芽孢杆菌菌株合成HA的能力，从而增加HA前体的可用性。细菌合成HA的固有能力也可通过形成额外的拷贝或扩增携带HA合酶基因的质粒而增加。该扩增可使质粒拷贝数目及因此的HA合酶基因拷贝数目增加10-倍。
可进一步增加HA合酶基因拷贝数目的另一个程序是向质粒中插入多拷贝的基因。另一种技术可包括将HAS基因和/或糖前体基因整合入染色体DNA中。该额外的扩增可为尤其可行的，这是因为细菌HA合酶基因大小是小的。在一些计划中，将染色体DNA-连接的载体通过使用能够在选择的宿主中表达插入的DNA的载体而应用于转染宿主，该宿主是为筛选的目的而选择的，如大肠杆菌。
在另一个优选的实施方案中，HA合酶基因是通过同源或异源重组而引入到宿主细胞染色体中的。has基因在这种构型中可能更加稳定，尤其是当无药物选择时。多种载体可用于将has基因引入到芽孢杆菌中，如pTLH或pKSV7，或者引入到酵母中，如YIp211，或者引入到动物细胞中，如pcDNA/FRT。首先将DNA通过转化、转导或电穿孔引入到宿主细胞中。然后将具有has基因的DNA区段稳定地整合入宿主染色体中。例如，spHAS基因用于通过转导和整合来修复链球菌染色体的突变体；该操作结果导致HA的生产(DeAngelis等人，1993a)。
当应用真核来源如皮或滑膜成纤维细胞或公鸡鸡冠细胞时，人们想要首先通过制备cDNA文库而进行。这是首先通过从上述细胞中分离mRNA而实施的，随后用具有反转录酶活性的酶制备双链cDNA并与选择的载体连接。在本领域中对于双链DNA的制备的许多可能方式都是可用且公知的，且所有这种技术都认为是可采用的。优选的技术包括反转录。一旦获得了双链cDNA群体，则在选择的宿主中通过接受的技术制备cDNA文库，如通过连接入适当的载体中并在适当的宿主中扩增。由于所获得的极大数目的克隆及通过在此处提出的技术筛选极大数目克隆的相对容易性，人们可想要应用噬菌体表达载体以克隆和表达筛选cDNA克隆，如λgt11、λgt12、λGem11和/或λZAP。
在某些其他的实施方案中，本发明涉及分离的DNA区段和重组载体，它们在其序列中包括基本如在SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13的至少一个中提出的核酸序列或其变体，其中该变体编码基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列。例如，术语“基本如在SEQ ID NOX中提出的”或“如在SEQ ID NOX中提出的”是以与上述的相同的意义使用的，意思是核酸序列基本相应于SEQ ID NOX的部分，并且其只有非常少的几个密码子与SEQ IDNOX的密码子不同或不是其功能等价物。术语“功能等价物密码子”在此处用于指编码相同氨基酸的密码子如精氨酸或丝氨酸的6个密码子，且也可指编码如在表I中提出的生物学等价的氨基酸的密码子。
也可理解氨基酸和核酸序列可包括额外的残基，如额外的N-或C-末端氨基酸或额外的5’或3’核酸序列，且仍然是基本如在此处公开的序列之一中提出的，只要该序列满足上文提出的标准，该标准包括当涉及蛋白质表达和酶活性时维持生物学的蛋白质活性。末端序列的添加特别地应用于核酸序列，该序列包括如在侧面与编码区的5’或3’部分相接的多种非编码序列，或可包括已知在基因中存在的多种内部序列。特别地，真核生物中has基因产物的氨基酸序列比在原核生物中发现的大大约40％，而原核生物的和真核生物的HAS展示基本相同的合成HA的酶能力。
虑及遗传密码的简并性以及保守和半保守的替代，与SEQ IDNO1、3、5、7、9、11、13或其变体(其中该变体编码基本如在SEQID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列)的核苷酸具有约40％～约80％一致性的序列为“基本如在SEQ ID NOX中提出的”或“包含SEQ ID NOX的”序列；或者更优选地为约80％～约90％一致性的；或者更加优选地为约90％～约99％一致性的。基本与那些在SEQ IDNO1、3、5、7、9、11、13或其变体中提出的序列相同的序列也可功能性地定义为如下序列，该序列能够在“标准严格性杂交条件”、“中等严格性杂交条件”、“较不严格性杂交条件”或“低严格性杂交条件”下与含有SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13或其变体的互补链的核酸区段杂交，其中该变体编码基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列。适当的“标准”或“较不严格性”杂交条件将为本领域技术人员众所周知的，并在下文中明确地提出。在一个优选的实施方案中，利用了标准严格性杂交条件或较不严格性杂交条件。
如在此处所用的术语“标准严格性杂交条件”、“中等严格性杂交条件”和“较不严格性杂交条件”或“低严格性杂交条件”用于描述这样一些条件，在该条件下基本互补的核酸区段将形成标准的沃森-克里克碱基对，从而相互“杂交”。已知有许多因素决定结合或杂交的特异性，如pH、温度、盐浓度、如甲酰胺和二甲基亚砜的试剂的存在、杂交的区段的长度等。有许多规程以进行标准的杂交实验。依赖于目标DNA和探针或查询DNA的相对相似性，然后可在严格性、中等的或在低的或较不严格性条件下进行杂交。
杂交性核酸的杂交部分长度一般为约14个核苷酸，且优选地长度为约14～约100个核苷酸。杂交性核酸的杂交部分与编码HAS或其互补链的核酸序列的部分或全部具有至少约60％的一致性，如至少约80％的一致性或至少约90％的一致性，该编码HAS或其互补链的核酸序列如SEQ ID NO2或4或其互补链。寡核苷酸探针与核酸模板的杂交一般在标准或严格性杂交条件下进行。核酸双链体或杂交物稳定性表达为溶解温度或Tm，该温度是探针核酸序列从目标DNA中解离的温度。溶解温度用于定义需要的严格性条件。如果要对与探针相关和基本相同而不是相同的序列进行鉴定，那么有用的是首先确立在特定盐(如SSC、SSPE或HPB)浓度仅发生同源杂交的最低温度。然后，假定1％的错配导致Tm中1℃的降低，因此杂交反应中最终洗涤的温度也相应降低了(例如，如果序列与探针具有大于95％的一致性，那么最终洗涤温度降低约5℃)。实践上，每1％的错配中Tm的改变可为约0.5℃～1.5℃。标准严格性杂交条件的例子包括于约68℃在5×SSC/5×Denhardt溶液/1.0％SDS中的杂交，随后于室温在0.2×SSC/0.1％SDS中进行洗涤，或于约30℃～约45℃在1.8×HPB中进行杂交，随后于约45℃在0.2-0.5×HPB中进行洗涤。中等严格性条件包括如上所述在5×SSC/5×Denhardt溶液1％SDS中的杂交，及于42℃在3×SSC中进行洗涤。可改变盐浓度和温度的参数以实现探针和目标核酸之间一致性的最适水平。关于这种条件的额外的指南在本领域中易于获得，例如Sambrook等人，1989，Molecular Cloning，ALaboratory Manual，(Cold Spring Harbor Press，N.Y.)；和Ausubel等人(eds.)，1995，Current Protocols in Molecular Biology，(JohnWiley & Sons，N.Y.)。低严格性规程的几个例子包括(A)于约30℃在5×SSC、5×Denhardt试剂、30％甲酰胺中杂交约20小时，随后在约15分钟内于约30℃在2×SSC、0.1％SDS中洗涤2次，然后于约30℃在0.5×SSC、0.1％SDS中洗涤约30分钟(FEMSMicrobiology Letters，2000，第193卷，第99-103页)；(B)于约45℃在5×SSC中杂交过夜，随后在2×SSC中洗涤，然后于约55℃在0.7×SSC中洗涤(J.Biological Methods，1990，第30卷，第141-150页)；或(C)于约30℃～约45℃在1.8×HPB中进行杂交；随后于23℃在1×HPB中进行洗涤。
自然地，本发明也包含与在SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13或其变体中提出的序列互补或基本互补的DNA区段，其中该变体编码基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列。“互补”的核酸序列是那些能够根据标准的沃森-克里克互补原则进行碱基配对的。如在此处所用的，术语“互补序列”指基本互补的核酸序列，如可由在上文中提出的相同的核苷酸比较进行估计的，或定义为能够与SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13或其变体的核酸区段进行杂交的，其中该变体编码基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列。
不管其本身编码序列的长度怎样，本发明的核酸区段可与其他DNA序列组合，如启动子、聚腺苷酸化信号、额外的限制性酶切位点、多克隆位点、抗原决定部位标记、多组氨酸区域、其他编码区段等，从而其总长度可有相当大的变化。因此预期可应用几乎任何长度的核酸片段，其总长度优选地受在想要的重组DNA规程中制备和使用的容易性的限制。
自然地，也应理解为本发明不局限于分别为SEQ ID NO1、3、5、7、9、11、13(或其变体，其中该变体编码基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列)和SEQ ID NO15-92的特定核酸和氨基酸序列。因此重组的载体和分离的DNA区段可不同地包括HAS编码区本身、在基本编码区中具有选择的替代或修饰的编码区，或者它们可编码较大的多肽，然而该区段包括HAS-编码区或可编码具有变化的氨基酸序列的生物学功能性等价物蛋白质或肽。
巯基试剂抑制seHAS和spHAS的活性。
seHAS是最小的HAS蛋白质(417个氨基酸)，并含有4个Cys残基。seHAS的4个半胱氨酸残基在3个原核生物HAS(不包括pmHAS)中完全保守，且在所有脊椎动物HAS中位置保守(图1)。为了研究半胱氨酸在HAS功能中的可能作用，在存在不同巯基试剂时测定了seHAS和spHAS的活性(表II)。对于两种酶观察到了几乎相同的灵敏性。例如，seHAS活性被甲基硫代磺酸甲酯(0.05mM)抑制了大于93％，由NEM(5mM)抑制了大约70％，而IAA仅抑制了15％。亚砷酸钠和5，5’-二硫二-(2-硝基苯甲酸)也抑制各种HAS活性。这些结果显示一个或多个Cys残基对于seHAS和spHAS蛋白质的总体HA合成活性是重要的。每一个HAS由NEM的抑制更详细地在温育时间和NEM浓度方面进行检查(图2)。seHAS和spHAS关于温育时间或NEM浓度均以双相的方式进行抑制。尽管抑制程度随实验而有变化，但一般有60-70％的作用。约一半观察到的失活发生于≤1mM NEM，而剩余的失活发生于1-6mM(图2A)。在动力学上，有快速的初始失活，然后为非常缓慢的抑制阶段；每一个阶段再次涉及约一半受影响的活性(图2B)。
在上述NEM研究中的一个潜在的复杂因素是巯基修饰试剂的作用可能归因于由在检验的膜中对其他分子的修饰导致的次级作用。尽管该可能性非常小，这是因为seHAS是HA生物合成所必需的唯一蛋白质，但也在图3所示的条件下检查了巯基试剂对分离的膜中seHASCys-null突变体的作用。SeHASCys-null的活性未受NEM、IAA或亚砷酸钠处理的影响(≤1％)，这消除了如下可能性，即膜制剂中修饰的次级蛋白质负责改变的HAS活性。
表II不同巯基试剂对seHAS或spHAS活性的作用。
将表达重组seHAS-H6或spHAS-H6蛋白质的大肠杆菌膜于4℃与含有5mM NEM、5mM IAA、0.5mM 5，5’-二硫二-(2-硝基苯甲酸)、0.05mM甲基硫代磺酸甲酯、10mM亚砷酸钠或无添加物(对照，设为100％)的PBS一起温育1小时。然后四次确定剩余的seHAS活性并表达为相对于对照的％。示出了平均值和标准差。
表IIINEM或亚砷酸钠处理对野生型seHAS利用UDP-GlcUA和UDP-GlcNAc的作用将含有seHAS的大肠杆菌膜于4℃与单独的PBS(对照)或含有5mM NEM或10mM亚砷酸钠的PBS一起温育1小时。如在材料和方法中所述的，三次在不同的UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc浓度下确定seHAS的活性，并计算了米-曼氏常数(Km和Vmax)±标准误。
NEM对蛋白质的修饰可影响6个独立功能的任何一个或几个，这6个功能是HAS为了合成HA所必须进行的。为了确定核苷酸-糖结合位点之一是否受NEM的影响，我们检查了处理的和未处理的seHAS的UDP-GlcUA和UDP-GlcNAc饱和特性(图3和表III)。UDP-GlcUA(图3B)和UDP-GlcNAc(图3A)的Km值未由于NEM或亚砷酸钠的处理而显著改变，而最大的酶反应速率降低了多达～70％。
位点特异性Cys诱变对seHAS的HA合酶活性的作用。
制备了seHAS的位点特异性Cys到Ala和Cys到Ser突变体，以研究每一个Cys残基在HAS活性中的可能功能作用。在所有下面应用野生型(或天然的)和突变体seHAS蛋白质的动力学研究中，将获得的数据对在此处所描述的完整seHAS蛋白质的量进行了归一化。除C367A和C367S变体之外，seHAS的单个Cys到Ala或Cys到Ser突变体与野生型酶相比具有较低的酶活性(图4和表IV)。该结果显示Cys226、Cys262和Cys281有利于seHAS的催化活性。当与C226S和C262S变体的相应值相比时，C226A和C262A突变体的UDP-GlcUA的Km值更高。然而，UDP-GlcNAc的Km值不是很清晰。C226S突变体的KUDP-GlcNAc值比C226A突变体的高，而与C262S和C281S变体相比，C262A和C281A突变体蛋白质均具有更高的KUDP-GlcNAc值。在C367位置，从Ala和Ser突变体中获得了每一核苷酸-糖的相似Km值。
从这些结果可以看出，通过特定改变其Cys残基的至少一个而对HAS酶施加了功能约束。由于C226A和C226S突变体是活性最低的，所以Cys226看来是对于酶活性最重要的Cys残基。seHAS(C367A)变体实际上比野生型的活性更高(～145％)，而seHAS(C367S)变体无显著改变。在4种情形的每一个中，Cys到Ala改变导致具有比Cys到Ser改变更高活性的变体。耐受性最低的单Cys改变是C226S；该突变体受到了大于90％的抑制。
