用于肿瘤诊断和治疗的组合物和方法

专利名称：用于肿瘤诊断和治疗的组合物和方法
技术领域：
本发明致力于可用于诊断和治疗哺乳动物中的肿瘤的物质组合物，及使用那些物 质组合物来诊断和治疗哺乳动物中的肿瘤的方法。
背景技术：
恶性肿瘤(癌)是在美国位居心脏病之后的第二位致死原因(Boring et al.，CA Cancel J. Clin. 43 :7 (1993))。癌的特征为衍生自正常组织的异常或肿瘤性细胞的数量增 加，所述细胞增殖形成肿瘤块；这些赘生性肿瘤细胞侵入邻近组织；及产生恶性细胞，所述 恶性细胞最终经血液或淋巴系统传播到局部淋巴结并经称为转移的过程传播到远处。在癌 性状态，细胞在正常细胞不生长的条件下增殖。癌自身表现为多种形式，特征为不同程度的 侵袭力和进攻性。在寻找癌症诊断和治疗的有效细胞靶物的尝试中，研究人员试图鉴定在一种或多 种特定类型的癌细胞的表面上与一种或多种正常非癌性细胞相比特异性表达的跨膜多肽 膜相关多肽。通常，此类膜相关多肽在癌细胞的表面上比在非癌性细胞的表面上表达的量 更大。此类肿瘤相关细胞表面抗原多肽的鉴定导致了经基于抗体的疗法特异性靶向破坏癌 细胞的能力。在这点上，注意到基于抗体的疗法已经证明在某些癌症的治疗中是非常有效 的。例如，HERCEPTIN 和 RITUXAN (都来自 Genentech Inc. , South San Francisco, California)是已经分别成功用于治疗乳腺癌和非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤的抗体。更 具体的说，HERCEPTIN .是从重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，其选择性结合人表皮生长 因子受体2(HER2)原癌基因的胞外结构域。HER2蛋白过表达在25-30%的原发性乳腺癌中 观察到。RITUXAN 是遗传工程嵌合鼠/人单克隆抗体，其针对在正常的和恶性的B淋巴细 胞的表面上发现的⑶20抗原。这两种抗体都是在CHO细胞中重组生产的。尽管在哺乳动物癌症疗法中有了上述进展，对于能够分别检测哺乳动物中肿瘤的 存在和有效抑制肿瘤性细胞生长的另外的诊断和治疗剂仍然存在很大的需要。因此，本发 明的目标之一是鉴定在一种或多种类型的癌细胞上与正常细胞上或其它不同癌细胞上相 比表达更大量的细胞膜相关多肽，及使用那些多肽及其编码核酸来生成可用于哺乳动物中 的癌症的治疗性处理和诊断性检测的物质组合物。
发明概述A.实施方案在本说明书中，申请人首次描述了如下所述的细胞多肽(及其编码核酸或其片 段)的鉴定，所述细胞多肽在一种或多种类型癌细胞表面上表达的程度高于它们在一种或 多种类型正常非癌细胞表面上表达的程度。这些多肽在本文中称为肿瘤相关抗原性靶多肽 (Tumor-associated Antigenic Targetpolyp印tides，“TAT” 多肽)，它们有望充当哺乳动 物中癌症治疗和诊断的有效靶物。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明提供了分离的核酸分子，其具有编码肿 瘤相关抗原性靶多肽或其片段(“TAT”多肽)的核苷酸序列。在某些方面，所述分离的核酸分子包含与下述各项具有至少约80%的核酸序列同 一性，或者至少约 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)编码具有本文所公开的氨基酸序列的全长TAT多肽、本文所公开的缺少信号肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公开的有或没有信号肽的跨膜TAT多肽的胞外域、或本文所公开的全长TAT多肽氨基酸序列的任何其它具体定义的片段的DNA分子； 或者(b) (a)的 DNA 分子的互补分子(complement)。在其它方面，所述分离的核酸分子包含与下述各项具有至少约80%的核酸序列同 一性，或者至少约 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)包含本文所公开的全长TAT多肽cDNA的编码序列、本文所公开的缺少信号肽的TAT多肽的编码序列、本文所公开的有或没有信号肽的跨膜TAT多肽的胞外域的编码序列、或本文所公开的全长TAT多肽氨基酸序列的任何其它具体定义的片段的编码序列的DNA分子；或者(b) (a)的DNA分子的互补分子。在其它方面，本发明涉及分离的核酸分子，其包含与下述各项具有至少约80 %的 核酸序列同一性，或者至少约 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、 92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的核酸序列同一性的核苷酸序列(a)与本文所公开的保藏于ATCC的任何人类蛋白质cDNA的全长编码区编码相同 成熟多肽的DNA分子；或者(b) (a)的DNA分子的互补分子。本文的另一个方面提供了分离的核酸分子，其包含如下核苷酸序列，所述核苷酸 序列编码跨膜域删除的或跨膜域灭活的TAT多肽，或者与此类编码核苷酸序列互补，其中， 本文中公开了此类多肽的跨膜域。因此，设想了本文中所描述的TAT多肽的可溶性胞外域。在其它方面，本发明致力于分离的核酸分子，其与下述各项杂交
(a)编码具有本文所公开的全长氨基酸序列的TAT多肽、本文所公开的缺少信号肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公开的有或没有信号肽的跨膜TAT多肽的胞外域、或本文所公开的全长TAT多肽氨基酸序列的任何其它具体定义的片段的核苷酸序 列，或者(b) (a)的核苷酸序列的互补分子。在这点上，本发明的一个实施方案致力于本文所公开的全长TAT多肽编码序列的 片段或其互补序列，它们可用作例如杂交探针，所述杂交探针可用作例如诊断探针、PCR引 物、反义寡核苷酸探针，或者用于编码全长TAT多肽的片段，可任选编码包含抗TAT多肽抗 体、TAT结合寡肽、或其它结合TAT多肽的有机小分子的结合位点的多肽。此类核酸片段 的长度通常为至少约5个核苷酸，或者长度为至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、 95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、 190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、 370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、 560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、 750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、 940、950、960、970、980、990或1000个核苷酸，其中在此语境中，术语“约，，意指所述核苷酸 序列长度加上或减去所述长度的10%。此外，此类核酸片段经常包含衍生自TAT多肽全长 编码序列或其互补序列的连续核苷酸。注意到TAT多肽编码核苷酸序列或其互补序列的新 片段可以常规方式确定，即使用多种众所周知的序列对比程序中的任一种将TAT多肽编码 核苷酸序列与其它已知核苷酸序列对比，并确定哪个(些)TAT多肽编码核苷酸序列或其互 补序列是新的。本文设想了 TAT多肽编码核苷酸序列或其互补序列的所有此类新片段。还 设想了由这些核苷酸分子片段编码的TAT多肽片段，优选那些包含抗TAT多肽抗体、TAT结 合寡肽、或其它结合TAT多肽的有机小分子的结合位点的TAT多肽片段。在另一个实施方案中，本发明提供了分离的TAT多肽，其由上文鉴定的任何分离 的核酸序列编码。在某一个方面，本发明涉及分离的TAT多肽，其包含与具有本文所公开的全长氨 基酸序列的TAT多肽、本文所公开的缺少信号肽的TAT多肽氨基酸序列、本文所公开的有或 没有信号肽的跨膜TAT多肽的胞外域、由本文所公开的任何核酸序列编码的氨基酸序列、 本文所公开的全长TAT多肽氨基酸序列的任何其它具体定义的片段具有至少约80%的氨 基酸序列同一性，或者至少约 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、 91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,100% 的氨基酸序列同一性的氨基酸 序列。在另一个方面，本发明涉及分离的TAT多肽，其包含与任何本文所公开的保藏于 ATCC的人类蛋白质cDNA所编码的氨基酸序列具有至少约80%的氨基酸序列同一性，或者 至少约 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%或100%的氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
在又一个方面，本发明涉及分离的TAT多肽，其包含与编码(a)具有本文所公开的全长氨基酸序列的TAT多肽、(b)本文所公开的缺少信号肽的TAT多肽氨基酸序列、(c)本文所公开的有或没有信号肽的跨膜TAT多肽的胞外域、(d)本文所公开的任何核酸序列编码的氨基酸序列、或(e)本文所公开的全长TAT多肽氨基酸序列的任何其它具体定义的片段的DNA分 子的互补序列杂交的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个具体的方面，本发明提供了分离的TAT多肽，其没有N-末端信号序列和/ 或没有起始甲硫氨酸，且由编码上文所述氨基酸序列的核苷酸序列所编码。本文还描述了 用于产生它的方法，其中所述方法包括在适于表达TAT多肽的条件下培养包含如下载体 的宿主细胞，所述载体包含适宜的编码核酸分子，并从细胞培养物回收TAT多肽。本发明的另一个方面提供了分离的TAT多肽，其是跨膜域删除的或跨膜域灭活 的。本文还描述了用于产生它的方法，其中所述方法包括在适于表达TAT多肽的条件下培 养包含如下载体的宿主细胞，所述载体包含适宜的编码核酸分子，并从细胞培养物回收TAT 多肽。在本发明的其它实施方案中，本发明提供了包含编码任何本文所述多肽的DNA的 载体。还提供了包含任何此类载体的宿主细胞。举例而言，所述宿主细胞可以是CHO细胞、 大肠杆菌(E. coli)细胞或酵母细胞。还提供了用于产生任何本文所述多肽的方法，包括在 适于表达期望多肽的条件下培养宿主细胞并从细胞培养物回收期望多肽。在其它实施方案中，本发明提供了分离的嵌合多肽，其包含与异源(非TAT)多肽 融合的任何本文所述TAT多肽。此类嵌合分子的例子包括与异源多肽诸如例如表位标签序 列或免疫球蛋白Fc区融合的任何本文所述TAT多肽。在另一个实施方案中，本发明提供了抗体，其结合，优选特异性结合任何前述或后 述多肽。任选的是，所述抗体是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体、或 竞争性抑制抗TAT多肽抗体与其各自抗原性表位结合的抗体。本发明的抗体可任选偶联 生长抑制剂或细胞毒剂诸如毒素包括例如美登木素生物碱(maytansinoid)或加利车霉素 (calicheamicin)、抗生素、放射性同位素、溶核酶(nucleolytic enzyme)或诸如此类。本 发明的抗体可任选在CHO细胞或细菌细胞中产生，且优选抑制其所结合的细胞生长或增殖 或者诱导其所结合的细胞死亡。为了诊断目的，本发明的抗体可以被可检测地标记，附着于 固相支持物，等等。在本发明的其它实施方案中，本发明提供了包含编码任何本文所述抗体的DNA的 载体。还提供了包含任何此类载体的宿主细胞。举例而言，所述宿主细胞可以是CHO细胞、 大肠杆菌细胞或酵母细胞。还提供了用于产生任何本文所述抗体的方法，包括在适于表达 期望抗体的条件下培养宿主细胞并从细胞培养物回收期望的抗体。在另一个实施方案中，本发明提供了寡肽(“TAT结合寡肽”)，其结合，优选特异性 结合任何前述或后述TAT多肽。任选的是，本发明的TAT结合寡肽可偶联生长抑制剂或细 胞毒剂诸如毒素包括例如美登木素生物碱或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或 诸如此类。本发明的TAT结合寡肽可任选在CHO细胞或细菌细胞中产生，且优选抑制其所 结合的细胞生长或增殖或者诱导其所结合的细胞死亡。为了诊断目的，本发明的TAT结合寡肽可以被可检测地标记，附着于固相支持物，等等。在本发明的其它实施方案中，本发明提供了包含编码任何本文所述TAT结合寡肽 的DNA的载体。还提供了包含任何此类载体的宿主细胞。举例而言，所述宿主细胞可以是 CHO细胞、大肠杆菌细胞或酵母细胞。