专利名称：：强直性脊柱炎易感性检测方法和试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地涉及抗原肽转运蛋白1(TransporterofAntigenP印tides1，TAP1)和低分子量多肽2(lowmolecularmasspolyp印tide-2，LMP2)的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)及其与强直性脊柱炎的相关性。本发明还涉及检测这些SNP的方法和试剂盒。
背景技术：
：强直性脊柱炎又名别赫捷列夫氏(VonBechterev)病或马-施二氏(Maritstrumpell)病，是一种慢性、进行性，中轴关节受累的慢性炎症性疾病。主要影响骨盆的骶髂关节、脊柱关节和椎旁组织。主要症状为下腰痛、脊椎僵硬及运动范围受限、X线显示两侧骶髂关节炎(sacroilitis)为其特征。由于该病一般先侵犯骶髂关节，并重点累及脊柱，最终导致脊柱骨性强直，故目前国内外多称之为强直性脊柱炎(AnkglosingSpondytitis，AS)。强直性脊柱炎有明显的种族性，在不同民族中发病率的差异很大。印第安人发病率最高，北美印第安人发病率为2.7%~6.3%。其次为白种人，白种人中发病率为0.1%1.4%。黄种人低于白种人,我国约为0.3%。而黑人发病率最低，约为白人的1/4,在非洲仅为0.2%。强直性脊柱炎好发于20至40岁的成年人，尤其是2030岁的青年男性。强直性脊柱炎呈常染色体显性遗传,有明显的家族遗传倾向，遗传因素〉90%。据调査，强直性脊柱炎病人亲属发病率比一般人高一倍左右，同胞复发风险比为82。90n/。以上的AS病人具有HLA-B27阳性,在正常人群中阳性率为8。/。；子女HLA-B27阳性占50。/。，发生强直性脊柱炎的占25%。目前基本上已有定论，HLA-B27作为独立的致病基因在AS的发病中起作用。因为在HLA-B27阳性个体中只有iyo5。/。发展成为AS，提示还有其他基因参与AS的发病。近年来，单核苷酸多态性(SNP)和单倍型(haplotype)概念在多基因疾病研究中的广泛运用，为在分子水平上研究强直性脊柱炎的发生和发展的机制开辟了全新的思路。同时，高通量、低成本的SNP检测手段的不断出现也为SNP大规模快速分型提供了可能。SNP的存在与否以及等位基因频率存在人种及地域的差异，这就提示多基因疾病遗传异质性的存在，即同一疾病或性状在不同的人群中可能是不同的遗传因素造成的。另外，不同人群中SNP及其单倍型的类型和频率存在的这种差异可能与不同人群对药物及环境因素的反应性不同密切相关。强直性脊柱炎作为一种遗传因素起较大作用的疾病，寻找其相关基因进而阐明强直性脊柱炎发病的遗传机制已经成为目前研究的热点。虽然已有许多关于各种基因多态性与强直性脊柱炎的研究，但没有证实TAP1基因与强直性脊柱炎相关性的报道，更没有证实本发明所述的TAP1基因SNP与强直性脊柱炎相关性的报道。综上所述，为了尽早诊断强直性脊柱炎，本领域迫切需要寻找强直性脊柱炎易感基因，并开发检测强直性脊柱炎的方法和试剂盒。
发明内容本发明的目的就是提供一种辅助诊断(尤其是早期诊断)强直性脊柱炎的方法及检测试剂盒。本发明的另一目的是提供一种新的治疗强直性脊柱炎的方法。在本发明的第一方面，提供了一种体外检测样品是否存在抗原肽转运蛋白l(TAPl)的单核苷酸多态性的方法，包括步骤(a)用TAPl基因特异性引物扩增样品的TAPl基因，得到第一扩增产物，以及用LMP2基因特异性引物扩增样品的LMP2基因，得到第二扩增产物；和(b)检测第一扩增产物中是否存在以下单核苷酸多态性-366位G—缺失；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:1;和检测第二扩增产物中是否存在以下单核苷酸多态性-在另一优选例中，所述的TAP1基因特异性引物具有SEQIDN0:2和3的序列，而所述的LMP2基因特异性引物具有SEQIDN0:5和6的序列。在另一优选例中，所述的第一扩增产物的长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:l中第621位；并且所述的第二扩增产物的长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:4中第185和601位。在本发明的第二方面，提供了一种检测强直性脊柱炎的试剂盒，它包括特异性扩增TAP1基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:l中第621位的扩增产物；以及特异性扩增LMP2基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:4中第185和601位的扩增产物。