构建并检查了所有可能的Cys到Ala双重突变体(C226，262A；C226，281A；C226，367A；C262，281A；C262，367A；C281，367A)以及三重突变体和Cys-null突变体。为简单起见，根据习惯将三重Cys-突变体命名为显示4个Cys残基中的哪一个未被改变。例如，含有C(226，281，367)A改变的三重突变体是seHAS(Δ3C)C262，该突变体仅在位置262具有一个与野生型蛋白质相同的Cys。然后在对每一种底物饱和的条件下确定这些多重-Cys的seHAS突变体的HA合酶活性，并将其对存在于分离的膜中的seHAS蛋白质量进行归一化(图5)。活性最低的双重突变体为C(226，262)A，该突变体仅具有野生型酶比活性的2-3％。Cys226改变为Ala的所有3个双重突变体与其他3个双重突变体相比均具有较低的活性。2个三重突变体seHAS(Δ3C)C226和seHAS(Δ3C)C262均显著地比其他2个三重突变体seHAS(Δ3C)C281和seHAS(Δ3C)C367活性更高(～3-30倍)。
令人惊讶地，Cys-null seHAS突变体比2个活性最低的三重Cys-突变体和6个双重Cys-突变体中的2个活性更高(图5)。单个和多重Cys-突变体降低的活性与上述巯基试剂对seHAS或spHAS的抑制一致。基于这些Cys-突变体中大多数的较低比活性，可得出如下结论，即seHAS中没有特定的半胱氨酸残基是HA合成过程中重要步骤所必需的。然而，这些数据也支持如下结论，即Cys226和Cys262可发挥作用，或至少影响HAS总活性所必需的6个亚活性的一个或多个。至少这些后面两个残基的改变或修饰可阻碍酶，并导致明显低的Vmax值。
表IVseHAS的单Cys-突变体的米-曼氏常数如在此处所述应用从表达所示的seHAS变体的大肠杆菌SURE细胞中制备的膜进行了动力学分析。野生型seHAS和seHAS的单Cys-突变体的希尔数为0.9～1.2，且这些突变体的值中没有一个与野生型的 显著不同。
a.除C367S之外，所有的值均与野生型的显著不同(p≤0.05)。
b.与野生型的显著不同(p≤0.05)。
c.与野生型的显著不同(p≤0.005)。
表VseHAS的双重Cys-突变体的米-曼氏常数如在此处所述应用从表达所示的seHAS变体的大肠杆菌SURE细胞中制备的膜进行了动力学分析。
a.所有的值均与野生型的显著不同(p≤0.05)。
b.与野生型的显著不同(p≤0.05)。
c.与野生型的显著不同(p≤0.005)。
表VIseHAS的三重和四重Cys-突变体的米-曼氏常数如在此处所述应用从表达所示的seHAS突变体的大肠杆菌SURE细胞中制备的膜进行了动力学分析。
a.所有的值均与野生型的显著不同(p≤0.05)。
b.与野生型的显著不同(p≤0.05)。
c.所有的值与野生型的显著不同(p≤0.005)。
seHAS的Cys-突变体的酶分析。
为了确定seHAS的何种亚活性可通过对其Cys残基进行突变而改变，对野生型酶及其所有Cys-突变体进行了动力学分析，并计算了其各自的Km和Vmax值(表IV-VI)。每一个seHAS的单、双重和三重Cys到Ala突变体的Vmax值的比较证实了活性最低的突变体是C(226，262)A和seHAS(Δ3C)C281，它们仅具有野生型活性的～1-3％(如由图5的结果所提示的)。seHAS(C226S)突变体具有～10％的野生型活性(表IV)。C226A、C(226，367)A、seHAS(Δ3C)C367和Cys-null突变体具有野生型的17-30％活性。剩余的8个seHAS的Cys-突变体保留了野生型seHAS的40％或更多活性。唯一具有高于野生型活性的突变体(表IV)为seHAS(C367A)。
所有Cys-突变体对于UDP-GlcUA的Km值(表IV-VI)与野生型seHAS的差异不超过2-3倍。对于大多数Cys-突变体，对于UDP-GlcNAc的Km值也未有巨大的变化(在1-3倍中)。这些相对小的改变显示这些seHAS变体中改变的Cys残基在酶如何结合并应用核苷酸-糖中起相对次要的作用。然而，Cys-突变的一些组合对于核苷酸-糖的利用具有更引人注目的作用。例如，seHAS(Δ3C)226的KUDP-GlcNAc值为～4-倍高(表VI)。C(226，262)A突变体(表V)和seHAS(Δ3C)C281、seHAS(Δ3C)C367和Cys-null突变体(表VI)的KUDP-GlcNAc值受到了更大影响；它们比野生型的高～6-9倍。这些后面的突变体在其对UDP-GlcNAc的利用中明显比野生型的seHAS效率低。有趣的是，这些突变体与野生型酶1.0的值相比，也具有大于1.5的希尔数，从而显示它们在利用UDP-GlcNAc中已获得了新的协同水平。所有上述动力学结果显示Cys226和Cys262在seHAS活性中潜在的重要作用，尽管不是绝对基本的作用。
半胱氨酸残基对于HAS活性不是必需的，但位于或靠近底物结合位点。
尽管seHAS中的4个Cys残基(位置226、262、281和367)在所有I型HAS家族成员中基本保守，但seHAS和spHAS的Cys-null突变体是活性的，它在动力学中与野生型相比具有最小的改变。此处也已知没有一个HAS含有二硫键。然而，为了理解这4个半胱氨酸残基为何在I型HAS中大大保守，对seHAS的所有可能的Cys到Ala突变体的NEM敏感性进行了检查(即时间-和剂量-依赖性抑制)。对seHAS的化学修饰研究显示Cys226、Cys262和Cys281与NEM反应，而Cys367是不可接近的。比较野生型和Cys-突变体的底物保护研究显示NEM-反应性的Cys226和Cys262均位于或靠近底物结合位点，这是因为UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc的存在阻止了由NEM的失活。Cys281不位于UDP-糖结合位点，这是由于三重Cys-突变体seHAS(Δ3C)C281未由UDP、UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc保护而免受NEM抑制(图6)。由于可以与两个靠近的Cys残基交联的亚砷酸钠类似地抑制双重Cys-突变体seHAS C(226，367)A和野生型-seHAS，所以相信Cys281和Cys262在蛋白质中非常靠近(基本邻近)。
由seHAS的各种Cys-突变体合成的HA的相对大小分布。
来自不同物种的HAS合成具有特征性的且常不同的大小分布的HA产物。为了确定seHAS的任何一个Cys-突变体是否合成与野生型HAS相比具有改变的大小分布的HA，将琼脂糖凝胶电泳用于对由各种变体酶制备的放射性标记HA产物进行分级分离(图7)。单(图7A)和双重Cys-突变体(图7B)的大多数合成了与野生型酶相比具有基本相同大小的HA。C281A和C367S单突变体和C(262，281)A和C(281，367)A双重突变体产生了较小的产物。4个三重突变体中的3个(除seHAS(Δ3C)C281之外所有的)和Cys-null突变体产生了更小的HA产物(图6B)。由三重seHAS(Δ3C)C226突变体产生了最小的相对HA大小分布。有趣的是，seHAS突变体C(226)S、C(226，262)A和(Δ3C)C281的HA大小分布与野生型酶的相似，尽管这些突变体具有最低的活性(野生型的1.4-8％)，进而具有最低的HA延伸速率。总之，这些结果清楚地显示Cys残基各种组合的突变导致seHAS比野生型酶合成更短的HA链，从而显示Cys残基可影响由seHAS产生的HA大小分布。
SeHAS中二硫键形成的估计。
为了理解Cys残基在seHAS功能中的潜在作用，需要确定其4个半胱氨酸残基中的任何一个是否参与二硫键的形成。进行了两种方法以回答该问题。在第一种方法中，用14C-NEM处理含有重组seHAS的大肠杆菌膜以确定野生型或Cys-突变体seHAS蛋白是否可进行放射性标记，且然后可在SDS-PAGE后通过放射自显影进行鉴定(图8)。该NEM-反应性可以显示游离半胱氨酸的存在，该半胱氨酸未参与二硫键的形成。seHAS的6个Cys到Ala双重Cys-突变体的每一个都被14C-NEM放射性标记。该标记是特异性的，这是因为单独载体对照和Cys-null突变体不显示显著的标记。这些结果显示seHAS中没有一个Cys残基参与二硫键。存在于来自野生型和几个双重-Cys突变体的NEM-标记的蛋白质混合物中的31kDa的条带可能是HAS的降解产物，这是因为它不存在于单独载体对照中。这种片段预期是无活性的，并阐明了将动力学数据对完整HAS蛋白质的量进行归一化的重要性，如由SDS-PAGE凝胶的蛋白质染色所估计的。
在估计二硫键存在的第二种方法中，用生物素-PEO-马来酰亚胺对纯化的酶进行处理，然后通过MALDI-TOF质谱分析法对修饰的蛋白质产物进行分析(图9)。对于每一种添加的生物素-PEO-马来酰亚胺基团，seHAS衍生物的质量增加了525.6Da。处理的野生型seHAS含有衍生化的产物的分布，该衍生化产物增加的质量等于每个seHAS中1～4个生物素-PEO-马来酰亚胺基团的添加(图9A)。大多数蛋白质被3或4个基团进行修饰，从而证明该酶不具有二硫键。三种最大的加合物观察的质量值与预测值的差异小于0.005％。当在6M盐酸胍存在时用生物素-PEO-马来酰亚胺对野生型seHAS进行处理时，修饰的程度仅略高些(未显示)。该后一种结果显示4个Cys残基中没有一个基本隐藏于天然的酶中；它们均易于与相对大的修饰试剂进行反应。作为对照，也用生物素-PEO-马来酰亚胺对seHASCys-null进行处理以证实在不存在Cys基团时不能形成衍生化的酶产物(图9B)。该结果证实了修饰试剂不与任何其他氨基酸侧链进行反应，且对于Cys是特异性的；与Cys-null蛋白质未形成任何共价加合物。
Cys残基的诱变和spHAS的表达为了研究二硫键可能的存在和保守的Cys残基在化脓链球菌HAS的酶活性中的功能作用，将spHAS中6个Cys残基的每一个突变为Ser或Ala。随后，通过对来自不同突变体的HAS片段进行定点诱变或限制酶消化和连接而产生了具有Cys到Ala改变组合的spHAS突变体。对粗制膜的研究显示一些Cys残基的改变对HA产生具有巨大的作用，其中最初将spHAS突变体的酶活性对总的膜蛋白质进行了归一化。例如，spHAS(C225A)几乎是失活的，而spHAS(C261A)和spHAS(C280A)具有低于野生型一半的活性。然而，由于在各种突变体中spHAS蛋白质表达的显著差异，所以这些初始的印象是不正确的。
因而，为了对HAS蛋白质表达水平进行归一化，发展了一种灵敏的且定量的基于蛋白质印迹的测定(Heldermon等人，2001)。由于所有HAS构建体都含有C-末端的His6标记，该标记可由商业上的抗-His6单克隆抗体进行有效识别，所以在生物素化之后，将该抗体用作一级抗体以进行蛋白质印迹分析，随后与作为二级试剂的125I-链霉抗生物素蛋白进行温育。与标准的蛋白质印迹不同，该探测规程提供了更高的灵敏性以及在更广的浓度范围内对HAS蛋白质进行定量的能力。对HAS蛋白质表达的归一化是相对于已知量的纯化spHAS-His6进行的，该纯化的spHAS-His6包括于每一个分析中用作内部标准。基于该归一化的结果，明显的是spHAS(C225S)以相对于任何其他突变体最低的水平表达，为野生型的～66％(表VII)。大多数单Cys-突变体的蛋白质表达水平与野生型无显著差异，尽管spHAS(C124S)和spHAS(C261A)突变体可提高～35％(p～0.05)。有趣的是，大多数多重Cys-突变体以及Cys-null突变体以比野生型酶高3-～5-倍的水平表达。这些spHAS变体相对表达中的上述差异与多个实验一致，该实验具有独立的细胞生长和酶诱导，从而显示spHAS中的几个Cys残基可影响酶的起始折叠和稳定性，特别是位置225上保守的Cys。
突变体的酶分析进行了spHAS的单和多重Cys-突变体的动力学分析，以研究如下可能性，即多重Cys残基以协同方式对于酶活性为重要的。通过上述方法对每一种突变体的活性进行测定和归一化以确定其对于UDP-GlcUA和UDP-GlcNAc的最大速率(Vmax)和米-曼氏(Km)常数(图10和11；表VIII)。该分析揭示HAS活性对于任何单个的Cys残基无依赖性。这些测定也揭示了相对于野生型spHAS在最大酶活性中无极端的改变。spHAS(C225S)和spHAS(C280A)突变体具有降低最多的活性，其Vmax值为野生型的30-50％。spHAS(C261，280A)和Cys-null突变体具有野生型活性的50-75％。有趣的是，spHAS(C124，366，402A)和spHAS(C366A)具有增加的活性，为野生型的～150％。其他的单突变体以及spHAS(C124，402A)和spHAS(C124，261，280，366，402A)显示了相对于野生型Vmax小于25％的变化。
所有突变体spHAS的KUDP-GlcNAc值也在野生型酶的25％之内。任何突变体酶对UDP-GlcNAc利用的S形特征没有改变。当用希尔方法(1913)对这些数据进行分析时，希尔值均为～2(表VIII)，这显示与所有突变体酶结合并在固定的UDP-GlcUA浓度应用UDP-GlcNAc的能力相关的高度协同性。因而，spHAS酶利用UDP-GlcNAc的协同性(Tlapak-Simmons等人，1999b)不受其6个Cys残基中的任何一个的影响，也不依赖于后者。类似地，这些Cys残基中没有一个在结构上或以其他方式对UDP-GlcNAc的二级结合位点即别构结合位点有贡献。
表VIIspHAS各种Cys-突变体的表达水平将从表达所示的spHAS变体的大肠杆菌SURE细胞制备的膜通过SDS-PAGE进行分级分离，并将蛋白质转移到硝酸纤维素上。如在方法中所述对spHAS蛋白质水平进行定量，并将该值对野生型的进行归一化。进行斯氏t检验以估计与野生型酶的表达相比差异的显著性。