还提供了用于产生任何本文所述TAT结合寡肽的方 法，包括在适于表达期望的TAT结合寡肽的条件下培养宿主细胞并从细胞培养物回收期望 的TAT结合多肽。在另一个实施方案中，本发明提供了有机小分子(“TAT结合有机分子”)，其结合， 优选特异性结合任何前述或后述TAT多肽。任选的是，本发明的TAT结合有机分子可偶联 生长抑制剂或细胞毒剂诸如毒素包括例如美登木素生物碱或加利车霉素、抗生素、放射性 同位素、溶核酶或诸如此类。本发明的TAT结合有机分子优选抑制其所结合的细胞生长或 增殖或者诱导其所结合的细胞死亡。为了诊断目的，本发明的TAT结合有机分子可以被可 检测地标记，附着于固相支持物，等等。在又一个实施方案中，本发明涉及物质组合物，其包含与载体组合的如本文所述 的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、如本文所述的抗TAT抗体、如本文所述的TAT结 合寡肽、或如本文所述的TAT结合有机分子。任选的是，所述载体是药学可接受的载体。在又一个实施方案中，本发明涉及制品，其包括容器及该容器中容纳的物质组合 物，其中所述物质组合物可包含如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT多肽、如本 文所述的抗TAT抗体、如本文所述的TAT结合寡肽、或如本文所述的TAT结合有机分子。该 制品可任选还包括附于所述容器的标签或所述容器中包括的包装插页，其涉及所述物质组 合物在肿瘤的治疗性处理或诊断性检测中的用途。本发明的另一个实施方案致力于如本文所述的TAT多肽、如本文所述的嵌合TAT 多肽、如本文所述的抗TAT多肽抗体、如本文所述的TAT结合寡肽、或如本文所述的TAT结 合有机分子用于制备药物的用途，所述药物可用于治疗对所述TAT多肽、嵌合TAT多肽、抗 TAT多肽抗体、TAT结合寡肽、或TAT结合有机分子有响应的状况。本发明的其它实施方案致力于任何分离的抗体，其包含本文所公开的HVR-L1、 HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2和HVR-H3序列中的一种或多种，或是与任何此类抗体结合 相同表位的任何抗体。B.另外的实施方案本发明的另一个实施方案致力于用于抑制表达TAT多肽的细胞生长的方法，其中 该方法包括使所述细胞接触与所述TAT多肽结合的抗体、寡肽或有机小分子，且其中所述 抗体、寡肽或有机小分子与所述TAT多肽的结合引起所述表达TAT多肽的细胞的生长抑制。 在优选的实施方案中，所述细胞是癌细胞，且所述抗体、寡肽或有机分子与所述TAT多肽的 结合引起表达所述TAT多肽的所述细胞死亡。任选的是，所述抗体是单克隆抗体、抗体片 段、嵌合抗体、人源化抗体、或单链抗体。本发明方法中所采用的抗体、TAT结合寡肽和TAT 结合有机分子可任选偶联生长抑制剂或细胞毒剂诸如毒素包括例如美登木素生物碱或加 利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或诸如此类。本发明方法中所采用的抗体和TAT 结合寡肽可任选在CHO细胞或细菌细胞中产生。本发明的又一个实施方案致力于治疗性处理具有癌性肿瘤的哺乳动物的方法，所 述癌性肿瘤包含表达TAT多肽的细胞，其中该方法包括给所述哺乳动物施用治疗有效量的结合所述TAT多肽的抗体、寡肽或有机小分子，由此所述肿瘤得到有效的治疗性处理。任选 的是，所述抗体是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。本发明方法中 所采用的抗体、TAT结合寡肽和TAT结合有机分子可任选偶联生长抑制剂或细胞毒剂诸如 毒素包括例如美登木素生物碱或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或诸如此类。 本发明方法中所采用的抗体和寡肽可任选在CHO细胞或细菌细胞中产生。本发明的又一个实施方案致力于测定怀疑含有TAT多肽的样品中该TAT多肽的存 在的方法，其中该方法包括使所述样品暴露于结合所述TAT多肽的抗体、寡肽或有机小分 子，并测定所述样品中所述抗体、寡肽或有机小分子与所述TAT多肽的结合，其中此类结合 的存在表明所述样品中存在所述TAT多肽。任选的是，所述样品可包括怀疑表达TAT多肽 的细胞(可以是癌细胞)。本发明方法中所采用的抗体、TAT结合寡肽或TAT结合有机分子 可任选被可检测地标记、附着于固相支持物，或诸如此类。本发明的又一个实施方案致力于诊断哺乳动物中肿瘤的存在的方法，其中该方法 包括检测(a)从所述哺乳动物获得的组织细胞的测试样品中和(b)相同组织来源或类型的 已知正常非癌性细胞的对照样品中编码TAT多肽的基因的表达水平，其中所述TAT多肽在 测试样品中的表达水平高于对照样品表明获取该测试样品的哺乳动物中存在肿瘤。本发明的又一个实施方案致力于诊断哺乳动物中肿瘤的存在的方法，其中该方法 包括(a)使包含从所述哺乳动物获得的组织细胞的测试样品接触结合TAT多肽的抗体、寡 肽或有机小分子，并(b)检测所述测试样品中所述抗体、寡肽或有机小分子和所述TAT多肽 之间复合物的形成，其中复合物的形成表明所述哺乳动物中存在肿瘤。任选的是，所采用的 抗体、TAT结合寡肽或TAT结合有机分子被可检测地标记，附着于固相支持物，或诸如此类， 和/或所述组织细胞的测试样品是从怀疑具有癌性肿瘤的个体获得的。本发明的又一个实施方案致力于治疗或预防与改变的，优选提高的TAT多肽表达 或TAT多肽活性有关的细胞增殖性紊乱(病症)的方法，该方法包括给需要此类治疗的受 试者施用有效量的TAT多肽的拮抗剂。优选的是，所述细胞增殖性紊乱是癌症，且所述TAT 多肽的拮抗剂是抗TAT多肽抗体、TAT结合寡肽、TAT结合有机分子或反义寡核苷酸。细胞 增殖性紊乱TAT多肽的有效治疗或预防可以是直接杀死表达TAT多肽的细胞或抑制其生长 的结果，或者通过拮抗TAT多肽的细胞生长促进活性。本发明的又一个实施方案致力于使抗体、寡肽或有机小分子与表达TAT多肽的细 胞结合的方法，其中该方法包括在适于所述抗体、寡肽或有机小分子与所述TAT多肽结合 的条件下使表达TAT多肽的细胞接触所述抗体、寡肽或有机小分子，并容许它们之间的结 合。在优选的实施方案中，所述抗体用可定性和/或定量测定所述抗体、寡肽或有机小分子 结合所述细胞的位置和/或量的分子或化合物标记。本发明的其它实施方案致力于(a)TAT多肽、(b)编码TAT多肽的核酸或包含该核 酸的载体或宿主细胞、(c)抗TAT多肽抗体、(d) TAT结合寡肽、或(e) TAT结合有机小分子在 制备可用于(i)癌症或肿瘤的治疗性处理或诊断性检测或(ii)细胞增殖性紊乱(病症) 的治疗性处理或预防的药物中的用途。本发明的另一个实施方案致力于抑制癌细胞生长的方法，其中所述癌细胞的生长 至少部分依赖于TAT多肽的生长促进效果(其中所述TAT多肽可以是由癌细胞自身表达 的，或者是由产生对癌细胞具有生长促进效果的多肽的细胞表达的)，其中该方法包括使所述TAT多肽接触结合所述TAT多肽的抗体、寡肽或有机小分子，由此拮抗所述TAT多肽的生 长促进活性，继而抑制所述癌细胞的生长。优选完全抑制癌细胞的生长。甚至更优选的是， 所述抗体、寡肽或有机小分子与所述TAT多肽的结合诱导所述癌细胞的死亡。任选的是，所 述抗体是单克隆抗体、抗体片段、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。本发明方法中所采用 的抗体、TAT结合寡肽和TAT结合有机分子可任选偶联生长抑制剂或细胞毒剂诸如毒素包 括例如美登木素生物碱或加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或诸如此类。本发明 方法中所使用的抗体和TAT结合寡肽可任选在CHO细胞或细菌细胞中产生。本发明的又一个实施方案致力于治疗性处理哺乳动物中的肿瘤的方法，其中所述 肿瘤的生长至少部分依赖于TAT多肽的生长促进效果，其中所述方法包括给所述哺乳动物 施用治疗有效量的结合所述TAT多肽的抗体、寡肽或有机小分子，由此拮抗所述TAT多肽的 生长促进活性并使所述肿瘤得到有效的治疗性处理。任选的是，所述抗体是单克隆抗体、抗 体片段、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。本发明方法中所采用的抗体、TAT结合寡肽和 TAT结合有机分子可任选偶联生长抑制剂或细胞毒剂诸如毒素包括例如美登木素生物碱或 加利车霉素、抗生素、放射性同位素、溶核酶或诸如此类。本发明方法中所采用的抗体和寡 肽可任选在CHO细胞或细菌细胞中产生。C.更多另外的实施方案在其它实施方案中，本发明致力于如下这套本申请可能的
权利要求
1.分离的核 酸，其具有与下述各项具有至少80%核酸序列同一性的核苷酸序列(a) DNA分子，其编码SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)DNA分子，其编码SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽；(C)DNA分子，其编码SEQ ID NO :2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)DNA分子，其编码SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e) SEQ ID NO 1所示核苷酸序列；(f) SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码序列；或(g) (a)，(b)，(C)，(d)，(e)或(f)的互补序列。2.分离的核酸，其具有(a)核苷酸序列，其编码SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)核苷酸序列，其编码SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽；(c)核苷酸序列，其编码SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)核苷酸序列，其编码SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e) SEQ ID NO 1所示核苷酸序列；(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区；或(g) (a)，(b)，(C)，(d)，(e)或(f)的互补序列。3.分离的核酸，其与下述任一项杂交(a)核酸，其编码SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)核酸，其编码SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽；(c)核酸，其编码SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)核酸，其编码SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列；
(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区；或(g) (a)，(b)，(C)，(d)，(e)或(f)的互补序列。4.权利要求3的核酸，其中所述杂交在严格条件下发生。5.权利要求3的核酸，其长度为至少约5个核苷酸。6.表达载体，其包含权利要求1、2或3的核酸。7.权利要求6的表达载体，其中所述核酸与控制序列可操作连接，所述控制序列 受到用该载体转化的宿主细胞的识别。8.宿主细胞，其包含权利要求7的表达载体。9.权利要求8的宿主细胞，其是CHO细胞、大肠杆菌细胞或酵母细胞。10.用于生产多肽的方法，包括在适于表达所述多肽的条件下培养权利要求8的 宿主细胞，并从细胞培养物回收所述多肽。11.分离的多肽，其与下述各项具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽。12.分离的多肽，其具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。13.嵌合多肽，其包含与异源多肽融合的权利要求11或12的多肽。14.权利要求13的嵌合多肽，其中所述异源多肽是表位标签序列或免疫球蛋白的 Fc区。15.分离的抗体，其结合与下述各项具有至少80%氨基酸序列同一性的多肽(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽。16.分离的抗体，其结合具有下述任一项的多肽(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；
