专利名称：大肠菌群测试液及简易测试瓶的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种水、食品等物质中微生物的测试方法及其测试器具，特别是涉及一种水或其它物质中大肠菌群的测试液及其测试瓶。
背景技术：
大肠菌群作为粪便污染指示菌已有80多年的历史。大肠菌群包括了正常家畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌。该类大肠菌群能够导致肠道疾病，人们食用或饮用大肠菌群超标的食物或水易引起腹泻、发烧等不良症状，对人体危害极大。
大肠菌群的传统测定方法为多管发酵法，其一般操作程序为①采集水样→②无菌水制备→③器皿、试剂灭菌→④培养基制备→⑤稀释和接种水样→⑥细菌培养→⑦计数与报告，完成整个测试过程一般需要3天，多管发酵法不但操作程序繁琐、复杂，时间冗长，而且其对测试环境及操作人员的素质要求极高，从采样技术、实验室条件、仪器设备、器皿试剂质量、操作人员的技能，直至质量控制等全部监测过程及控制程序都有着严格的规定和要求。此外，繁杂的测试环节极易产生较大的误差，致使测试结果不准确。
发明内容
本发明的目的是提供一种水或其它物质中大肠菌群的测试液及其简易测试瓶。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是
根据大肠菌群代谢产物与特定试剂发生化学显色反应并伴随气体产生的原理制备出高选择性液体培养基，封存于透明瓶中，并灭菌，从而成为存储期较长的简易大肠菌群测试瓶。
一种大肠菌群测试液，以重量百分比计，含有乳糖0.3～1.0％，氯化物0.2～1.0％、磷酸盐0.3～1.0％、胰蛋白胨0.5～2.0％、抑制剂0.05～0.25％、蒸馏水94.75～98.65％％，调节溶液pH值至6.8～7.7。
本发明中所述大肠菌群测试液中的氯化物可以为氯化钠、氯化钾中的一种或两种。
本发明中所述大肠菌群测试液中的磷酸盐可以为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或两种。
本发明中所述大肠菌群测试液中的抑制剂可以为胆盐物质，如猪胆盐、羊胆盐、胆盐三号、胆盐五号、去氧胆酸钠。
根据以上所述的大肠菌群测试液，含有乳糖0.3～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，磷酸二氢钾0.1～0.2％，磷酸氢二钾0.2～0.8％，胰蛋白胨0.5～2.0％、胆盐三号0.1～0.2％、蒸馏水97.1～99.3％，调节溶液pH至7.2～7.7。
一种大肠菌群简易测试瓶，包括封口的无色透明小瓶，其中装有所述大肠菌群测试液和一端封闭的无色透明的小导管，所述测试液在测试瓶中的高度H1和测试瓶等截面留空高度H2之比H1∶H2＝1∶0.3～0.8，所述小导管的高度H3小于或等于测定液在瓶中的高度H1，大于测试瓶的内径D，小导管开口一端倒置于测试瓶中，其中充满测试液，测试时通过该导管，观察有无气体产生，所述测试瓶内部在测试前为无菌状态。
本发明中所述的无色透明小瓶可以是以胶塞和铝皮盖封口的无色透明的西林瓶或口服液瓶。
本发明中所述小导管为一端封闭的玻璃导管，其内径为2～7mm。
本发明所述的大肠菌群简易测试瓶中所装的大肠菌群测试液含有乳糖0.3～1.0％，氯化物0.2～1.0％、磷酸盐0.3～1.0％、胰蛋白胨0.5～2.0％、抑制剂0.05～0.25％、蒸馏水94.75～98.65％％，调节溶液pH至6.8～7.7。
本发明所述的大肠菌群简易测试瓶中所装的大肠菌群测试液含有乳糖0.3～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，磷酸二氢钾0.1～0.2％，磷酸氢二钾0.2～0.8％，胰蛋白胨0.5～2.0％、胆盐三号0.1～0.2％、蒸馏水97.1～99.3％，调节溶液pH至7.2～7.7。
本发明具有以下积极有益的效果(1)特制培养基密封贮存于玻璃瓶中，并灭菌，贮存期较长，省去多管发酵法繁琐、复杂的操作步骤，检测时间仅需1天，大大缩短了测试时间，减轻了劳动强度。
(2)不需要传统方法所要求的无菌操作条件，使得生化检验可以在一般环境中进行，进而节省大量基础建设投资。
(3)大肠菌群与测试液的特征反应是在无菌的细菌测试瓶中自动进行，可避免传统方法多步骤操作过程中的沾污和干扰，检测结果准确可靠，且最低检出限符合国家水质标准要求。
(4)可应用于各种水或其他物质中总大肠菌群和耐热大肠菌群的简易快速测试，非专业人员数分钟内即可学会操作。
图1是一种大肠菌群简易测试瓶的结构示意图。
具体实施例方式