表VIIIspHAS的Cys到Ser/Ala突变体的动力学常数Vmax值以每小时每pmol spHAS整合的两种底物μmol数表示。对于UDP-GlcNAc和UDP-GlcUA的Km值分别在0.5mM UDP-GlcUA和1.5mM UDP-GlcNAc进行确定。对单或多重Cys-突变体分别进行两次或三次实验。对于野生型，n＝7。基于斯氏t检验，与野生型酶有显著差异的值以*(p＜0.05)或**(p＜0.001)显示。
所有单Cys突变体和2个双重Cys到Ala突变体的KUDP-GlcUA值均在野生型的50％之内。剩余的多重Cys到Ala突变体均展示了野生型的2-3倍的KUDP-GlcUA值。尽管这些多重Cys-突变体通过降低利用UDP-GlcUA的效率而改变酶活性，但它们不在很大程度上这样改变。此外，Cys-null突变体和野生型spHAS之间活性中相对小的差异清楚地显示半胱氨酸残基在催化上和结构上不是HA合成绝对必需的。
NEM对spHAS活性的抑制对来自多重Cys-突变体的实验组的膜的NEM处理显示该抑制不再存在于spHASCys-null或仅有Cys225的完整突变体中，而在其他多重Cys-突变体中保持了NEM敏感性(图12)。这些结果显示野生型酶由NEM或其他巯基/反应性试剂的抑制最可能归因于单独Cys残基的修饰，而不是S-H基团的丧失。含有Cys的单突变体抑制的缺乏证明Cys225主要是由于其在酶中的位置而不能由NEM进行修饰，或者该特定的半胱氨酸残基当由NEM进行修饰时不参与酶的抑制反应。
二硫键形成的估计尽管Cys残基可能不是HAS蛋白质酶活性所必需的，但它们在酶的结构完整性和长期稳定性中仍然是重要的，如由spHAS(C225S)降低的表达和spHAS(C124S)和spHAS(C261A)突变体增加的表达所显示的(表VII)。Cys残基对于维持正确的酶构象以使得生长中的HA链能够伸出膜可能是重要的。Cys残基在蛋白质中发挥结构作用的主要方式是通过形成分子间或分子内二硫键。为了研究spHAS中二硫键的可能性，将一种化学标记方法用于确定游离Cys残基的数目，该游离的Cys残基因此不参与二硫键键合。使结合到加载了Ni+2的NTA柱上的生物素-PEO-马来酰亚胺能够与纯化的spHAS反应，然后通过MALDI-TOF质谱分析法对修饰的蛋白质产物进行分析(图13)。在非变性条件下，处理的野生型spHAS样品显示了衍生化产物的分布，该衍生化产物增加的质量等于每个seHAS中1～6个生物素-PEO-马来酰亚胺基团的添加，其中大多数蛋白质通过添加5或6个基团进行了修饰(图13A)。作为该化学修饰方法的对照，以相同的方式用生物素-PEO-马来酰亚胺对spHASCys-null样品进行处理以证实在不存在Cys基团时不能形成衍生化的酶产物。结果(图13B)证明与Cys-null蛋白质未形成任何共价加合物，这证实了修饰试剂对于Cys是特异性的，且不与其他氨基酸侧链进行反应。在6M盐酸胍存在时用生物素-PEO-马来酰亚胺对野生型或Cys-null spHAS蛋白质的处理基本得到了与不存在变性剂时获得的相同的结果，尽管修饰程度略微高些(未显示)。该后一种结果显示spHAS不含有弱的二硫键，该二硫键当蛋白质进行变性时易于进行可逆的还原。总体结果证明在野生型spHAS酶中无二硫键，且在溶液中该蛋白质中的6个Cys残基与生物素-PEO-马来酰亚胺试剂有混合程度的暴露。
突变体HAS的HA大小范围和普遍的HA大小因为C280由丙氨酸替代的spHAS突变体合成了平均分子量比spHAS野生型酶低的HA，所以对其他氨基酸替代也进行了检查(表IX)。例如，C280T和C280V突变体产生了具有比野生型更大的大小分布的HA，而C280G产生了具有比野生型更小的平均分子量的HA。
表IX突变体HAS的HA大小范围和普遍大小将在饱和的底物浓度下在每小时中由spHAS和seHAS突变体产生的HA在1％的琼脂糖凝胶上进行电泳。通过在反应混合物中加入UDP-[14C]GlcUA而对反应物进行放射性标记，并用MolecularDynamics Phosphoimager对HA产物的分布进行估计。相对于HighMolecular Weight和Kb DNA梯度标准物估计大小。产物的大小分布报道为各种大小范围之间的总计数的百分比(IDV)。产生的普遍HA大小(“峰值大小”)报道为以MDa为单位的大概分子量，在该值上有最大的IDV强度。MW范围以MDa表示，而DNA在括号中以kbp表示。C226A、C262A、C281A和C367A是seHAS的突变体。
在seHAS两个膜结构域中的靶向诱变和“双交换(double switch)”突变体的生成。
在对HAS如何聚合长的HA链的理解中有自相矛盾的地方。HA链在其伸长时必须快速自由移动通过酶。因而，人们预期HAS的HA-结合能力不应是“高亲合力的”相互作用，这是因为低的分离率(off-rate)将妨碍链的移动(即跨过膜的转位)。然而，HA-结合“亲合力”也不能非常低，这是因为在大的HA链(～4×106)释放之前，一些链要保持大于10,000个循环的HA二糖组装。预期HAS具有多个HA-结合区，该结合区与生长的多聚体的相互作用必须以协同的方式形成和打破以使得生长的HA链能够在酶中进行转位，而不在成熟前释放。图14A阐明了5个基元，该基元是B-X7-B型推定的HA-结合基元，其中B是碱性氨基酸(即Arg或Lys)，而X是任何氨基酸，如由Yang等人(1994)描述的。预期HAS利用两种类型的HA-结合区；一种类型支撑供体HA-UDP并确定其方向以进行下一个二糖单位的组装，另一种类型在当生长的HA链从前一位点释放并跨膜进行转运时对其进行支撑。
尽管没有关于HAS中可能的HA-结合区的信息，但令人感兴趣的是基元#2-5在strepHAS中是绝对保守的，且通常在I型HAS家族中这些位置上是保守的(即在一级序列的相同一般区域中保守)。此外，尽管suHAS中的基元#1含有Gln而不是Arg/Lys(仍然能够与HA形成H-键)，但它仍然是良好的候选基元，这是因为由于上述原因必须考虑部分的或“较弱的”HA-结合基元。位置#1重叠的基元在I型家族中是高度保守的。进一步地，因为3种人类HAS固有地产生不同大小的HA，所以不能预期I型家族中HA-结合区的完全保守；这反映了HAS1、HAS2和HAS3保持其HA链的不同能力。特别地，除小球藻酶之外，基元#4(具有Asn而不是R/K)和基元#5在所有HAS中均是保守的。
spHAS和可能所有I型HAS的拓扑学组织显示于图14B中。除两个膜结构域(MD3和MD6)不是跨膜结构域(TMD)之外，实验确定的spHAS拓扑学与最初预测的相似。N-和C-末端和大的中央结构域是细胞内的。前2个TMD是β-折叠(不是α-螺旋)，并生成了蛋白酶不能接近的小细胞外环。大的中央结构域中的MD3与膜结合，但不跨过膜。
于是有2个通过第二个小的细胞外环连接的TMD，蛋白酶也不能接近该环。具有两亲螺旋的MD6位于spHAS C-末端的50个氨基酸中，且不跨过膜。HAS需要许多Md以生成孔状的结构，生长的HA链通过该结构可伸出到外部。基于其相似性，所有I型HAS均具有其spHAS-相关结构域的类似拓扑学组织。
注意到所有I型HAS中两个膜结构域之间存在可能的电荷/极性-配对，且在seHAS中，这些残基是K48和E327(在图14B中以椭圆形显示，及如图15A所示的)。据信两个带电荷或极性的残基形成可锚定MD2(从外向内跨过膜)和MD4(从内向外跨过膜)的盐桥或强的H-键连接。生成了一系列seHAS的定点突变体，其中对这些残基的一个或两者进行了改变以破坏该推定的相互作用或颠倒带电荷的残基的位置。这些seHAS突变体的Vmax值有很大变化(图15B)。由于“双交换”突变部分地补救了E327K突变体，所以该结果支持该两个残基相互作用的观点。尽管大多数上述seHAS突变体得到了表达，但水平降低了，从而显示蛋白质未正确折叠且有降解，如seHAS(E327K)仅有野生型活性的～0.2％。然而，生成一个“双交换”突变体seHAS(K48E/E327K)将HAS活性恢复到野生型的～8％，在该突变体中对带电荷的残基进行了交换。因此，这些结果支持K48和E327相互作用及MD2和MD4足够邻近以至于这些残基可形成离子配对或H-键的观点。
光散射常规地用于获得补充HAS变体动力学特征的重要信息。例如，一项最近的研究利用含有HAS变体的大肠杆菌膜以检查由seHAS和spHAS的所有Cys-突变体产生的HA大小。HA大小的分析不如人们所预期的那样简单，这是因为已经发现由HAS产生的HA大小分布可随时间而稍有改变，且对HAS浓度极其敏感——即使在高浓度和关于时间和蛋白质动力学线性的条件下。动力学分析估计糖整合入不论大小的HA中的总速率，而不反映产生的HA产物大小中的改变。因为GPC-MALLS这样敏感，所以我们仅仅知道这些。当人们考虑到存在于样品中的HAS分子在达到稳定状态的大小分布之前需要进行几轮的链合成时，HA大小分布中的时间依赖性改变不令人惊讶。此外，基于底物HAS的改变的比例，在当该比例最大的早期可产生非常大的链，而以后当该比例降低时可产生较小的链。本发明用于通过MALLS比较HA大小差异的方法中利用的标准条件如下，即应消耗≤5％的底物，合成必须在≥2小时内是线性的，且观察的HA大小分布不应在蛋白质浓度增加几倍范围内显著改变。
seHAS(E327K)突变体仅具有野生型活性的～0.2％。然而，生成一个“双交换”突变体seHAS(K48E/E327K)将HAS活性恢复到显著水平(野生型的～8％)，在该突变体中对带电荷的残基进行了交换。因此，这些结果提示Lys48和Glu327相互作用及MD2和MD4足够邻近以至于这些残基可形成离子配对或H-键的观点。K48和E327的相互作用对于酶活性显得是非常重要的，可能是关键的。进一步支持该结论的是如下非常有趣的结果，即由双交换突变体产生的HA的大小分布急剧移动到较小的大小(图15和16)。基于GPC-MALLS分析，与野生型seHAS的280万相比，突变体的平均分子量(Mw)为26万。
HAS的独特性在于它们以交错的方式聚合两种糖GlcUA和GlcNAc，并同时使生长的HA链伸出质膜。链球菌HAS是I型HAS家族中最小的成员，并发挥HA合成和从细胞分泌所必需的所有功能。与真核生物的HAS酶不同(它们共享基本的同源性及在其共同区域中可能具有相同的拓扑学组织)，链球菌酶易于进行研究，这是因为它们可易于进行超量表达、纯化和表征，该链球菌酶与真核生物的酶。迄今为止，仅对一种真核生物的酶即小鼠的HAS1进行了超量表达、纯化和动力学表征。
由于3个原因而最初集中于Cys残基在seHAS和spHAS中的重要性上。首先，Cys残基在许多蛋白质(如35)中发挥重要的结构和功能作用。其次，seHAS中位置226、262、281和367的4个Cys残基在两种其他的链球菌酶suHAS和spHAS中完全保守，且通常在所有其他真核生物HAS中保守(图1)。最后，已报道对氯高汞苯甲酸(p-chloro-mercurobenzoate)在无细胞系统中可抑制A组spHAS合成HA(Sugahara等人，1979)。尽管自该报道之后未出现其他对巯基在HAS功能中作用的进一步研究，但重要的是研究Cys残基是HAS活性所必需的可能性。
本结果证明各种巯基试剂抑制spHAS和seHAS酶。该抑制可反映Cys在这些细菌HAS蛋白质功能中的重要作用。然而，对这些结果的解释由于Cys-修饰在酶中产生了两个改变的事实而复杂化了；消除了S-H基团，但也引入了新的S-R基团，其中R依赖于所用的巯基试剂。因为所有的R基团均大于初始的H，所以修饰的Cys残基可对特定的酶功能如底物结合生成新的空间限制。可选择地，不同巯基试剂不同程度的HAS抑制显示其对Cys残基的不同反应性，该反应性依赖于其大小、电荷或极性。虽然服从上述相同的考虑，但应用定点诱变以改变天然的Cys残基提供了确定Cys残基在HAS功能中重要性的补充方法。两种方法均显示尽管HAS活性通过改变Cys残基而降低，但该活性并没有消除；完全修饰的seHAS和spHAS Cys-null酶仍然能够发挥HA合成所需的所有功能。
此处详述的实验和结果清楚地证明seHAS和spHAS两者均不含有任何二硫键。因此，可合理地得出如下结论，即链球菌HAS蛋白质不具有二硫键。真核生物HAS蛋白质是否含有二硫键是更难确定的，这是因为这些蛋白质难以以高产量进行纯化，且比链球菌蛋白质含有更多Cys残基(≥14个)。
所有HAS酶均产生具有较大分子量范围的HA，而不是单一的分子量大小。产物大小的异质性对于3种脊椎动物HAS酶的特定功能具有生物学的重要性。此外，HA大小分布在链球菌HAS及也在3种哺乳动物HAS同种型中有变化。仅在体外(如在分离的细胞或膜制剂中)观察到的HA产物大小分布中的酶差异如果也在体内发生于真核生物细胞和组织中，则具有非常显著的生物学结果。过去10年中的许多研究已证明HA不简单地是大多数脊椎动物组织的细胞外基质的结构成分，而且也是能够修饰细胞行为重要方面的细胞信号传导分子，该细胞行为包括迁移和附着。关于HA的生物学功能的新范例的最有趣和最令人惊讶的方面是许多细胞仅在HA为特定大小时起反应。特别地，小寡糖HA具有与大的天然大小的HA非常不同的生物学活性。
本发明的令人感兴趣的发现是seHAS中Cys-突变体的一些但不是所有组合可导致酶合成具有改变大小的HA产物。检查的19个Cys-突变体中的8个合成了具有明显正常的大小分布的HA，该大小分布不同程度地移动到较小的质量。这些Cys-突变体中在HA延长率(Vmax值)和HA大小分布之间无明显的相关。虽然如此，但是活性最低的seHAS变体产生了大小与由野生型酶制备的HA相似的HA产物。琼脂糖凝胶电泳技术非常适合于获得对大小差异的定性估计。然而，非常难以估计迁移与大小成比例的狭窄范围之外的大小估计的可靠性。例如，几个Cys-突变体(如图7中单、双重和三重突变体中各自一个)实际上可合成显著比野生型更大的HA，但与野生型相比的迁移差异非常小。由于这些原因，一种表征这些seHAS的HA大小分布的研究示于图17中，该研究应用与动态光散射偶联的凝胶渗透层析(MALLS)。本发明证明了Cys残基在控制HA链长度中的作用。特别地，单seHAS Cys-突变体C281A产生了比野生型seHAS的小得多的HA，而seHAS的C281S突变体产生了与野生型seHAS的类似大小的HA产物。此外，spHAS的Cys突变体C280A也产生了小得多的HA，如在共同未决的美国序列号10/011,771中所看到的，此前以将其内容整体引入作为参考。
