专利名称：肌酸羟基柠檬酸盐、其制法及在个体中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种促进个体肌肉生长和锻炼成绩、减少和/或预防肥 胖、改善训练的恢复和/或抑制食欲导致减肥的食品添加剂。本发明还 涉及一种通过消耗添加的组合物促进这些效果的方法。本发明还涉及一 种制造一种添加组合物的方法。
背景技术：
单水合肌酸通常作为添加剂使用。单水合肌酸可溶于水，每75mL 水可溶解l克肌酸。摄取单水合肌酸须要同时摄入大量的水。另外，在 水溶液中，肌酸通过不可逆的、与pH值有关的非酶反应而转化为肌酸 酐。碱性水溶液含有肌酸和肌酸酐的平衡混合物。另一方面，在酸性的 溶液中，则完全生成肌酸酐。肌酸酐完全没有肌酸的增进机能的有益效 果。水溶性的单水合肌酸盐是可以得到的，在其他地方已经叙述。比如， 美国专利5,973,199 (其全部内容在此引作参考)将lmol单水合肌酸和 lmol如下的有机酸结合而成的肌酸水溶性有机盐，这些有机酸是柠 檬酸、马来酸、富马酸、酒石酸和马来酸。美国专利5，925，278 (其全部内容在此引作参考)声称叙述了通过 lmol的肌酸和lmol的柠檬酸结合得到的一种形式的肌酸盐。美国专利6,211,407 (其全部内容在此引作参考)声称叙述了柠檬酸 二肌酸盐和三肌酸盐及其制造方法。据报道此盐是2mo1和3mo1的单 水合肌酸分别与lmol柠檬酸结合。另外，柠檬酸二肌酸盐和三肌酸盐 据称在酸性溶液中是稳定的，似乎旨在防止或阻止肌酸形成肌酸酐。美国专利6,166,249 (其全部内容在此引作参考)声称叙述了丙酮酸 肌酸盐，其中肌酸和丙酮酸根之比为1:1,该丙酮酸肌酸盐含有1~10 个分子的水。美国专利5，973，199 (其全部内容在此引作参考)声称叙述了其熔点 为128~ 129'C的马来酸肌酸盐的制造方法。该专利还声称叙述了其熔 点为112-114X:的柠檬酸肌酸盐的制造方法。 美国专利6，838，562(其全部内容在此引作参考)声称叙述了乳清酸、 硫代乳清酸和二氢乳清酸的单肌酸盐、二肌酸盐或三肌酸盐的合成方 法。发明内容本发明，按照其不同的实施方案提供了通过肌酸(正如在本文中所 使用的，此术语指的是任何种类的肌酸，将不限定于任何特定的形式或 阴离子)与羟基柠檬酸(也称为HCA)的反应形成的有机盐的制造方 法及其在个体，比如动物和人当中的应用，羟基柠檬酸是在藤黄属植物(包括但不限于膝黄果(G"flmVi/fl cfl附办wVi)、山竹子((7"w7wVi ) 和客夜果(G"rc/"/fl "/ W/7V/s ))水果外壳中存在的主要的酸。这些盐， 比如羟基柠檬酸单肌酸盐、羟基柠檬酸二肌酸盐和羟基柠檬酸三肌酸盐(一起称为"羟基柠檬酸肌酸盐")，可提供改善的水溶性，并在水中 和在酸性溶液中具有比单水合肌酸改善的稳定性。如上所述的羟基柠檬 酸肌酸盐可用于增加个体，特别是运动员的肌肉和锻炼成绩，提供针对 特定生物能缺陷的神经保护策略。另外，通过供给有生物效果量的 HCA,这样的羟基柠檬酸肌酸盐有助于通过避免将碳水化合物能转化 为三甘油酯来减少脂肪酸合成，借此特别适合于旨在减少和/或防止过 度肥胖以减轻体重的节食和锻炼安排。