专利名称：：一种苦瓜皂甙和多糖混合物及其提取工艺与应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于农产品加工领域，具体涉及一种苦瓜皂甙和多糖混合物及其提取工艺和应用。
背景技术：
：苦瓜在我国己有近500年的应用历史，为著名的民间中药和常用蔬菜。历代临床应用于治疗肿瘤、痢疾、中暑等症。《本草纲目》记载苦瓜"苦寒、无毒、除邪热、解劳乏、清心明目、益气壮阳"。现代大量研究表明，苦瓜含有丰富的多糖和皂甙类生物活性物质，具有降血糖、抗癌、抗病毒、调节血脂、增强免疫力等的多种生理功能。因此，研究苦瓜多糖和皂甙的同步提取的方法具有重要的开发应用价值。目前关于苦瓜多糖或皂苷单独提取的工艺已有较多的报道，对苦瓜多糖的提取法主要采取传统水提法、酶解提取法、膜分离法，对苦瓜皂甙的提取方法主要为有机溶剂萃取法、热水提取法、微波提取法等。基于苦瓜多糖和皂苷单独提取法工艺耗时长，温度高，容易引起杂质过多，活性物质降解等问题，有必要找到一条原料利用率高、提取条件温和、快速、高效的联合提取方法，而相关研究还没见报道。
发明内容本发明的目的在于提供一种苦瓜皂甙和多糖混合物，该苦瓜皂甙和多糖混合物具有降血糖、抗癌、抗病毒、调节血脂、增强免疫力等的多种生理功能。本发明的目的还在于提供上述苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，该提取工艺原料利用率高、提取条件温和，并提高了苦瓜皂甙和多糖的提取效率。本发明的目的还在于提供上述苦瓜皂甙和多糖混合物在制备具有降血糖作用的保健食品中的应用。为达到本发明的第一个目的，本发明提供的苦瓜皂甙和多糖混合物，通过如下方法制备获得以苦瓜干为原料，加入有机溶剂，进行超声-微波协同提取，过滤后得苦瓜皂甙提取液，对苦瓜滤渣进行碱液提取，所得提取液即为苦瓜多糖提取液，对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓缩、干燥和混合后，即得苦瓜多糖和皂甙混合物。为达到本发明的第二个目的，本发明提供的上述苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，包括以下步骤取苦瓜干，经超微粉碎后，加入有机溶剂，进行超声-微波协同提取，过滤后得苦瓜皂甙提取液，对苦瓜滤渣进行碱液提取，所得提取液即为苦瓜多糖提取液，分别对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓縮、干燥和混合后，即可得到苦瓜多糖和皂甙。进一步的，本发明提供的上述苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，包括以下步骤(1)超微粉碎取苦瓜干，切碎，进行超微粉碎，得到超微苦瓜粉；(2)超声-微波协同提取在超微苦瓜粉中加入其12-24重量倍的有机溶剂，调节超声-微波协同处理的条件为功率40~60W,频率1525khz，进行超声-微波协同提取800-1150s，过滤所得滤液即为苦瓜皂甙提取液；(3)碱液提取在上述过滤所得滤渣中加入其30~40重量倍的碱液，调节pH为7~9，温度为8090'C，进行提取2030min，过滤所得溶液即为苦瓜多糖提取液；(4)浓縮和干燥对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓缩和干燥后，按1:1的重量比混合即可得到苦瓜多糖和皂甙的混合物。上述步骤(1)中苦瓜粉的粒度为250350目。上述步骤(2)中有机溶剂的体积浓度为65~85%的乙醇。上述步骤(3)中碱液为氢氧化钠水溶液。上述步骤(4)中浓縮后苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液的体积为原体积的1/10~1/5。本发明提取的苦瓜皂甙和多糖混合物在制备具有降血糖作用的保健食品中的应用。本发明方法制备的苦瓜多糖和皂甙混合物可以制备成食品学上所述的剂型或以活性物质增强剂的方式添加于保健食品中。