尽管对seHAS的NEM处理导致酶的速率最大值(Vmax)降低，但与未处理的seHAS相比，它基本不改变每一种核苷酸-糖的Km值。这些结果显示NEM-处理的酶结合每一种底物的能力未通过对其Cys残基的修饰而大大降低，但总的催化速率减缓了。相反，一些位点特异性Cys-突变体在其动力学常数中显示更大的变化。
seHAS或spHAS的单Cys到Ala或Cys到Ser突变体中没有一个是失活的，从而显示没有单个Cys残基在HA合成中起重要的且必需的作用。在单、双重、三重和Cys-null突变体中剩余的特定HAS活性证实酶中任何位置的Cys均不是HA合成中关键步骤所必需的。虽然如此，但是Cys226和Cys262一起在seHAS活性中起重要的作用，这是因为双重突变体seHAS(C226，262A)是活性最低的Cys-突变体，仅具有野生型活性的2-3％。尽管具有低的活性，但是该双重突变体可合成正常大小的HA。与双重Cys-突变体seHAS(C226，262A)类似，三重Cys-突变体seHAS(Δ3C)C281也具有非常低的活性，且也合成正常大小的HA。这些结果显示Cys367的变化不导致HAS活性的降低，且与表VIII中单Cys-突变体的结果一致。事实上，seHAS的C367A和spHAS的C366A突变体相对于野生型的酶均显示活性的增加。
有趣的是，seHAS(C226，262A)的较低功能性基本可由引入C281A改变以生成三重Cys-突变体seHAS(Δ3C)C367而补救。可能的是，通过使Cys226和Cys262突变为Ala而发生的可能与HA链长度相关的结构或功能限制基本可由同时突变Cys281补救。三重突变体seHAS(Δ3C)C367和Cys-null突变体具有相似的活性和HA产物大小，提示对有害的Cys226/Cys262双重突变体相似程度的补偿。seHAS的Cys-null突变体保持了野生型活性的约20％。该结果显示Cys226和Cys262在seHAS的总活性和动力学特征中起重要作用，但Cys281可在调节HA大小中起作用。基于最近确定的spHAS拓扑学及其与seHAS高水平的同源性(72％相同的加10％相似的残基)，我们知道Cys226、Cys262和Cys281存在于seHAS的中央结构域中(图1)，该结构域是含有β-糖基转移酶家族基元的区域。拓扑学模型预测Cys367非常靠近跨膜结构域4，且可能不靠近糖基转移酶基元。
基于NEM-修饰和Cys-诱变结果，看来一种或多种Cys残基可能靠近seHAS或spHAS酶的核苷酸-糖结合位点定位。该可能性提供了解释这些Cys残基的修饰或改变为何干扰酶功能并降低酶活性的基本原理。初步的结果提示每一种底物(UDP-GlcUA或UDP-GlcNAc)均可保护seHAS免受NEM的抑制(图6)，从而支持至少一个Cys位于或靠近核苷酸-糖结合袋中的假定。与该位点的底物结合看来可干扰NEM和邻近的Cys残基之间的相互作用。对于几个其他的蛋白质已报道了关于Cys残基与底物结合位点接近性的类似结果，该蛋白质包括乳糖通透酶、谷胱甘肽合酶、糖皮质激素受体、视黄酸受体β和质膜质子ATP酶。所有这些研究发现Cys残基由巯基试剂的修饰降低了蛋白质的活性，即使Cys诱变不使蛋白质失活。另一个最近的研究生成了400个四环素转运蛋白的Cys-扫描突变体，以对膜的拓扑学和膜制剂中蛋白质的活性位点进行作图。四环素仅保护特定Cys残基不与NEM反应的能力和随后蛋白质的失活使得能够对四环素结合位点和通道进行作图。
在估计Cys残基在spHAS及其他I型HAS家族成员中重要性中的另一个重要考虑是其在HA转位中的参与。当这些酶连续地将多糖伸出细菌细胞或质膜时，该酶能够保持于生长的HA链上的机制仍然未知。该伸出过程称为转位，这是因为HA未完全跨过细胞膜转移及如在典型的转运过程中发生的那样进行释放。一些细菌对多糖如聚唾液酸的合成和细胞外累积常需要由非常复杂的多基因操纵子编码的因子和蛋白质(Moxon和Kroll，1990；Bliss和Silver，1996)。相反，迄今为止所有的遗传和生物化学证据(综述见Weigel，1998)均证明链球菌酶能够在不存在任何起始物或其他蛋白质时起始HA链形成及HA链的快速延伸。除两个糖核苷酸底物和Mg+2之外，纯化的spHAS或seHAS酶仅需要磷脂(Tlapak-Simmons等人，1999a)以合成高分子量的HA(＞106Da)。特别地，心磷脂显著地刺激去污剂溶解的或纯化的spHAS和seHAS的比活性。HA产物的大小分布对于分离的膜中的酶或用十二烷基麦芽糖苷(dodecylmaltoside)溶解和亲和纯化后的酶是非常相似的(数据未显示)。因此，天然完整的磷脂双层和膜的存在不影响HAS酶合成HA的能力。目前，尚无估计野生型或Cys-突变体酶使HA转位的能力的适当测定。
保留酶活性的seHASCys-null和/或spHASCys-null突变体的生成使得能够对HAS酶的四级结构和在底物结合、催化和HA转位过程中发生的构象变化进行深入的分析。为了理解该过程，必须以更明确的途径确定蛋白质中各种结构域的相互作用和分子接近性。在预期位置含有一个唯一的Cys残基的seHAS或spHAS的Cys-扫描突变体使得人们能够通过用适当的探针修饰该Cys残基而应用电子顺磁共振研究。该方法使得如Voss等人能够确定所述修饰的残基与Lac通透酶的其他区域的接近性。类似地，用荧光探针对一个唯一的Cys残基的化学修饰使得能够对蛋白质不同区域中的局部环境进行系统分析。seHAS和spHAS中相互作用的或接近的结构域也可通过估计含有2个Cys残基的突变体中二硫键的形成而确定。这种方法有助于阐明seHAS的结构和功能，并增加我们对HAS家族如何能够合成HA的理解。
材料与方法载体、引物和试剂作为Altered Sites Mutagenesis试剂盒一部分的pEx-1购自Promega。表达载体pKK223购自Pharmacis Biotech Inc.。大肠杆菌SURE细胞购自Stratagene。成功的诱变通过购自Stratagene的QUICK CHANGETMMutagenesis试剂盒实现。引物由The GreatAmerican Gene Company(Ransom Hill Bioscience，Inc.，CA)、NBI或Midland Certified Reagent Company合成。所有诱变寡核苷酸均由Genosys Biotechnologies，Inc.(Spring，TX)合成，并通过反相层析纯化。Cy-5荧光测序引物由Molecular Biology Resource Facility，Oklahoma University Health Sciences Center合成。非放射性标记的UDP-GlcUA和2，4，6-三羟苯乙酮购自Fluka。UDP-GlcNAc购自Sigma。UDP-[14C]GlcUA(300mCi/mmol)和14C-NEM(40mCi/mmol)购自New England Nuclear。琼脂糖购自Bio-Rad。(+)-biotinyl-3-maleimidopropionamidyl-3，6-dioxaoctanediamine(生物素-PEO-马来酰亚胺)购自Pierce Chemical Co.。除另有说明外，NEM和所有其他试剂均购自Sigma。为了证实HAS突变体的整个ORF，应用购自Amersham的T7或PCR测序试剂盒或通过OklahomaUniversity Health Sciences Center的Department of Microbiology &Immunology实施的微量测序设备进行了DNA测序。抗-His5单克隆抗体和Ni+2-NTA树脂购自Qiagen。
定点诱变将具有在3’末端编码His6尾巴的融合的seHAS基因(seHAS-His6)克隆入pKK233中。设计诱变引物以将位置226、262、281和367的半胱氨酸改变为Ala或Ser。将2个编码所需突变的互补的寡核苷酸引物用于生成单Cys突变体(表X)。根据生产商的说明书应用QuickChange方法实施诱变。使含有seHAS-His6基因的pKK233质粒生长于SURE细胞中，应用Spin Miniprep Kit(Qiagen)进行纯化并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析以证实正确的大小。将纯化的pDNA用作模板，以用于由一对诱变引物进行的引物延伸反应。应用pfu DNA聚合酶的PCR扩增条件为16个如下循环95℃进行1分钟，58℃进行1分钟和68℃进行18分钟。该扩增生成了具有交错切口的突变质粒，然后将该质粒用DpnI处理以消化甲基化和半甲基化的亲代DNA。然后将消化的pDNA转化入SURE细胞中，并通过用荧光标记的终止子(ABI Prism 377 MODEL program，v2.1.1)对分离的质粒DNA进行测序以筛选菌落中预期的突变。选择的突变体的完整ORF通过在Pharmacia ALF Express DNA Sequencer上用Cy-5标记的载体引物在两个方向的测序进行证实。应用ALF Manager，v3.02分析数据。seHAS-His6的双重、三重和无效Cys-突变体分别用适当的单、双重或三重Cys-突变体质粒DNA作为模板进行制备。
表X用于制备seHAS突变体的合成的寡核苷酸黑体显示改变的密码子。所示的所有引物均为有义方向。
seHAS序列突变体SEQ ID NOC226A5′-GGTAATATCCTTGTTGCCTCAGGTCCGCTTAGCC226S5′-GGTAATATCCTTGTTTCCTCAGGTCCGCTTAGCC262A5′-ATTGGTGATGACAGGGCCTTGACCAACTATGCAC226S5′-ATTGGTGATGACAGGTCCTTGACCAACTATGCAC281A5′-CAATCCACTGCTAAAGCTATTACAGATGTTCCTC281S5′-CAATCCACTGCTAAATCTATTACAGATGTTCCTC367A5′-TTCATTGTTGCCCTGGCTCGGAACATTCATTACC367S5′-TTCATTGTTGCCCTGTGTCGGAACATTCATTAC表XI用于spHAS的Cys到Ser/Ala定点诱变的寡核苷酸。
将spHAS中位置124、225、261、280、366和402的Cys残基用与编码链互补的单诱变寡核苷酸和Altered Sites试剂盒转变为Ser，或者用一对互补的诱变寡核苷酸和Quick Change Mutagenesis试剂盒转变为Ala(在后一种情形中，仅显示了与编码链互补的正向引物)。改变的密码子以黑体显示。
SpHAS突变诱变寡核苷酸 SEQ ID NO(C124S)5′-TAACGTTTCGAGAAATATCCAC(C225S)5′-GGTCCTGAGGAAACTAAAAT(C261S)5′-ATTTGTTAAAGATCGATCATC(C280S)5′-ATCAGTATCAGATCTAGCTGT(C366S)5′-AACATTACGAGATAAAGCAAC(C402S)5′-TTTAATGGTGGATAAAGAATA(C124A)5′-AACGATAACGTTTCGAGCAATATCCACTTCTCT(C225A)5′-CAATGGTCCTGAGGCAACTAAAATATTACC(C261A)5′-AGCATAATTTGTTAAAGCTCGATCATCCCCAAT(C280A)5′-AGGTACATCAGTATCAGCTCTAGCTGTTGATTG(C366A)5′-AACATTACGAGCTAAAGCAAC(C402A)5′-CGTATTTTTAATGGTGGCTAAAGAATAAAGTTT
表XIIseHAS和spHAS的所有可能的半胱氨酸突变体如在此处前文中所述的，每一个所列的半胱氨酸均可突变为丙氨酸、丝氨酸或任何其他氨基酸。此外，当超过一个半胱氨酸突变时，所有突变可为相同的(即均为Cys-Ala突变)，或者含有多重半胱氨酸突变的突变体可具有Cys-Ala、Cys-Ser和Cys-Xaa突变的组合。

spHAS的单突变体通过Altered Sites Mutagenesis或QuickChange Mutagenesis规程应用引物(表XI)生成，该引物设计为用于改变在C-末端含有His6的spHAS的位置124、225、261、280、366或402的Cys残基(Tlapak-Simmons等人，1999a)。在生成并证实在Altered Sites载体中产生的每一个spHAS(Cys到Ser)突变体的完整序列之后，将HAS ORF中的内部限制位点用于将突变的区域转移到pKK223中的spHAS插入物中(含有HAS的该载体称为pKK3K)。spHAS的Cys到Ala突变体直接在pKK3K载体中应用Quick Change Mutagenesis方法生成。将定点诱变用于生成C124，C402A双重突变体，然后通过限制片段交换添加C366A以生成三重突变体。定点诱变也可用于生成双重突变体spHAS(C261A，C280A)。含有5个或6个突变的Cys残基的突变体是利用限制位点组合含有不同突变的spHAS片段生成的。例如，将AvrII和MfeI用于组合spHAS(C124A，C366A，C402A)三重Cys-突变体和spHAS(C261A，C280A)双重突变体以生成仅有Cys225完整的spHAS。最后，用BglII和AvrII将spHAS(C225A)剪接为后面的五重Cys-突变体以生成称为spHASCys-null的Cys-null突变体。所有Cys到Ala/Ser突变体均通过自动DNA测序而在完整ORF上进行证实。