再有，由于HCA部分对5-羟 色胺能输出(serotonergic output)的刺激作用，羟基柠檬酸肌酸盐可 有助于改善锻炼恢复和抑制食欲导致减轻体重。一般说来，按照其不同的实施方案，本发明提供稳定的水溶性羟基 柠檬酸的肌酸盐，比如羟基柠檬酸肌酸盐及其制造方法，与单水合肌酸 相比，此肌酸盐具有更高的水溶性和在酸性溶液中具有更高的稳定性。 按照其不同的实施方案，本发明还可提供羟基柠檬酸肌酸盐及其制造方 法，这种肌酸盐可以给哺乳动物口服，并具有与单独服用或同时服用肌 酸或柠檬酸相比相同或更高的生物有效性，其中该盐可协同性地增加由 单独的肌酸和羟基柠檬酸成分所赋予的生理学效果。更具体说，本发明提供一种食品添加剂的制造方法，这种方法提供 生物有效的有机肌酸盐，比如羟基柠檬酸单肌酸盐、二肌酸盐和三肌酸 盐，它们在整体上被称为"羟基柠檬酸肌酸盐"。本发明有利地提供一 种食品添加剂及其制造方法，其中有生物效果的有机肌酸盐，每个脂解 /抗生脂的阴离子部分(由羟基柠檬酸表示)分别包括一个、两个或三 个增能的阳离子部分(由肌酸表示，它如上所述但不限定于特定种类的 阴离子)。还有，按照其一个实施方案，本发明可提供具有改善了 口味 的羟基柠檬酸肌酸盐及其制造方法。本发明还通过消耗含有羟基柠檬酸肌酸盐的添加组合物，来提供促 进个体增加肌肉和锻炼成绩的方法。本发明还通过消耗含有羟基柠檬酸 肌酸盐或衍生物的添加组合物，来提供减少和/或防止肥胖症的方法。 本发明还通过消耗含有羟基柠檬酸肌酸盐或衍生物的添加组合物，提供 改善锻炼恢复的方法。另外，本发明还通过消耗含有羟基柠檬酸肌酸盐 或衍生物的添加组合物，来提供抑制食欲导致减轻体重的方法。按照本发明的不同实施方案，须要改善短期无氧运动成绩和/或同 时实现肌肉体积膨大和瘦肉多的从事运动的个体可补充以羟基柠檬酸肌酸盐。再有，由于来源于补充羟基柠檬酸肌酸盐而由HCA-诱发的刺 激5 -羟色胺能输出，使得增强了锻炼的恢复，并改善了进食的欲望(特 别是在严格限制饮食的期间)。再有，通过神经保护，羟基柠檬酸肌酸 盐可特别用于杭廷顿舞蹈症和帕金森病、杜兴氏肌营养不良病人的特异 性生物能缺陷，在临床上可以用于螺旋状萎缩病人和其他各种神经肌肉 疾病、糖原储积病和充血性心脏功能不全。在一个实施方案中，本发明涉及通过肌酸与羟基柠檬酸反应形成的 被分离的水溶性肌酸盐，比如羟基柠檬酸肌酸盐，这是一种与单水合肌 酸相比，具有改善的在水和酸性溶液中稳定性的盐。在一个实施方案中，羟基柠檬酸肌酸盐是羟基柠檬酸的单肌酸盐、 二肌酸盐和三肌酸盐。羟基柠檬酸单肌酸盐可以是每个羟基柠檬酸根阴 离子包括一个肌酸阳离子。羟基柠檬酸二肌酸盐可以是每个羟基柠檬酸 根阴离子包括两个肌酸阳离子。而羟基柠檬酸三肌酸盐可以是每个羟基 柠檬酸根阴离子包括三个肌酸阳离子。本发明可提供对个人，比如运动员增强肌肉能力和锻炼恢复以及减 轻体重的方法，其中该方法包括单独或组合服用含有经分离的在此叙述 的盐中的任何一种的组合物。本发明还可以提供针对特异性生物能缺陷 提供神经保护策略的方法，该方法包括单独或組合服用含有在此所述分 离的盐中任何一种的组合物。本发明还可以提供恢复疲劳和紧张的方 法，其中该方法包括单独或组合服用含有在此所述分离的盐中任何一种 的组合物。