本发明的有益效果是(1)本发明的苦瓜皂甙和多糖混合物具有降血糖、抗癌、抗病毒、调节血脂、增强免疫力等的多种生理功能；(2)本发明对苦瓜皂甙和多糖采用了分步提取处理技术，可有效地解决单独提取技术中工艺复杂，提取温度过高，产品品质不佳等缺点，具有原料利用率高、提取条件温和、快速、高效等特点，与单独提取技术相比较，本发明提取工艺在提取时间上縮短20%以上，产品纯度提高15%以上；(3)本发明对苦瓜皂甙和多糖采用了超声-微波协同提取处理技术，并对提取的温度、时间、pH、料液比、粒度、酒精度等提取条件进行了优化，在该最优化条件下，苦瓜皂苷的提取率可达2.51%，苦瓜多糖的提取率达12.86%，分别比单独提取技术工艺高出18%和25%以上；(4)本发明方法制备的苦瓜皂甙和多糖，按l:l的重量比混合后，可以以活性物质增强剂的方式添加于糖尿病的保健食品、普通食品等产品中，市场潜力巨大，这对促进苦瓜深加工业的发展、提高其经济效益、推动农业的可持续发展具有重要意义。图1是小鼠糖耐量曲线；图2各组小鼠胰岛组织病理学改变，其中图2a为空白对照组，2b为模型组，2c为苦瓜皂苷(1)，图2d为苦瓜皂苷(n)，图2e为苦瓜多糖(1)，图2f为苦瓜多糖(II)，图2g为苦瓜多糖和皂苷混合物(I)，图2h为苦瓜多糖和皂苷混合物(n)。具体实施方式以下实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。所述
技术领域：
的普通技术人员依据以上本发明公开的内容和各参数所取范围，均可实现本发明的目的。第一部分苦瓜皂甙和多糖混合物及其提取工艺与应用其中，实施例13为本发明苦瓜皂甙和多糖混合物及其提取工艺；实施例4~5为本发明苦瓜皂式和多糖混合物在制备具有降血糖作用的保健食品中的应用。实施例l取苦瓜干lkg，超微粉碎至250目，加体积浓度为75。/。的乙醇溶液18kg，浸泡lh，然后在60w、20khz的超声-微波协同提取800s;对上述提取液进行过滤，滤6液即为苦瓜皂甙提取液；对上述过滤所得滤渣，加入料液重量比为l:35、pH为9的NaOH水溶液在8(TC下提取25min，然后过滤，过滤所得水溶液即为苦瓜多糖提取液；分别对上述所得苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓縮处理至原体积的1/7.5，得到苦瓜皂甙浓縮液和苦瓜多糖浓缩液；分别对苦瓜皂甙浓縮液和苦瓜多糖浓縮液进行冷冻干燥，按l:l的重量比混合后即可得到苦瓜多糖和皂甙混合物。实施例2取苦瓜干lkg，超微粉碎至300目，加体积浓度为65。/。的乙醇溶液12kg，浸泡lh，然后在50w、25khz的超声-微波协同提取1150s;对上述提取液进行过滤，滤液即为苦瓜皂甙提取液；对上述过滤所得滤渣，加入料液重量比为l:40、pH为8的NaOH水溶液在85'C下提取20min，然后过滤，过滤所得水溶液即为苦瓜多糖提取液；分别对上述所得苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓縮处理至原体积的1/5，得到苦瓜皂甙浓縮液和苦瓜多糖浓縮液；分别对苦瓜皂甙浓縮液和苦瓜多糖浓縮液进行冷冻干燥，按l:l的重量比混合后即可得到苦瓜多糖和皂甙混合物。实施例3取苦瓜干lkg，超微粉碎至350目，加体积分浓度为85Q/。的乙醇溶液24kg,浸泡lh，然后在40w、15khz的超声-微波协同提取975s;对上述提取液进行过滤，滤液即为苦瓜皂甙提取液；对上述过滤所得滤渣，加入料液重量比为l:30、pH为7的NaOH溶液在9(TC下提取30min，然后过滤，过滤所得水溶液即为苦瓜多糖提取液；分别对上述所得苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓縮处理至原体积的1/10，得到苦瓜皂甙浓縮液和苦瓜多糖浓縮液；分别对苦瓜皂甙浓縮液和苦瓜多糖浓縮液进行冷冻干燥，按l:l的重量比混合后即可得到苦瓜多糖和皂甙混合物。