在另一优选例中，所述的试剂盒还含有选自下组的试剂(a)与SEQIDN0:l中第621位、SEQIDN0:4中第185和601位的突变结合的探针；(b)识别SEQIDN0:l中第621位、SEQIDN0:4中第185和601位的突变限制性内切酶。在另一优选例中，所述的突变是同时存在以下的单核苷酸多态性366位G—缺失；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:1;以及185位G—A和601位G—A;其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:4。在另一优选例中，所述的TAP1基因特异性引物具有SEQIDNO:2和3的序列，而所述的LMP2基因特异性引物具有SEQIDN0:5和6的序列。在本发明的第三方面，提供了一种对个体的强直性脊柱炎易感性进行诊断的方法，它包括步骤检测该个体的TAP1基因或转录本，并与正常的TAP1基因或转录本相比较，同时检测该个体的LMP2基因或转录本，并与正常的LMP2基因或转录本相比较；其中，存在差异就表明该个体患强直性脊柱炎的可能性高于正常人群。在另一优选例中，检测的是TAP1的基因和LMP2基因，并与正常TAP1和LMP2的核苷酸序列比较差异。在另一优选例中，所述的差异是同时存在以下的单核苷酸多态性366位G—缺失；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:1;以及185位G—A禾口601位G—A;其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:4。在另一优选例中，所述的个体是人。具体实施例方式本发明人经过深入而广泛的研究，对大量候选基因的SNP进行了测定和分析。首次发现和证明了TAP1的基因组序列与强直性脊柱炎密切相关，其中关联研究结果显示，在TAP1的SEQIDN0:1中第621位的SNP(366位G—缺失)(记为rs3216794)和LMP2基因内含子1的SNP1765A/G和内含子2的SNPrs2071535相互连锁，该3个位点构成的连锁变化(即"GGG"—"—AA")，在对照组和病例组中的分布存在显著性差异(代O.05)，因此可作为辅助性检测强直性脊柱炎(或其易感性)的一个辅助指标。在此基础上完成了本发明。TAP1基因抗原肽转运蛋白l(TransporterofAntigenP印tides1，TAP1)的序列是已知，其详细序列和一些相关信息可参见网址http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/Genebank/;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP。为了方便起见，在SEQIDNO:1给出TAP1中与本发明SNP相关的核苷酸序列。TAP1基因位于6P21.3，大小为8.7k，共有ll个外显子。其编码的蛋白属于ABC(ATP-结合盒)超家族的MDR/TAP亚家族。TAP是一类转运蛋白，分为TAP1和TAP2两种形式，表达于内质网膜表面，参与内源性抗原肽的处理和加工。蛋白酶体水解产生的肽段在TAP1和TAP2组成的异二聚体的作用下转运至内质网腔，经由内质网泵入膜分隔区，与HLAI类分子结合，形成稳定的HLA-Ag复合物，然后才能表达于细胞表面并提呈给T细胞。抗原多肽可能就是这样呈递给CD8+T淋巴细胞受体而导致了关节炎的产生。TAP的多态性可使不同的肽转运至内质网。现有的研究已发现TAP1基因与糖尿病、多发性硬化、原发性开角型青光眼、青少年特发性关节炎、桥本氏甲状腺炎、牛皮癣、白癜风等多种自身免疫性疾病及肿瘤的发生发展密切相关。其与AS(ankylosingspondylitis,强直性脊柱炎)的关系也是值得探讨的研究方向。国外有研究发现TAP1某些位点在HLA-B27阳性者和具有脊柱外疾病的AS患者中增加。我国有学者在安徽人群中的研究发现HLA-B27阳性个体中TAP1333位Val/Val表型频率可能具有显著的AS抗性。本发明人对TAP1基因中的几乎整个区域进行了测序，发现了许多SNP，其中大部分SNP与强直性脊柱炎易感性并不相关，然而关联研究表明SEQIDN0:1中366位G—缺失是与强直性脊柱炎易感性关联性很高的SNP。LMP2基因低分子量多肽2(lowmolecularmasspolyp印tide-2，LMP2)的序列是已知，其详细序列和一些相关信息可参见网址http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/Genebank/;http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP。为了方便起见，在SEQIDNO:4给出TAP1中与本发明SNP相关的核苷酸序列。LMP2基因位于6P21.3，大小为5.7K，其编码的产物属于T1B家族(蛋白酶体B型家族)，是一种20S的核心P-亚单位。