专利名称：苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法
技术领域：
本发明涉及一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法。
背景技术：
近年来，有关苦瓜的研究正方兴未艾，国内外对于苦瓜的药用价值研究已经取得了重要的进展，初步证实苦瓜具有降血糖、抗菌、提高免疫力、抗生育、抗肿瘤、抗氧化等功效。苦瓜多糖和苦瓜皂甙是苦瓜的两个主要有效成分。苦瓜皂甙的提取方法主要有乙醇提取法、醇浸渍法、索氏抽提法、回流热提取法、热水提取、微波提取法等。崔恒林等人(崔恒林，徐斌，董英.苦瓜皂甙的提取过程研究.江苏大学学报(自然科学版)，2004，25(5)372-375)以提取温度、浸泡时间、乙醇的质量分数和料液比为考察因素，采用单因素试验及正交试验对苦瓜中皂甙进行了提取条件优化试验，确定最佳提取条件为浸提温度60℃，浸提时间6h，乙醇质量分数为70％及料液比1∶5。高文等人(高文，朱晓韵，刘丽君，陶玉梅.微波技术在苦瓜甙提取中的应用.广西轻工业，2004，513-15.)采用平行对照试验比较了常规水煮法、60％乙醇提取法、微波提取法在鲜苦瓜中所提取苦瓜皂甙的总量，结果证明微波提取法明显优于常规水煮法，即投料物液比为1∶5，微波输出功率为750W，提取时间为10min时为最佳。侣丽红等人(侣丽红，赵余庆.苦瓜中降血糖活性成分的提取分离与鉴定.中药材，2004，27(12)922-923.)对苦瓜70％乙醇提取物氯仿萃取部分进行硅胶柱层析分离纯化，获得3个化合物，确定它们的结构分别为二十三烷酸、B-谷甾醇、苦瓜苷。
苦瓜多糖的研究比较少。吴笳笛等人(吴笳笛，阚国仕，陈红漫等.双酶水解法提取水溶性苦瓜多糖的研究.安徽农业科学，2005，33(1)73-74.)采用水提醇沉法从苦瓜中提取出水溶性多糖，经除小分子物质、除色素、脱蛋白后，通过DEAE-32柱的进一步纯化，得到单一组分。对其进行理化性质检测，证实其为多糖，并命名为PMCI。继而在苦瓜水溶性多糖的浸提及脱蛋白过程中分别加入纤维素酶和中性蛋白酶，通过正交实验确定其最佳水解条件分别为纤维素酶，提取温度50℃，pH值6.0，酶用量5％；中性蛋白酶，水解时间48h，pH值7.0，酶用量10％。程霜等人(程霜，崔庆新，王勇.水溶性苦瓜多糖的提取与测定.郑州粮食学院学报，2000，21(2)53-56.)通过沸水提取、醇析、脱蛋白和透析，从鲜苦瓜中分离出多糖粗品，粗品经sephadexG-100柱层析纯化，得一苦瓜多糖样品，分子量约8000，并利用薄层色谱和气相色谱对该多糖中的成分单糖进行了定性和定量分析，结果表明，苦瓜水溶性多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖。
现有的文献资料中都是单一提取苦瓜皂甙或苦瓜多糖，还没有综合提取这两种物质的报道，单一提取苦瓜皂甙或苦瓜多糖资源浪费较多并且成本很高另外，大量使用有机溶剂，产生的废液废渣严重污染环境，且溶剂残留会影响产物的质量和稳定性；同时，还存在提取温度高，所需时间长的不足。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种低成本，并且对环境污染较小的苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法。
本发明的技术方案概述如下一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量5％～20％的蒸馏水，匀浆，在300w～3000w微波处理10min～60min，过滤；(2)取上清液，过0.1μm～0.2μm的中空纤维膜，压力为0.05Mpa～0.15Mpa，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.05Mpa～0.15Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上大孔树脂柱，用60％～80％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
所述经步骤(1)得到的残渣还可以再加入5％～20％的蒸馏水，匀浆，在300w～3000w微波处理10min～60min，过滤，将滤液与步骤(1)得到的滤液合并后进行步骤(2)。
加入蒸馏水的重量最好是鲜苦瓜重量的10％。
所述微波处理的瓦数为500w，时间为25min。
取上清液，过中空纤维膜的压力最好选为0.1Mpa。
所述大孔树脂柱可以选用各种型号，例如D101、AB-8、NKA，最好为AB-8型大孔树脂柱。