实施例4本实施例苦瓜皂甙和多糖混合物与茶等合用，重量配比在l:110之间，冲剂，每日10100g，可用于糖尿病人的降血糖作用及健康人群的糖尿病的预防、增强免疫力、抗肿瘤及延缓衰老等作用。实施例5本实施例粉状水溶性活性物质苦瓜皂甙和多糖混合物以活性物质增强剂的方式添加于保健食品，重量配比是l:15，可用于糖尿病人的降血糖作用及健康人群的糖尿病的预防、增强免疫力、抗肿瘤及延缓衰老等作用。(二)苦瓜皂甙和多糖混合物的药效试验1、试验方法1.1样品本发明制备的苦瓜皂甙和苦瓜多糖混合物。1.2主要试剂链脲佐菌素(STZ)AR美国Sigma公司；葡萄糖测定试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司；超氧化物歧化酶(SOD)测试盒，过氧化氢酶(CAT)测试盒，测试盒丙二醛(MDA)测定试剂盒，谷胱甘肽(GSH)(除蛋白)测定试剂盒，己糖激酶(HK)测试盒，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。1.3仪器C02培养箱，酶联免疫检测仪，紫外可见分光光度计，分析天平，真空冷冻干燥机，旋转蒸发仪。1.4实验动物昆明种小白鼠(20士2g)，SPF级，雄性，中山大学实验动物中心提供，将昆明小鼠分成8组，12只/组，在动物房内温度22T:和相对湿度60。/。的条件下饲养。1.5动物处理及组织匀浆的制备取肝组织块(0.5g左右)，在预冰冷的生理盐水中漂洗干净，用滤纸拭干。称重后放入冰浴的离心管中，添加9倍体积的生理盐水用组织匀浆机制备组织匀浆。再将制备好的10。/。肝匀浆用冷冻离心机(4。C)3000rpm离心1015min，取上清液待测。上清液的蛋白含量用考马斯亮兰法测定。1.6DM小鼠模型的建立将适应性喂养7d后的小鼠禁食15h，STZ130mg/(kg'bw)剂量腹腔注射，STZ用0.1mol/L，pH二4.2的柠檬酸钠缓冲液新鲜配制(冰上操作)，3d后眼眶静脉丛采血，测空腹血糖(BG)，BG^11.0mmol/L者为DM小鼠。1.7实验动物分组及其血糖测定将DM小鼠随机分成7组，即模型组和6个实验组，同时设正常对照组；空白对照组灌胃生理盐水，实验组分别灌胃给予150，300mg/(kg，bw)的苦瓜皂苷组、苦瓜多糖组、及二者的混合物组，具体设计如下表表1动物分组及处理情况<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实验期为30d，每天定时给药，间隔10天取血一次，检测空腹血糖，检测之前，小鼠更换垫料并禁食12h，按葡萄糖氧化酶试剂盒说明书测定血糖值。1.8糖脂代谢1.8.1小鼠糖耐量的测定DM小鼠在连续治疗30d后测定其糖耐量，在最后一次给药后立即测定血糖浓度(Oh)，并给予正常对照组、模型对照组、皂苷低剂量组、皂苷高剂量组、多糖低剂量组、多糖高剂量组、交互低剂量组和交互高剂量组，剂量为lg/kgbw，分别在给药后测定30、60、120min小鼠的血糖浓度。1.8.2小鼠血脂测定30d后，处死小鼠，分离血清，按试剂盒操作要求测血脂三项TC、TG和HDL-C。1.8.3肝糖原的测定测定原理糖原在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量；糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成份而保留糖原。1.8.4肝脏己糖激酶的测定测定原理应用6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD)的偶联反应，在提供足量的底物条件下，在340nm波长处，通过测定吸光度的增加来反映HK的活性。单位定义在37。C，pH7.6的条件下，每克组织蛋白在本反应体系中每分钟生成lmmol/L的NADPH定义为一个酶活力单位。