该基因受Y-干扰素诱导表达,其产物释放免疫蛋白酶体中的催化亚单位-1(蛋白酶体06亚基)。蛋白酶体是一种存在于胞质和胞核内的蛋白水解酶复合物，负责降解细胞内大部分蛋白质，在MHCI类分子包括HLA-B27分子的表达及相关抗原呈递过程中起关键作用。MHCI类分子呈递的抗原均来源于蛋白酶体的降解产物。蛋白酶体的功能受其结构组成的调控，其核心部分是由a和e亚单位组成的四环状圆柱形结构，与PA28结合后成为免疫蛋白酶体。LMP2、LMP7及MECU(multicatalyticendopeptidasecomplex-like1，多催化内肽酶样复合物-l)是P环中最重要的具有蛋白水解活性的亚单位，均能被IFN-Y诱导表达，改变降解蛋白质的速度及切割位点，更有利于内源性蛋白质的降解和抗原的呈递。LMP2基因的多态性影响着免疫蛋白酶体的功能状态，引起降解内源性蛋白质产生的抗原肽的数量和性质发生改变，其中可能包括能诱导AS发生的特异性抗原肽。除与肿瘤的发生发展相关以外，国内外均有研究发现LMP2基因与B27阳性AS病人及其AAU(acuteanterioruveitis,急性前葡萄膜炎)的发生有关。具体而言，本发明揭示了TAP1基因5'UTR的SNPrs3216794、位于LMP2基因内含子1的SNP1765A/G和内含子2的SNPrs2071535相互连锁，具有显著的统计学效应。上述三个位点的单倍型(GGG)向(一AA)改变，增加了强直性脊柱炎的易感性。TAP1和LMP2蛋白的多聚核苷酸可用于相关疾病的辅助诊断。在诊断方面，TAP1和LMP2蛋白的多聚核苷酸可用于检测TAP1和LMP2蛋白的表达与否或在疾病状态下TAP1和LMP2蛋白的异常表达。如TAP1和LMP2DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断TAP1和LMP2蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(microarray)或DNA芯片(又称为"基因芯片")上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用TAP1和LMP2蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测TAP1和LMP2蛋白的转录产物。检测可以针对cDNA，也可针对基因组DNA。TAP1和LMP2蛋白突变的形式包括与正常野生型TAP1和LMP2DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用己有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。最方便的检测本发明SNP的方法，是通过用TAP1和LMP2基因特异性引物扩增样品的TAP1和LMP2基因，得到扩增产物；然后检测扩增产物中是否存在以下单核苷酸多态性366位G—缺失，其中核苷酸位置编号基于SEQIDN0:1以及185位G—A和601位G—A，其中核苷酸位置编号基于SEQIDNO:4。应理解，在本发明首次揭示了TAP1和LMP2基因的SNP与强直性脊柱炎的相关性之后，本领域技术人员可以方便地设计出可特异性扩增出含该SNP位置的扩增产物，然后通过测序等方法确定是否存在366位G—缺失。通常，引物的长度为15-50bp，较佳地为20-30bp。虽然引物与模板序列完全互补是优选的，但是本领域技术人员知道，在引物与模板存在一定的不互补(尤其是引物的5'端)的情况下，也能够特异性地扩增(即仅扩增出所需的片段)。含有这些引物的试剂盒和使用这些引物的方法都在本发明范围之内，只要该引物扩增出的扩增产物含有本发明SNP的对应位置。一种优选的引物对具有SEQIDN0:2和3，以及SEQIDNO:5和6的序列。虽然扩增产物的长度没有特别限制，但是通常扩增产物的长度为100-2000bp，较佳地为150-1500bp，更佳地为200-1000bp。这些扩增产物都应含有SEQIDN0:1中第621位以及SEQIDNO:4中的185位和601位。由于本发明的SNP与强直性脊柱炎具有非常高的关联性，因此不仅可用于早期辅助性诊断强直性脊柱炎，而且可以未雨绸缪地使一些携带者在未发病前就采取合理的预防措施，从而提高携带者的生存期和生存质量，因此具有极其重大的应用价值和社会效益。当然，最终还应当用常规检测方法进行确诊。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例l1.1研究对象病例样本全部采集自门诊病人，患者的诊断由仁济医院富有临床经验的风湿病科医师根据1984年提出修订的纽约标准作出，并通过多次随访确诊。对照样本选自南方中心样本库中年龄、性别匹配，无关节炎病史的个体。