专利名称：铜绿假单胞菌测试液及简易测试瓶的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种水、食品等物质中微生物的测试方法及其测试器具，特别是涉及一种水或其它物质中铜绿假单胞菌的测试液及其测试瓶。
背景技术：
铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)在自然界分布广泛，对人类而言，属于条件致病菌，长期应用激素、免疫抑制剂，进行肿瘤化疗、放射治疗等导致病人免疫功能低下，以及手术后或某些治疗操作后(气管切开、保留导尿管等)的病人易导致本菌感染，故认为该菌为医院内感染的重要病原菌之一。《新英格兰医学杂志》日前发表的两份研究报告表明，铜绿假单胞菌的水污染问题已经引起了有关专家和医学管理部门的极大关注，即使是对于那些通常被认为是非常清洁的水源。
铜绿假单胞菌目前传统的测定方法是利用增菌分离培养和多种生化试验相结合来进行判断，其传统的测定方法为①采集水样→②无菌水制备→③器皿、试剂灭菌→④培养基制备→⑤稀释和接种水样→⑥增菌培养→⑦分离培养→⑧革兰染色镜检→⑨生化试验→⑩结果报告，完成整个测试过程一般需要10天传统方法不但操作程序繁琐、复杂，时间冗长，而且其对测试环境及操作人员的素质要求极高，从采样技术、实验室条件、仪器设备、器皿试剂质量、操作人员的技能，直至质量控制等全部监测过程及控制程序都有着严格的规定和要求。此外，繁杂的测试环节极易产生较大的误差，造成测试结果的误判。
发明内容
本发明的目的是提供一种水或其它物质中铜绿假单胞菌的测试液及其简易测试瓶。
本发明解决技术问题所采用的技术方案是根据铜绿假单胞菌代谢产物与特定试剂发生显色反应的原理制备出高选择性液体培养基，封存于透明瓶中，并灭菌，从而制成可较长时间存储的简易铜绿假单胞菌测试瓶。
以重量百分比计，所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.02～0.15％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.35～99.18％。
所述的铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.04～0.1％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.4～99.16％。
所述氯化物可以为氯化钠、氯化钾中的一种或两种。
本发明提供了一种铜绿假单胞菌简易测试瓶，包括封口的无色透明小瓶和装在瓶内的铜绿假单胞菌测试液，测试液在测试瓶中的高度H1和测试瓶等截面留空高度H2之比H1∶H2＝1∶0.3～0.8，测试瓶内部在测试前为无菌状态。
本发明所述无色透明小瓶可以是以胶塞和铝皮盖封口的无色透明玻璃瓶。
本发明所述无色透明瓶可以是以胶塞和铝皮盖封口的5～15mL西林瓶或口服液瓶。
本发明中所述铜绿假单胞菌简易测试瓶中的铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵十六烷三甲基溴化铵0.02～0.15％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.35～99.18％。
本发明中所述铜绿假单胞菌简易测试瓶中的铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.04～0.1％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.4～99.16％。
所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.05％、氯化钠0.5％、蛋白胨1.0％、牛肉浸提物0.5％、蒸馏水97.95％。
本发明具有以下积极有益的效果(1)特制测试培养液密封贮存于玻璃瓶中，并灭菌，贮存期较长，省去传统方法繁琐、复杂的操作步骤，检测时间仅需2天，大大缩短了测试时间，减轻了劳动强度。
(2)不需要传统方法所要求的无菌操作条件，使得生化检验可以在一般环境中进行，进而节省大量基础建设投资。
(3)铜绿假单胞菌与测试液的特征反应是在无菌的细菌测试瓶中自动进行，可避免传统方法多步骤操作过程中的沾污和干扰，检测结果准确可靠，且最低检出限符合国家水质标准要求。
(4)可应用于各种水中或其物质中铜绿假单胞菌的快速测试，非专业人员数分钟内即可学会操作。
图1是一种铜绿假单胞菌简易测试瓶的结构示意图。
具体实施例方式
实施例一参见图1，图中1为铝皮盖，2为胶塞，3等截面玻璃瓶腔，4为铜绿假单胞菌测试液。H1为铜绿假单胞菌测试液的高度，H2为测试瓶等截面留空高度。本实施例中测试瓶为15mL的无色透明口服液瓶，测试液的高度H1为6cm，留空高度H2为4cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.02％、氯化钠0.2％、蛋白胨0.5％、牛肉浸提物0.1％，测试液配好后，按每瓶9.0mL封装于15mL的无色透明口服液瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用时采用绝迹稀释法，即用无菌注射器将待测定的水样(固体样品则须用水溶解或浸提，处理成液体后测定)逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数。铜绿假单胞菌瓶阳性反应时由近无色液体变成蓝绿色液体。
实施例二本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为8mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为4.5cm，留空高度H2为3.5cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.15％、氯化物1.0％、蛋白胨2.0％、牛肉浸提物0.5％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按每瓶4.5mL封装于8mL的无色透明西林瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用时用无菌注射器将吸取0.5mL水质样品，注入到测试瓶中，摇匀后放置于37℃干燥箱或水浴锅中24小时，根据瓶中液体的变化判断阴性或阳性反应，此为定性分析；按此方法做2组或3组平行样，按逐级稀释法查MPN表，即可进行定量测试。污泥等其它固体样品则须用水溶解或浸提，处理成液体后再按上述方法进行测定。