本发明一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，用水作为浸提剂，与以往有机溶剂浸提相比，可以节省大量的有机溶剂，大大降低有机溶剂对苦瓜皂甙和苦瓜多糖生理活性的破坏作用，提高了产品的质量，减少对环境的污染，同时，本发明可同时提取苦瓜皂甙和苦瓜多糖，可有效利用苦瓜资源，节约成本。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明实施例1一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是由包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量10％的蒸馏水，组织捣碎匀浆机匀浆，在500w微波处理25min，4层滤布挤汁过滤；(2)取上清液，过0.1μm的中空纤维膜，压力为0.1Mpa，用于除去上清液中的大颗粒物质，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.1Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上D101型大孔树脂柱，用80％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
过截留分子量6000的中空纤维膜是因为苦瓜皂甙的分子量在1000以下，苦瓜多糖的分子量在6000以上，所以取透过液提取苦瓜皂甙，取浓缩液提取苦瓜多糖。
实施例2一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是由包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量10％的蒸馏水，组织捣碎匀浆机匀浆，在500w微波处理25min，4层滤布挤汁过滤；过滤后的滤渣再加入10％的蒸馏水，组织捣碎匀浆机匀浆，在500w微波处理25min，4层滤布挤汁过滤，将滤液合并；(2)取上清液，过0.1μm的中空纤维膜，压力为0.1Mpa，用于除去上清液中的大颗粒物质，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.1Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上AB-8型大孔树脂柱，用80％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
实施例3一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是由包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量5％的蒸馏水，匀浆，在300w微波处理60min，板框压滤机过滤；(2)取上清液，过0.2μm的中空纤维膜，压力为0.05Mpa，用于除去上清液中的大颗粒物质，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.05Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上AB-8型大孔树脂柱，用60％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
实施例4一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是由包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量20％的蒸馏水，组织匀浆器匀浆，在3000w微波处理10min，过滤；过滤后的滤渣再加入20％的蒸馏水，组织匀浆器匀浆，在3000w微波处理10min，过滤，将滤液合并；(2)取上清液，过0.1μm的中空纤维膜，压力为0.15Mpa，用于除去上清液中的大颗粒物质，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.15Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上NKA型大孔树脂柱，用70％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
实施例5一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是由包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量15％的蒸馏水，超细匀浆器匀浆，在2500w微波处理15min，过滤；过滤后的滤渣再加入15％的蒸馏水，匀浆，在2500w微波处理15min，过滤，将滤液合并；(2)取上清液，过0.1μm的中空纤维膜，压力为0.1Mpa，用于除去上清液中的大颗粒物质，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.1Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上D101型大孔树脂柱，用75％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