本发明还可以提供通过防止碳水化合物能转化为三甘油酯， 从而减少脂肪酸合成的方法，其中该方法包括单独或组合服用含有在此所述分离的盐中任何一种的组合物。还有，本发明可提供通过刺激5-羟色胺能输出来抑制食欲导致减轻体重的方法，其中，该方法包括单独 或组合服用含有在此所述分离的盐中任何一种的组合物。本发明还可以提供方法，该方法有利地包括将任何一种在此所述分 离的盐与一种或几种如下所述的食品添加剂相组合的步骤乳清蛋白 (分离物和/或浓缩物和/或水解物)、酪蛋白(胶束酪蛋白、酪蛋白酸 钠和/或酪蛋白酸钾)、a-硫辛酸、碳水化合物、游离形式的氨基酸(分 支链和/或关键氨基酸和/或非关键氨基酸)和盐、三价铬及其有机盐和 螯合物(多烟酸铬和/或曱基吡啶酸铬和/或富马酸铬、柠檬酸铬等)、 维生素和矿物质、茶叶及其多酚提取物(特别含有表没食子儿茶精五倍 子酸盐(EGCG)、表没食子儿茶精(EGC)、儿茶精(C)、表儿茶 精(EC)、表儿茶精五倍子酸盐(EG)等)、咖啡因和其他热源、生 物类黄酮、缩合单宁酸、低聚原花青素、美国和/或韩国人参及其提取 物(特别含有人参皂戒型糖苷皂戒)、魔芋葡甘露聚糖、肌肉醇，包括 肌肉醇衍生物，比如酯、酰胺和盐以及其他衍生物，包括在消化时变成 活性物的衍生物和o-磷酸肌醇酯(COP)、硫酸肌醇酯(CS)、普立 醇、补益草药和药物等。应该承认，可以加入或者与本发明的食品盐一 起加入的成分并不限于如上所述的成分。按照一个实施方案，本发明涉及如下通式的分离的水溶性羟基柠檬 酸肌酸盐该水溶性盐的分子量为547.07，熔点为大约290'C。
此外，按照一个实施方案，本发明涉及至少下列一种方法促进个 体增加肌肉和锻炼成绩、减少和/或防止肥胖症、改善锻炼恢复和抑制 食欲，导致个体减轻体重的方法，该方法包括消耗以分离水溶性幾基柠 檬酸肌酸盐的形式含有羟基柠檬酸肌酸盐的食品添加组合物。该水溶性 盐的分子量为547.07，熔点为大约290匸。按照一个实施方案，本发明涉及用于促进个体增加肌肉和锻炼成 绩、减少和/或防止肥胖症、改善锻炼恢复和抑制食欲，导致个体减轻 体重的中至少 一 项的食品添加组合物，该食品添加组合物包括呈分离的 水溶性羟基柠檬酸肌酸盐形式的羟基柠檬酸肌酸盐。在该食品添加组合 物中，该盐的分子量为547.07，其熔点为大约290。C。
具体实施方式
当补充外源肌酸时，肌肉内和大脑的肌酸及其磷酰化形式，即磷酰 肌酸的储存就变高。此储存量的增加，通过防止消耗ATP，刺激蛋白 质合成或减少蛋白质降解和使生理膜稳定化而给予治疗的效果。来自运 动文献的证据表明，运动员通过补充肌酸得到增加肌肉力量和能力的益 处，减轻了重复活动产生的疲劳并增加了肌肉的质量。在短时间的强力 锻炼的过程中，比如在半分钟或更短的时间内，磷酰肌酸分解为肌酸和 磷酸根，使用释放出的能量使初级能源，即三磷酸腺普(ATP)再生。 当磷酰肌酸被耗尽时，由于ATP的再生无法快到满足锻炼的需要而使 动力输出下降。因此，在肌肉中积累更多的磷酰肌酸能够减轻在短时间 内高强度锻炼产生的疲劳。在肌肉中过量的肌酸也可以在高强度无氧锻炼之后提高磷酰肌酸 再生的速度，这可能导致减轻在训练中或在许多竟争性运动中由于重复 的急促性活动导致疲劳。因此，补充肌酸能够导致对骨银肌有积极的生理效果，比如在短时 间高强度无氧锻炼的过程中提高成绩，增加强度和改善体力活动主体的 身体成分。这样的好处已经给予了杭廷顿舞蹈症、帕金森病和杜兴氏肌 营养不良病人模型，在临床上用于螺旋状萎缩病人和其他各种神经肌肉 疾病、糖原储积病和充血性心脏功能不全。请见比如Persky, A. M.和 Brazeau, G. A.，的《食品补充单水合肌酸的临床药理学》，栽尸A"r柳a"/ Z ev53 ( 2) : 161-176， 2001。食品中补充合成肌酸越来越普遍，代表
