专利名称：硫酸盐还原菌测试液及其测试瓶的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细菌的测试方法及其测试器具，特别是涉及一种水质、污泥、沉积物等其它物质中硫酸盐还原菌的测试液及其测试瓶。
背景技术：
硫酸盐还原菌是一类有机化能异养细菌，在自然界分布极广。在厌氧条件下，硫酸盐还原菌更多的存在于供水、排水管道中水、污泥和沉积物中，它能够利用附着于金属表面的有机物作为碳源，并利用细菌生物膜内产生的氢，将硫酸盐还原成硫化氢。硫化氢腐蚀性极强，能与金属基体发生化学反应，导致化学腐蚀。反应生成的铁硫化物沉积于金属表面，改变了基体金属的表面性质。同时，在环境中离子(尤其是Cl-)的协同作用下，可能引起更严重的腐蚀。因此，人们普遍认为硫酸盐还原菌能诱发腐蚀，在金属细菌腐蚀中占主导地位。
国内外针对硫酸盐还原菌的生理、生态和生化特征及其腐蚀机理和防护措施等开展了一系列的研究，但目前，水质样品中硫酸盐还原菌的测试方法尚无国家标准方法，大多数采用传统的多管发酵法，多管发酵法中涉及到的主要仪器为高压蒸气灭菌器、恒温培养箱、无菌操作台、电子天平、酒精灯、镍铬丝接种棒、培养皿、试管、吸管、烧杯、锥形瓶和采样瓶等。
多管发酵法的主要操作步骤为第一步 采集水样以无菌操作方法用灭菌吸管吸取一定量的水样；第二步 无菌水的制备；第三步 器皿、试剂灭菌将各种器皿清洗后放入高压蒸汽灭菌器内，灭菌一定时间；第四步 培养基的配制检验并称量各种试剂，以无菌水溶解配制；第五步 逐级稀释和接种水样；第六步 细菌的培养；第七步 菌落计数与报告。
传统的测定方法多管发酵法，该方法对实验室环境及操作人员要求极为严格，包括从采样技术、实验室条件、仪器设备、器皿、试剂质量、操作人员的专业知识、操作技能、实际经验直至质量控制等全部监测过程及控制程序。操作程序繁琐、复杂、冗长，任何一个环节的不慎都有可能造成测试结果的误差。该多管发酵法测定过程一般需要20天。
发明内容
本发明的目的克服现有技术中硫酸盐还原菌测试方法中的不足，提供种高选择性、快速、具有较长储存期的简易硫酸盐还原菌测试液及其测试瓶。
本发明的技术方案本发明提供一种硫酸盐还原菌测试液，该测试液为高选择性液体培养基，以重量含量为单位，由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1.0～10‰和蒸馏水955.5～991.8‰组成。
所述的硫酸盐还原菌测试液是由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～5‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～0.5‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐5～10‰和蒸馏水962～987.8‰组成。
所述的硫酸盐还原菌测试液是由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐5～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.5～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1～5‰和蒸馏水961～987.4‰组成。
所述的硫酸盐还原菌测试液中乳酸盐为乳酸钠或乳酸钙；氯化物为氯化钠或氯化钾；硫酸盐为硫酸镁或硫酸亚铁铵；亚铁盐为硫酸亚铁铵；维生素为维生素C；乙酸盐为乙酸钠。
一种硫酸盐还原菌测试瓶，该测试瓶为带胶塞和铝皮盖的无菌、无色透明玻璃瓶，测试瓶中装有硫酸盐还原菌测试液，测试液在瓶中的高度H1和留空高度H2之比为H1∶H2＝1∶0.3～0.8。
所述的硫酸盐还原菌测试瓶中所述的测试液，以重量含量为单位，由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1.0～10‰和蒸馏水955.5～991.8‰组成。
所述的硫酸盐还原菌测试瓶，其中所述的测试液由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～5‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～0.5‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐5～10‰和蒸馏水962～987.8‰组成。
所述的硫酸盐还原菌测试瓶，其中所述的测试液由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐5～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.5～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1～5‰和蒸馏水961～987.4‰组成。
本发明的测试瓶可以选用5～15毫升西林瓶或口服液瓶。
使用本发明硫酸盐还原菌测试液及其测试瓶用来测定水质时的操作方法为用无菌注射器将水质样品吸取1.0(或0.5)毫升，注入到测试瓶中，摇匀后放置于35℃干燥箱或水浴锅中14天，根据瓶中液体的变化来判断阴性或阳性反应。瓶中液体本身无颜色，若无变化为阴性，出现黑色沉淀为阳性，此为定性分析；按此方法做2组或3组平行样，按逐级稀释法查MPN表，即可进行定量测试。污泥等其它固体样品则须用水溶解或浸提，处理成液体后再按上述方法进行测定。
本发明的积极有益效果1.本发明的测试液密封贮存于玻璃瓶中，有较长贮存期，省去多管发酵法第二、三、四的操作步骤，只须配置无菌注射器即可完成全部操作，检测时间仅需14天，大大减轻了劳动强度，缩短了测试时间。
