专利名称：一种生物芯片片基处理方法
技术领域：
本发明属于生物材料领域。
背景技术：
目前，硬质基片形式的生物芯片的制作，主要是将玻璃片或硅片 等硬质基片经表面化学处理后，直接在基片上合成探针，或者将合成 好的探针、抗体、抗原等生物样品点加到基片上，通过化学结合反应， 将生物样品固定在硬质基片上，它的优点在于样品固定牢固，精密度 好，但它的缺点在于玻璃片片基边框效应明显，精密度仍未能满足临 床使用要求，生物样品与片基结合量低，固定样品活性降低快等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种能降低芯片片基边框效 应，精密度能满足临床使用要求，生物样品与片基结合量高，固定样 品活性降低慢的生物芯片片基处理方法。
本发明的技术方案是-O) 将H2S04与11202按体积比50%-80%: 20%-50%搅拌混匀，配 成芯片片基处理液；
(2) 将芯片片基浸入片基处理液中，室温处理12-36小时；
(3) 取出纯化水超声洗涤5次，10min/次；
(4) 风干；
(5) 浸入5。/。-30。/oKOH溶液，室温反应30-120分钟；(6) 取出用纯化水冲洗3次；
(7) 60摄氏度烘干；
(8) 冷却至室温；
(9) 将3-氨丙基三乙氧基硅垸用纯化水配成1%-12%溶液后，加入 0. 1%果糖配成硅化溶液；
(10) 浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟；
(11) 取出用超纯水漂洗2次；
(12) 120-180摄氏度干燥30分钟;
(13) 冷却至室温；
(14) 将戊二醛配成1%-10%水溶液后加入1%果糖，用5MNaOH溶 液调pH至8.0-10，制成醛化溶液；
(15) 将硅化片基进入醛化溶液，30-45摄氏度反应10-90分钟；
(16) 超纯水漂洗6次；
(17) 110摄氏度干燥10-40分钟；
(18) 冷却至室温。
有益效果:本发明的生物芯片片基处理方法，通过在片基前处理中 加入H2S04与H202以及KOH对表面进行预处理，在表面活化过程中 加入果糖和适当的硅垸浓度、戊二醛浓度以及适度的高温烘烤，制出 的生物芯片片基，边框效应低，精密度高，固定样品活性降低慢，生 物样品与片基结合量高。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。实施例1
(1) 将H2S04与H202按体积比50%: 50%搅拌混匀，配成片基处理 液
(2) 浸入片基处理液中，室温处理12小时
(3) 取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4) 风干
(5) 浸入5。/。KOH溶液，室温反应30分钟
(6) 取出用纯化水冲洗3次
(7) 60摄氏度烘干
(8) 冷却至室温
(9) 将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成1%溶液后，加入0. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11) 取出用超纯水漂洗2次
(12) 120摄氏度干燥30分钟
(13) 冷却至室温
U4)将戊二醛配成1%水溶液后加入1%果糖，用5。/。NaOH溶液调
pH至8.0，制成醛化溶液 U5)将硅化片基进入醛化溶液，30摄氏度反应10分钟
(16) 超纯水漂洗6次
(17) 110摄氏度干燥10分钟
(18) 冷却至室温实施例2
(1) 将H2S04与H202按体积比55%: 45%搅拌混匀，配成片基处理 液
(2) 浸入片基处理液中，室温处理16小时
(3) 取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4) 风干
(5) 浸入10。/。KOH溶液，室温反应50分钟
(6) 取出用纯化水冲洗3次
(7) 60摄氏度烘干
(8) 冷却至室温
(9) 将3-氨丙基三乙氧基硅垸用纯化水配成3%溶液后，加入O. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11) 取出用超纯水漂洗2次
(12) 130摄氏度干燥30分钟
(13) 冷却至室温
(14) 将戊二醛配成2%水溶液后加入1%果糖，用5y。NaOH溶液调 pH至8.2，制成醛化溶液
(15) 将硅化片基进入醛化溶液，34摄氏度反应20分钟 U6)超纯水漂洗6次
(17) 110摄氏度干燥15分钟
(18) 冷却至室温实施例3
(1) 将H2S04与H202按体积比60%: 40°/。搅拌混匀，配成片基处理 液
(2) 浸入片基处理液中，室温处理20小时
(3) 取出纯化水超声洗漆5次，10min/次
(4) 风干
(5) 浸入15MKOH溶液，室温反应70分钟
(6) 取出用纯化水冲洗3次
(7) 60摄氏度烘干
(8) 冷却至室温
(9) 将3-氮丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成5%溶液后，加入O. 1% 果糖配成硅化溶液
OO)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11) 取出用超纯水漂洗2次
(12) 140摄氏度干燥30分钟 (n)冷却至室温
(14) 将戊二醛配成3%水溶液后加入1%果糖，用5%NaOH溶液调 pH至8.5，制成醛化溶液
(15) 将硅化片基进入醛化溶液，38摄氏度反应30分钟
(16) 超纯水漂洗6次
(17) 110摄氏度干燥20分钟
(18) 冷却至室温实施例4
(1) 将H2S04与&02按体积比65%: 35%搅拌混匀，配成片基处理 液
(2) 浸入片基处理液中，室温处理24小时
(3) 取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4) 风干
(5) 浸入20。/。KOH溶液，室温反应90分钟
