专利名称：一种新型的灵芝菌丝粉生产工艺的制作方法
技术领域：
本专利涉及一种新型的灵芝菌丝粉生产工艺，特别涉及一种固液结合发酵法生产灵芝菌丝粉的工艺。
背景技术：
灵芝(fe"o&r咖hciV咖)又名灵芝草、菌灵芝、木灵芝，是担子菌纲多孔菌科灵芝属。自古以来，在东亚地区人们就将其作为药物或补品食用；现在，灵芝药食兼用，《中华人民共和国药典》(2000版，1部)收载了灵芝(赤芝和紫芝子实体)作为法定中药材；2003年10月份获卫生部批准作为新资源食品；《美国草药药典与治疗概要》也收载了灵芝。
现代医学研究发现灵芝中主要有效成分为灵芝多糖，其保健功能主要集中在调节免疫、抗肿瘤、降血压、降血脂、护肝、抗病毒等方面。在灵芝药食价值被广泛认可的同时，灵芝或灵芝多糖产品的安全性、年产量、成本是限制灵芝市场应用的瓶颈。
目前，由于野生自然灵芝资源有限；同时人工栽培灵芝，获得灵芝子实体，虽然能将灵芝多糖提取出来，但是无法将灵芝培养基所带来的污染及农药残留物去除掉，而且多糖的收益率也非常低、只有8— 15%。灵芝菌丝体的多糖含量要明显高于子实体的多糖含量，菌丝体的细胞壁较子实体细胞壁结构疏松，细胞中的灵芝多糖较容易被提取。发酵法可通过调节培养基组成、培养温度和时间等，在短时间内得到大量的灵芝菌丝体，这些菌丝体的化学组成或生理功能，经分析表明与农业栽培得到的灵芝子实体是很相似的。国内外主要采取发酵工艺，获取灵芝菌丝体，克服了污染和农药残留，有两种发酵方法 一种是采用菌种液体发酵技术获得灵芝菌丝体；另一种是采用固体发酵技术获得灵芝菌丝体。第一种液体发酵技术设备投资大、占地面积大，特别是用水量相当大，多糖的收益率也不高，最高的一般能达到45%左右， 一般的只能达到20%左右，而引活性成分损失大，多糖的生产量低。第二种方法固体发酵技术虽然收益高，但是容易染菌，菌种纯化条件严格，而且发酵周期长、难以工业化。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵芝菌丝粉的生产工艺，它结合了液体发酵和固体发酵的各自优点，利用粮作物残渣为原料，生产工艺流程连续、简单，重金属、细菌含量符合国家食品标准，且生产过程中无污染，是一种安全卫生、成本低廉、高效环保的方法，提取得灵芝菌丝粉，完整保留了其有效活性，与野生灵芝效果一致。其中菌丝干基收率》25%,菌丝多糖含量》8%,即100kg培养基(干重)，可25g以上的灵芝菌丝，菌丝中灵芝多糖含量》8%。
本发明所提供的生产工艺是这样实施的1.培养基准备。固体培养基制备粮作物魔芋渣和木薯渣重量比为1: 1粉碎混合，然后加水，加水量为粮作物干重
的三分之二。接种量为粮作物干重的10%, 25-30'C培养12-16天即成。灭菌条件为121'C， 1小时。
PDA斜面培养基PDA固体(马铃薯提取液1.0L,蔗糖20.0g,KH2PO43.0g，MgSO4.7H2O1.5g,蛋白胨l.Og，琼脂15.0g，pH7.0)灭菌条件均为12rC, 30min;
液体种子培养基PDA液体(马铃薯提取液LO L，蔗糖20.0g， KH2P04 3.0g, MgS04.7H20 1.5g,蛋白胨1.0g，pH7.0),灭菌条件均为121'C， 30min。
2. 菌种活化。
将灵芝属灵芝种fe/ oofe/7Z7a JuciV咖菌种接种到PDA斜面培养基上，25-30'C培养3-4天，活化。
活化好的菌种取l cn/大小的菌苔3-4块接种到液体种子培养基(500 mL三角瓶，装液量为200 mL)中，25-3(TC, 150转/分钟培养4-5天，获得一级种子。按10%接种量的一级种子接种到种子液培养基(500 mL三角瓶，装液量为200 mL)中，25-30'C, 150转/分钟培养3—4天，得到二级种子。
3. 发酵。
将二级种子再接种瓶装固体培养基，拌匀，25-3(TC下培养12-16天左右，直至袋中长满白色的菌丝为止。
4. 烘干。
发酵结束后，将菌丝和培养基一起在50'C的烘箱中烘干，水分要求在5%以下。
5. 粉碎。
将烘干的菌丝粉碎，要求小于80目。
6. 灭菌，装瓶。
生产工艺简要流程如下如图1
以下结合具体实施方式
，对本发明进行进一歩的说明。
具体实施例方式
实施例1:
1.培养基准备。
固体培养基制备粮作物魔芋渣100kg和玉米渣100kg粉碎混合，然后加水134L混匀。高温灭菌，灭菌条件为121'C， lh。
斜面培养基制备PDA固体(马铃薯提取液1.0L,蔗糖20.0g,KH2PO43.0g,MgSO4.7H2O1.5g，蛋白胨l.Og,琼脂15.0g，pH7.0)。高温灭菌，灭菌条件均为121。C, 30min;液体种子培养基PDA液体(马铃薯提取液l.O L,蔗糖20.0g, KH2P04 3.0g， MgS04.7H20 1.5g，蛋 白胨1.0个g，pH7.0)。高温灭菌，灭菌条件均为12rC, 30min;