实施例一参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3等截面玻璃瓶腔，4为大肠菌群测试液，5为玻璃小导管。H1为大肠菌群测试液的高度，H2为测试瓶等截面留空高度，D为测试瓶的内径，H3为小导管的高度。本实施例中测试瓶为15mL的无色透明口服液瓶，测试液的高度H1为6cm，留空高度H2为4cm，D为4.4cm，玻璃小导管内径0.7cm，H3为5.5cm。
上述测试液配方为乳糖0.5％，氯化钠0.5％、磷酸二氢钾0.5％、胰蛋白胨1.0％、胆盐三号0.15％，余量为蒸馏水，调节溶液pH值至7.0，每瓶罐装9mL测试液，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用时采用绝迹稀释法，即用无菌注射器将待测定的水样(固体样品则须用水溶解或浸提，制成待测液后测定)逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数。大肠菌群阳性反应时测试瓶中的红色液体变为黄色，同时小导管中有气泡生成。
实施例二本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为8mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为4.5cm，留空高度H2为3.5cm，D为1cm，玻璃小导管内径0.2cm，H3为3.5cm。
上述测试液配方为乳糖0.3％、氯化钠0.2％、磷酸二氢钾0.1％、磷酸氢二钾0.2％、胰蛋白胨0.5％、胆盐五号0.1％，余量为蒸馏水，调节pH值至6.8，每瓶罐装4.5mL测试液，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用时用无菌注射器将吸取0.5mL水质样品，注入到测试瓶中，摇匀后放置于37℃干燥箱或水浴锅中24小时，根据瓶中液体的变化判断阴性或阳性反应(大肠菌群阳性反应时测试瓶中的红色液体变为黄色，同时小导管中有气泡生成)，此为定性分析；按此方法做2组或3组平行样，按逐级稀释法查MPN表，即可进行定量测试。污泥等其它固体样品则须用水溶解或浸提，处理成液体后再按上述方法进行测定。
实施例三本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为10mL的无色透明圆底玻璃瓶，测试液的高度H1为3.0cm，留空高度H2为0.9cm，D为1.4cm，玻璃小导管内径0.5cm，H3为2.5cm。
上述测试液配方为乳糖1.0％，氯化钾1.0％，磷酸二氢钾0.2％，磷酸氢二钾0.8％，胰蛋白胨2.0％、猪胆盐0.2％、蒸馏水94.8％，调节pH值至7.7，每瓶罐装4.5mL测试液，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例四本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为8.1mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为3.0cm，留空高度H2为2.4cm，D为1.4cm，玻璃小导管内径0.6cm，H3为3.0cm。
上述测试液配方为乳糖0.3％，氯化钠0.2％，磷酸二氢钾0.1％，磷酸氢二钾0.2％，胰蛋白胨0.5％、羊胆盐0.1％、蒸馏水98.6％，调节pH值至7.2，每瓶罐装4.5mL测试液，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例五本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为12.6mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为5.0cm，留空高度H2为2.0cm，D为1.5cm，玻璃小导管内径0.4cm，H3为4.5cm。
上述测试液配方为乳糖1.0％，氯化钠1.0％，磷酸二氢钾0.2％，磷酸氢二钾0.8％，胰蛋白胨2.0％、去氧胆酸钠0.2％，余量为蒸馏水，调节溶液pH值至7.5，每瓶罐装9mL测试液，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例六本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为6.5mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为4.5cm，留空高度H2为1.6cm，D为1.2cm，玻璃小导管内径0.3cm，H3为3cm。