巯基试剂处理对seHAS和spHAS活性的作用和seHAS的Cys突变体动力学常数的确定将用含有各种seHAS突变体的质粒转化的大肠杆菌SURE细胞于32℃在LB培养基中剧烈振荡生长到A600为～0.8，并用1mM的异丙基-β-硫代半乳糖苷诱导3小时。收获细胞，并如前文所述制备膜。于37℃在100μl具有20mM MgCl2、1mM DTE、240μM UDP-GlcUA、0.7μM UDP-[14C]GlcUA和0.6-1.0mM UDP-GlcNAc的50mM pH7.0的磷酸钠和磷酸钾中，在100μM含有50mM NaCl、20mM MgCl2、1mM二硫苏糖醇、1mM UDP-GlcUA、0.68μM UDP-GlcUA和1mMUDP-GlcNAc的25mM pH7.0的磷酸钠和磷酸钾中。一些测定也含有0.1mM EDTA和20％甘油(v/v)。为了起始酶反应，加入～0.5-40μg的膜蛋白，并将混合物于30℃在MicroMixer X-36(Tiatec)上轻轻振荡1-2小时。反应通过添加SDS至终浓度为2％(w/v)而终止。放射性的[14C]GlcUA的整合通过下行纸色谱法进行确定，而Km和Vmax值如Tlapak-Simmons等人(1999b)所述的进行确定。数据通过米曼氏或希尔方法进行分析。蛋白质含量通过Bradford方法应用牛血清白蛋白作为标准进行确定。所有Cys-突变体或巯基处理的seHAS样品均应用2种或3种独立的膜制剂进行双次或三次的测定。结果表示为平均数±标准误。所有酶测定均在关于时间和蛋白质浓度线性的条件下进行。没有一种seHAS突变体酶在应用的条件下是不稳定的。
由seHAS变体产生的HA大小的确定由野生型seHAS或Cys-突变体合成的HA的相对Mr是通过对在上述测定条件下合成的14C-标记的HA产物的琼脂糖凝胶电泳确定的。野生型seHAS在这些稳定状态的条件下在小于5分钟内合成并释放HA链，从而每一种酶分子在温育过程中平均合成大于10个HA链。反应通过在95℃加热1分钟而终止，然后高速离心混合物并回收含有HA的上清液。用Microcon YM-3滤器(Amicon Bioseparations，Inc.)将样品浓缩～10-倍，并在60mM MgCl2存在时，用DNase和RNase(各自4μg/ml)于22℃处理30分钟。然后将样品和DNA标准的组合在1.3％(w/v)琼脂糖凝胶上于80-90V进行电泳。不经加热使凝胶干燥，并对Biomax-MR胶卷(Kodak)暴光1-4周。应用FluorchemTM8000(Alpha Innotech Corp.)图象分析工作站扫描放射自显影图以生成数字文件。作为对照，将样品用链霉菌属(Streptomyces)透明质酸盐裂解酶(80单位)于37℃处理过夜，这将导致放射性标记的条带完全消失。
由spHAS变体(表IX)产生的HA链长度的确定。
HAS突变体HA大小分布是通过琼脂糖凝胶电泳进行确定的。使含有野生型或突变体Has的膜在25mM pH7.0的磷酸钠/钾中的0.5mM UDP-GlcUA和1.5mM UDP-GlcNAc、75mM NaCl、1mM DTT、15％甘油、10mM MgCl2中与0.68-8.16μM UDP-[14C]GlcUA于30℃温育1小时，同时在Taitec E-36 micromixer中振荡。加入EDTA至0.1M以终止反应。将1mg/ml绵羊睾丸透明质酸酶加入到对照管中，并于37℃温育1小时以确保形成的产物为HA。加入5mg/ml链霉蛋白酶以消化可结合HA的蛋白质成分，并使反应物于4℃温育大于12小时。将反应物直接加载到1％琼脂糖凝胶上或在加载前进行乙醇沉淀。电泳后反应物的成分保留在或靠近加样孔。进行乙醇沉淀以降低该污染。将反应物于21,000×g离心10分钟。将十分之一体积的3M pH5.2的乙酸钠和三倍体积的乙醇加入到上清液中。将管混合并于-20℃温育1小时。通过在21,000×g离心10分钟收集HA。将沉淀风干并悬浮于水或PBS中。将悬浮液与购自Gibco BRL的高分子量和KB梯度DNA标准一起加载于琼脂糖凝胶中。电泳停止后，使凝胶干燥并对phosphoscreen暴光1小时～大于2周。通过应用Molecular DynamicsPhosphoimager的筛选而获得凝胶图象。HA链的大小通过相对于DNA标准的迁移距离进行估计。HA产物的大小分布通过在对每一个泳道获得的整合密度值(IDV)的MW范围上进行整合而估计。优选的HA产物大小(峰大小)由MW范围指明，其中在该MW范围中含有最大的IDV。
膜中seHAS蛋白质浓度的确定和seHAS活性的归一化。
分离的膜中的重组seHAS蛋白质是包含～5-8％的总蛋白质的主要成分，是通过SDS-PAGE与其他主要蛋白质充分分离的，且可易于在考马斯蓝染色的凝胶中鉴定的。使含有野生型或突变的seHAS的大肠杆菌膜溶解，并根据Laemmli的SDS-PAGE方法在10％(w/v)凝胶上进行电泳。每一种膜制剂中的seHAS蛋白质量均通过应用FluorchemTM8000(Alpha Innotech Corp)的染色凝胶图象分析进行定量。考马斯蓝染色的seHAS条带线性通过加载不同量的膜蛋白质而证实。为了生成标准曲线，使各种量的亲和纯化的seHAS-His6进行相同的SDS-PAGE，并对每一个条带确定整合密度值(IDV)。将IDV对纯seHAS的pmol进行绘图。然后将含有野生型或突变蛋白质的膜中seHAS条带的IDV值与标准进行比较以估计每mg膜蛋白质中seHAS蛋白质的含量。然后将这些数据用于归一化野生型和每一种变体seHAS的膜制剂中的seHAS酶活性。
膜中HAS的化学修饰。
NEM、IAA或其他巯基试剂的贮存液(10-100mM)在pH7.0的PBS中制备。使含有seHAS或spHAS的膜悬浮液与0-5mM巯基试剂于4℃进行温育，并通过添加DTE至10mM的终浓度而停止反应。然后如上文所述测定膜的HAS活性。
用14C-NEM对seHAS进行标记。
将从野生型seHAS和6个seHAS双重Cys-突变体的每一个中分离的膜于4℃与2.5mM14C-NEM(～8×106dpm)温育5分钟。通过添加DTE至5mM的终浓度而终止反应。通过与10％的三氯乙酸于4℃温育过夜而沉淀总的膜蛋白质，然后通过2个循环的离心和用5％的三氯乙酸的重悬而去除游离的14C-NEM。将沉淀的蛋白质溶于1×SDS聚丙烯酰胺样品缓冲液中，通过加入0.1N NaOH进行中和，并用10％的凝胶通过SDS-PAGE进行分析。用Model PDSIP60densitometer(Molecular Dynamics)扫描考马斯蓝染色的凝胶，然后用闪烁体进行处理，并进行应用Biomax-MR(Kodak)胶卷的荧光自显影和约1周的暴光。将从单独用载体转化的细胞中制备的大肠杆菌膜用作对照，该膜不含有seHAS。
SeHAS衍生物的MALDI-TOF分析。
使野生型seHAS-His6与Ni+2-次氮基三乙酸螯合树脂(Qiagen)结合，洗涤，并用生物素-PEO-马来酰亚胺(10mg/ml)在冰上处理2小时。在洗涤柱子之后，将酶用含有0.5％(v/v)三氟乙酸和0.02％(w/v)的十二烷基麦芽糖苷的蒸馏水洗脱。处理的seHAS样品中Cys残基的修饰程度应用MALDI-TOF Voyager Elite质谱仪(AppliedBiosystems，Framingham，MA)进行确定，该质谱仪配备有N2激光(337nm)，位于NSF EPSCoR Oklahoma Laser Mass SpectrometryFacility。将样品(1μl)点样于样品平板上，随后加入基质溶液(1μl)，并使其风干。所用的基质为20mg/ml溶于50％的乙腈中的2，4，6-三羟苯乙酮溶液，其中该乙腈含有0.1％的三氟乙酸和0.05％(w/v)的十二烷基麦芽糖苷。将样品应用延迟的300ns提取、87.8％的栅格电压以线性正离子模式进行分析，并进行25kV的加速电压。常规地应用马apomyoglobin和牛血清白蛋白(分别为16,951和66,430Da)进行外部和内部校正。光谱为80-120次扫描的平均结果，并应用19点的Savitsky-Golay平滑选项(smoothing option)进行处理，该选项包括于由生产商提供的软件中。
膜中重组spHAS-H6含量的确定从表达突变体或野生型spHAS的大肠杆菌SURE品系中分离膜，通过根据Laemmli(1970)方法的SDS-PAGE进行分级分离，并将蛋白质电转移到硝化纤维素上，如Towbin等人(1979)所述，并具有微小的修改(Tlapak-Simmons等人，1998)。蛋白质印迹进行如下，即将这些点与作为一级抗体的生物素化的抗His5单克隆抗体于室温温育1小时，然后洗涤并与如上文所述制备的3μg/ml125I-链霉抗生物素蛋白进行温育。于室温进行1小时后，将点洗涤，干燥并对Phosphoscreen暴光1～72小时。用Molecular DynamicsPhosphoimager对该筛选进行分析，并获得每一个HAS条带的整合密度值。也获得渐增量的亲和纯化的spHAS的整合密度值(Tlapak-Simmons等人，1999a)，该值用作相同印迹中的内部标准以生成标准曲线。如果必需，则制备膜样品的稀释物以确保所有HAS量的估计均在测定的线性范围内。然后将这些给出与渐增的蛋白质线性反应的膜样品与标准曲线进行比较以计算每μl膜悬浮液中存在的spHAS的量。然后将这些值用于使应用来自各种spHAS突变体的膜获得的动力学结果归一化。
HAS突变体的酶分析使预先用含有野生型或突变体spHAS基因的质粒转化的大肠杆菌SURE细胞生长到A600为～1.2，并用1mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导3小时。收获细胞，并如前文所述制备膜(Tlapak-Simmons等人，1999a)。突变体spHAS的活性通过在分离的膜中测量其Vmax和Km值进行估计，并如上文所述对表达的酶量进行归一化。Km值应用下行纸色谱法测定进行确定(Tlapak-Simmons等人，1999b)，其中使一种UDP-糖底物保持恒定，而将另一种从0.01mM改变为4mM。数据通过应用线性回归进行分析，对于UDP-GlcUA使用Haynes-Wolf图，而对于UDP-GcNAc则使用希尔图。
NEM对spHAS活性的抑制将来自野生型和各种spHAS突变体(即C124，402A；C261，280A；C124，366，402A；C124，261，280，366，402A和Cys-null突变体)的膜制剂于冰上在具有或不具有20mM NEM的50mM pH7.0的磷酸钠、磷酸钾，75mM NaCl和10％(v/v)甘油中温育90分钟。然后通过添加下述成分至所示终浓度而估计膜样品合成HA的能力1mM UDP-GlcUA、1mM UDP-GlcNAc、25mM pH7的磷酸钠/钾中的0.68μM UDP-[14C]GlcUA、75mM NaCl、10mM MgCl2、1mM二硫苏糖醇、0.1mM EGTA、15％甘油。将反应物于30℃在Taitec E-36micromixer中振荡1小时，通过添加SDS至2％(w/v)终止反应，并点样于No.3MM Whatman纸上以用pH5.5的1mM乙酸铵/乙醇(7∶13)进行过夜的下行纸色谱。通过液体闪烁光谱学估计[14C]GlcUA向高分子量HA中的整合以确定最初剩余的放射性。通过用链霉菌透明质酸酶处理后显示后一种材料完全丧失而获得了对该后一种材料是真实HA的证据。
通过MALDI-TOF MS估计spHAS中二硫键的形成。
如前文所述使野生型spHAS-His6与Ni+2螯合柱(Qiagen)结合并洗涤(Tlapak-Simmons等人，1999a)。在仍然与树脂结合时，使酶与生物素-PEO-马来酰亚胺(10mg/ml)于4℃在6M盐酸胍存在或不存在时温育2小时。洗涤柱子，并将seHAS-His6用含有0.5％(v/v)三氟乙酸和0.02％(w/v)的十二烷基麦芽糖苷的蒸馏水洗脱。为了估计Cys残基的修饰程度，将含有纯化的spHAS的样品应用MALDI-TOF Voyager Elite质谱仪(Applied Biosystems，Framingham，MA)进行确定，该质谱仪配备有N2激光(337nm)，位于NSF EPSCoR Oklahoma Laser Mass Spectrometry Facility。将1μl等份试样的样品点样于样品平板上，随后加入1μl基质，并使其风干。所用的基质为溶于含有0.1％的三氟乙酸和0.005％(w/v)的十二烷基麦芽糖苷的50％乙腈中的2，4，6-三羟苯乙酮饱和溶液。将样品应用延迟的300ns提取、87.8％的栅格电压以线性正离子模式进行分析，并进行25kV的加速电压。常规地应用马apomyoglobin和牛血清白蛋白(分别为16,951和66,430Da)进行外部校正。数据常规地应用19点的Savitsky-Golay平滑选项进行处理，该选项包括于由生产商提供的软件中。
本发明包括一种功能活性的透明质素合酶，该合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基，从而该功能活性的透明质素合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性。也公开了利用重组宿主细胞生产透明质酸的方法，该宿主细胞具有编码酶活性改变的功能活性透明质素合酶的表达构建体。
因而，显而易见的是根据本发明提供了一种重组宿主细胞，该宿主细胞具有编码在其中引入的酶活性HAS的编码区的纯化核酸区段，以及提供了从该宿主细胞中生产透明质酸的方法，该方法完全满足在上文中提出的目标和利益。尽管本发明结合特定的实施方案进行了描述，但明显的是许多改变、修饰和变体对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，应包括所有这些在附加的权利要求的精神和广泛范围之内的改变、修饰和变体。
在本申请中提出的所有数字和数量测量(包括在实施例和权利要求中的)均为近似值。
在此处示例性公开或申请专利的本发明可适当地在不存在任何未在此处特定地公开或申请专利的成分时实施。因而，本发明可包含在此处公开或申请专利的成分，由在此处公开或申请专利的成分组成或基本由此处公开或申请专利的成分组成。
下面的权利要求应保护与本发明一致的最广泛的可能范围。这些权利要求不必要局限于优选实施方案或在实施例中显示的实施方案。
参考文献将下述参考文献以它们为在在此处提出的那些提供示例性程序上或其他细节补充的程度特定地在此处整体引入作为参考，正如在此处特别提出的。
Abatangelo，G.，and Weigel，P.H.(2000)(editors)New Frontiers in MedicalSciencesRedefining Hyaluronan.Elsevier Science B.V.，Amsterdam.Appel，A.，Horwitz，A.L.，and Dorfman，A.(1979)J.Biol.Chem.254，12199-12203.