在知情同意的基础上随机收集了197个病人和474个正常对照个体的外周血样1.2实验方法和结果1.2.1DNA提取用常规酚氯仿法从人的外周血样本中提取DNA，浓度校正至20ng/ul后，用于常规PCR扩增。所示<1.2.2PCR及测序引物的设计根据GenBank中TAPl的基因组序列，设计和合成以下引物。具体引物如下表l表l引物序列表引物名称序列(5'-30SEQIDNO:有义引物AGCCATGCGAGAGAAGCTC2反义引物CTCAAGCCCAGACCCATTAC3根据GenBank中LMP2的基因组序列，设计和合成以下引物。具体引物如下表2所示。表2引物序列表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>以提取的DNA为模板，用Taq酶，在GeneAmp9700PCR仪上以Touchdown程序进行PCR扩增。反应条件为94。C预变性2分钟，94。C变性30秒，63。C退火40秒，72。C延伸40秒，共10个循环，每个循环退火温度递减0.5。C;以后94。C变性30秒，58。C退火40秒，72。C延伸40秒，共30个循环；最后72。C延伸7分钟。PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳验证。结果，分别获得TAP1和LMP2的扩增产物。1.2.4SNP的发现和检测PCR产物经Resin树脂纯化后，用ABI-3730DNA测序仪(美国应用生物系统公司appliedbiosystems(ABI))进行测序，用Polyphred软件(美国华盛顿大学http:〃droog.mbt.Washington,edu/Polyphred.html)进行序歹[J的判读、基因分型和SNP确认。结果，发现存在数个SNP，其中包括以下SNP:SEQIDNO:1中366位G—缺失(rs3216794)以及SEQIDNO:4中185位G—A(SNP1765A/G)和601位G—A(rs2071535)。1.2.5SNP基因分型和关联分析用直接单向测序法进行SNP基因分型。即在强直性脊柱炎病人和正常对照组中进行分型和关联分析。对基因分型结果进行描述性统计分析，列联表进行卡方检验。观察基因型在病人和对照之间是否具有差异。分析结果如下在SEQIDNO:1的第621位上以及SEQIDNO:4中185位和601位上，在474例对照中，GG/GG/GG389例，G-/AG/AG85例；在197例病例中GG/GG/GG167例，G-/AG/AG28例，--/AA/AA2例，两者具有显著性差异，卡方检验P二0.055。而且，(--/AA/AA)纯合单倍型仅在病例中出现。上述结果表明由TAP1基因5'UTR的SNPrs3216794、位于LMP2基因内含子1的SNP1765A/G和内含子2的SNPrs2071535所组成的单倍型(GGG)向(-AA)的改变，增加了AS的易感性，与AS显著相关。实施例2强直性脊柱炎易感性检测试剂盒如实施例l所述，SEQIDNO:1中366位G—缺失和SEQIDNO:4中185位和601位三个位点的(GGG)向(-AA)的改变与强直性脊柱炎疾病密切相关。因此，可基于这个突变设计TAP1和LMP2基因特异性引物在以病人的DNA为模板进行扩增进行检测。制备一试剂盒(100人次)，它含有<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>随机挑选100个人构成的测试组，其中包括未知是否患强直性脊柱炎的对象、已知患强直性脊柱炎病人和经检测无强直性脊柱炎的正常人。抽取测试组中待检测对象的外周血3ml，使用常规方法(或使用特定的试剂盒)从血液中提取DNA。将强直性脊柱炎检测试剂盒中的PCR引物稀释到limol/il，以所提取的DNA为模板与所提供的引物进行PCR反应。PCR产物纯化后，用ABI3730DNA测序仪进行测序，用Polyphred软件进行序列的判读和SNP确认。或者，将扩增产物与正常对照用变性高效液相色谱仪(DHPLC)进行色谱分析，也可检测出TAP1基因中的366位G—缺失以及LMP2基因中185位G—A和601位G—A。检测结果对于TAP1存在366位G—缺失以及LMP2基因存在185位G—A和601位G—A的对象，进一步通过常规方法检测以确认是否患有强直性脊柱炎情况。检测结果表明，含"一AA"基因型的检测对象的强直性脊柱炎易感性比例明显高于含G的正常人群。所有检测的"一/AA/AA"的个体都患有AS。因此，这表明通过检测上述三个连锁位点是否存在(GGG)向(-AA)的改变，可进行强直性脊柱炎的辅助性检测。实施例3强直性脊柱炎易感性辅助性检测重复实施例2的检测，不同点在于随机选取了90个人(检测前不知道是否有强直性脊柱炎症状)进行检测。制备一试剂盒(100人次)，它含有<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>抽取待检测对象的外周血3ml，使用常规方法(或使用特定的试剂盒)从血液中提取DNA。