(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。17.权利要求15或16的抗体，其是单克隆抗体。18.权利要求15或16的抗体，其是抗体片段。19.权利要求15或16的抗体，其是嵌合或人源化抗体。20.权利要求15或16的抗体，其与生长抑制剂偶联。21.权利要求15或16的抗体，其与细胞毒剂偶联。22.权利要求21的抗体，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。23.权利要求21的抗体，其中所述细胞毒剂是毒素。24.权利要求23的抗体，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。25.权利要求23的抗体，其中所述毒素是美登木素生物碱。26.权利要求15或16的抗体，其在细菌中产生。27.权利要求15或16的抗体，其在CHO细胞中产生。28.权利要求15或16的抗体，其诱导与其结合的细胞死亡。29.权利要求15或16的抗体，其被可检测地标记。30.分离的核酸，其具有编码权利要求15或16的抗体的核苷酸序列。31.表达载体，其包含与控制序列可操作连接的权利要求30的核酸，所述控制序 列由用该载体转化的宿主细胞识别。32.宿主细胞，其包含权利要求31的表达载体。33.权利要求32的宿主细胞，其是CHO细胞、大肠杆菌细胞或酵母细胞。34.用于生产抗体的方法，包括在适于表达所述抗体的条件下培养权利要求32的 宿主细胞，并从细胞培养物回收所述抗体。35.分离的寡肽，其结合与下述任一项具有至少80%氨基酸序列同一性的多肽(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽。36.分离的寡肽，其结合具有下述任一项的多肽(a) SEQ ID NO 2任一所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。37.权利要求35或36的寡肽，其与生长抑制剂偶联。
38.权利要求35或36的寡肽，其与细胞毒剂偶联。39.权利要求38的寡肽，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。40.权利要求38的寡肽，其中所述细胞毒剂是毒素。41.权利要求40的寡肽，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。42.权利要求40的寡肽，其中所述毒素是美登木素生物碱。43.权利要求35或36的寡肽，其诱导其所结合的细胞死亡。44.权利要求35或36的寡肽，其被可检测地标记。45. TAT结合有机分子，其结合与下述各项具有至少80%氨基酸序列同一性的多 肽(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e) SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽。46.权利要求45的有机分子，其结合具有下述任一项的多肽(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。47.权利要求45或46的有机分子，其与生长抑制剂偶联。48.权利要求45或46的有机分子，其与细胞毒剂偶联。49.权利要求48的有机分子，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素 和溶核酶。50.权利要求48的有机分子，其中所述细胞毒剂是毒素。51.权利要求50的有机分子，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。52.权利要求50的有机分子，其中所述毒素是美登木素生物碱。53.权利要求45或46的有机分子，其诱导其所结合的细胞死亡。54.权利要求45或46的有机分子，其被可检测地标记。55.物质组合物，其包含与载体组合的(a)权利要求11的多肽;(b)权利要求12的多肽；(c)权利要求13的嵌合多肽；(d)权利要求15的抗体；(e)权利要求16的抗体；(f)权利要求35的寡肽；
(g)权利要求36的寡肽；(h)权利要求45的TAT结合有机分子；或⑴权利要求46的TAT结合有机分子。56.权利要求55的物质组合物，其中所述载体是药学可接受的载体。57.制品，其包括(a)容器 ’及(b)所述容器中容纳的权利要求55的物质组合物。58.权利要求57的制品，还包括附于所述容器的标签或所述容器中包括的包装插 页，其涉及所述物质组合物用于癌症的治疗性处理或诊断性检测的用途。59.抑制细胞生长的方法，所述细胞表达与所述任一项具有至少80%氨基酸序列 同一性的蛋白质(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括使所 述细胞接触结合所述蛋白质的抗体、寡肽或有机分子，由此所述抗体、寡肽或有机分子与所 述蛋白质的结合引起所述细胞的生长抑制。60.权利要求59的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。61.权利要求59的方法，其中所述抗体是抗体片段。62.权利要求59的方法，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体。63.权利要求59的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与生长抑制剂偶联。64.权利要求59的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与细胞毒剂偶联。65.权利要求64的方法，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。66.权利要求64的方法，其中所述细胞毒剂是毒素。67.权利要求66的方法，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。68.权利要求66的方法，其中所述毒素是美登木素生物碱。69.权利要求59的方法，其中所述抗体在细菌中产生。70.权利要求59的方法，其中所述抗体在CHO细胞中产生。71.权利要求59的方法，其中所述细胞是癌细胞。72.权利要求71的方法，其中使所述癌细胞进一步暴露于放射处理或化疗剂。73.权利要求71的方法，其中所述癌细胞选自乳腺癌细胞、结肠直肠癌细胞、肺癌 细胞、卵巢癌细胞、中枢神经系统癌细胞、肝癌细胞、膀胱癌细胞、胰腺癌细胞、宫颈癌细胞、 黑素瘤细胞和白血病细胞。74.权利要求71的方法，其中所述癌细胞与相同组织来源的正常细胞相比更大量 的表达所述蛋白质。75.权利要求59的方法，其引起所述细胞死亡。
76.权利要求59的方法，其中所述蛋白质具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。77.治疗性处理具有癌性肿瘤的哺乳动物的方法，所述癌性肿瘤包含表达与下述 任一项具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白质的细胞(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括给所 述哺乳动物施用治疗有效量的结合所述蛋白质的抗体、寡肽或有机分子，由此有效治疗所 述哺乳动物。78.权利要求77的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。79.权利要求77的方法，其中所述抗体是抗体片段。80.权利要求77的方法，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体。81.权利要求77的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与生长抑制剂偶联。82.权利要求77的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与细胞毒剂偶联。83.权利要求82的方法，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素和溶 核酶。84.权利要求82的方法，其中所述细胞毒剂是毒素。85.权利要求84的方法，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。86.权利要求84的方法，其中所述毒素是美登木素生物碱。87.权利要求77的方法，其中所述抗体在细菌中产生。88.权利要求77的方法，其中所述抗体在CHO细胞中产生。89.权利要求77的方法，其中使所述肿瘤进一步暴露于放射处理或化疗剂。90.权利要求77的方法，其中所述肿瘤是乳腺肿瘤、结肠直肠肿瘤、肺肿瘤、卵巢 肿瘤、中枢神经系统肿瘤、肝肿瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤或宫颈肿瘤。91.权利要求77的方法，其中所述肿瘤的癌性细胞与相同组织来源的正常细胞相 比更大量的表达所述蛋白质。92.权利要求77的方法，其中所述蛋白质具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；
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(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。93.测定怀疑含有某种蛋白质的样品中该蛋白质的存在的方法，其中所述蛋白质 与下述任一项具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括使所 述样品暴露于结合所述蛋白质的抗体、寡肽或有机分子，并测定所述样品中所述抗体、寡肽 或有机分子与所述蛋白质的结合，其中所述抗体、寡肽或有机分子与所述蛋白质的结合表 明所述样品中存在所述蛋白质。94.权利要求93的方法，其中所述样品包含怀疑表达所述蛋白质的细胞。95.权利要求94的方法，其中所述细胞是癌细胞。96.权利要求93的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子被可检测地标记。97.权利要求93的方法，其中所述蛋白质具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。98.诊断哺乳动物中肿瘤的存在的方法，所述方法包括测定从所述哺乳动物获得 的组织细胞的测试样品中及相同组织来源的已知正常细胞的对照样品中编码与下述任一 项具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白质的基因的表达水平(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，其中所述蛋白质在 测试样品中的表达水平高于对照样品表明获取测试样品的哺乳动物中存在肿瘤。99.权利要求98的方法，其中测定编码所述蛋白质的基因的表达水平的步骤包括 在原位杂交或RT-PCR分析中使用寡核苷酸。100.权利要求98的方法，其中测定编码所述蛋白质的基因的表达水平的步骤包 括在免疫组化或Western印迹分析中使用抗体。101.权利要求98的方法，其中所述蛋白质具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；
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(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。102.诊断哺乳动物中肿瘤的存在的方法，所述方法包括使从所述哺乳动物获得的 组织细胞的测试样品接触结合与下述任一项具有至少80%的氨基酸序列同一性的蛋白质 的抗体、寡肽或有机分子(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，并检测测试样品中 所述抗体、寡肽或有机分子和所述蛋白质之间复合物的形成，其中复合物的形成表明所述 哺乳动物中存在肿瘤。103.权利要求102的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子被可检测地标记。104.权利要求102的方法，其中所述组织细胞的测试样品从怀疑具有癌性肿瘤的 个体获得。105.权利要求102的方法，其中所述蛋白质具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。106.治疗或预防与某种蛋白质的表达或活性增高有关的细胞增殖性紊乱的方法， 所述蛋白质与下述任一项具有至少80%的氨基酸序列同一性(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b)SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括给需 要此类治疗的受试者施用有效量的所述蛋白质的拮抗剂，由此有效治疗或预防所述细胞增 殖性紊乱。107.权利要求106的方法，其中所述细胞增殖性紊乱是癌症。108.权利要求106的方法，其中所述拮抗剂是抗TAT多肽抗体、TAT结合寡肽、TAT 结合有机分子或反义寡核苷酸。