运动员用肌酸给肌肉"加载"的主要方法。每日摄入大约20g的肌酸， 连续5 ~ 7日 一般会增加肌肉中肌酸含量10 ~ 25 % 。在肌肉中过量肌酸 的大约三分之一呈磷酰肌酸的形式。请见比如Harris, R.等人的《通过 补充肌酸提高正常主体的静止肌肉和运动肌肉中肌酸含量》，载Clinical Science 83: 367-374， 1992和Balson, P.等人的《在短时间高强度锻炼 的过程中骨骼肌的代谢，补充肌酸的影响》，载爿""户/^si》/og/cfl S，J/譜/ca， 1154: 303-310, 2995。羟基柠檬酸表现出能够抑制ATP柠檬酸分解酶的活性，这是负责 将碳水化合物能转化为脂肪的线粒体外酶，因此，据信能抑制脂肪酸的 合成，即抑制脂肪生成并减轻体重，请见比如Jena， B. S.等人的《来 源于藤黄的(-)-鞋基柠檬酸的化学和生物化学》，载/.爿g〃'c Ftf^/C7^w. 50: 10-20， 2002。还在一定程度上介绍了另外的证据，即羟基柠檬酸 可借助于对5-羟色胺能输出的刺激来减少食物摄入，这最终会诱发饱 和并减少个体对食物的欲望，请见比如Preuss， H. G.等人的《(-)-羟基 柠檬酸(HCA-SX)新型天然提取物和HCA-SX、尼亚新(一种烟酸商 品名)结合铬和匙羹藤(Gymnema sylvestre )提取物组合在志愿者体 重控制方面的影响初步研究》，载7VM/W//Vm i ^e"rc/i 24: 45-58， 2004。 补充羟基柠檬酸通常被用作饮食介入以对抗肥胖症和体重过重导致减 轻体重。另外，在运动营养中羟基柠檬酸还用于帮助活动的个体和专业 运动员达到和保持许多运动规则可要求的身体脂肪的最佳水平。按照其不同的实施方案(指实施例1-4),本发明提供稳定的水 溶性羟基柠檬酸肌酸盐，比如羟基柠檬酸肌酸盐，如羟基柠檬酸三肌酸 盐，还提供其制造方法，该肌酸盐具有比单水合肌酸有更高水溶性并在 酸性溶液中有更高的稳定性。按照其不同的实施方案，本发明提供羟基 柠檬酸肌酸盐，比如羟基柠檬酸三肌酸盐及其制造方法，该肌酸盐可供 哺乳动物口服，其生物有效性与单独或组合给药的肌酸或幾基柠檬酸相同或者更高，其中该盐可协同性地增加由单独的肌酸和羟基柠檬酸成分 所赋予的生理效果。更具体说，本发明提供一种食品添加剂及其制造方法，该添加剂提 供生物有效的肌酸有机盐，比如羟基柠檬酸肌酸盐。本发明有利地提供 一种食品添加剂及其制造方法，其中该生物有效的肌酸有机盐在每个脂 解/抗生脂阴离子部分(由羟基柠檬酸根表示)分别包括一个、两个或