将强直性脊柱炎检测试剂盒中的PCR引物稀释到limol/U,以所提取的DNA为模板与所提供的引物进行PCR反应。TAP1和LMP2的PCR产物纯化后，用ABI3730DNA测序仪进行测序，用Polyphred软件进行序列的判读和SNP确认。结果同样证实了，所有检测的"--/AA/AA"的个体都患有AS,且具有G-/AG/AG的个体中AS患者病例高于GG/GG/GG个体(高出至少60X)。这表明通过检测上述三个连锁位点是否存在(GGG)向(-AA)的改变，可进行强直性脊柱炎的辅助性检测。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。序列表<110〉上海人类基因组研究中心〈120〉强直性脊柱炎易感性检测方法和试剂盒4〈130〉081333<160>6<170〉Patentlnversion3.4<210>1〈211〉741<212>DM〈213〉智人(Homosapiens)<400〉1eigccatgcgactagccattgcggtggggcc犯cgagggcgtcagccatttttcc犯犯gtctcgggetgcagcctcctgccgtcacttgtcgcagcacccatgcgctgtccgatgctgcggggtaieitgggtgagaeigctccgcactcggactg卿ctccggggctctcggagggga卿cggcctgcccagccctggtgctttccacttgtcggggc柳ggcgcctcctC6Lggttgg犯gc鹏agcacctgggcttgaggggaggcagcggcacccgcgccgtcccggtcccggccggggtaccgccgagtcctccccaaagtcccaggaacaggctggaaatcgaaagcggccgcctgactattttggtagcaagcgccaattttctccatcacgcgicaccagttttcccaccccagtctgccctacacacgttagcggcggcgccgcgaaggggcgaccagtgccccaggcggcgacaaccggggact"taccccgggggggagcgggacacct柳ggcctgggactctccgcgccctactggcggctgggggaigggETtcctgcgctggcgagaagcgctcactagataacgcctactggaaatcagatctgag犯tcacccttctcgcctctccctcctc鄉gcggggctgcctcgccgcgcgcaaagcagccccgggctgtcggctgcgcgttggg柳gcggtgccttgcaigggcggg柳agtccacaccgg<210>2〈211〉19<212>DNA〈213〉引物<400〉2agccatgcgagagaagctc<210>3〈211〉20<212〉DNA<213〉引物6012018024030036042048054060066072074119<400〉3ctcaagcccagaccwttac〈210〉4<211>707<212〉DNA〈213〉智人(Homosapiens)<400〉4gcggagctgcttcacttctacctgtaggagattccactaggcaagttggeiacttagggacgctgtggcattcccctgcagccggatgaagaaaagcctgtactgacagtcagctctggcctcgcctctctgggaatgtttcttcttctcttgacEittccatattctgtgtctctgcagaccgttgtgatgggttctgattcccgagtgtcSLtttggaaagaagctaatggcctcaaatacggcaaactggagccttggaggaatggagttatttggtgggtgcttgggtctctgaeiUtggtgacctgtcccagtagtgtacagggatgagagatagatttttgagggtcttctttcc3t<210>5<211>20<212〉DNA<213〉引物<5gcggagctgcttcacttcta〈210〉6<211〉21<212〉DNA<213〉引物<400〉6ttgatcccta3gc3cagatgg20cctcatctccacctctctacagtggagagg60acagttctttctgtgttgtatcacagctgg120caatagagaaagtggaaagatgaagggaaa180tgttactgtgtaatctttgagccagtcact240aacatgagggcatcaaggctgttcttgccc300caccatcatggcagtggagtttgacggggg360tgcagggtgagt^3agtga_agatgtatgc420acactttccttacccattcatgaaaagact480gaccttcccc犯aagccactatgataagct540tggaggaggatctggggtctg犯tgtgtat600gtaaaggaatagggtctgagagggggacag660ctgtgcttagggatc犯707202权利要求1.