1.9抗氧化作用1.9.1超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定测定原理通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基((V')，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光值低于对照管的吸光值，通过计算可求出被测样品的SOD活力。组织匀浆中SOD活力定义每毫克组织蛋白在lmL反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD为一个SOD活力单位(U)。1.9.2丙二醛(MDA)含量的测定测定原理过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)縮合，形成红色产物，该产物在532nm处有最大吸收峰。1.9.3过氧化氢酶(CAT)活力测定过氧化氢酶分解H202的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H202与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其生成量，可计算出CAT的活力。定义每毫克组织蛋白每秒钟分解1Pmol的H202的量为一个活力单位。1.9.4谷胱甘肽(GSH)的测定二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物，可进行比色定量测定。1.10胰岛保护作用1,10.1c-肽的测定测定原理采用竞争放射免疫分析法，即标准或待测样品中的C-P和125I-C-P共同与限量的特异性C-P抗体在适宜的条件下进行竞争性结合反应。均按试剂盒说明进行试验1.10.2胰腺组织切片HE染色观察①取材小鼠颈椎脱臼处死后，迅速取胰腺置于含4y。中性甲醛固定液(pH7.2)中，固定24小时，常规脱水包埋。②取蜡块作切片，厚度5pm，常规HE染色，封片后光镜观察。1.11小鼠小肠粘膜a-葡萄糖苷酶活性比较1.11.1小肠粘膜匀浆制备方法小鼠处死后，取自十二指肠始至空肠小肠粘膜10cm，立即取出小肠置于冰台上，剖开小肠暴露出肠粘膜，用冰冷生理盐水冲洗后拭干，用玻片刮取小肠粘膜。刮取所得小肠粘膜称重，按一定比例加入冰冷PBS,在冰浴中匀浆，粘膜匀浆于低温(4。C)3000rpm离心15min，取上清作为a-葡萄糖苷酶悬液。按考马思亮兰蛋白测定试剂盒说明书操作，测定各小肠粘膜匀浆中总蛋白含量。据总蛋白含量，用生理盐水稀释配制a-葡萄糖苷酶测试悬液，使得每50pL小肠粘膜匀浆含约100ng总蛋白。1.11.2小肠粘膜a-葡萄糖苷酶活性测定参照文献的方法，试管中加入42mmol/L的麦芽糖(或蔗糖、乳糖)溶液，PBS(66.7mmol/L，pH5.6)，37。C孵育20min,加入0.2mol/LNa2CO3终止反应。反应液3000rpm离心15min，取上清。按葡萄糖测定试剂盒说明书操作，测定上清液葡萄糖含量(Gs，mmol/L)。计算小肠粘膜匀浆每g蛋白质催化生成的葡萄糖量(Gp,mmol/gprotein):Gp(mmol/gprotein)=(Gs'0.225)xlO1.11.3小鼠小肠粘膜ci-葡萄糖苷酶活性比较依小肠粘膜中每克蛋白催化乳糖、蔗糖和麦芽糖生成葡萄糖产量(mmol/gprotein)。1.12数据分析数据采用SPSS10.0软件进行处理，进行多样本均数间比较及两两比较的方差分析；如果方差不齐，则编秩后再进行两两比较的方差分析。PO.05为差别有统计学意义。2、试验结果2.1对STZ所致DM小鼠血糖值的影响由下表2看出，通过对DM小鼠30天血糖变化观察发现，给药组均能显著抑制DM小鼠的血糖升高，而且在给药21天后除皂苷低剂量组及多糖低剂量组降血糖效果不显著外(PX).05),其余各组均显著优于模型组(P0.05)。在实验结束时，各给药组血糖值均显著优于模型组(P0.05)，皂苷、多糖和交互组存在显著的量效关系(P0.05)。皂苷高剂量组小鼠血糖值较皂苷低剂量组小鼠血糖值下降9.8%，多糖高剂量组小鼠血糖值较多糖高剂量组小鼠血糖值下降8.5%，交互高剂量组小鼠血糖值较交互低剂量组小鼠血糖值下降8.8%。