三个增强能量的阳离子部分(由肌酸表示)。本发明还可以提供具有改 善了滋味的羟基柠檬酸肌酸盐及其制造方法。本发明通过消耗含有羟基柠檬酸的食品添加组合物，提供促进个体 增加肌肉和提高锻炼成绩的方法。本发明通过消耗含有羟基柠檬酸肌酸 盐的食品添加组合物，提供减少和/或防止肥胖症的方法。本发明还通 过消耗含有羟基柠檬酸肌酸盐的食品添加组合物，提供一种改善锻炼恢 复的方法。另外，本发明还通过消耗含有羟基柠檬酸肌酸盐的食品添加 组合物，提供一种抑制个体食欲，导致减轻体重的方法。在此方面，按照本发明的各种实施方案，补充羟基柠檬酸肌酸盐， 可特别适用于须要改善短时间无氧成绩和/或同时实现肌肉增加体积和瘦肉的运动。再有，由于HCA-诱发的刺激5-羟色胺能输出，按照本 发明的各种实施方案，补充羟基柠檬酸肌酸盐，特别可适用于增强从锻 炼中的恢复和减少进食欲望(特别是在严格的饮食限制中)。再有，通 过赋予神经保护，幾基柠檬酸肌酸盐特别适用于杭廷顿舞蹈症、帕金森 病和杜兴氏肌营养不良特异性生物能缺陷，在临床上用于螺旋状萎缩和 各种神经肌肉疾病、糖原储积病和充血性心脏功能不全的病人。添加剂羟基柠檬酸肌酸盐可以任何形式消费。比如可将添加组合物 的剂型以比如胶嚢、片剂、嚢片剂、液体饮料、粉末混合饮料、食品凝 胶或即食型棒或饮品的形式提供。优选的剂型是胶嚢或粉末。再有，可以按照习惯的草药和/或食品添加剂的加工技术，以如上 所述的任何形式提供剂型。本领域的专业人员都可以理解，补充组合物 可含有各种附加的活性成分和赋形剂。在实施例l至实施例5中更详细说明的本发明的几个实施例的实施 方案中，提供了生产羟基柠檬酸肌酸盐的方法、用于促进增加个体肌肉 和提高锻炼成绩、减少和/或防止肥胖症、改善锻炼的恢复和/或抑制食 欲导致减轻体重的方法。因此，按照其各种实施方案，本发明提供与单水合肌酸相比具有更 高的水溶性和在酸性溶液中稳定性的稳定水溶性HCA肌酸盐，比如羟基柠檬酸肌酸盐。按照其各种实施方案，本发明还可以提供可供哺乳动 物口服，与单独或组合给药的肌酸或HCA相比，其生物有效性相等或 更高的羟基柠檬酸肌酸盐，其中该盐可协同性地增加由单独的肌酸或 HCA组分所赋予的生理效果。
至于在下面说明的在实施例的实施方案中各个步骤中使用的醇，应 该注意到，优选的醇包括曱醇、乙醇、丙醇和异丙醇。也可以^使用乙酸 乙酯。更优选使用曱醇。为了降低在完成反应所必需的时间内，肌酸向肌酸酐的转化率，优选(-)-HCA的羟基醇溶液。也可以使用水-(-)-HCA 溶液作为加入单水合肌酸的介质。然而反应产生的盐，其肌酸的含量更 低。按照其各种实施方案，本发明可提供比传统的食品添加剂及其制造 方法更好的某些优点。比如，本发明的羟基柠檬酸肌酸盐，与单水合肌 酸相比，可具有改善的水溶性并具有改善的在水和酸性溶液中的稳定 性。再有，本发明的羟基柠檬酸肌酸盐可用于增加个体，特别是运动员 的肌肉和提高锻炼成绩，并赋予面向特异性生物能缺陷的神经保护策 略。此外，通过供应生物有效量的HCA，本发明的鞋基柠檬酸肌酸盐 可有助于通过防止碳水化合物能转化为三甘油酯来减少脂肪酸合成，借 此特别适合于与旨在减少和/或防止过分肥胖导致减轻体重的节食计划 一起使用。进一步，本发明的羟基柠檬酸肌酸盐，由于HCA部分对5 -羟色胺能输出的刺激作用，本发明的羟基柠檬酸肌酸盐可有助于改善 个体的锻炼恢复和抑制食欲，导致减轻体重。虽然下面的实施例在其5个实施方案中说明了本发明的实施方法， 但这些实施例并不构成对本发明范围的限制。