109.使抗体、寡肽或有机分子与细胞结合的方法，所述细胞表达与下述任一项具 有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白质(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括使所 述细胞接触结合所述蛋白质的抗体、寡肽或有机分子，并允许所述抗体、寡肽或有机分子与 所述蛋白质的结合发生，由此使所述抗体、寡肽或有机分子结合所述细胞。110.权利要求109的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。111.权利要求109的方法，其中所述抗体是抗体片段。112.权利要求109的方法，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体。113.权利要求109的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与生长抑制剂偶联。114.权利要求109的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与细胞毒剂偶联。115.权利要求114的方法，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素和 溶核酶。116.权利要求114的方法，其中所述细胞毒剂是毒素。117.权利要求116的方法，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。118.权利要求116的方法，其中所述毒素是美登木素生物碱。119.权利要求109的方法，其中所述抗体在细菌中产生。120.权利要求109的方法，其中所述抗体在CHO细胞中产生。121.权利要求109的方法，其中所述细胞是癌细胞。122.权利要求121的方法，其中使所述癌细胞进一步暴露于放射处理或化疗剂。123.权利要求121的方法，其中所述癌细胞选自乳腺癌细胞、结肠直肠癌细胞、肺 癌细胞、卵巢癌细胞、中枢神经系统癌细胞、肝癌细胞、膀胱癌细胞、胰腺癌细胞、宫颈癌细 胞、黑素瘤细胞和白血病细胞。124.权利要求123的方法，其中所述癌细胞与相同组织来源的正常细胞相比更大 量地表达所述蛋白质。125.权利要求109的方法，其引起所述细胞死亡。126.权利要求1-5或30任一项的核酸在制备用于癌症的治疗性处理或诊断性检 测的药物中的用途。127.权利要求1-5或30任一项的核酸在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。128.权利要求1-5或30任一项的核酸在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊乱 (病症)的药物中的用途。129.权利要求6、7或31任一项的表达载体在制备用于癌症的治疗性处理或诊断 性检测的药物中的用途。130.权利要求6、7或31任一项的表达载体在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。131.权利要求6、7或31任一项的表达载体在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊乱(病症)的药物中的用途。132.权利要求8、9、32或33任一项的宿主细胞在制备用于癌症的治疗性处理或诊 断性检测的药物中的用途。133.权利要求8、9、32或33任一项的宿主细胞在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。134.权利要求8、9、32或33任一项的宿主细胞在制备用于治疗或预防细胞增殖性 紊乱(病症)的药物中的用途。135.权利要求11-14任一项的多肽在制备用于癌症的治疗性处理或诊断性检测 的药物中的用途。136.权利要求11-14任一项的多肽在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。137.权利要求11-14任一项的宿主细胞在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊乱 的药物中的用途。138.权利要求15-29任一项的抗体在制备用于癌症的治疗性处理或诊断性检测 的药物中的用途。139.权利要求15-29任一项的抗体在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。140.权利要求15-29任一项的抗体在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊乱的药 物中的用途。141.权利要求35-44任一项的寡肽在制备用于癌症的治疗性处理或诊断性检测 的药物中的用途。142.权利要求35-44任一项的寡肽在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。143.权利要求35-44任一项的寡肽在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊乱的药 物中的用途。144.权利要求45-54任一项的TAT结合有机分子在制备用于癌症的治疗性处理或 诊断性检测的药物中的用途。145.权利要求45-54任一项的TAT结合有机分子在制备用于治疗肿瘤的药物中的 用途。146.权利要求45-54任一项的TAT结合有机分子在制备用于治疗或预防细胞增殖 性紊乱的药物中的用途。147.权利要求55或56任一项的物质组合物在制备用于癌症的治疗性处理或诊断 性检测的药物中的用途。148.权利要求55或56任一项的物质组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。149.权利要求55或56任一项的物质组合物在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊 乱的药物中的用途。150.权利要求57或58任一项的制品在制备用于癌症的治疗性处理或诊断性检测 的药物中的用途。151.权利要求57或58任一项的制品在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。152.权利要求57或58任一项的制品在制备用于治疗或预防细胞增殖性紊乱的药 物中的用途。
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153.用于抑制细胞生长的方法，其中所述细胞的生长至少部分依赖与下述任一项 具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白质的生长促进作用(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的多肽；或(f)SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括使所 述蛋白质接触与所述蛋白质结合的抗体、寡肽或有机分子，由此抑制所述细胞的生长。154.权利要求153的方法，其中所述细胞是癌细胞。155.权利要求153的方法，其中所述蛋白质由所述细胞表达。156.权利要求153的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与所述蛋白质的结合 拮抗所述蛋白质的细胞生长强化活性。157.权利要求153的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与所述蛋白质的结合 诱导所述细胞死亡。158.权利要求153的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。159.权利要求153的方法，其中所述抗体是抗体片段。160.权利要求153的方法，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体。161.权利要求153的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与生长抑制剂偶联。162.权利要求153的方法，其中所述抗体、寡肽或有机分子与细胞毒剂偶联。163.权利要求162的方法，其中所述细胞毒剂选自毒素、抗生素、放射性同位素和 溶核酶。164.权利要求162的方法，其中所述细胞毒剂是毒素。165.权利要求164的方法，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。166.权利要求164的方法，其中所述毒素是美登木素生物碱。167.权利要求153的方法，其中所述抗体在细菌中产生。168.权利要求153的方法，其中所述抗体在CHO细胞中产生。169.权利要求153的方法，其中所述蛋白质具有(a) SEQ ID NO 2所示氨基酸序列；(b)SEQ ID NO 2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(c) SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；(d)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；(e)SEQ ID NO=I所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或(f)SEQ ID NO 1所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。170.治疗性处理哺乳动物中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤的生长至少部分依赖与 下述任一项具有至少80%氨基酸序列同一性的蛋白质的生长促进作用(a) SEQ ID NO 2 所示多肽；(b) SEQ ID NO 2所示多肽，缺少其相关信号肽；(C)SEQ ID NO 2所示多肽的胞外域，具有其相关信号肽；
(d)SEQ工D N。2所示多肽的胞外域，缺少其相关信号肽；
(e)SEQ工D N。l所示核苷酸序列所编码的多肽；或
(f)SEQ工D N。l所示核苷酸序列的全长编码区所编码的多肽，所述方法包括使所述蛋白质接触与所述蛋白质结合的抗体1寡肽或有机分子，由此有效治疗所述肿瘤。
171．权利要求170的方法，其中所述蛋白质由所述肿瘤的细胞表达。
172．权利要求170的方法，其中所述抗体1寡肽或有机分子与所述蛋白质的结合拮抗所述蛋白质的细胞生长促进活性。
173．权利要求170的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
174．权利要求170的方法，其中所述抗体是抗体片段。
175．权利要求170的方法，其中所述抗体是嵌合或人源化抗体。
176．权利要求170的方法，其中所述抗体1寡肽或有机分子与生长抑制剂偶联。
177．权利要求170的方法，其中所述抗体1寡肽或有机分子与细胞毒剂偶联。
178．权利要求177的方法，其中所述细胞毒剂选自毒素1抗生素1放射性同位素和溶核酶。
179．权利要求177的方法，其中所述细胞毒剂是毒素。
180．权利要求179的方法，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。
181．权利要求179的方法，其中所述毒素是美登木素生物碱。
182．权利要求170的方法，其中所述抗体在细菌中产生。
183．权利要求170的方法，其中所述抗体在CH。细胞中产生。
184．权利要求170的方法，其中所述蛋白质具有
(a)SEQ工D N。2所示氨基酸序列；
(b)SEQ工D N。2所示氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；
(C)SEQ工D N。2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，具有其相关信号肽序列；
(d)SEQ工D N。2所示多肽的胞外域的氨基酸序列，缺少其相关信号肽序列；
(e)SEQ工D N。l所示核苷酸序列所编码的氨基酸序列；或
(f)SEQ工D N。l所示核苷酸序列的全长编码区所编码的氨基酸序列。