2. 菌种活化。
将灵芝属灵芝种fe/ ^/e/wa 7uciW咖菌种接种到PDA斜面培养基上，28'C培养4d。
活化好的菌种取约1 cm2大小的菌苔4块接种到种子液培养基(500 mL三角瓶，装液量为200 mL) 中，28'C， 150 r/rain培养5d，得到一级种子。将20g—级种子接种到种子液培养基(500 mL三角瓶，装 液量为200 mL)中，28'C, 150 r/min培养7d，得到二级种子。
3. 取二级种子20g再接种袋装的200g固体培养基中，拌匀，2『C下培养12天，袋中长满白色的菌丝。
4. 发酵结束后，将菌丝和培养基一起在50'C的烘箱中烘干，直到水分在5%以下。
5. 将烘干的菌丝粉碎，粉碎颗粒指标小于80目。
6. 灭菌，装袋。
实施例2:
1. 培养基准备。
固体培养基制备粮作物红薯渣100kg和玉米渣100kg粉碎混合，然后加水134L混匀。高温灭菌， 灭菌条件为m。c, lh。
斜面培养基制备PDA固体(马铃薯提取液1.0L,蔗糖20.0g，KH2PO43.0g,MgSO4.7H2O1.5g，蛋白胨 l.Og,琼脂15.0g,pH7.0)。高温灭菌，灭菌条件均为121'C， 30min;
液体种子培养基PDA液体(马铃薯提取液1.0L,蔗糖20.0g, KH2PO43.0g,MgSO4.7H2O 1.5g，蛋白 胨1.0g,pH7.0)。高温灭菌，灭菌条件均为121'C， 30min;
2. 菌种活化。
将灵芝属灵芝种fe/Joofera/a化cic/M菌种接种到PDA斜面培养基上，28'C培养3d。
活化好的菌种取约lcW大小的菌苔3块接种到种子液培养基(500mL三角瓶，装液量为100mL)中， 28°C， 150 r/min培养4d,得到一级种子。将10g—级种子接种到种子液培养基(500 mL三角瓶，装液量 为100 mL)中，28°C, 150 r/min培养5d，得到二级种子。
3. 取二级种子10g再接种袋装的100g固体培养基中，拌匀，28'C下培养13天，袋中长满白色的菌丝。
4. 发酵结束后，将菌丝和培养基一起在5(TC的烘箱中烘干，直到水分在5%以下。
5. 将烘干的菌丝粉碎，粉碎颗粒指标小于80目。
6. 灭菌，装袋。
权利要求
1、一种粮作物的固体培养基，其特征在于粮作物魔芋渣和木薯渣重量比为1∶1粉碎混合，然后加水，加水量为粮作物干重的三分之二。接种量为粮作物干重的10％，25-30℃培养12-16天即成。灭菌条件为121℃，1小时。
2、 一种新型的灵芝菌丝体生产工艺，其特征在于该工艺步骤如下a. 将灵芝菌种fe/70der鹏7wcic^7/接种到PDA斜面培养基上，25-30'C培养3-4天，活化；b. 活化好的菌种取1 cii^大小的菌苔3-4块接种到液体种子培养基(500 mL三角瓶，装液量为200 mL)中， 25-30°C， 150转/分钟培养4-5天，获得一级种子；c. 将600mL (3瓶) 一级种子液接种到液体种子培养基(500L发酵罐，装液量为300L)中，25-30'C, 150 转/分钟培养3—4天，得到二级种子；d. 将二级种子再接种瓶装固体培养基，拌匀，25-3(TC下培养12-16天左右，直至袋中长满白色的菌丝为 止；e. 将菌丝体烘干，粉碎。
3、 根据权利要求2中a步骤所述的PDA斜面培养基,其特征在于:PDA固体(马铃薯提取液l.OL，蔗糖20.0g， KH2PO43.0g,MgSO4.7H2O 1.5g,蛋白胨l.Og，琼脂15.0g,pH7.0)灭菌条件均为121'C, 30min 。
4、 根据权利要求2中a步骤所述的灵芝菌种，是灵芝属灵芝种C朋o^r则J"cW 。
5、 根据权利要求2中b步骤所述的液体种子培养基，其特征在于PDA液体(马铃薯提取液1.0L，蔗糖 20. 0g， KH2PO43.0g，MgSO4.7H2O 1.5g，蛋白胨1.0g,pH7.0),灭菌条件均为121°C， 30min。
全文摘要
本发明公布一种新型的灵芝菌丝粉生产工艺，它结合了液体发酵和固体发酵的各自优点，具有安全卫生、成本低廉、高效环保的特点，能有效的提取灵芝菌丝粉，菌丝干基收率≥25％，菌丝多糖含量≥8％。本发明不但完整保留了灵芝菌丝粉的有效活性，与野生灵芝效果一致，而且生产工艺流程连续、简单。
文档编号C12N1/14GK101481658SQ200810167809
公开日2009年7月15日 申请日期2008年10月13日 优先权日2008年10月13日
发明者朱浩君, 梁运祥, 瑜 陈 申请人:中丹康灵(北京)生物技术有限公司