专利名称：棉花品系9422用农杆菌介导法转化豇豆胰蛋白酶抑制剂基因过程中所得的外源基因未导 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及棉花转基因技术，特别涉及棉花转基因过程中所用的受体材料，具体为棉花品系9422用农杆菌介导法转化豇豆胰蛋白酶抑制剂基因过程中所得的外源基因未导入其内的再生棉花植株的用途。
背景技术：
农杆菌介导法是将外源基因转化到受体植物中的转基因技术，因为其转化率高，是国际生物技术界所公认的作物转基因方法之一，在棉花的转基因技术领域得到广泛的应用(见科学出版社2001年2月出版、由贾士荣、郭三维、安道昌主编的《转基因棉花》一书第五章)。棉花采用农杆菌介导法转化外源基因所用时间较长，从感染到愈伤组织、再到再生植株产生一般为1-1.5年，有的时间更长，因此，现有的采用农杆菌介导法进行棉花转基因技术的最大缺陷是转化时间太长，影响该技术的应用。
目前采用农杆菌介导法进行棉花转基因所用的受体材料可采用多种的棉花品种或品系，如713、321、312、中4404、9422等，转化的目的基因包括抗虫、抗除草剂、抗病、雄性不育和纤维品质改良等的基因。农杆菌介导转化棉花包含如下的操作程序和步骤；1、菌株培养；2、棉花无菌苗制备；3、棉花外植体与农杆菌的共培养；4、诱导愈伤组织及抗性愈伤组织的筛选；5、愈伤组织的增殖继代；6、愈伤组织的分化；7、再生植株的移栽；8、转基因棉株的检测；无论何种棉花品系或外源基因，经过上述一系列过程，在得到的再生棉株中都有部分是外源基因未导入的棉株，这部分经检测证明外源基因未导入的棉株或其所结的种子(申请人在进行棉花品种或品系与外源基因的转化过程中得到大量的该外源基因未导入的棉株或其所结种子)，被认为是无用之物，在现有的转化过程中都丢弃了。
发明内容
本发明解决农杆菌介导法进行棉花转基因转化时间过长的问题，提供一种能大幅度缩减棉花转基因所需时间的受体材料，具体是给出棉花品系9422用农杆菌介导法转化豇豆胰蛋白酶抑制剂基因过程中所得的外源基因未导入其内的再生棉花植株的用途。
本发明是采用如下技术方案实现的棉花品系9422用农杆菌介导法转化豇豆胰蛋白酶抑制剂基因过程中所得的外源基因未导入其内的再生棉花植株的用途，该外源基因未导入其内的再生棉花植株作为棉花农杆菌介导转化外源基因所需的受体材料。以该外源基因未导入其内的再生棉花植株作为受体，以农杆菌介导法与所需的不同外源基因进行转化可大大缩短转化时间，能使转化时间缩短4-5个月。这个转化受体材料是所有转化受体材料中转化时间最短的材料。
图1为实施例1中以本发明所述受体材料转化外源基因所获得的再生棉株的分子检测图片。
具体实施例方式
实施例1
将豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea Trypsin Inhibitor，CpTI)基因转移进入9422棉花品系(或称以棉花品系9422转化外源抗虫基因——豇豆蛋白酶抑制剂基因(简称CpTI))，利用农杆菌介导法进行转化(该转化过程已在《棉花学报》1998，10(5)；237～243上公开，其区别只在于棉花品种选用了9422)，一年多后得到59株再生株，成活的再生株有26株，收获种子的再生株仅有14株，其中，编号第8的再生株经检测(分子检测、NPTII室内检测等)表明这个再生株没有将CpTI外源基因转化到植株体内。
以这个再生株做为棉花农杆菌介导法转化受体材料，转化三价抗虫基因(Bt毒蛋白+豇豆蛋白酶抑制剂基因+雪花莲凝集素，简称Bt+CpTI+GNA)，整个转化过程仅用6个月时间。转化再生株经分子检测(见附图1的分子检测图片)，外源基因已转化到受体棉花组织中。
实施例2以实施例1中所述的外源基因未导入其内的棉花植株(种子)转化纤维品质改良基因(简称QHSI)。2001年2月1日感染，2001年8月转化再生株产生，转化过程用6个月时间。转化再生株经分子检测，外源基因已转化到受体棉花组织中。
实施例3以实施例1中所述的外源基因未导入其内的棉花植株(种子)转化纤维品质改良基因(简称HAN2)。2002年4月14日感染，2002年11月转化再生株产生，转化过程用6个多月时间。转化再生株经分子检测，外源基因已转化到受体棉花组织中。
权利要求
1.棉花品系9422用农杆菌介导法转化豇豆胰蛋白酶抑制剂基因过程中所得的外源基因未导入其内的再生棉花植株的用途，其特征为该外源基因未导入其内的再生棉花植株作为棉花农杆菌介导转化外源基因所需的受体材料。
全文摘要
本发明涉及棉花转基因技术，特别涉及棉花转基因过程中所用的受体材料，具体为棉花品系9422用农杆菌介导法转化豇豆胰蛋白酶抑制剂基因过程中所得的外源基因未导入其内的再生棉花植株的用途，该外源基因未导入其内的再生棉花植株作为棉花农杆菌介导转化外源基因所需的受体材料。以该外源基因未导入其内的再生棉花植株作为受体，以农杆菌介导法与所需的不同外源基因进行转化可大大缩短转化时间，能使转化时间缩短4－5个月。这个转化受体材料是所有转化受体材料中转化时间最短的材料。
文档编号C12N15/09GK1432646SQ0310479
公开日2003年7月30日 申请日期2003年3月3日 优先权日2003年3月3日
发明者李燕娥, 吴霞, 朱祯, 上官小霞, 刘惠民, 杨广东, 张林水, 李波, 翟小菊, 廉聪妮 申请人:山西省农业科学院棉花研究所