2.本发明若与硫化氢试验测试管配合使用，则检测时间可以减少至3～5天。
3.本发明免除了传统方法中必须的无菌环境条件，使得生化检验可以在一般环境中进行，节省大量的基础建设投资。
4.细菌代谢产物与测试液中试剂的特征沉淀反应是在无菌的细菌测试瓶中自动进行，可避免传统方法多步骤操作过程中易引起的污染和干扰，从而大大提高检测结果的准确可靠性；本方法的最低检出限符合国家水质标准要求。
5.本发明可应用于各种水质中硫酸盐还原菌的简易快速测试，非专业人员数分钟即可学会操作。
6.本发明将细菌检测技术产品化、商品化，将预先配置好的测定液封装于透明玻璃瓶中，可直接用于细菌的测定，携带、使用方便，测定简单快速、准确，保存时间长。可用于水质、食品、药品、化妆品等多种物质的细菌定性、定量检测。
四
图1硫酸盐还原菌测试瓶的结构示意图五具体实施例方式下面的实施例仅为了进一步说明本发明，而不是限制本发明的范围。
实施例一硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钠2‰，氯化钠10‰，硫酸镁1‰，酵母浸膏3‰，硫酸亚铁0.5‰，维生素C 0.1‰，乙酸钠5‰和蒸馏水978.4‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶4.5毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌测试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为4.5毫升，测试液的高度H1为3厘米，留空高度H2为1.5厘米。
实施例二硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钙10‰，氯化钾3‰，硫酸镁5‰，酵母浸膏1‰，硫酸亚铁铵0.1‰，维生素C 0.5‰，乙酸10‰和蒸馏水970.4‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶4.5毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌测试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为4.5毫升，测试液的高度H1为4厘米，留空高度H2为1.2厘米。
实施例三硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钠6‰，氯化钾7‰，硫酸镁3‰，酵母浸膏2‰，硫酸亚铁铵0.3‰，维生素C 0.3‰，乙酸8‰和蒸馏水973.4‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶9.0毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为9.0毫升，测试液的高度H1为3.5厘米，留空高度H2为2.8厘米。
实施例四硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钙4‰，氯化钠5‰，硫酸镁7‰，酵母浸膏3‰，硫酸亚铁铵1.0‰，维生素C 0.2‰，乙酸5‰和蒸馏水974.8‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶9.0毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为9.0毫升，测试液的高度H1为4.5厘米，留空高度H2为2.7厘米。
实施例五硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钠8‰，氯化钾8‰。硫酸镁10‰，酵母浸膏1‰，硫酸亚铁铵0.5‰，维生素C 0.4‰，乙酸钠1.0‰和蒸馏水971.1‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶4.5毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌测试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为4.5毫升，测试液的高度H1为5厘米，留空高度H2为2厘米。
实施例六硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钠2‰，氯化钠10‰，硫酸镁5‰，酵母浸膏2‰，硫酸亚铁0.7‰，维生素C 0.3‰，乙酸钠3‰和蒸馏水977‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶4.5毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌测试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为4.5毫升，测试液的高度H1为3厘米，留空高度H2为1.5厘米。
实施例七硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钙2‰，氯化钾10‰，硫酸镁1‰，酵母浸膏3‰，硫酸亚铁铵0.1‰，维生素C 0.5‰，乙酸10‰和蒸馏水973.4‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶4.5毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌测试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为4.5毫升，测试液的高度H1为4厘米，留空高度H2为1.2厘米。