上述测试液配方为乳糖0.8％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.6％，胰蛋白胨1.0％、胆盐五号0.5％，余量为蒸馏水，调节溶液pH值至7.0，按照需要量罐装在上述测试瓶中，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例七本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为6.0mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为5.0cm，留空高度H2为2.5cm，D为1.0cm，玻璃小导管内径0.6cm，H3为4.5cm。
上述测试液配方为乳糖0.5％，氯化钾0.5％，磷酸氢二钾0.5％，胰蛋白胨1.5％、猪胆盐0.5％，余量为蒸馏水，调节溶液pH值至7.0～7.2，按照需要量罐装在上述测试瓶中，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例八本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为5.0mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为5.0cm，留空高度H2为2.0cm，D为0.95cm，玻璃小导管内径0.3cm，H3为4.8cm。
上述测试液配方为乳糖0.6％，氯化钠0.7％，磷酸氢二钾0.5％，胰蛋白胨1.5％、去氧胆酸钠0.15％，余量为蒸馏水，调节溶液pH值至6.8～7.2，按照需要量罐装在上述测试瓶中，并加装开口朝下的小导管后密封瓶口，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
权利要求
1.一种大肠菌群测试液，其特征是以重量百分比计，含有乳糖0.3～1.0％，氯化物0.2～1.0％、磷酸盐0.3～1.0％、胰蛋白胨0.5～2.0％、抑制剂0.05～0.25％、蒸馏水94.75～98.65％，调节溶液pH值至6.8～7.7。
2.根据权利要求1所述的大肠菌群测试液，其特征是所述氯化物为氯化钠、氯化钾中的一种或两种。
3.根据权利要求1或2所述的大肠菌群测试液，其特征是所述磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾中的一种或两种。
4.根据权利要求3所述的大肠菌群测试液，其特征是所述抑制剂为胆盐物质。
5.根据权利要求4所述的大肠菌群测试液，其特征是含有乳糖0.3～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，磷酸二氢钾0.1～0.2％，磷酸氢二钾0.2～0.8％，胰蛋白胨0.5～2.0％、胆盐三号0.1～0.2％、蒸馏水94.8～98.6％，调节溶液pH值至7.2～7.7。
6.一种大肠菌群简易测试瓶，包括封口的无色透明小瓶，其特征是无色透明小瓶中装有大肠菌群测试液和一端封闭的无色透明的小导管，所述测试液在测试瓶中的高度H1和测试瓶等截面留空高度H2之比H1∶H2＝1∶0.3～0.8，所述小导管的高度H3小于或等于测试液在瓶中的高度H1，大于测试瓶的内径D，小导管开口一端倒置于测试瓶中，用于测试时观察有无气体产生，所述测试瓶内部在测试使用前为无菌状态。
7.根据权利要求6所述的大肠菌群简易测试瓶，其特征是所述无色透明小瓶是以胶塞和铝皮盖封口的无色透明的西林瓶或口服液瓶。
8.根据权利要求7所述的大肠菌群简易测试瓶，其特征是所述小导管为一端封闭的玻璃导管，其内径为2～7mm。
9.根据权利要求6至8任意一项所述的大肠菌群简易测试瓶，其特征是以重量百分比计，测试液中含有乳糖0.3～1.0％，氯化物0.2～1.0％、磷酸盐0.3～1.0％、胰蛋白胨0.5～2.0％、抑制剂0.05～0.25％、蒸馏水94.75～98.65％，调节溶液pH至6.8～7.7。
10.根据权利要求9所述的大肠菌群简易测试瓶，其特征是含有乳糖0.3～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，磷酸二氢钾0.1～0.2％，磷酸氢二钾0.2～0.8％，胰蛋白胨0.5～2.0％、胆盐三号0.1～0.2％、蒸馏水94.8～98.6％，调节溶液pH至7.2～7.7。
全文摘要
本发明涉及一种水或其它物质中大肠菌群的测试液及其测试瓶。本发明所提供的简易测试瓶，包括封口的无色透明小瓶，其装有大肠菌群测试液和一端封闭的无色透明的小导管，测试液在瓶中的高度H
文档编号C12M1/34GK101029334SQ200610128319
公开日2007年9月5日 申请日期2006年11月30日 优先权日2006年11月30日
发明者李树华, 郝军峰, 刘松彥, 白莉, 王玲玲 申请人:白莉