186．分离的抗体，其与表11所示任何杂交瘤细胞系所产生的抗体结合相同表位。
187．权利要求186的抗体，其是单克隆抗体。
188．权利要求186的抗体，其是抗体片段。
189．权利要求186的抗体，其是嵌合或人源化抗体。
190．权利要求186的抗体，其与生长抑制剂偶联。
191．权利要求186的抗体，其与细胞毒剂偶联。
192．权利要求19l的抗体，其中所述细胞毒剂选自毒素1抗生素1放射性同位素和溶核酶。
193．权利要求19l的抗体，其中所述细胞毒剂是毒素。
194．权利要求193的抗体，其中所述毒素选自美登木素生物碱和加利车霉素。
195．权利要求193的抗体，其中所述毒素是美登木素生物碱。
196．权利要求186的抗体，其在细菌中产生。
197．权利要求186的抗体，其在CH。细胞中产生。
198.权利要求186的抗体，其诱导其所结合的细胞死亡。199.权利要求186的抗体，其被可检测地标记。200.权利要求186的抗体，其包含表11所示任何杂交瘤细胞系所产生的任何抗体 的至少一个互补决定区。201.表11所示任何杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体。202.产生结合TAT多肽的单克隆抗体的杂交瘤细胞。203.鉴定如下所述抗体的方法，所述抗体结合表11所示任何杂交瘤细胞系所产 生的抗体结合的表位，所述方法包括测定第一抗体阻断表11所示任何杂交瘤细胞系所产 生的第二抗体与TAT多肽结合的能力，其中所述第一抗体在相等抗体浓度阻断所述第二抗 体与所述TAT多肽结合达至少40%的能力表明所述第一抗体能够结合所述第二抗体所结 合的表位。阅读本说明书后，本发明的其它实施方案对于本领域技术人员而言将是显而易见 的。附图简述图 IA-E 显示了 TAT10772 cDNA 的核苷酸序列(SEQ ID NO :1)，其中 SEQID NO 1 是本文中称作“DNA772”的克隆。图2A-B显示了衍生自

图1中所示SEQ ID NO 1的编码序列的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)。图3显示了以下各项的轻链可变区氨基酸序列的比对轻链人亚类I共有序列 (huKI ；SEQ ID NO 3)、鼠 11D10 抗 TAT10772 抗体(mullD10-L ；SEQID NO 4)、禾口 11D10 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗体(llDlO-graft ；SEQ IDNO 5)。图4显示了以下各项的重链可变区氨基酸序列的比对重链人亚组III共有序列 (hum III ；SEQ ID NO :6)、鼠 11D10 抗 TAT10772 抗体(mullD10-H ;SEQ ID NO :7)、和 11D10 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗体(llDlO-graft ；SEQID NO 8)。图5显示了以下各项的轻链可变区氨基酸序列的比对轻链人亚类I共有序列 (huKI ；SEQ ID NO :3)、鼠 3A5 抗 TAT10772 抗体(mu3A5-L ;SEQ IDNO :9)、和 3A5 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗体(3A5-graft ；SEQ ID NO 10)。图6A-6B显示了以下各项的重链可变区氨基酸序列的比对重链人亚组III共有 序歹Ij (hum III ；SEQ ID NO 6)、鼠 3A5 抗 TAT10772 抗体(mu3A5_H ；SEQID NO 11)、3A5 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗体“L 变体”(3A5. L-graft ；SEQ ID NO 12)、和 3A5 抗 TAT10772 移植的“人源化”抗体“F变体” (3A5. F-graft ；SEQ ID NO 13)。图7显示了选定的亲和力成熟的11D10衍生抗体的各种HVR-Ll序列(SEQ ID NOS 14-34)。图8显示了选定的亲和力成熟的11D10衍生抗体的各种HVR-L2序列(SEQ ID NOS 35-58)。图9显示了选定的亲和力成熟的11D10衍生抗体的各种HVR-L3序列(SEQ ID NOS 59-73)。图10显示了选定的亲和力成熟的11D10衍生抗体的各种HVR-Hl序列(SEQ ID NOS 74-93)。
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图11显示了选定的亲和力成熟的11D10衍生抗体的各种HVR-H2序列(SEQ ID NOS 94-112)。图12显示了选定的亲和力成熟的11D10衍生抗体的各种HVR-H3序列(SEQ ID NOS 113-118)。图13显示了选定的亲和力成熟的3A5衍生抗体的HVR-Ll序列(SEQ IDNO :119)。图14显示了选定的亲和力成熟的3A5衍生抗体的各种HVR-L2序列(SEQ ID NOS 120-121)。图15显示了选定的亲和力成熟的3A5衍生抗体的HVR-L3序列(SEQ IDNO 122)。图16显示了选定的亲和力成熟的3A5衍生抗体的HVR-Hl序列(SEQ IDNO 123)。图17显示了选定的亲和力成熟的3A5衍生抗体的各种HVR-H2序列(SEQ ID NOS 124-127)。图18A-B显示了选定的亲和力成熟的3A5衍生抗体的各种HVR-H3序列(SEQ ID NOS 128-183)。图19显示了用于实施本发明的例示性受体人共有框架序列，序列标识符如下人 VH亚类I共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID NO :184)、人VH亚类I共有框架除去延伸的高 变区(SEQ ID NO 185-187)、人 VH 亚类 II 共有框架除去 Kabat CDR (SEQ ID NO: 188)、人 VH亚类II共有框架除去延伸的高变区(SEQ ID NO :189_191)、人VH亚类III共有框架除 去Kabat CDR “L变体”(SEQ ID NO 192)、和人VH亚类III共有框架除去Kabat CDR “F变 体” (SEQ ID NO 193)。图20显示了用于实施本发明的例示性受体人共有框架序列，序列标识符如下人 VLk亚类I共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID N0:194)、人VLk亚类II共有框架除去Kabat CDR(SEQ ID N0:195)、AVLk 亚类 III 共有框架除去 Kabat CDR(SEQ ID N0:196)、和人 VLk 亚类 IV 共有框架除去 KabatCDR (SEQ ID NO: 197)。图21A-B显示了以下抗体的完整重链可变区序列3A5vl (SEQ IDNO 198)、 3A5v2(SEQ ID NO 199)、3A5v3(SEQ ID NO :200)、3A5v4 (SEQ IDNO :201)、3A5v5(SEQ ID NO :202)、3A5v6(SEQ ID NO :203)、3A5v7(SEQ IDNO :204)、3A5v8(SEQ ID NO :205)、 3A5vlb. 52 (SEQ ID NO 206)、3A5vlb. 54 (SEQ ID NO 207)、3A5v4b. 52 (SEQ ID NO 208)、和 3A5v4b. 54 (SEQ IDNO :209)。所有这些抗体包含SEQ ID NO :3的huKI轻链可变区氨基酸序 列。图22显示了用于本文所述某些抗TAT10772抗体的完整轻链可变区序列(SEQ ID NO 210-211)。图23显示了各种人源化3A5抗体抑制钌标记的嵌合3A5结合生物素化5 ‘-结构 域TAT10772多肽靶物的能力。“h2H7 ctr”是不特异性结合TAT10772的阴性对照抗体。图24显示了各种人源化3A5抗体抑制钌标记的嵌合3A5结合生物素化CA125多 肽的能力。“h2H7 ctr”是不特异性结合TAT10772的阴性对照抗体。图25显示了使用各种人源化3A5抗体来测量0VCAR-3细胞结合的ELISA分析的 结果。“h2H7 ctr”是不特异性结合TAT10772的阴性对照抗体。图26显示了 0VCAR-3细胞(内源性表达TAT10772多肽)在用嵌合llDlO-vc-MMAF 或嵌合3A5-VC-MMAF抗体处理后的体外增殖。
图27显示了 0VCAR-3细胞(内源性表达TAT10772多肽)在用嵌合llDlO-vc-MMAE 或嵌合3A5-VC-MMAE抗体处理后的体外增殖。图28显示了 0VCAR-3细胞(内源性表达TAT10772多肽)在用嵌合11D10-MC-MMAF 或嵌合3A5-MC-MMAF抗体处理后的体外增殖。图29显示了经使其表达TAT10772多肽的载体转染的PC3细胞(PC3/A5. 3B2)或 不表达TAT10772多肽的PC3细胞(PC3/neo)在用嵌合llD10-vc_MMAF或嵌合3A5-vc_MMAF 抗体处理后的体外增殖。图30显示了经使其表达TAT10772多肽的载体转染的PC3细胞(PC3/A5. 3B2) 或不表达TAT10772多肽的PC3细胞(PC3/neo)在用嵌合llD10-vc-PAB-MMAE或嵌合 3A5-vc-PAB-MMAE抗体处理后的体外增殖。图31显示了经使其表达TAT10772多肽的载体转染的PC3细胞(PC3/A5. 3B2)或 不表达TAT10772多肽的PC3细胞(PC3/neo)在用嵌合11D10-MC-MMAF或嵌合3A5-MC_MMAf 抗体处理后的体外增殖。图32显示了 PC3/A5. 3B2衍生肿瘤在用各种偶联有毒素的嵌合3A5抗体、对照抗 体或仅媒介物处理后的体内平均肿瘤体积测量值(皮下注射模型)。图33显示了 0VCAR-3衍生肿瘤在用各种偶联有毒素的嵌合3A5抗体、对照抗体或 仅媒介物处理后的体内平均肿瘤体积测量值(乳腺脂肪垫移植SCID米色小鼠模型)。图34显示了 0VCAR-3衍生肿瘤在用各种偶联有毒素的嵌合3A5抗体、对照抗体或 仅媒介物处理后的体内平均肿瘤体积测量值(乳腺脂肪垫移植SCID米色小鼠模型)。图35显示了 0VCAR-3衍生肿瘤在用各种偶联有毒素的嵌合3A5抗体、对照抗体或 仅媒介物处理后的体内平均肿瘤体积测量值(乳腺脂肪垫移植SCID米色小鼠模型)。图36显示了 PC3/A5. 3B2衍生肿瘤在用各种偶联有毒素的嵌合3A5抗体、对照抗 体或仅媒介物处理后的体内平均肿瘤体积测量值(裸鼠中的异种移植肿瘤，每只小鼠106 个细胞)。图37显示了 0VCAR-3衍生肿瘤在用各种偶联有毒素的嵌合3A5抗体、对照抗体或 仅媒介物处理后的体内平均肿瘤体积测量值(乳腺脂肪垫移植SCID米色小鼠模型)。优选实施方案的详述I.定义术语“TAT多肽”和“TAT”在用于本文时且后面紧跟着数值名称时指各种多肽，其 中完整名称(即TAT/数值)指本文描述的特定多肽序列。术语“TAT/数值多肽”和“TAT/ 数值”，其中术语“数值”作为实际数值名称提供，在用于本文时涵盖天然序列多肽、多肽变 体和天然序列多肽的片段和多肽变体(本文中有进一步定义)。本文中描述的TAT多肽可 从多种来源分离，诸如人组织类型或其它来源，或者通过重组或合成方法制备。术语“TAT 多肽”指本文中公开的每一种个别的TAT/数值多肽。本说明书中涉及“TAT多肽”的所有 公开内容适用于独自的以及共同的每一种多肽。例如，关于多肽的制备、纯化、衍生、针对该 多肽的抗体的形成、针对该多肽的TAT结合寡肽的形成、针对该多肽的TAT结合有机分子的 形成、施用、含有该多肽的组合物、用该多肽治疗疾病、等等的描述适用于本发明的具体的 每一种多肽。术语“TAT多肽”还包括本文中公开的TAT/数值多肽的变体。“天然序列TAT多肽”包括与衍生自自然界的相应TAT多肽具有相同氨基酸序列的