实施例八硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钠10‰，氯化钾3‰，硫酸镁10‰，酵母浸膏1‰，硫酸亚铁铵1‰，维生素C 0.1‰，乙酸1‰和蒸馏水973.9‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶9.0毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为9.0毫升，测试液的高度H1为3.5厘米，留空高度H2为2.8厘米。
实施例九硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钙5‰，氯化钠8‰，硫酸镁3‰，酵母浸膏2‰，硫酸亚铁铵0.3‰，维生素C 0.2‰，乙酸3‰和蒸馏水978.5‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5-7.2，按每瓶9.0毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为9.0毫升，测试液的高度H1为4.5厘米，留空高度H2为2.7厘米。
实施例十
硫酸盐还原菌测试液配方为由乳酸钠7‰，氯化钾5‰。硫酸镁7‰，酵母浸膏3‰，硫酸亚铁铵0.7‰，维生素C 0.3‰，乙酸钠7‰和蒸馏水970‰组成。
将上述测试液配好后调节PH值为6.5～7.2，按每瓶4.5毫升封装于无菌、无色透明小玻璃瓶中，经高压灭菌即可。
硫酸盐还原菌测试瓶实施方法参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3为等截面玻璃瓶，4为测试液；H1为测试液的高度，H2为留空高度，本实施例中测试瓶为4.5毫升，测试液的高度H1为5厘米，留空高度H2为2厘米。
权利要求
1.一种硫酸盐还原菌测试液，该测试液为高选择性液体培养基，其特征是以重量含量为单位，由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1.0～10‰和蒸馏水955.5～991.8‰组成。
2.根据权利要求1所述的硫酸盐还原菌测试液，其特征是由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～5‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～0.5‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐5～10‰和蒸馏水962～987.8‰组成。
3.根据权利要求1所述的硫酸盐还原菌测试液，其特征是由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐5～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.5～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1～5‰和蒸馏水961～987.4‰组成。
4.根据权利要求1～3任一项所述的硫酸盐还原菌测试液，其特征是所述乳酸盐为乳酸钠或乳酸钙；氯化物为氯化钠或氯化钾；硫酸盐为硫酸镁或硫酸亚铁铵；亚铁盐为硫酸亚铁铵；维生素为维生素C；乙酸盐为乙酸钠。
5.一种硫酸盐还原菌测试瓶，该测试瓶为带胶塞和铝皮盖的无菌、无色透明玻璃瓶，其特征是测试瓶中装有硫酸盐还原菌测试液，测试液在瓶中的高度H1和留空高度H2之比为H1∶H2＝1∶0.3～0.8。
6.根据权利要求5所述的硫酸盐还原菌测试瓶，其特征是所述的测试液，以重量含量为单位，由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1.0～10‰和蒸馏水955.5～991.8‰组成。
7.根据权利要求5所述的硫酸盐还原菌测试瓶，其特征是所述的测试液由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～5‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～0.5‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐5～10‰和蒸馏水962～987.8‰组成。
8.根据权利要求5所述的硫酸盐还原菌测试瓶，其特征是所述的测试液由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐5～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.5～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1～5‰和蒸馏水961～987.4‰组成。
全文摘要
本发明提供一种硫酸盐还原菌测试液及其测试瓶。硫酸盐还原菌测试液以以质量含量为单位，由乳酸盐2～10‰，氯化物3～10‰，硫酸盐1～10‰，酵母浸膏1～3‰，亚铁盐0.1～1.0‰，维生素0.1～0.5‰，乙酸或乙酸盐1.0～10‰和蒸馏水955.5～991.8‰组成。硫酸盐还原菌测试瓶为带胶塞和铝皮盖的无菌、无色透明玻璃瓶，测试瓶中装有硫酸盐还原菌测试液，测试液在瓶中的高度H
文档编号C12M1/34GK101029328SQ20061012831
公开日2007年9月5日 申请日期2006年11月30日 优先权日2006年11月30日
发明者刘五一, 白莉, 崔纪周, 李树华, 张玉忠 申请人:白莉