且交互低剂量组小鼠血糖值显著低于皂苷低剂量组和多糖低剂量组(P0.05)，分别达8.9%和11.0%;交互高剂量组小鼠血糖值显著低于皂苷高剂量组和多糖高剂量组(P0.05)，分别达8.0%和11.3%。可以看出，苦瓜多糖和皂苷在降低STZ诱导高血糖小鼠血糖值方面存在着协同增效作用。表2苦瓜皂甙和多糖及其混合物对STZ所致DM小鼠血糖值的影响(3f土S，n=12)AD。,,血糖值Bloodglucose(mmol/L)组别-^_^a^_Dayll_Day21_Day31空白对照模型组皂苷(I)皂苷(II)多糖(I)多糖(II)皂苷+多糖(I)皂苷+多糖(n)3.54士0.33a27.90士2.34b28.42士2.68b27.75士2.40b29.14士2.49b29.20士2.17b29.00士2.13b29.49士2.14b3.71士0.31a30.71士2.13b29.77士2.32b26.90士1.45b29.27士1.43b29.10土2.01b26.22士2.32b26.64土2.89b3息0.32a30.42士0.88e29.04士1.07de26.35士0.90bcd27.44士0.75cde26.87士0.66bcd24.45士1.04bc23.60士0.80b3.82士0.39a30.92士0.72f28.00±0.57de25.27士0.49c28.67士0.66e26.24±0.27cd25.50士1.00c23.26士0,40b2.2对STZ所致DM小鼠糖耐量影响小鼠的耐糖曲线见附图l，外源性葡萄糖会引起血糖升高，葡萄糖耐量实验是确诊DM的试验之一，正常情况下，由于血糖调节机制的协调作用，即使一次摄入大量食糖，血糖浓度也只会暂时升高，不久即恢复正常水平，这种现象称为耐糖现象，一般用糖耐量试验观察耐糖现象，糖耐量试验分为口服葡萄糖试验(OGTT)、静脉注射葡萄糖耐量试验、皮质素葡萄糖耐量试验等方法，其中前者最为常用，通过葡萄糖耐量试验可以了解个体对葡萄糖的负荷能力，评估胰岛细胞的功能状态。从下表3可知，正常对照组小鼠糖耐量正常，服用葡萄糖后，其血糖值在30min时达到最高水平，随后逐渐下降，120mim时降到正常水平；模型对照组其血糖在30min时达到最高水平，其后一直维持在较高水平，表现为糖耐量降低的特征。各给药组均能抑制高血糖小鼠血糖峰的升高，120min时血糖下降幅度远高于模型对照组，几乎降到给药前水平；多糖对DM小鼠表现出显著的量效关系，多糖高剂量组小鼠曲线下面积显著低于多糖低剂量组达6.3%;而交互高剂量组在各给药组中最优，较皂苷低剂量、皂苷高剂量、多糖低剂量、多糖高剂量及交互低剂量组小鼠显著减小曲线下面积CP0.05)，分别达6.5、3.8、10.0、3.9和4.1%。表3苦瓜皂甙和多糖及其混合物对STZ所致DM小鼠糖耐量影响(i±S，n=12)_血糖值Bloodglucose(mmol/L)_曲线下面积组另1」a,a..，^.Areabelow0min30mm60mm120mm'thecurve2.3对STZ所致DM小鼠肝脏中肝糖原、己糖激酶血糖的根本来源是食物中的糖类，在不进食而血糖趋于降低时，肝糖原分解作用加强，当长期饥饿时，肝脏糖异生作用增强，因而血糖仍能继续维持在正常水平。糖原是葡萄糖残基以a-(l,4滩苷键相连构成直链和以a-(l，6)糖苷键构成支链的含有许多分支的大分子高聚物，主要贮存在肌肉和肝脏中。当体内葡萄糖浓度过低时，肌糖原的分解为肌肉自身收縮供给能量，肝糖原的分解则用来维持血糖浓度，为神经系统和其他组织器官提供每日所需的能量。如果体内血糖浓度过高，过高的葡萄糖浓度又会诱导(3细胞分泌胰岛素，将葡萄糖转化为肝糖原贮存，以降低血糖。灌胃30天后各组小鼠肝脏中糖原含量如下表4所示，DM模型组小鼠肝脏中肝糖原含量呈显著下降(尸O.Ol)，只有空白对照组小鼠肝糖原含量的36%。