一种体外检测样品是否存在抗原肽转运蛋白1(TAP1)的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，包括步骤(a)用TAP1基因特异性引物扩增样品的TAP1基因，得到第一扩增产物，以及用LMP2基因特异性引物扩增样品的LMP2基因，得到第二扩增产物；和(b)检测第一扩增产物中是否存在以下单核苷酸多态性366位G→缺失；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDNO1；和检测第二扩增产物中是否存在以下单核苷酸多态性185位G→A和601位G→A；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDNO4。2.如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述的TAP1基因特异性引物具有SEQIDN0:2和3的序列，而所述的LMP2基因特异性引物具有SEQIDN0:5和6的序列。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一扩增产物的长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:l中第621位；并且所述的第二扩增产物的长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:4中第185和601位。4.一种检测强直性脊柱炎的试剂盒，其特征在于，它包括特异性扩增TAP1基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:1中第621位的扩增产物；以及特异性扩增LMP2基因或转录本的引物，所述的引物扩增出长度为100-2000bp且含有SEQIDN0:4中第185和601位的扩增产物。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，它还含有选自下组的试剂(a)与SEQIDN0:l中第621位、SEQIDN0:4中第185和601位的突变结合的探针；(b)识别SEQIDN0:l中第621位、SEQIDN0:4中第185和601位的突变限制性内切酶。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的突变是同时存在以下的单核苷酸多态性366位G—缺失；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:1;以及185位G—A和601位G—A;其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:4。7.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的TAP1基因特异性引物具有SEQIDN0:2和3的序列，而所述的LMP2基因特异性引物具有SEQIDN0:5和6的序列。8.—种对个体的强直性脊柱炎易感性进行诊断的方法，其特征在于，它包括步骤检测该个体的TAP1基因或转录本，并与正常的TAP1基因或转录本相比较，同时检测该个体的LMP2基因或转录本，并与正常的LMP2基因或转录本相比较；其中，存在差异就表明该个体患强直性脊柱炎的可能性高于正常人群。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，检测的是TAP1的基因和LMP2基因，并与正常TAP1和LMP2的核苷酸序列比较差异。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的差异是同时存在以下的单核苷酸多态性366位G—缺失；其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:1;以及185位G—A和601位G—A;其中，核苷酸位置编号基于SEQIDN0:4。全文摘要本发明公开了一种检测强直性脊柱炎易感性的方法，它包括检测该个体的TAP1基因或转录本，并与正常的TAP1基因或转录本相比较，同时检测该个体的LMP2基因或转录本，并与正常的LMP2基因或转录本相比较；其中，存在差异就表明该个体患强直性脊柱炎的可能性高于正常人群。本发明还公开了相应的检测试剂盒。文档编号C12Q1/68GK101525655SQ20081003422公开日2009年9月9日申请日期2008年3月5日优先权日2008年3月5日发明者牛振民,蓉雷,薇黄申请人:上海人类基因组研究中心