在考虑了说明书和下面的 实施例之后，其他实施方案和制造模式对本领域的专业人员都是不言而 喻的。实施例实施例1单水合羟基柠檬酸肌酸二钾盐、单水合羟基柠檬酸二肌酸(单)钾 盐和单水合羟基柠檬酸三肌酸盐藤黄果(G. cfl附^^,Vi)和山竹子(G". /wJ/c")的果壳可含有20 ~ 30 %的(画)-HCA (参照Lewis, Y. S和Neelakantan S.《(-)-羟基柠檬酸， 藤黄果中主要的酸》，载Pytochemistry 4: 619-625， 1965)。基于无 水酸含量，为使反应产率不低于50。/。的(-)-HCA，藤黄果(G. c"w^g/fl) 和山竹子(<7./m//cfl)的果壳优选可含有最少大约15。/。的(-)-HCA。因此，估计从1.3875kg原料藤黄果果壳可提取出208.13g (-)-HCA。 提取的方法可类似于由比如Majeed,M.等人在美国专利5，783，603中叙
述的方法，其中叙述了水溶性羟基柠檬酸(三)钾盐。该方法包括使用烷基醇从藤黄果中提取(-)-HCA。步骤l)在回流温度下，用4.1625L曱醇提取1.3875kg藤黄果3.5h。 因此用滤布过滤器过滤之后，收集第一提取液；步骤2)在藤黄果果壳中再加入4.1625L曱醇并回流3.5h。如上将 其过滤收集第二提取液；步骤3)在藤黄果果壳中再加入4.1625L曱醇并再回流3.5h。如上 将其过滤，收集第三提取液；步骤4)然后将全部三者合并；步骤5 )用4.1625L曱醇处理合并的提取液，在9 ~ 10的pH值下， 在甲醇中加入112.2g氢氧化钾(2mol元素钟)和149.13g单水合肌酸 (lmol)。再将其回流3.5h得到恒定的pH值10，以4吏单水合羟基柠 檬酸(单)肌酸二钾盐沉淀出来。步骤6)过滤出沉淀并用1.3875L曱醇洗涤；步骤7)在大约70。C下真空干燥该沉淀。为了得到羟基柠檬酸二肌酸(单)钾盐，用4.1625L曱醇处理在步 骤5中的合并提取液，在大约9~ 10的pH值下，在甲醇中加入56.1g 氢氧化钾(lmol的元素钾)和298.26g单水合肌酸(2mo1)。将其回 流3.5h，得到恒定的pH值10，以使单水合羟基柠檬酸二肌酸(单)钾 盐沉淀出来。重复步骤6和步骤7。为了得到羟基柠檬酸三肌酸盐，用4.1625L曱醇处理步骤5中的合 并提取液，在大约9~ 10的pH值下，在曱醇中加入447.39g单水合肌 酸(2mo1)。将其回流3.5h，得到恒定的pH值10，以沉淀出单水合 羟基柠檬酸三肌酸盐。重复步骤6和步骤7。基于干物重量，单水合羟基柠檬酸(单)肌酸二钾盐优选具有不小 于大约50。/。的(-)-HCA,钟和肌酸含量分别为大约20%和10% 。内酯 含量可接近于不大于大约2%。基于干物重量，单水合羟基柠檬酸二肌酸(单)钾盐优选具有不小 于大约50%的(-)-HCA,钾和肌酸含量分别为大约10%和20% 。内酯 含量可接近于不大于大约2%。基于干物重量，单水合羟基柠檬酸三肌酸盐优选具有不小于大约 50。/。的(-)-HCA，肌酸的含量为大约30%。内酯含量可接近于不大于大 约2 % 。单水合羟基柠檬酸(单)肌酸二钾盐、单水合羟基柠檬酸二肌酸(单) 钾盐和单水合羟基柠檬酸三肌酸盐都是稳定的、水溶性的和生物有效的。