Atkinson，E.M.and Long，S.R.(1992)Mol.Plant.Microbe.Interact.5,439-442.Bliss，J.M.and Silver，R.P.(1996)Mol.Microbiol.21，221-231.Bradford，M.M.(1976)Anal.Biochem.72，248-254.
Breton，C.，and Imberty，A.(1999)Curr.Opin.Struct.Biol.9，563-571.Chakraborti，P.K.，Garabedian，M.J.，Yamamoto，K.R.，and Simons，S.S.，Jr.(1992)J，Biol.Chem.267，11366-73.
DeAngelis，P.L.，Papaconstantinou，J.and Weigel，P.H.(1993a)J.Biol.Chem.268，14568-14571.
DeAngelis，P.L.，Papaconstantinou，J.and Weigel，P.H.(1993b)J.Biol.Chem.268，19181-19184.
DeAngelis，P.L.，Yang，N.and Weigel，P.H.(1994)Biochem.Biophys.Res.Commun.199，1-10.
DeAngelis，P.L and Weigel，P.H.(1994)Biochem.33，9033-9039.DeAngelis，P.L.(1996)Biochem.35，9768-9771.
DeAngelis，P.L.and Achyuthan，A.M.(1996)J.Biol.Chem.271，23657-23660.DeAngelis，P.L.，Jing，W.，Drake，R.R.and Achyuthan，A.M.(1998)J. Biol. Chem.273，8454-8458.
DeAngelis，P.L.，Jing，W.，Graves，M.V.，Burbank，D.E.and Van Etten，J.L.(1997)Science，278，1800-1803.
DeAngelis，P.L.(1999) Cell. Mol.Life Sci. 56，670-682.Determan，H.(1968) GelChromatography，Springer-Verlag，Inc. New York.Evered，D.，and Whelan，J.(eds.)(1989) The biology of hyaluronan.Ciba Fnd.Symposium 143，1-288.
Fenderson，B.A.，Stamenkovic，I.，and Aruffo，A.(1993) Differentiation 54，85-98.Frillingos，S.，Sahin-Toh，M.，Wu，J.and Kaback，H.R.(1998) FASEB J.12，1281-1299.
Heldermon，C.D.，DeAngelis，P.L.and Weigel P.H.(2001) J. Biol. Chem. 276，2037-2046.
Hill，A.V.(1913) Biochem. J.7，471-480.
Horton，M.R.，Olman，M.A.，Bao，C.，White，K.E.，Choi，A.M.，Chin，B.Y.，Noble，P.W..and Lowenstein，C.J.(2000)Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.279，707-715.
Itano，N.and Kimata，K.(1996a)J. Biol. Chem. 271，9875-9878.
Itano，N.and Kimata，K.(1996b) Biochem. Biophys. Res.Commun. 222，816-820.
Ishimoto，N.，Temin，H.M.，and Strominger，J.L.(1966)J. Biol. Chem.241，2052-2057.
Itano，N.，Sawai，T.，Yoshida，M.，Lenas，P.，Yamada，Y.，Imagawa，M.，Shinomura，T.，Hamaguchi，M.，Yoshida，Y.，Ohnuki，Y.，Miyauchi，S.，Spicer，A.P.，McDonald，J.A.，and Kimata，K.(1999)J.Biol.Chem. 274，25085-25092.
Ito，K.，Sato，T.，and Y.ura，T.(1977) Cell，11，551-559.
Jung，K.，Jung，H.，and Kaback，H.R.(1994) Biochemistry 33，3980-3985.
Kass，E.H.and Seastone，C.V.(1944)J.Exp.Med.79，319-330.
Kato，H.，Tanaka，T.，Nishioka，T.，Kimura，A.，and Oda，J. (1988)J.Biol. Chem.263，11646-11651.
Knudson，C.B.，and Knudson，W.(1993) FASEB J.7，1233-1241.
Kumari，K.and Weigel，P.H.(1997)J. Biol.Chem.，272，32539-32546.
Laemmli，U.K.(1970)Nature 227，680-685.
Lansing，M.，Lellig，S.，Mausolf，A.，Martini，I.，Crescenzi，F.，O′Regan，M.，andPrehm，P.(1993)Biochem.J. 289，179-184.
Laurent，T.C.，and Fraser，J.R.E.(1992)Hyaluronan.FASEB J.6，2397-2404.
Lee，H.G.and Cowman，M.K.(1994)Anal.Biochem.219，278-287.
Lin，Y.，Mahan，K.，Lathrop，W.F.，Myles，D.G.，and Primakoff，P.(1994)J. Cell Biol.125，1157-1163.
Malinowski，N.M.，Cysyk，R.L.，and August，E.M.(1995)Biochem.and Molec.Biol.Intl.35，1123-1132.
Markovitz，A.，J.A.Cifonelli，and Dorfman A.(1959)J.Biol.Chem.234，2343-2350.
McDonald，J. and Spicer，A.(1998).InScience of Hyaluronan Today(V.C.Hascalland M.Yanagishita，eds)chapter 7，www.GlycoForum.gr.ip.
Meyer，M.F.and Kreil，G.(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93，4543-4547.Michaelis，L.and Menten，M.L.(1913)Biochem.Z.49，333-338.
Moxon，E.R.and Kroll，J.S.(1990)Curr.Top.Microbiol.Immunol.6，65-85.
Ng，K.F.and Schwartz，N.B.(1989)J.Biol.Chem.264，11776-11783.
Ohno，S.，Tanimoto，K.，Fujimoto，K.，Ijuin，C.，Honda，K.，Tanaka，N.，Doi，T.，Nakaharra，M.，Tanne，K.(2001) Biochim Biophys Acta 1520，71-78.
Ohya，T.and Kaneko，Y.(1970)Biochim.Biophys.Acta 198，607-609.
Petrov，V.V.，Pardo，J.P.，and Slayrnan，C.W.(1997)J.Biol.Chem.272，1688-1693.
Philipson，L.H.，and Schwartz，N.B.(1984)J.Biol.Chem.259，5017-5023.Prehm，P.(1983) Biochem.J.211，181-189.
Prehm，P.(1983)Biochem.J. 211，191-198.
Prehm，P.(1984).Biochem.J. 220597-600.
Prehm，P.and Mausolf，A.1986.Biochem.J. 235887-889.
Rosa，F.，Sargent，T.D.，Rebbert，M.L. Michaels，G.S.，Jamrich，M.，Grunz，H.，Jonas，E.，Winkles，J.A.and Dawid，I.B.(1988)Dev.Biol.129，114-123.
Shyjan，A.M.，Heldin，P.，Butcher，E.C.，Yoshino，T.and Briskin，M.J.(1996)J.Biol.Chem.271，23395-23399.
Spicer，A.P.，Augustine，M.L.and McDonald，J.A.(1996) J. Biol.Chem.271，23400-23406.
Spicer，A.P.and McDonald，J.A.(1998)J. Biol. Chem. 273，1923-1932.
Sugahara，K.，Schwartz，B.N.，and Dorfman，A.(1979)J.Biol.Chem.2546252-6261.
Tamura，N.，Konishi，S.，Iwaki，S.，Kimura-Someya，T.，Nada，S.，Yamaguchi，A.(2001)J.Biol.Chem.276，20330-20339.
Tlapak-Simmons V.L.，Baggenstoss，B.A.，Clyne，T.and Weigel，P.H.(1999a)J.Biol.Chem.274，4239-4245.
Tlapak-Simmons V.L.，Baggenstoss，B. A.，Kumari，K.，Heldermon，C.，and Weigel，P.H.(1999b)J. Biol.Chem.274，4246-4253.
Tlapak-Simmons，V.L，Kempner，E.S.，Baggenstoss，B. A. and Weigel，P.H.(1998)J.Biol.Chem.273，26100-26109.
Toole，B.P.(1997)J.Intern.Med.242，35-40.
Towbin，H.，Steahelin，T.and Gordon，J.(1979)Proc. Natl. Acad.Sci.U.S.A.76，4350-4354.
Triscott，M.X.and van de Rijn，I.(1986)J.Biol.Chem.261，6004-6009.
Usui，T.，Suzuki K.，Kaji，Y.，Amano，S.，Miyata，K.，Heldin，P.，Yamashita，H.(1999) Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.40，563-7.
van de Rijn，I.and Drake，R.R.(1992)J.Biol.Chem.267，24302-24306.Voss，J.，Hubbell，W.L.，Hernandez-Borrell，J.and Kaback，H.R.(1997)Biochemistry 36，15061-15066.
Wang，Q.and Kaback，H.R.(1999)Biochemistry 38，16777-16782.
Ward，P.N.，Field，T.R.，Ditcham，W.G.Maguin，E.and Leigh，J.A.(2001) Infect.Immun.69，392-399.
Watanabe，K.and Yamaguchi，Y.(1996)J.Biol.Chem.271，22945-22948.
Weigel，P.H.，Hascall，V.C.and Tammi，M.(1997)J. Biol.Chem.272，13997-14000.
Weigel，P.H.(1998).Bacterial hyaluronan synthases.InScience of HyaluronanToday(V.C.Hascall and M.Yanagishita，eds)chapter 6，www.GlycoForum.gr.ip.
Wessels，M.R.，Goldberg，J.B.，Moses，A.E.，and Dicesare，T.J. (1994) Infect.Immun. 62，433-441.
Wessels，M.R.，Moses，A.E.，Goldberg，J.B.，and Dicesare T.J.(1991) Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.88，8317-8321.
White，S.H.and Wimley，W.C.(1999)Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.28，319-365.
Whitnack，E.，Bisno，A.L.，and Beachey，E.H.(1981)Infect.Immun.31，985-991.
Wolfgang，C.L.，Zhang，Z-P.，Gabriel，J.L.，Pieringer，R.A.，Soprano，K.J.，andSoprano，D.R.(1997)J.Biol.Chem.272，746-753.
Wu，J.，and Kaback，R.H.，(1994)Biochem.33，12166-12171.
Yang，et al.，(1994) EMBO J.13286-960.