实施例三本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为10mL的无色透明圆底玻璃瓶，测试液的高度H1为3.0cm，留空高度H2为0.9cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.04、氯化钠0.2、蛋白胨0.5％、牛肉浸提物0.1％、蒸馏水96.4～99.6％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按每瓶4.5毫升封装于10mL测试瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例四本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为8.1mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为3.0cm，留空高度H2为2.4cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.1％、氯化钠1.0％、蛋白胨2.0％、牛肉浸提物0.5％、蒸馏水96.4～99.6％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按照需要量罐装在上述测试瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用方法同实施例一。
实施例五本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为12.6mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为5.0cm，留空高度H2为2.0cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.06％、氯化钠0.5％、蛋白胨1.0％、牛肉浸提物0.5％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按照需要量罐装在上述测试瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用方法与实施例一相同。
实施例六本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为6.5mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为4.5cm，留空高度H2为1.6cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.05％、氯化钾0.8％、蛋白胨1.5％、牛肉浸提物0.6％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按照需要量罐装在上述测试瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用方法与实施例一相同。
实施例七本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为6mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为5.0cm，留空高度H2为2.5cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.03％、氯化钠0.3％、氯化钾0.5％、蛋白胨1.0％、牛肉浸提物0.2％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按照需要量罐装在上述测试瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用方法与实施例一相同。
实施例八本实施例与实施例一基本相同，不同之处在于测试瓶为5.0mL的无色透明西林瓶，测试液的高度H1为4.5cm，留空高度H2为2.0cm。
上述测试液配方为十六烷三甲基溴化铵0.12％、氯化钾0.8％、蛋白胨1.0％、牛肉浸提物0.2％，余量为蒸馏水。将上述试液配好后，按照需要量罐装在上述测试瓶中，高压灭菌15分钟即可。
使用方法与实施例一相同。
权利要求
1.一种铜绿假单胞菌测试液，其特征是以重量百分比计，含有十六烷三甲基溴化铵0.02～0.15％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.35～99.18％。
2.根据权利要求1所述的铜绿假单胞菌测试液，其特征是所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.04～0.1％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.4～99.16％。
3.根据权利要求1或2所述的铜绿假单胞菌测试液，其特征是所述氯化物为氯化钠、氯化钾中的一种或两种。
4.根据权利要求3所述的铜绿假单胞菌测试液，其特征是所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.05％、氯化钠0.5％、蛋白胨1.0％、牛肉浸提物0.5％、蒸馏水97.95％。
5.一种铜绿假单胞菌简易测试瓶，包括封口的无色透明瓶，其特征是所述无色透明瓶中装有所述铜绿假单胞菌测试液，测试液在测试瓶中的高度H1和测试瓶等截面留空高度H2之比H1∶H2＝1∶0.3～0.8，所述测试瓶内部在测试前为无菌状态。
6.根据权利要求5所述的铜绿假单胞菌简易测试瓶，其特征是所述无色透明小瓶是以胶塞和铝皮盖封口的无色透明玻璃瓶。
7.根据权利要求6所述的铜绿假单胞菌简易测试瓶，其特征是所述无色透明瓶是以胶塞和铝皮盖封口的5～15mL西林瓶或口服液瓶。
8.根据权利要求5至7任意一项所述的铜绿假单胞菌简易测试瓶，其特征是以重量百分比计，所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.02～0.15％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.35～99.18％。
9.根据权利要求8所述的铜绿假单胞菌简易测试瓶，其特征是所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.04～0.1％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.4～99.16％。
10.根据权利要求9所述的铜绿假单胞菌简易测试瓶，其特征是所述铜绿假单胞菌测试液含有十六烷三甲基溴化铵0.05％、氯化钠0.5％、蛋白胨1.0％、牛肉浸提物0.5％、蒸馏水97.95％。
全文摘要
本发明涉及一种水、食品等物质中微生物的测试方法及其测试器具，特别是涉及一种水或其它物质中铜绿假单胞菌的测试液及其测试瓶。本发明所提供的铜绿假单胞菌测定液含有十六烷三甲基溴化铵0.02～0.15％、氯化物0.2～1.0％、蛋白胨0.5～2.0％、牛肉浸提物0.1～0.5％、蒸馏水96.35～99.18％。本发明还提供了相应的铜绿假单胞菌简易测试瓶，包括封口的无色透明瓶，其中装有所述铜绿假单胞菌测试液，测试液在测试瓶中的高度H
文档编号C12M1/34GK101029329SQ200610128320
公开日2007年9月5日 申请日期2006年11月30日 优先权日2006年11月30日
发明者宋毛平, 李树华, 刘五一, 白莉, 陈恭恩 申请人:白莉