(6) 取出用纯化水冲洗3次
(7) 60摄氏度烘干
(8) 冷却至室温
(9) 将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成7%溶液后，加入0. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟 (n)取出用超纯水漂洗2次
(12) 150摄氏度干燥30分钟
(13) 冷却至室温
(14) 将戊二醛配成5%水溶液后加入1%果糖，用5%NaOH溶液调 pH至9.0，制成醛化溶液
(15) 将硅化片基进入醛化溶液，40摄氏度反应50分钟
(16) 超纯水漂洗6次
(n) 110摄氏度干燥30分钟 U8)冷却至室温实施例5
(1) 将H2SO4与H2O2按体积比70。/。 30%搅拌混匀，配成片基处理
液
(2) 浸入片基处理液中，室温处理28小时
(3) 取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4) 风干
(5) 浸入25n/。KOH溶液，室温反应110分钟
(6) 取出用纯化水冲洗3次
(7) 60摄氏度烘干
(8) 冷却至室温
(9) 将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成9%溶液后，加入O. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟 Ui)取出用超纯水漂洗2次
(12) 160摄氏度干燥30分钟
(13) 冷却至室温
(14) 将戊二醛配成7%水溶液后加入1°/。果糖，用5%NaOH溶液调 pH至9.5，制成醛化溶液
(15) 将硅化片基进入醛化溶液，42摄氏度反应70分钟
(16) 超纯水漂洗6次
(17) 110摄氏度干燥35分钟
(18) 冷却至室温实施例6
(1) 将H2S04与H202按体积比80%: 20%搅拌混匀，配成片基处理 液
(2) 浸入片基处理液中，室温处理36小时
(3) 取出纯化水超声洗涤5次，10min/次
(4) 风干
(5) 浸入30Q/。KOH溶液，室温反应120分钟
(6) 取出用纯化水冲洗3次
(7) 60摄氏度烘干
(8) 冷却至室温
(9) 将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成12%溶液后，加入0. 1% 果糖配成硅化溶液
(10) 浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟
(11) 取出用超纯水漂洗2次
(12) 180摄氏度干燥30分钟
(13) 冷却至室温
(14) 将戊二醛配成10%水溶液后加入1%果糖，用5。/bNaOH溶液调 pH至10.0，制成醛化溶液
(15) 将硅化片基进入醛化溶液，45摄氏度反应90分钟
(16) 超纯水漂洗6次
(17) 110摄氏度干燥40分钟
(18) 冷却至室温表1是本发明实施例1-6的测试部分结果
表l中用于测试的原料分别为
固定蛋白AFP (Alpha-Fetoprotein)抗体(河南博赛生物生产) 信号抗体辣根过氧化物酶标记AFP抗体(河南博赛生物生产)
封闭剂小牛血清(上海普龙生物生产)
反应洗液0. lmol/1 Tris-Hcl (上海美季生物生产)
发光底物SuperSignal ELISAFemto Maximum Sensitivity Substrate(美
国pierce生产)
测试时用美国biodot公司的喷点点样机器人将固定蛋白按4*12阵列 方式点于玻片表面后，经反应读取信号，进行分析。
表l:测试结果
、施例 项\1246
外观表面清洁无 物理颗粒表面清洁无 物理颗粒表面清洁无 物理颗粒表面清洁无 物理颗粒表面清洁无 物理颗粒表面清洁无 物理颗粒
信号强度880860830850860850
精密度 Ccv%;>3.83.24.24.03.54.0
本底值535353535453
蛋白活性 保持时间l年l年l年l年l年l年
1权利要求
1、一种生物芯片片基处理方法，其特征在于，包括如下步骤(1)将H2SO4与H2O2按体积比50％-80％20％-50％搅拌混匀，配成片基处理液；(2)将芯片片基浸入片基处理液中，室温处理12-36小时；(3)取出纯化水超声洗涤5次，10min/次；(4)风干；(5)浸入5％-30％KOH溶液，室温反应30-120分钟；(6)取出用纯化水冲洗3次；(7)60摄氏度烘干；(8)冷却至室温；(9)将3-氨丙基三乙氧基硅烷用纯化水配成1％-12％溶液后，加入0.1％果糖配成硅化溶液；(10)浸入硅化溶液中，室温避光反应30分钟；(11)取出用超纯水漂洗2次；(12)120摄氏度干燥30分钟；(13)冷却至室温；(14)将戊二醛配成1％-10％水溶液后加入1％果糖，用5％NaOH溶液调pH至8.0-10，制成醛化溶液；(15)将硅化片基浸入醛化溶液，30-45摄氏度反应10-90分钟；(16)超纯水漂洗6次；(17)110摄氏度干燥10-40分钟；(18)冷却至室温。
全文摘要
本发明属于生物材料领域，本要解决的技术问题是提供一种能降低芯片片基边框效应，精密度能满足临床使用要求，生物样品与片基结合量高，固定样品活性降低慢的生物芯片片基处理方法，技术方案是配芯片片基处理液；将芯片片基浸入片基处理液中，室温处理；纯化水超声洗涤；风干；浸入KOH溶液，室温反应；用纯化水冲洗；60摄氏度烘干；冷却至室温；浸入硅化溶液中，室温避光反应超纯水漂洗干燥冷却至室温；将硅化片基进入醛化溶液，30-45摄氏度反应；超纯水漂洗6次；110摄氏度干燥10-40分钟；冷却至室温。制出的生物芯片片基，边框效应低，精密度高，固定样品活性降低慢，生物样品与片基结合量高。
文档编号C12Q1/00GK101424682SQ20071013447
公开日2009年5月6日 申请日期2007年10月30日 优先权日2007年10月30日
发明者吴堂明, 张必达, 江晨亮, 潘能科, 陆冬雷 申请人:江苏三联生物工程有限公司