实施例6苦瓜多糖含量测定(蒽酮-硫酸法)标准葡萄糖曲线的制作准确称量100mg干燥恒重的分析纯D-葡萄糖，加蒸馏水溶解定溶在容量瓶中至1000mL。蒽酮试剂1g溶于20mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中。取6支试管(10mL以上)，依次加入葡萄糖原液(100μg/mL)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，然后再依次加入蒸馏水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0mL，在每支试管中加入葸酮试剂0.5mL，再用酸式滴定管加入浓硫酸5mL，摇匀，放置10min，在620nm波长下比色，以标准葡萄糖浓度作横坐标，以吸光度作纵坐标，做出标准曲线。
准确称取1mg待测样品，加蒸馏水溶解稀释至200μg/mL，取0.1ml此溶液，立即加入蒽酮试剂0.5mL，再用酸式滴定管加入浓硫酸5mL，摇匀，放置10min，在波长620nm处测定吸光度。以标准曲线计算苦瓜多糖的含量。
本发明的实施例1得到的苦瓜多糖粗品用葸酮-硫酸法测得提取率为苦瓜鲜重的3.02％，其中质量分数为31.6％。
苦瓜皂甙的测定标准曲线的绘制精密称取苦瓜皂甙粗品1g溶于3ml甲醇，取0.1ml此溶液水浴挥去溶剂，即得供试品溶液。分别精密吸取人参皂甙Rg1对照品溶液30，60，90，120，150，180μL于具塞试管中，水浴挥去溶剂，加入新配制的5％香草醛—冰醋酸0.2ml，高氯酸0.8ml，在60℃水浴中加热15min，流水冷却，加冰醋酸5ml，摇匀，放置15min至不退色，在波长468nm处测定吸光度，甲醇溶液随行空白对照，以吸光度为纵坐标，人参皂甙取样量为横坐标，绘制标准曲线。
样品含量测定准确称取苦瓜皂甙粗品1g溶于3ml甲醇，取0.1ml此溶液水浴挥去溶剂，加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，在60℃水浴中加热15min，流水冷却，加冰醋酸5ml，摇匀，放置15min至不褪色，在波长468nm处测定吸光度，线性回归计算供试品苦瓜皂甙的含量。
本发明实施例1提取的苦瓜皂甙通过测定提取率为苦瓜鲜重的0.116％，其中皂甙的质量分数为35.7％。
权利要求
1.一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是包括如下步骤(1)将洗净切碎的鲜苦瓜加入其重量5％～20％的蒸馏水，匀浆，在300w～3000w微波处理10～60min，过滤；(2)取上清液，过0.1μm～0.2μm的中空纤维膜，压力为0.05Mpa～0.15Mpa，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.05Mpa～0.15Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上大孔树脂柱，用60％～80％乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙。
2.根据权利要求1所述的一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是所述经步骤(1)得到的残渣再加入5％～20％的蒸馏水，匀浆，在300w～3000w微波处理10min～60min，过滤，将滤液与步骤(1)得到的滤液合并。
3.根据权利要求1所述的一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是所述加入蒸馏水的重量为鲜苦瓜重量的10％。
4.根据权利要求1所述的一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是所述微波处理的瓦数为500w，时间为25min。
5.根据权利要求1所述的一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是所述过中空纤维膜的压力为0.1Mpa。
6.根据权利要求1所述的一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，其特征是所述大孔树脂柱为AB-8型大孔树脂柱。
全文摘要
本发明公开了一种苦瓜皂甙和苦瓜多糖的综合提取方法，包括如下步骤将洗净切碎的鲜苦瓜加入蒸馏水，匀浆，微波处理，过滤；取上清液，过中空纤维膜，取透过液，过截留分子量6000的中空纤维膜，压力为0.05Mpa～0.15Mpa，取浓缩液经真空干燥得到苦瓜多糖；取所述过截留分子量6000的中空纤维膜的透过液，上大孔树脂柱，用乙醇洗脱，减压回收乙醇至无醇味，经真空浓缩得苦瓜皂甙，本发明用水作为浸提剂，与现有技术相比，可以节省大量的有机溶剂，降低有机溶剂对苦瓜皂甙和苦瓜多糖生理活性的破坏作用，提高了产品的质量，减少对环境的污染，同时，本发明可同时提取苦瓜皂甙和苦瓜多糖，可有效利用苦瓜资源，节约成本。
文档编号C07G3/00GK1709900SQ200510014268
公开日2005年12月21日 申请日期2005年6月30日 优先权日2005年6月30日
发明者刘金福, 张平平, 韩慧 申请人:天津农学院