皂苷、多糖和交互组对小鼠肝糖原含量影响均呈显著的量效关系(尸<0.05)，皂苷高剂量组较皂苷低剂量组上升26.2%，多糖高剂量组较多糖低剂量组上升57%，交13照[)I)[).I)皂苷+多糖(I)皂苷+多糖(n)3.51士0.44a27.51±1.26c24.43土1.64b25.58士1.70bc26.24士2.05bc24.86±1.80b12.12士0.66a35.34士1.60d28.68士1.29b30.54士2.15bc31.67士1.85c30.04士1.32bc8.72士1.30a29.74士2.92cd31.93±1.21d26.98士2.36bc29.65土1.78cd28.26土2.71bc5.71士0.24a30.01士4.59c26.52±4.45bc26.81士1.98bc27.78土2.83bc26.13士1.86bc12.72±0.75a46.37士1.75e43.04士1.18cd41.86士2.04bc44.72±2.03de41.90士1.45bc26,07士1.44bc28.39士1.54b28.54士1.81bc28.05士1.21bc41.99士0.83bc24.42士1.04b29.92士2.94bc26.16士1.39b24.44士1.40b40.25士1.91b空模皂皂多多互高剂量组较交互低剂量组上升21.4%。而且交互低剂量组小鼠肝糖原含量显著高于皂苷低剂量组和多糖低剂量组(P0.05)，分别达20.8%、86.3%;交互高剂量组小鼠肝糖原含量亦显著高于皂苷高剂量组和多糖低剂量组(P0.05)，分别达13.5%、44.1%，交互组呈显著协同增效作用。葡萄糖代谢的第一步为葡萄糖的磷酸化，首先胰岛素刺激葡萄糖转移蛋白4(GLUT4)将葡萄糖转移到骨骼肌细胞中，然后己糖激酶(HK)催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖(G-6-P)。HK包括4种异构酶HKI-IV，其中IV型HK(葡萄糖激酶)，存在于肝细胞中，在胰岛素介导的葡萄糖磷酸化过程中起着重要的作用。如下表4所示，灌胃30天后，DM模型组小鼠肝脏中HK酶活极显著下降(尸O.Ol)，只有空白对照组的30%;而各给药组均能显著提高DM小鼠肝脏中HK酶活(PO.05);而且皂苷和多糖对HK酶活影响存在显著剂量关系(户0.05)，皂苷高剂量组较皂苷低剂量组高21.0%，多糖高剂量组叫多糖低剂量组高51.4%;交互组无显著剂量影响(P〉0.05)，但交互低剂量组较皂苷低剂量组和多糖低剂量组小鼠肝脏中HK酶活显著增加(尸0.05)，分别达23.7%和97.9%。表4苦瓜皂甙和多糖及其混合物对STZ所致DM小鼠肝脏中肝糖原、己糖激酶的影响(i±5)组别n肝糖原己糖激酶Glycogen(mg/mgprot)HK(U/mgprot)空白对照812.80士1.10e12.08士1.31e模型组84.56士2.52a3.63士0.54a皂苷(I)86.52士0.75b7.60士0.97c皂苷(n)88.43士0.51cd9.20士0.89d多糖(i)104.23士1.29a4.75士0.44b多糖(n)106.64士1.21b7.19士0.41c皂苷+多糖(i)107.88士1.13bc9.40士0.43d皂苷+多糖(n)109.57士0.68d10.37士0.62d2.4对STZ所致DM小鼠血脂水平的影响糖代谢异常经常合并脂代谢异常。大量的血脂沉积于动脉内管壁，在血管内形成粥样斑块，斑块逐渐增大增多，血管壁逐渐增厚变硬，血管腔变小，久而久之引起这一血管供应的部位缺血，严重时供血中断，这种病变可发生在全身血管，并引起并发症，是DM病人早死与致残的主要原因。灌胃30天后各组小鼠血脂变化如下表5所示，皂苷、多糖组小鼠总胆固醇(TC)水平呈显著的量效关系，高剂量均显著优于低剂量组(PO.05)分别达14.3、13.0%，交互低高剂量组小鼠之间TC水平虽无显著差异(PX).05)，但交互高剂量组小鼠显著低于多糖高剂量和皂苷高剂量小鼠，分别达3.2、23.0%。DM模型组小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及甘油三酯(TG)水平也均显著高于空白组小鼠(P〈0.05)，各给药组均能显著降低LDL-C及TG水平，但各给药组之间降低TG水平效果并无差异。