24多肽。此类天然序列TAT多肽可从自然界分离，或者可通过重组或合成手段生成。术语“天 然序列TAT多肽”明确涵盖天然存在的截短或分泌形式的特定TAT多肽(例如胞外结构域 序列)、该多肽的天然存在变体形式(例如可变剪接形式)和天然存在的等位变体。在本发 明的某些实施方案中，本文中公开的天然序列TAT多肽是包含附图中所示全长氨基酸序列 的成熟或全长天然序列多肽。起始和终止密码子(如果指示的话)在图中以粗体和下划线 显示。附图中以“N”或“X”指示的核酸残基是任何核酸残基。然而，尽管附图中公开的TAT 多肽据显示以本文中指派为图中第1位氨基酸的甲硫氨酸残基开始，可以想到且有可能的 是，可采用位于图中第1位氨基酸上游或下游的其它甲硫氨酸残基作为TAT多肽的起始氨 基酸残基。TAT多肽“胞外结构域”或“ECD”指基本上不含跨膜结构域和胞质结构域的TAT多 肽形式。通常，TAT多肽ECD具有少于的所述跨膜结构域和/或胞质结构域，优选具有 少于0. 5%的所述结构域。可以理解，为本发明TAT多肽鉴定的任何跨膜结构域是依照本领 域常规用于鉴定该种类型疏水性结构域的标准鉴定的。跨膜结构域的精确边界可以变化， 但最有可能是本文中最初鉴定的结构域任一末端不超过约5个氨基酸。因此，任选的是， TAT多肽的胞外结构域可含有实施例或说明书中鉴定的跨膜结构域/胞外结构域边界任一 侧的约5个或更少氨基酸，而且本发明设想了具有或没有相关信号肽的此类多肽及编码它 们的核酸。本说明书和/或附图中可能显示了本文中所公开的各种TAT多肽的“信号肽”的 大致位置。然而，应当注意，信号肽的C-末端边界可以变化，但最有可能的是本文中最初 鉴定的信号肽C-末端边界任一侧不超过约5个氨基酸，其中信号肽的C-末端边界可依照 本领域常规用于鉴定该种类型氨基酸序列元件的标准鉴定(例如Nielsen et al. , Prot. Eng. 10 1-6 (1997)和 von Heinjeet al.，Nucl. Acids. Res. 14 :4683_4690(1986))。此夕卜， 还认识到，在有些情况中，从分泌多肽上切除信号序列不是完全统一的，导致超过一种分泌 种类。本发明设想了这些成熟多肽，其中信号肽在本文中所鉴定的信号肽C-末端边界任一 侧不超过约5个氨基酸内切除，及编码它们的多核苷酸。"TAT多肽变体”意指与本文中所公开的全长天然序列TAT多肽序列、缺乏本文中 所公开的信号肽的TAT多肽序列、具有或没有本文中所公开的信号肽的TAT多肽胞外结构 域、或本文中所公开的全长TAT多肽序列的任何其它片段(诸如那些由只呈现全长TAT多 肽的完整编码序列一部分的核酸编码的片段)具有至少约80%的氨基酸序列同一性的本 文中所定义的TAT多肽，优选活性TAT多肽。此类TAT多肽变体包括例如其中全长天然氨 基酸序列的N-或C-末端添加或删除一个或多个氨基酸残基的TAT多肽。通常，TAT多肽 变体与本文中所公开的全长天然序列TAT多肽序列、缺乏本文中所公开的信号肽的TAT多 肽序列、具有或没有本文中所公开的信号肽的TAT多肽胞外结构域、或本文中所公开的全 长TAT多肽序列的任何其它特别限定片段具有至少约80%的氨基酸序列同一性，或者至少 约 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%或99%的氨基酸序列同一性。通常，TAT变体多肽的长度为至少约10个氨 基酸，或者长度为至少约 20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、 180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、 370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600个氨基酸或更多。任选的是，TAT变体多肽与天然TAT多肽序列相比 具有不超过一个保守氨基酸替代，或者与天然TAT多肽序列相比具有不超过2、3、4、5、6、7、 8、9或10个保守氨基酸替代。关于本文中所鉴定的TAT多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义 为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代 视为序列同一性的一部分时，候选序列中与特定TAT多肽序列中的氨基酸残基相同的氨 基酸残基的百分率。可以本领域技术范围内的多种方式进行测定百分比氨基酸序列同一 性目的的序列对比，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或 Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定测量对比的适宜参数，包括对所比较序 列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明，％氨基酸序列同一性值是使用 序列比较计算机程序ALIGN-2获得的，其中下文表1中提供了 ALIGN-2程序的完整源代码。 ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，下文表1所示源代码已经连同用户文 档一起提交给美国版权局(USCopyright Office, Washington D. C.，20559)，并以美国版权 注册号 TXU510087 注册。公众可通过 Genentech 公司(South San Francisco, California) 得到ALIGN-2程序，或者可从下文表1中提供的源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在 UNIX操作系统，优选数码UNIX V4. OD上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不 变。在采用ALIGN-2用于氨基酸序列比较的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与 (with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有 或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序 列A)如下计算分数X/Y乘100其中X是由序列对比程序ALIGN-2在该程 序的A和B对比中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。可 以领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序 列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。作为使用这种方法的％氨基酸序列 同一性计算的例子，表2和3演示了如何计算指派为“比较蛋白质”的氨基酸序列相对于指 派为“ TAT ”的氨基酸序列的％氨基酸序列同一性，其中“ TAT ”代表目的假设TAT多肽的氨基 酸序列，“比较蛋白质”代表目的“TAT”多肽针对其进行比较的多肽的氨基酸序列，而“X”、 “Y”和“Z”各自代表不同假设氨基酸残基。除非另有具体说明，本文中所使用的所有％氨基 酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。"TAT变体多核苷酸”或“TAT变体核酸序列”意指编码本文中所定义的TAT多肽， 优选活性TAT多肽且与编码本文中所公开的全长天然序列TAT多肽序列、本文中所公开的 缺乏信号肽的全长天然序列TAT多肽序列、本文中所公开的具有或没有信号肽的TAT多肽 胞外结构域、或本文中所公开的全长TAT多肽序列的任何其它片段(诸如那些由只呈现全 长TAT多肽的完整编码序列一部分的核酸编码的片段)的核苷酸序列具有至少约80%核 酸序列同一性的核酸分子。通常，TAT变体多核苷酸与编码本文中所公开的全长天然序列 TAT多肽序列、本文中所公开的缺乏信号肽的全长天然序列TAT多肽序列、本文中所公开 的具有或没有信号序列的TAT多肽胞外结构域、或本文中所公开的全长TAT多肽序列的任 何其它片段的核酸序列具有至少约80%的核酸序列同一性，或者至少约81 %、82%、83 %、
2684%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98% 或 99%的核酸序列同一性。变体不涵盖天然核苷酸序列。通常，TAT变体多核苷酸的长度为至少约5个核苷酸，或者长度为至少约6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、 55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、 160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、 310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、 500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、 690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、 880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980、990 或 1000 个核苷酸，其中在此语境 中，术语“约”意指所述核苷酸序列长度加上或减去所述长度的10 %。关于本文中所鉴定的TAT编码核酸序列的“百分比(％ )核酸序列同一性”定义 为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，候选序列中与TAT目的 核酸序列中的核苷酸相同的核苷酸的百分率。可以本领域技术范围内的多种方式进行测定 百分比核酸序列同一性目的的序列对比，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、 BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。然而，为了本发明，％核酸序列同一性值是 使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得的，其中下文表1中提供了 ALIGN-2程序的完整源 代码。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，下文表1所示源代码已经连 同用户文档一起提交给美国版权局(US CopyrightOffice, Washington D. C.，20559)，并 以美国版权注册号TXU510087注册。公众可通过Genentech公司(South San Francisco, California)得到ALIGN-2程序，或者可从下文表1中提供的源代码编译。ALIGN2程序应 当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIX V4. OD上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2 程序设定且不变。在采用ALIGN-2来比较核酸序列的情况中，给定核酸序列C相对于(to)、与 (with)、或针对(against)给定氨基酸序列D的％核酸序列同一性(或者可表述为具有或 包含相对于、与、或针对给定核酸序列D的某一％核酸序列同一性的给定核酸序列C)如下 计算分数W/Z乘100其中W是由序列对比程序ALIGN-2在该程序的 C和D对比中评分为相同匹配的核苷酸数，且其中Z是D中的核苷酸总数。可以领会，若核 酸序列C的长度与核酸序列D的长度不相等，则C相对于D的％核酸序列同一性将不等于D 相对于C的％核酸序列同一性。作为％核酸序列同一性计算的例子，表4和5演示了如何 计算指派为“比较DNA”的核酸序列相对于指派为“TAT-DNA”的核酸序列的％核酸序列同一 性，其中“TAT-DNA”代表目的假设TAT编码核酸序列，“比较DNA”代表目的“TAT-DNA”核酸 分子针对其进行比较的核酸分子的核苷酸序列，而“N”、“L”和“V”各自代表不同假设核苷 酸。除非另有具体说明，本文中所使用的所有％核酸序列同一性值都是依照上一段所述，使 用ALIGN-2计算机程序获得的。在其它实施方案中，TAT变体多核苷酸是编码TAT多肽且能够与编码本文中所公 开的全长TAT多肽的核苷酸序列杂交，优选在严格杂交和洗涤条件下杂交的核酸分子。TAT 变体多肽可以是那些由TAT变体多核苷酸编码的变体多肽。