Yoshida，M.，Itano，N.，Yamada，Y.and Kimata，K.(2000)J.Biol.Chem.275，497-506.
序列表<110>WEIGEL，PAUL HKUMARI，KSHAMA<120>透明质素合酶及其制备和应用方法<130>620473-3/JP/336,105<140>PCT/US02/38596<141>2002-12-03<150>60/336,105<151>2001-12-03<150>10/011,771<151>2001-12-11<160>92<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>1254<212>DNA<213>类马链球菌<400>1atgagaacat taaaaaacct cataactgtt gtggccttta gtattttttg ggtactgttg 60atttacgtca atgtttatct ctttggtgct aaaggaagct tgtcaattta tggctttttg120ctgatagctt acctattagt caaaatgtcc ttatcctttt tttacaagcc atttaaggga180agggctgggc aatataaggt tgcagccatt attccctctt ataacgaaga tgctgagtca240ttgctagaga ccttaaaaag tgttcagcag caaacctatc ccctagcaga aatttatgtt300gttgacgatg gaagtgctga tgagacaggt attaagcgca ttgaagacta tgtgcgtgac360actggtgacc tatcaagcaa tgtcattgtt catcggtcag agaaaaatca aggaaagcgt420catgcacagg cctgggcctt tgaaagatca gacgctgatg tctttttgac cgttgactca480
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<212>PRT<213>多杀性巴斯德氏杆菌<400>8Met Asn Thr Leu Ser Gln Ala Ile Lys Ala Tyr Asn Ser Asn Asp Tyr1 5 10 15Gln Leu Ala Leu Lys Leu Phe Glu Lys Ser Ala Glu Ile Tyr Gly Arg20 25 30Lys Ile Val Glu Phe Gln Ile Thr Lys Cys Gln Glu Lys Leu Ser Ala35 40 45His Pro Ser Val Asn Ser Ala His Leu Ser Val Asn Lys Glu Glu Lys50 55 60Val Asn Val Cys Asp Ser Pro Leu Asp Ile Ala Thr Gln Leu Leu Leu65 70 75 80Ser Asn Val Lys Lys Leu Val Leu Ser Asp Ser Glu Lys Asn Thr Leu85 90 95Lys Asn Lys Trp Lys Leu Leu Thr Glu Lys Lys Ser Glu Asn Ala Glu100 105 110Val Arg Ala Val Ala Leu Val Pro Lys Asp Phe Pro Lys Asp Leu Val115 120 125Leu Ala Pro Leu Pro Asp His Val Asn Asp Phe Thr Trp Tyr Lys Lys130 135 140Arg Lys Lys Arg Leu Gly Ile Lys Pro Glu His Gln His Val Gly Leu145 150 155 160
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ttcctggaga tacgcagggt aaataagagt gagcttcctt gcagctttaa gaagacagtg 300gctctgacca ttgctgggta tcaggagaac cctgagtacc tgataaagtg cttggaatcc 360tgcaagtatg tgaaataccc caaagataaa ctcaagatca ttttggtcat cgatgggaac 420acagaggatg atgcctacat gatggagatg ttcaaagacg tgttccacgg tgaagatgta 480ggcacctacg tatggaaggg aaattaccac actgttaaaa agcctgagga gaccaataag 540ggatcctgtc ctgaggtttc taagcccttg aatgaagatg aaggtatcaa tatggtggaa 600gaacttgtta gaaacaagag atgtgtgtgc atcatgcaac agtggggcgg aaaaagagag 660gtcatgtaca cagcattcca ggccattggg acttctgtgg actatgtaca ggtctgtgac 720tcggacacca aactggatga actggcaaca gtggaaatgg tgaaggttct ggaatccaat 780gacatgtacg gcgcagtggg aggagacgtt cgcattctga acccttatga ttccttcatt 840agtttcatga gcagcctgcg ttactggatg gcgtttaacg tggagagggc ctgccagtct 900tacttcgact gcgtgtcctg tataagtgga cctctgggaa tgtaccggaa caacattctc 960caggtgtttt tggaagcctg gtacagacag aaatttttgg gaacctattg tactttggga1020gatgatagac atctgacaaa ccgagtgctc agcatgggat atcgcaccaa atacacccac1080aaatccagag cattctccga aactccatcc ctgtatctcc ggtggttgaa ccagcaaaccl140cggtggacca agtcctactt ccgagagtgg ctgtataatg cccagtggtg gcacaagcat1200cacatctgga tgacctatga gtctgtggtg tccttcatct ttcccttctt catcactgcc1260actgttatcc gcctcatcta tgccggcacc atatggaatg ttgtgtggct cctcctgtgc1320atccagatca tgtctctctt caaatccatc tatgcctgct ggctccgcgg caacttcatt1380atgctcctga tgtctctcta ctccatgctg tacatgactg ggcttctgcc atccaagtac1440tttgccttgt tgaccttaaa caagaccggt tggggaacat ctgggcgcaa gaagatagta1500
ggcaactaca tgccaatact gcccctgtcc atatgggcag ctgttctgtg tggaggggtg1560ggttatagta tctatatgga ctgtcaaaat gactggagca cccctgaaaa gcaaaaggag1620atgtaccatc tattgtatgg gtgtgtgggc tatgtaatgt actgggtaat catggctgtg1680atgtactggg tctgggtgaa gaggtgctgc aggaagaggt cccaaactgt caccctggtc1740catgacattc ctgatatgtg tgtttaa1767<210>10<211>588<212>PRT<213>非洲爪蟾<400>10Met Lys Glu Lys Ala Ala Glu Thr Met Glu Ile Pro Glu Gly Ile Pro1 5 10 15Lys Asp Leu Glu Pro Lys His Pro Thr Leu Trp Arg Ile Ile Tyr Tyr20 25 30Ser Phe Gly Val Val Leu Leu Ala Thr Ile Thr Ala Ala Tyr Val Ala35 40 45Glu Phe Gln Val Leu Lys His Glu Ala Ile Leu Phe Ser Leu Gly Leu50 55 60Tyr Gly Leu Ala Met Leu Leu His Leu Met Met Gln Ser Leu Phe Ala65 70 75 80Phe Leu Glu Ile Arg Arg Val Asn Lys Ser Glu Leu Pro Cys Ser Phe85 90 95Lys Lys Thr Val Ala Leu Thr Ile Ala Gly Tyr Gln Glu Asn Pro Glu100 105 110
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cccgggtcgc tctgtgggca aagcaatatc tcattgcata tatgtggtgg gccgcggttg1500ttggcgctgg agtttacagc atcgtccata actggatgtt cgattggaat tctctttctt1560atcgttttgc tttggttggt atttgttctt acattgtttt tattgttatt gtgctggtgg1620tttatttcac cggcaaaatt acgacttgga atttcacgaa gcttcagaag gagctaatcg1680aggatcgcgt tctgtacgat gcaactacca atgctcagtc tgtgtgattt ttcctgcaag1740<210>12<211>567<212>PRT<213>小球藻病毒PBCV-1<400>12Met Gly Lys Asn Ile Ile Ile Met Val Ser Trp Tyr Thr Ile Ile Thr1 5 10 15Ser Asn Leu Ile Ala Val Gly Gly Ala Ser Leu Ile Leu Ala Pro Ala20 25 30Ile Thr Gly Tyr Val Leu His Trp Asn Ile Ala Leu Ser Thr Ile Trp35 40 45Gly Val Ser Ala Tyr Gly Ile Phe Val Phe Gly Phe Phe Leu Ala Gln50 55 60Val Leu Phe Ser Glu Leu Asn Arg Lys Arg Leu Arg Lys Trp Ile Ser65 70 75 80Leu Arg Pro Lys Gly Trp Asn Asp Val Arg Leu Ala Val Ile Ile Ala85 90 95Gly Tyr Arg Glu Asp Pro Tyr Met Phe Gln Lys Cys Leu Glu Ser Val
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ggtcattaca aagggtatta tagctataaa tcctccgtaa tgcaagaata aataaaagat 240aaagaagtcg gaatggtaac gggttggcag atacaatagt aataagagct tagtattaat 300tacattaatt gaggaataga tcttaagaat tctagtgaaa ctcatataaa ggaacaagag 360cgtaaataat ggtaacagat tggtgtatat catattaaaa acgtataatg aacccctttt 420acttatacta ccgtcagcta tctcccttat aaaattaaga taatttgctc ttgtccatct 480agttacttgt ttcgtaaaca tttttatgtc tctagggggt tttgtatatg ccactgcatc 540aaagactttt acagccctat accctttttt tataacaaaa tcggttaaat ctctatcatc 600ggaaatttta attggtcttc caaacatttt cggctctaaa aactctttag ataatatata 660tggttttacg agttcggtcc tatatattac acattgtcca cttaatatta tagcacttcc 720aaaatagttt accgccctgt ttactatctc acttattctc tcaaagaatt caccataata 780atatgcatat ttatttttct cgtcatacat aattctaata tttggcccta ctccacctac 840tgactcatca aaaacactta acatctttag tatagagtct ttataaataa tcgtatcact 900atctagaaac atcactagag gagatcttac atacttaact ccctcggcta acgcgtatct 960tttcccctta tgttcacgca tataaataaa tttaccacca tatctttccg taattgattt1020gtatggttct agaacactat cccctacaac aataaattct aaccttgtgt catataaagt1080ccttatcact ttttcaaaaa tatctatttc ctccttataa actggtatca caactgtaag1140atcagagaga ttataaaaac ttgagtgttg agtttttcta ttattactta ttactgcaaa1200aaatgaattc aaaaagaaat aaagaatagt tataattgtg aatgaaagag aataaatgaa1260atatgagact ccgtgaaata agtgaaacat aatcaccact ataatgctcg atatcgaaat1320atataacgat ttttcctaat tcaccattcg aattctccgt tcaaaaaggg gttagttaac1380<210>14<211>415<212>PRT
<213>硫磺矿硫化叶菌<400>14Met Val Ile Met Phe His Leu Phe His Gly Val Ser Tyr Phe Ile Tyr1 5 10 15Ser Leu Ser Phe Thr Ile Ile Thr Ile Leu Tyr Phe Phe Leu Asn Ser20 25 30Phe Phe Ala Val Ile Ser Asn Asn Arg Lys Thr Gln His Ser Ser Phe35 40 45Tyr Asn Leu Ser Asp Leu Thr Val Val Ile Pro Val Tyr Lys Glu Glu50 55 60Ile Asp Ile Phe Glu Lys Val Ile Arg Thr Leu Tyr Asp Thr Arg Leu65 70 75 80Glu Phe Ile Val Val Gly Asp Ser Val Leu Glu Pro Tyr Lys Ser Ile85 90 95Thr Glu Arg Tyr Gly Gly Lys Phe Ile Tyr Met Arg Glu His Lys Gly100 105 110Lys Arg Tyr Ala Leu Ala Glu Gly Val Lys Tyr Val Arg Ser Pro Leu115 120 125Val Met Phe Leu Asp Ser Asp Thr Ile Ile Tyr Lys Asp Ser Ile Leu130 135 140Lys Met Leu Ser Val Phe Asp Glu Ser Val Gly Gly Val Gly Pro Asn145 150 155 160
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Leu<210>23<211>417<212>PRT<213>类马链球菌<220>
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<210>24<211>417<212>PRT<213>类马链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(281)..(281)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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Leu<210>29<211>417<212>PRT<213>类马链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(226)..(226)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(367)..(367)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>29Met Arg Thr Leu Lys Asn Leu Ile Thr Val Val Ala Phe Ser Ile Phe1 5 10 15Trp Val Leu Leu Ile Tyr Val Asn Val Tyr Leu Phe Gly Ala Lys Gly20 25 30Ser Leu Ser Ile Tyr Gly Phe Leu Leu Ile Ala Tyr Leu Leu Val Lys
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<221>MISC_FEATURE<222>(261)..(261)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸
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Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Cys Arg Asn355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Cys Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415Ile Phe Lys<210>33<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>33Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30
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<221>MISC_FEATURE<222>(366)..(366)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>34Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80
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<210>35<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>35Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110
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<221>MISC_FEATURE<222>(225)..(225)
<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145 150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg180 185 190Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Xaa Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255Gly Asp Asp Arg Cys Leu Thr Asn Tyr Ala Ile Asp Leu Gly Arg Thr260 265 270Val Tyr Gln Ser Thr Ala Arg Cys Asp Thr Asp Val Pro Phe Gln Leu275 280 285Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala
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<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE
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<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>40Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu
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Ile Phe Lys<210>42<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(225)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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<220>
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<220>
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Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Cys Arg Asn355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Cys Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415Ile Phe Lys<210>46<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(261)..(261)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>47
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<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>49Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45
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<221>MISC_FEATURE<222>(366)..(366)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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Ile Phe Lys<210>51<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>59Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15
Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110Ile Glu Glu Tyr Val Asn Arg Glu Val Asp Ile Xaa Arg Asn Val Ile115 120 125Val His Arg Ser Leu Val Asn Lys Gly Lys Arg His Ala Gln Ala Trp130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145 150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg180 185 190
Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Cys Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255Gly Asp Asp Arg Cys Leu Thr Asn Tyr Ala Ile Asp Leu Gly Arg Thr260 265 270Val Tyr Gln Ser Thr Ala Arg Xaa Asp Thr Asp Val Pro Phe Gln Leu275 280 285Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala305 310 315 320Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Cys Arg Asn
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<221>MISC_FEATURE
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<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(261)..(261)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>87Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110
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Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala305 310 315 320Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Cys Arg Asn355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Xaa Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415Ile Phe Lys<210>88<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)
<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(225)..(225)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>88Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60
Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110Ile Glu Glu Tyr Val Asn Arg Glu Val Asp Ile Xaa Arg Asn Val Ile115 120 125Val His Arg Ser Leu Val Asn Lys Gly Lys Arg His Ala Gln Ala Trp130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145 150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg180 185 190Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Xaa Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240
Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255Gly Asp Asp Arg Xaa Leu Thr Asn Tyr Ala Ile Asp Leu Gly Arg Thr260 265 270Val Tyr Gln Ser Thr Ala Arg Cys Asp Thr Asp Val Pro Phe Gln Leu275 280 285Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala305 310 315 320Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Xaa Arg Asn355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Xaa Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415
Ile Phe Lys<210>89<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(366)..(366)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>89Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu
1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110Ile Glu Glu Tyr Val Asn Arg Glu Val Asp Ile Xaa Arg Asn Val Ile115 120 125Val His Arg Ser Leu Val Asn Lys Gly Lys Arg His Ala Gln Ala Trp130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg
180 185 190Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Xaa Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255Gly Asp Asp Arg Cys Leu Thr Asn Tyr Ala Ile Asp Leu Gly Arg Thr260 265 270Val Tyr Gln Ser Thr Ala Arg Xaa Asp Thr Asp Val Pro Phe Gln Leu275 280 285Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala305 310 315 320Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Xaa Arg Asn
355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Xaa Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415Ile Phe Lys<210>90<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(261)..(261)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(366)..(366)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>90Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110Ile Glu Glu Tyr Val Asn Arg Glu Val Asp Ile Xaa Arg Asn Val Ile115 120 125
Val His Arg Ser Leu Val Asn Lys Gly Lys Arg His Ala Gln Ala Trp130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145 150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg180 185 190Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Cys Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255Gly Asp Asp Arg Xaa Leu Thr Asn Tyr Ala Ile Asp Leu Gly Arg Thr260 265 270Val Tyr Gln Ser Thr Ala Arg Xaa Asp Thr Asp Val Pro Phe Gln Leu275 280 285Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300
Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala305 310 315 320Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Xaa Arg Asn355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Xaa Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415IIe Phe Lys<210>91<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(225)..(225)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸
<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(261)..(261)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(366)..(366)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>9lMet Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80
Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110Ile Glu Glu Tyr Val Asn Arg Glu Val Asp Ile Cys Arg Asn Val Ile115 120 125Val His Arg Ser Leu Val Asn Lys Gly Lys Arg His Ala Gln Ala Trp130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145 150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg180 185 190Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Xaa Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255
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<210>92<211>419<212>PRT<213>化脓链球菌<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(124)..(124)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(225)..(225)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(261)..(261)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(280)..(280)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(366)..(366)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(402)..(402)<223>Xaa＝Ala，Ser或任何其他氨基酸<400>92
Met Pro Ile Phe Lys Lys Thr Leu Ile Val Leu Ser Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Ile Ser Ile Leu Ile Tyr Leu Asn Met Tyr Leu Phe Gly Thr Ser Thr20 25 30Val Gly Ile Tyr Gly Val Ile Leu Ile Thr Tyr Leu Val Ile Lys Leu35 40 45Gly Leu Ser Phe Leu Tyr Glu Pro Phe Lys Gly Asn Pro His Asp Tyr50 55 60Lys Val Ala Ala Val Ile Pro Ser Tyr Asn Glu Asp Ala Glu Ser Leu65 70 75 80Leu Glu Thr Leu Lys Ser Val Leu Ala Gln Thr Tyr Pro Leu Ser Glu85 90 95Ile Tyr Ile Val Asp Asp Gly Ser Ser Asn Thr Asp Ala Ile Gln Leu100 105 110Ile Glu Glu Tyr Val Asn Arg Glu Val Asp Ile Xaa Arg Asn Val Ile115 120 125Val His Arg Ser Leu Val Asn Lys Gly Lys Arg His Ala Gln Ala Trp130 135 140Ala Phe Glu Arg Ser Asp Ala Asp Val Phe Leu Thr Val Asp Ser Asp145 150 155 160Thr Tyr Ile Tyr Pro Asn Ala Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ser Phe Asn165 170 175
Asp Glu Thr Val Tyr Ala Ala Thr Gly His Leu Asn Ala Arg Asn Arg180 185 190Gln Thr Asn Leu Leu Thr Arg Leu Thr Asp Ile Arg Tyr Asp Asn Ala195 200 205Phe Gly Val Glu Arg Ala Ala Gln Ser Leu Thr Gly Asn Ile Leu Val210 215 220Xaa Ser Gly Pro Leu Ser Ile Tyr Arg Arg Glu Val Ile Ile Pro Asn225 230 235 240Leu Glu Arg Tyr Lys Asn Gln Thr Phe Leu Gly Leu Pro Val Ser Ile245 250 255Gly Asp Asp Arg Xaa Leu Thr Asn Tyr Ala Ile Asp Leu Gly Arg Thr260 265 270Val Tyr Gln Ser Thr Ala Arg Xaa Asp Thr Asp Val Pro Phe Gln Leu275 280 285Lys Ser Tyr Leu Lys Gln Gln Asn Arg Trp Asn Lys Ser Phe Phe Arg290 295 300Glu Ser Ile Ile Ser Val Lys Lys Ile Leu Ser Asn Pro Ile Val Ala305 310 315 320Leu Trp Thr Ile Phe Glu Val Val Met Phe Met Met Leu Ile Val Ala325 330 335Ile Gly Asn Leu Leu Phe Asn Gln Ala Ile Gln Leu Asp Leu Ile Lys340 345 350
Leu Phe Ala Phe Leu Ser Ile Ile Phe Ile Val Ala Leu Xaa Arg Asn355 360 365Val His Tyr Met Val Lys His Pro Ala Ser Phe Leu Leu Ser Pro Leu370 375 380Tyr Gly Ile Leu His Leu Phe Val Leu Gln Pro Leu Lys Leu Tyr Ser385 390 395 400Leu Xaa Thr Ile Lys Asn Thr Glu Trp Gly Thr Arg Lys Lys Val Thr405 410 415Ile Phe Lys
权利要求
1.一种功能活性透明质素合酶，该合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基。
2.权利要求1的功能活性透明质素合酶，其中所述具有至少一个修饰的氨基酸残基的功能活性透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS。
3.权利要求1的功能活性透明质素合酶，其中所述至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
4.权利要求3的功能活性透明质素合酶，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
5.权利要求1的功能活性透明质素合酶，其中所述具有至少一个修饰的氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ IDNo15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
6.一种功能活性透明质素合酶，该合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性。
7.权利要求6的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS。
8.权利要求7的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基。
9.权利要求8的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
10.权利要求9的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
11.权利要求10的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述具有至少一个修饰的氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID No15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
12.一种功能活性透明质素合酶，该合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基，其中所述相应功能活性天然透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
13.权利要求12的功能活性透明质素合酶，其中所述至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
14.权利要求13的功能活性透明质素合酶，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
15.权利要求12的功能活性透明质素合酶，其中所述具有至少一个修饰的氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ IDNo15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
16.一种功能活性透明质素合酶，该合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性，其中所述相应功能活性天然透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
17.权利要求16的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基。
18.权利要求17的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
19.权利要求18的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
20.权利要求16的具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶，其中所述具有至少一个修饰的氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID No15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
21.一种宿主细胞，该宿主细胞具有在其中整合的与相应功能活性天然透明质素合酶相比酶活性改变的功能活性透明质素合酶，从而该宿主细胞能够产生透明质素。
22.权利要求21的宿主细胞，其中所述相应功能活性天然透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
23.权利要求21的宿主细胞，其中所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS。
24.权利要求21的宿主细胞，其中所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基。
25.权利要求24的宿主细胞，其中所述至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
26.权利要求25的宿主细胞，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
27.权利要求21的宿主细胞，其中所述具有至少一个修饰的氨基酸残基的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID No15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
28.一种具有包含SEQ ID NO15-92中至少一个的氨基酸序列的功能活性透明质素合酶。
29.一种具有基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列的功能活性透明质素合酶。
30.一种提供功能活性透明质素合酶的方法，该合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性，该方法包含步骤--提供透明质素合酶；和--对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶。
31.权利要求30的方法，其中在提供透明质素合酶的步骤中，该透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
32.权利要求30的方法，其中在提供透明质素合酶的步骤中，该透明质素合酶选自spHAS、seHAS、suHAS和pmHAS。
33.权利要求30的方法，其中在对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶的步骤中，该至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
34.权利要求33的方法，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
35.权利要求30的方法，其中在对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰的步骤中，该具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ ID No15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
36.权利要求30的方法，其中在对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶的步骤中，该功能活性透明质素合酶具有增加的酶活性。
37.权利要求30的方法，其中在对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶的步骤中，该功能活性透明质素合酶具有降低的酶活性。
38.权利要求30的方法，其中在对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶的步骤中，该功能活性透明质素合酶产生如下透明质酸，该透明质酸具有比由相应功能活性天然透明质素合酶产生的透明质酸的平均分子量更小的平均分子量。
39.权利要求30的方法，其中在对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶的步骤中，该功能活性透明质素合酶产生如下透明质酸，该透明质酸具有比由相应功能活性天然透明质素合酶产生的透明质酸的平均分子量更大的平均分子量。
40.一种生产透明质酸的方法，该方法包含步骤--提供具有至少一个表达构建体的宿主细胞，该构建体包含在其中整合的编码功能活性透明质素合酶的透明质素合酶基因，从而该宿主细胞能够产生透明质素，其中该功能活性透明质素合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性；和--将该宿主细胞于适合于透明质酸生产的条件下进行培养。
41.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，所述相应功能活性天然透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
42.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶与相应功能活性天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基。
43.权利要求42的方法，其中所述至少一个修饰的氨基酸残基是半胱氨酸。
44.权利要求43的方法，其中所述半胱氨酸修饰为丙氨酸或丝氨酸残基。
45.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，所述具有改变的酶活性的功能活性透明质素合酶具有基本如在SEQ IDNo15-92中至少一个提出的氨基酸序列。
46.权利要求40的方法，该方法进一步包含从宿主细胞中分离透明质酸的步骤。
47.权利要求40的方法，其中所述至少一个表达构建体进一步包含至少一个编码合成透明质酸糖前体的酶的基因。
48.权利要求47的方法，其中所述至少一个编码用于合成透明质酸糖前体的酶的基因选自能够产生UDP-GlcNAc或UDP-GlcUA的焦磷酸酶、转移酶、变位酶、脱氢酶或差向异构酶。
49.权利要求40的方法，其中所述至少一个表达构建体进一步包含至少一个透明质酸糖前体生物合成途径基因。
50.权利要求40的方法，其中所述至少一个表达构建体进一步包含至少一个编码用于透明质酸糖前体合成的酶的基因。
51.权利要求40的方法，该方法进一步包含至少一个第二表达构建体，该表达构建体具有至少一个编码合成透明质酸糖前体的酶的基因。
52.权利要求40的方法，其中该宿主细胞包括至少一个编码合成透明质酸糖前体的酶的整合的或质粒上的基因。
53.权利要求40的方法，其中给宿主细胞提供用于透明质酸糖前体生物合成途径的养分。
54.权利要求53的方法，其中给宿主细胞施用提供透明质酸糖前体生物合成途径的养分。
55.权利要求53的方法，其中透明质酸糖前体可通过宿主细胞的内源基因而表达于宿主细胞中。
56.权利要求53的方法，其中透明质酸糖前体可通过包括其基因的引入的载体而表达于宿主细胞中。
57.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，该功能活性透明质素合酶具有增加的酶活性。
58.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，该功能活性透明质素合酶具有降低的酶活性。
59.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，该功能活性透明质素合酶产生如下透明质酸，该透明质酸具有比由相应功能活性天然透明质素合酶产生的透明质酸的平均分子量更小的平均分子量。
60.权利要求40的方法，其中在提供宿主细胞的步骤中，该功能活性透明质素合酶产生如下透明质酸，该透明质酸具有比由相应功能活性天然透明质素合酶产生的透明质酸的平均分子量更大的平均分子量。
61.一种与相应的天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基的透明质素合酶。
62.一种与相应的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性的透明质素合酶。
63.一种与相应的天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基的透明质素合酶，其中所述相应的天然透明质素合酶具有基本如在SEQ ID NO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
64.一种与相应的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性的透明质素合酶，其中所述相应的天然透明质素合酶具有基本如在SEQ IDNO2、4、6、8、10、12和14的至少一个中提出的氨基酸序列。
65.一种宿主细胞，该宿主细胞具有在其中整合的与相应的天然透明质素合酶相比酶活性改变的透明质素合酶。
66.一种具有包含SEQ ID NO15-92中至少一个的氨基酸序列的透明质素合酶。
67.一种具有基本如在SEQ ID NO15-92的至少一个中提出的氨基酸序列的透明质素合酶。
68.一种提供透明质素合酶的方法，该合酶与相应的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性，该方法包含步骤--提供透明质素合酶；和--对透明质素合酶的至少一个氨基酸残基进行修饰以提供具有改变的酶活性的透明质素合酶。
69.一种生产透明质酸的方法，该方法包含步骤--提供具有至少一个表达构建体的宿主细胞，该构建体包含在其中整合的编码透明质素合酶的透明质素合酶基因；和--将该宿主细胞于适合于透明质酸生产的条件下进行培养。
全文摘要
公开了一种功能活性的透明质素合酶，该合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比在其中具有至少一个修饰的氨基酸残基，从而该功能活性的透明质素合酶与相应功能活性的天然透明质素合酶相比具有改变的酶活性。也公开了利用重组宿主细胞生产透明质酸的方法，该宿主细胞具有编码酶活性改变的功能活性透明质素合酶的表达构建体。
文档编号C12P19/26GK1596307SQ02826694
公开日2005年3月16日 申请日期2002年12月3日 优先权日2001年12月3日
发明者P·H·威格尔, K·库马里 申请人:俄克拉何马大学董理会