皂苷、多糖组小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平呈显著的量效关系，高剂量均显著优于低剂量组(PO.05)分别达11.7、12.6%，交互低高剂量组小鼠之间LDL-C水平虽无显著差异(PX).05)，但显著低于多糖高剂量和皂苷高剂量小鼠，分别达4.3、18.2%。表5苦瓜有效降糖组分对STZ所致DM小鼠血脂的影响(3f土S，n=12)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2.5对STZ所致DM小鼠肝脏中氧化应激水平的影响由下表6可知，灌胃30天后各组小鼠肝脏中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及还原性谷胱甘肽(GSH)水平差异。苦瓜各组提取物灌胃30天后，交互高剂量组(300mg/kgbw)小鼠肝组织抗氧化剂水平均优于或显著优于其余DM小鼠(P0.05)，较皂苷低剂量、皂苷高剂量、多糖低剂量、交互低剂量组小鼠提高CAT水平(分别达ll.l、6.7、24.8、4.3和16.0%)、SOD水平(分别达30.1、14.7、15.6、3.7和17.7%)，降低MDA水平(分别达26.1、16.8、12.2、3.0和8.2%)。DM小鼠肝脏中GSH水平也显著低于空白对照组小鼠，由下表6可以看出皂苷组和交互组小鼠GSH水平表现出显著的剂量关系(P0.05)，皂苷高剂量组较皂苷低剂量组小鼠肝脏GSH水平提高11.4%，交互高剂量组较皂苷低剂量组小鼠肝脏GSH水平提高14.0%。交互高剂量组DM小鼠肝脏中GSH水平显著优于皂苷低剂量组、皂苷高剂量组、多糖低剂量组和多糖高剂量组(P0.05)，分别达22.9、10.3、25.2禾口14.0。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>2.7对STZ所致DM小鼠对小鼠胰岛保护作用由表8可以看出，与空白组小鼠相比，模型对照组小鼠血清内C-肽水平显著下降(P0.05)，皂苷、多糖和交互组小鼠血清内C-肽水平呈显著的剂量关系(PO.05),皂苷高剂量组小鼠0肽水平高于皂苷低剂量组达32.5%，多糖高剂量组小鼠。肽水平高于多糖低剂量组达47.2%，交互高剂量组小鼠C-肽水平高于交互低剂量组达31.8Q/。。交互低剂量组小鼠血清内C-肽水平显著优于(PO.05)或优于皂苷低剂量组和多糖低剂量组，分别达6.0%和66.0%;交互高剂量组小鼠血清内C-肽水平显著优于(PO.05)或优于皂苷高剂量组和多糖高剂量组，分别达5.4%和48.7%。表8苦瓜有效降糖组分对STZ所致DM小鼠血清C-肽的影响(i士5)组别nC-肽(ng/ml)空白对照61.30±0.14d模型组60.44±0.14a皂苷(I)80.83±0.08b皂苷(n)81.10±0.09c多糖(i)80.53±0.lla多糖(n)80.78±0.12b皂苷+多糖(i)80.88±0.21b皂苷+多糖(n)81.16±0.10c由附图2可以看出，正常组大鼠胰岛呈着色淡浅的细胞团，边界清楚，形态规则，胰岛内细胞排列整齐，大小一致分布均匀。细胞核呈紫蓝色，大而圆，核清晰，核仁明显，胞浆丰富呈淡粉色。成模小鼠的胰岛变小，胰岛细胞数量减少，甚至失去胰岛结构，完全萎縮、崩解，与周围组织混合，难以识别。多糖低剂量组小鼠胰岛形状亦不规则，纤维组织增生、玻变，胰岛可见以淋巴细胞、单核细胞为主体的炎细胞浸润；胰岛P细胞空泡变性、坏死、消失，使胰岛呈空虚状态。而多糖高剂量组小鼠胰岛面积略有增大，但胰岛内分泌细胞结构紊乱，形态不规则，多数胞核变形，固縮，大小不等，出现空泡变性。皂苷低高剂量组和交互低剂量组小鼠胰岛偶见轻度纤维化，交互高剂量组小鼠内分泌细胞形态接近正常组，边界较清楚，细胞排列较整齐。