术语“全长编码区”在涉及编码TAT多肽的核酸使用时指编码本发明全长TAT多肽 的核苷酸序列(常常在附图中起始和终止密码子(含)之间显示)。术语“全长编码区”在 涉及ATCC保藏核酸使用时指插入保藏在ATCC的载体中的cDNA的TAT多肽编码部分(常 常在附图中起始和终止密码子(含)之间显示)。“分离的”，在用于描述本文中所公开的各种TAT多肽时，意指已经鉴定且与/由其 天然环境的一种成分分开和/或回收的多肽。其天然环境的污染性成分指通常会干扰该多 肽的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。 在优选的实施方案中，将多肽纯化至(1)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的 N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(2)根据使用考马斯蓝或优选银染色的非还原或还原 条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然TAT多肽天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离 的多肽包括重组细胞内的原位多肽。然而，分离的多肽通常通过至少一个纯化步骤来制备。“分离的”TAT多肽编码核酸或其它多肽编码核酸指已经鉴定且与该多肽编码核酸 的天然来源中通常与之相关的至少一种污染性核酸分子分开的核酸分子。分离的多肽编码 核酸分子不同于在自然界中发现它时的形式或背景。分离的多肽编码核酸分子因此与存在 于天然细胞中时的特定多肽编码核酸分子有区别。然而，分离的多肽编码核酸分子包括通 常表达该多肽的细胞中所包含的多肽编码核酸分子，例如当所述核酸分子在所述细胞中的 染色体定位不同于它在天然细胞中的染色体定位时。术语“控制序列”指在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA 序列。例如，适于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵基因序列、和核糖体结合位 点。已知真核细胞利用启动子、多腺苷酸化信号、和增强子。若一条核酸与另一条核酸序列处于功能性相互关系中，则它是“可操作连接”的。 例如，若前序列(presequence)或分泌前导序列(secretory leader)的DNA表达成参与多 肽分泌的前蛋白质(preprotein)，则它与多肽的DNA可操作连接；若启动子或增强子影响 编码序列的转录，则它与该序列可操作连接；或者，若核糖体结合位点的位置促进翻译，则 它与编码序列可操作连接。通常，“可操作连接”意味着相连的DNA序列是相邻的，而且在分 泌前导的情况中意味着相邻且处于阅读状态。然而，增强子不必相邻。连接可通过在方便 的限制性位点处的连接反应来实现。如果没有此类位点，那么依照常规实践使用合成的寡 核苷酸衔接头或接头。杂交反应的“严格性”可以容易的由本领域普通技术人员确定，而且通常根据探针 长度、洗涤温度、和盐浓度凭经验计算。通常，较长的探针要求较高的温度以正确退火，而较 短的探针需要较低的温度。杂交通常依赖于当互补链存在于低于其解链温度的环境中时变 性DNA重新退火的能力。探针和可杂交序列之间的期望同源性程度越高，可使用的相对温 度也越高。结果是，推断出较高相对温度将趋向于使反应条件更为严格，而较低温度也就较 不严格。关于杂交反应严格性的另外细节和解释，参见Ausubel等人，((CurrentProtocols in Molecular Biology)), Wiley Interscience Publishers, 1995。“严格条件”或“高严格性条件”，如本文中所定义的，可如下鉴别(1)采用低离 子强度和高温进行洗涤，例如0. 015M氯化钠/0. 0015M柠檬酸钠/0. 十二烷基硫酸钠， 500C ； (2)在杂交过程中采用变性剂，诸如甲酰胺，例如50% (ν/ν)甲酰胺及0.1%牛血清 清蛋白/0. 1% Ficoll/0. 聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液pH 6. 5，含750mM氯化
28钠，75mM柠檬酸钠，42°C ；或(3)在采用50%甲酰胺，5x SSC(0. 75M NaCl，0. 075M柠檬酸 钠)，50mM磷酸钠(pH 6.8)，0. 焦磷酸钠，5x Denhardt氏溶液，超声波处理的鲑鱼精 DNA(50yg/ml),0. SDSjP 10%硫酸右旋糖苷的溶液中于42°C杂交过夜，以及于42°C在 0. 2x SSC(氯化钠/柠檬酸钠)中洗涤10分钟，接着在含EDTA的0. Ix SSC中于55°C进行 10分钟高严格性洗涤。“中等严格条件”可以如 Sambrook 等人，《Molecular Cloning =ALaboratory Manual)),New York, Cold Spring Harbor Press，1989所述鉴别，包括使用比上文所述较不 严格的洗涤溶液和杂交条件(例如温度、离子强度和％ SDS)。中等严格条件的一个例子是 于 37°C 在含20% 甲酰胺，5x SSC(150mM NaCl，15mM 柠檬酸三钠)，50mM 磷酸钠(pH 7.6)， 5x Denhardt氏溶液，10%硫酸右旋糖苷，和20mg/ml变性剪切的鲑鱼精DNA的溶液中温育 过夜，接着在Ix SSC中于约37-50°C洗涤滤膜。技术人员将认识到如何根据需要调整温度、 离子强度等以适应诸如探针长度等因素。术语“表位标记的”在用于本文时指包含与“标签多肽”融合的TAT多肽或抗TAT 抗体的嵌合多肽。标签多肽具有足够残基以提供表位而可制备针对其的抗体，但又足够短 使得其不干扰与其融合的多肽的活性。标签多肽优选还是相当独特的，使得所述抗体基本 上不与其它表位发生交叉反应。合适的标签多肽通常具有至少6个氨基酸残基且通常在约 8个到约50个氨基酸残基之间(优选在约10个到约20个氨基酸残基之间)。“有活性的”或“活性”为了本发明指保留天然或天然存在TAT的生物学和/或免 疫学活性的TAT多肽形式，其中“生物学”活性指由天然或天然存在TAT引起的，诱导针对 天然或天然存在TAT所具有的抗原性表位的抗体生成的能力以外的生物学功能(或是抑制 性的或是刺激性的)，而“免疫学”活性指诱导针对天然或天然存在TAT所具有的抗原性表 位的抗体生成的能力。术语“拮抗剂”以最广义使用，包括部分或完全阻断、抑制、或中和本文中所公开的 天然TAT多肽的生物学活性的任何分子。类似的，术语“激动剂”以最广义使用，包括模拟 本文中所公开的天然TAT多肽的生物学活性的任何分子。合适的激动剂或拮抗剂分子明确 包括激动性或拮抗性抗体或抗体片段、天然TAT多肽的片段或氨基酸序列变体、肽、反义寡 核苷酸、有机小分子等。用于鉴定TAT多肽的激动剂或拮抗剂分子的方法可包括使TAT多 肽接触候选激动剂或拮抗剂分子并测量通常与TAT多肽有关的一种或多种生物学活性的 可检测变化。“处理”或“治疗”或“缓和”指治疗性处理及预防性或防范性措施二者，其中目标 是预防或减缓(减轻)所针对的病理学状况或紊乱。需要治疗的受试者包括早就患有紊乱 的受试者以及倾向于患上紊乱的受试者或要预防紊乱的受试者。如果在依照本发明的方法 接受治疗量的抗TAT抗体、TAT结合寡肽或TAT结合有机分子后，患者在如下一项或多项中 显示出可观察和/或可测量的降低或消失，那么受试者或哺乳动物成功“治疗” 了表达TAT 多肽的癌症癌细胞数减少或癌细胞消失；肿瘤体积缩小；癌细胞浸润到周围器官中，包括 癌传播到软组织和骨中受到抑制(即一定程度的减缓，优选停止)；肿瘤转移受到抑制(即 一定程度的减缓，优选停止)；肿瘤生长受到一定程度的抑制；和/或与特定癌症有关的一 种或多种症状得到一定程度的减轻；发病率和死亡率降低；及生命质量提高。就抗TAT抗 体或TAT结合寡肽可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞而言，它可能是抑制细胞的和/或毒害细胞的。这些体征或症状的减轻还可以由患者感受到。用于评估疾病的成功治疗和改善的上述参数可以容易地通过内科医师所熟悉 的常规流程来测量。对于癌症治疗，可通过例如评估疾病进展时间(time to disease progression, TTP)和/或测定响应速率(response rate, RR)来测量功效。转移可通过分 期测试(staging test)来测定，及通过骨扫描及钙水平和其它酶的测试以测定是否传播到 骨。还可进行CT扫描以查明是否传播到骨盆及该区域中的淋巴结。分别使用胸腔X射线 和通过已知方法进行的肝酶水平测量来分别查明是否转移到肺和肝。用于监测疾病的其它 常规方法包括经直肠超声检查(TRUS)和经直肠针吸活组织检查(TRNB)。“长期”施用指以与短期模式相反的连续模式施用药剂，从而将初始治疗效果(活 性)维持较长的一段时间。“间歇”施用指并非连续不间断进行的处理，而是本质上是循环 的处理。对于癌症的治疗、减轻症状、或诊断而言，“哺乳动物”指归入哺乳类的任何动物， 包括人、家畜和牲畜，及动物园、运动或宠物动物，诸如犬、猫、牛、马、绵羊、猪、山羊、兔等。 优选的是，哺乳动物指人。“联合”一种或多种其它治疗剂的施用包括同时(共同)施用和任意次序的连续施用。“载体”在用于本文时包括药学可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的 剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理学可接受的载体是PH缓冲 水溶液。生理学可接受载体的来自包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸盐的缓 冲剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋 白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰 胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精； 螯合剂，诸如EDTA ；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；和/或非离子表面 活性剂，诸如TWEEN _ 、聚乙二醇(PEG)和PLUR0NICS 。“固相”或“固体支持物”意指本发明的抗体、TAT结合寡肽或TAT结合有机分子可 粘着或附着其上的非水性基质。本文中所涵盖的固相的例子包括那些部分或完全由玻璃 (例如可控孔径玻璃)、多糖(例如琼脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和聚硅氧烷 (silicone)制成的固相。在某些实施方案中，根据语境，固相可包括测定板的孔；在其它实 施方案中，它指纯化柱(例如亲和层析柱)。此术语还包括离散颗粒的不连续固相，诸如美 国专利4，275，149中所述。“脂质体”指由各种类型脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的，可用于对哺乳动物递 送药物(诸如TAT多肽、针对其的抗体或TAT结合寡肽)的小囊泡。与生物膜的脂质排列 相似，脂质体的成分通常排列成双层形式。“小”分子或有机“小”分子在本文中定义为分子量小于约500道尔顿。本文中所公开的多肽、抗体、TAT结合寡肽、TAT结合有机分子、或其激动剂或拮抗 剂的“有效量”指足以实现明确规定的目的的量。“有效量”可凭经验且以常规方式，联系所 述的目的来确定。术语“治疗有效量”指在受试者或哺乳动物中有效“治疗”疾病或紊乱的抗体、多 肽、TAT结合寡肽、TAT结合有机分子或其它药物的量。在癌症的情况中，药物的治疗有效