实施例2羟基柠檬酸三肌酸盐通过将羟基柠檬酸的钾盐、钠盐和钾盐的水溶液通过阳离子交换树 脂，比如Zeocarb 225，就能够4艮容易产生所述游离的HCA (参照 Singh， R. P.等人《来源于藤黄果的(-)-羟基柠檬酸》，载Biological Memoirs 21 ( 1 ) : 27-33， 1995)。羟基柠檬酸的分子量为208.13。单水合肌酸的分子量为149.13。可 按照如下的步骤制造羟基柠檬酸三肌酸盐步骤1)从10.84L无水甲醇开始；步骤2)在搅拌下，在无水曱醇中加入将(-)-HCA盐通过阳离子交 换树脂之后得到的含有1，084g羟基柠檬酸(5.2mo1)的水溶液。将得到 的混合物搅拌大约45min;步骤3)在羟基柠檬酸/曱醇的混合物中加入2，362g (15.6mol)单 水合肌酸。将此混合物搅拌大约4h;步骤4)在第4h结束时，通过离心从反应混合物中分离结晶的产 物，用无水曱醇洗涤以除去所有的杂质；步骤5)在70X:下真空干燥最终产品。得到的产物是羟基柠檬酸三肌酸盐，每个羟基柠檬酸的(三)阴离 子具有三个肌酸阳离子。单水合肌酸的分子量是149.13，因此加入的单 水合肌酸的量是15.6g-mol。因此，鉴于所述反应混合物包括5.2mol的羟基柠檬酸，肌酸与羟 基柠檬酸的化学计量比就是3:1。对材料进行化验肌酸含量应该在60 ~ 70 %的范围内。另外，鉴于反应混合物包括5.2mol羟基柠檬酸，通过将肌酸与幾 基柠檬酸的化学计量比变成1:1和2:1，就能够分别得到每个羟基柠檬 酸根阴离子具有一个或两个肌酸阳离子的羟基柠檬酸单肌酸盐和羟基 柠檬酸二肌酸盐。应该注意到，优选的醇包括甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇。还可以使 用乙酸乙酯。特别优选的是曱醇。优选(-)-HCA的羟基醇溶液，以减小 在完成反应所必需的时间内肌酸转化为肌酸酐的转化率。另外也可以4吏 用水-(-)-HCA溶液作为加入单水合肌酸的介质。然而反应产生盐将含有 比较少的肌酸。 实施例3从肌酸盐酸盐和单水合羟基柠檬酸(三)钾盐制备羟基柠檬酸三肌酸盐单水合羟基柠檬酸三钾盐每mol的分子量为340.41。肌酸盐酸盐分 子量为167.57。操作步骤如下步骤l)将3.5g单水合羟基柠檬酸三钾盐(O.Olmol)与足够量的 去离子水混合，使最终体积为300mL;步骤2)在如上所述的溶液中加入5.03g (0.03mol)肌酸盐酸盐， 并将溶液搅拌45min;步骤3)得到的产物是每个羟基柠檬酸(三)阴离子具有三个肌酸 阳离子的羟基柠檬酸三肌酸盐(5.8~6% );步骤4)通过此反应还得到氯化钾，可通过添加醇(乙醇、曱醇) 而沉淀出来，并经过滤而除去。鉴于所述反应混合物包括O.Olmol羟基柠檬酸三钾盐和0.03mol肌 酸盐酸盐，肌酸与羟基柠檬酸的化学计量比就是3:1。通过将肌酸与羟基柠檬酸的化学计量比改变为1:1和2:1时，就能 够分别得到每个羟基柠檬酸根阴离子具有一个或两个肌酸阳离子的羟 基柠檬酸单肌酸二钾盐和羟基柠檬酸二肌酸单钾盐。因此，在反应的步 骤2中分别能够每mol羟基柠檬酸三钾盐使用0.01和0.02mol肌酸盐 酸盐。