权利要求1、一种苦瓜皂甙和多糖混合物，其特征在于，通过如下方法制备获得以苦瓜干为原料，加入有机溶剂，进行超声-微波协同提取，过滤后得苦瓜皂甙提取液，对苦瓜滤渣进行碱液提取，所得提取液即为苦瓜多糖提取液，分别对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓缩、干燥和混合后，即得苦瓜多糖和皂甙混合物。2、一种权利要求1所述的苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤取苦瓜干，经超微粉碎后，加入有机溶剂，进行超声-微波协同提取，过滤后得苦瓜皂甙提取液，对苦瓜滤渣进行碱液提取，所得提取液即为苦瓜多糖提取液，分别对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓縮、干燥和混合后，即可得苦瓜多糖和皂甙混合物。3、根据权利要求2所述的苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤(1)超微粉碎取苦瓜干，切碎，进行超微粉碎，得到超微苦瓜粉；(2)超声-微波协同提取在超微苦瓜粉中加入其1224重量倍的有机溶剂，调节超声-微波协同处理的条件为功率40~60W，频率1525khz，进行超声-微波协同提取800~1150s，过滤所得滤液即为苦瓜皂甙提取液；(3)碱液提取在上述过滤所得滤渣中加入其30~40重量倍的碱液，调节pH为7~9，温度为809(TC，进行提取2030min，过滤所得溶液即为苦瓜多糖提取液；(4)浓縮和干燥分别对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓缩和干燥后，按1:1的重量比混合后即可得到苦瓜多糖和皂甙混合物。4、根据权利要求3所述的苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，其特征在于，步骤(l)中苦瓜粉的粒度为250-350目。5、根据权利要求3所述的苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中所述的有机溶剂的体积浓度为65~85%的乙醇。6、根据权利要求3所述的苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，其特征在于，歩骤(3)中所述的碱液为氢氧化钠水溶液。7、根据权利要求3所述的苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺，其特征在于，步骤(4)中浓縮后苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液的体积为原体积的1/10~1/5。8、权利要求1所述的苦瓜皂甙和多糖混合物在制备具有降血糖作用的保健食品中的应用。全文摘要一种苦瓜皂甙和多糖混合物，通过如下方法制备获得以苦瓜干为原料，加入有机溶剂，进行超声-微波协同提取，过滤后得苦瓜皂甙提取液，对苦瓜滤渣进行碱液提取，所得提取液即为苦瓜多糖提取液，分别对苦瓜皂甙提取液和苦瓜多糖提取液进行浓缩、干燥和混合后即得苦瓜多糖和皂甙混合物；还公开了上述苦瓜皂甙和多糖混合物的提取工艺与应用；该苦瓜皂甙和多糖混合物具有降血糖、抗癌、抗病毒、调节血脂、增强免疫力等多种生理功能；且可用于制备具有降血糖作用的保健食品中；该提取工艺采取分步提取技术，具有原料利用率高、提取条件温和、快速、高效等特点，与单独提取技术相比较，本发明提取工艺在提取时间上缩短20％以上，产品纯度提高15％以上。文档编号A23L1/29GK101597389SQ20091004080公开日2009年12月9日申请日期2009年7月3日优先权日2009年7月3日发明者唐小俊,雁张,张名位,张瑞芬,李健雄,池建伟,邓媛元,魏振承申请人:广东省农业科学院农业生物技术研究所;广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所;广东宝桑园健康食品研究发展中心