实施例4从游离(-)-HCA制备羟基柠檬酸三肌酸盐步骤l)通过将lmol ( 340.41g)羟基柠檬酸三钾盐溶解于去离子 水，使最终的溶液体积为2L，制备出0.5M的溶液；步骤2)在步骤1的羟基柠檬酸三钾盐溶液中加入lmol ( 192.13g) 无水柠檬酸。然后在30。C加热该溶液；步骤3)冷却，沉淀出柠檬酸三钾。通过过滤将其除去；步骤4)得到10y。的游离(-)-HCA溶液； 步骤5)然后通过加入2L无水曱醇能够得到3mo1 ( 447.39g )单水 合肌酸，然后将其与游离(-)-HCA溶液合并。将混合物搅拌4h,以得到 羟基柠檬酸三肌酸盐；步骤6)在第4h结束时，通过离心从反应混合物中分离结晶的产 物，用无水曱醇洗涤；步骤7)然后在70C下真空干燥最终产物。通过分别在无水曱醇和(-)-HCA的混合物中加入2mol或lmol单水 合肌酸，然后搅拌4h，即可得到羟基柠檬酸二肌酸盐和单肌酸盐。 实施例5羟基柠檬酸三肌酸盐的制造方法步骤l)将藤黄果果壳放入静态萃取器中，用5:1和7:1的水萃取 60miii;步骤2)然后将水排放到储槽中并进行4次洗涤； 步骤3)排放出果壳；步骤4)用氢氧化钙进行沉淀，回收羟基柠檬酸的钙盐；步骤5)用酸性介质处理羟基柠檬酸钓并过滤。回收液体羟基柠檬酸；步骤6)用液体羟基柠檬酸与肌酸反应，然后进行喷雾干燥； 步骤7)回收HCA三肌酸盐粉末；步骤8)通过40目的筛子过筛HCA三肌酸盐粉末，进行测试和包装。通过此方法用HPLC测定一般得到大约30~35%的(-)-羟基柠檬酸 和30~ 40%的肌酸。标准的规范可以是不低于大约30%的(-)-羟基柠檬酸和不低于30% 的肌酸。在干燥时的产物损失优选不多于8% ,重金属含量优选不多于 10ppm。产物可以是白色到淡黄色的细粉末。
权利要求
1.一种如下通式的分离的肌酸和羟基柠檬酸的水溶性盐
2. 权利要求1的水溶性盐，其中该盐的分子量为547.07。
3. 权利要求1的水溶性盐，其中该盐的熔点为大约290匸。
4. 促进增加个体的肌肉和提高锻炼成绩、减少和/或防止肥胖症、改 善锻炼恢复和抑制个体的食欲导致减轻体重等当中的至少一种方法，该 方法包括消耗含有呈分离的肌酸和羟基柠檬酸水溶性盐形式的鞋基柠 檬酸肌酸盐的食品添加组合物的步骤。
5. 权利要求4的方法，其中该盐的分子量为547.07。
6. 权利要求4的方法，其中该盐的熔点为大约2卯C。
7. 用于促进增加个体的肌肉和提高锻炼成绩、减少和/或防止肥胖 症、改善锻炼恢复和抑制个体的食欲导致减轻体重当中至少一种的食品 添加组合物，该食品添加组合物包括呈分离的肌酸和羟基柠檬酸水溶性 盐形式的羟基柠檬酸肌酸盐。
8. 权利要求7的食品添加组合物，其中该盐的分子量为547.07。
9. 权利要求7的食品添加组合物，其中该盐的熔点为大约290*C。
全文摘要
公开了羟基柠檬酸三肌酸盐的制造方法。羟基柠檬酸三肌酸盐可用作食品添加成分，用于减少肥胖症、抑制食欲、改善肌肉和锻炼的成绩和恢复。该盐可用于食品、食品添加剂和食品工业。
文档编号A23L1/29GK101115714SQ200680004276
公开日2008年1月30日 申请日期2006年2月7日 优先权日2005年2月7日
发明者M·A·休尔, M·莫里诺 申请人:新细胞制剂有限公司