30量可减少癌细胞数；缩小肿瘤体积；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)癌细胞浸润到周 围器官中；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/ 或一定程度的减轻与癌症有关的一种或多种症状。参见本文中“治疗”的定义。就药物可 预防现存癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是抑制细胞的和/或毒害 细胞的。抗TAT抗体、TAT多肽、TAT结合寡肽或TAT结合有机分子的“生长抑制量”指能够 在体外或在体内抑制细胞，尤其是肿瘤，例如癌细胞生长的量。抗TAT抗体、TAT多肽、TAT 结合寡肽或TAT结合有机分子为了抑制肿瘤性细胞生长的“生长抑制量”可凭经验且以常 规方式来确定。抗TAT抗体、TAT多肽、TAT结合寡肽或TAT结合有机分子的“细胞毒性量”指能够 在体外或在体内引起细胞，尤其是肿瘤，例如癌细胞破坏的量。抗TAT抗体、TAT多肽、TAT 结合寡肽或TAT结合有机分子为了抑制肿瘤性细胞生长的“细胞毒性量”可凭经验且以常 规方式来确定。术语“抗体”以最广义使用，明确覆盖例如单一抗TAT单克隆抗体(包括激动性、 拮抗性和中和性抗体)、具有多表位特异性的抗TAT抗体组合物、多克隆抗体、单链抗TAT抗 体、及抗TAT抗体的片段(见下文)，只要它们展现出期望生物学或免疫学活性。术语“免 疫球蛋白”(Ig)在本文中与抗体可互换使用。“分离的”抗体指已经鉴定且与/由其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗 体。其天然环境的污染性成分指会干扰该抗体的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、 和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(1)根据 Lowry方法的测定，抗体重量超过95%，最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测 序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据使用考马斯蓝或 优选银染色的还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然抗体天然环境的至少 一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常通 过至少一个纯化步骤来制备。基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四 聚体糖蛋白(IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，因此包含10 个抗原结合位点；而分泌型IgA抗体可聚合形成包含2-5个基本的4链单元及J链的多价 装配物)。在IgG的情况中，4链单元通常是约150，000道尔顿。每条轻链通过一个共价二 硫键与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链 的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在N-末端具有一个 可变区(Vh)，接着是三个(对于α和Y链)或四个(对于μ和ε同种型)恒定区(Ch)。 每条轻链在N-末端具有一个可变区(VJ，接着是其另一端的一个恒定区(Q)。\与乂11排 列在一起，而Q与重链的第一恒定区(ChI)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和 重链可变区之间形成界面。成对的一个Vh和一个\ 一起形成一个抗原结合位点。关于不 同类别抗体的结构和性质，参见例如《Basic and Clinical Immunology》，第8版，Daniel P. Stites,Abba I. Terr 禾口 Tristram G. Parslow 编，Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 第71页和第6章。来自任何脊椎动物物种的轻链，根据其恒定区氨基酸序列，可归入两种截然不同
31类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。根据其重链(Ch)恒定区氨基酸序列，免疫球 蛋白可归入不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有 称作α、δ、ε、Υ和μ的重链。根据Ch序列和功能的较小差异，、和α类可进一步分 为亚类，例如人类表达下列亚类=IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。术语“可变的”指可变区中的某些区段在抗体序列中差异广泛的实情。V结构域介 导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均勻分布于可变区 跨越的Iio个氨基酸。事实上，V区由15-30个氨基酸，称作框架区(KR)的相对不变异的 区段及将框架区分开的每个长度为9-12个氨基酸，称作“高变区”的极度变异的较短区域 构成。天然重链和轻链的可变区各自包含四个FR，它们大多采取β-折叠构象，通过形成 环状连接且在有些情况中形成β-折叠结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区 通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的 形成(参见 Kabat 等人，《Sequences of Proteins of Immunological Interest》，第 5 版， Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD，1991)。 ’g胃g 不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细 胞毒性(ADCC)中抗体的参与。术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成 群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的天然存在突变外。单克隆抗体是高 度特异的，针对单一抗原性位点。另外，与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的 多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了它们的特异性，单 克隆抗体的优越性体现在它们在合成时可未受到其它抗体的污染。修饰语“单克隆”不能解 释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可用于本发明的单克隆抗体可通过最初由 Kohler et al.，Nature，256 =495(1975)描述的杂交瘤方法来制备，或者可通过重组DNA方 法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(参见例如美国专利4，816，567)。“单克隆抗体”还 可使用例如 Clackson et al.，Nature，352 :624_628 (1991)和Marks et al.，J. Mol. Biol.， 222 581-597(1991)中描述的技术从噬菌体抗体库分离。单克隆抗体在本文中包括“嵌合”抗体，以及此类抗体的片段，其中重链和/或轻 链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同 源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列 相同或同源，只要它们展现出期望生物学活性(参见美国专利4，816，567和Morrison et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851_6855 (1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括包含 衍生自非人灵长类动物(如旧大陆猴类(Old World Monkey)、猿等)的可变区抗原结合序 列和人恒定区序列的“灵长类化(primatized) ”抗体。“完整抗体”指包含抗原结合位点以及Q和至少重链恒定区CH1、Ch2和Ch3的抗 体。恒定区可以是天然序列恒定区(例如人天然序列恒定区)或其氨基酸序列变体。优选 的是，完整抗体具有一项或多项效应器功能。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体 片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab' )2和Fv片段；双抗体(diabody)；线性抗体(参见美 国专利 5，641，870，实施例 2 ;Zapata et al. , Protein Eng. 8(10) 1057-1062 (1995))；单 链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。
用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，和一个残 余“Fe”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由一条完整轻链及一条重链的可 变区(Vh)和第一恒定区(ChI)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个 抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab' )2片段，它粗略相当于两个通过二 硫键相连的Fab片段，具有二价抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab’片段因在ChI结构 域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个 半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中对其中恒定区半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓。 F(ab' )2抗体片段最初是作为成对Fab’片段生成的，在Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。 还知道抗体片段的其它化学偶联。Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条重链的羧基末端部分。抗体的效应器功 能是由Fc区中的序列决定的，该区还是受到在某些类型细胞上发现的Fc受体(FcR)识别 的部分。“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密、非共价结 合的一个重链可变区和一个轻链可变区的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中散发出六 个高变环(重链和轻链各3个环)，贡献出抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特 异性。然而，即使是单个可变区(或只包含对抗原特异的三个CDR的半个Fv)也具有识别 和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。“单链Fv”，也可缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接成一条多肽链的抗体Vh和 八结构域的抗体片段。优选的是，sFv多肽在Vh和八结构域之间还包含多肽接头，使得 sFv形成抗原结合期望的结构。关于sFv的综述参见PlUckthun，《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，vol. 113, Rosenburg 禾口 Moore 编，Springer-Verlag, New York, pp. 269-315，1994 ；Borrebaeck 1995，见下文。术语“双抗体”指通过在Vh和\结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建 sFv片段(见上一段)而制备的小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非 链内配对，导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交 叉” sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的Vh和\结构域存在于不同多肽链上。双抗体更 完整的描述于例如 EP 404, 097 ；WO 93/11161 ；Hollinger et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90 6444-6448(1993)。非人(例如啮齿类)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人抗体的序 列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基 用具有期望抗体特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人 灵长类的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR)残 基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有发现的 残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。通常，人源化抗体包含至少一个、通 常两个基本上整个如下可变区，其中整个或基本上整个高变环对应于非人免疫球蛋白的高 变环，且整个或基本上整个FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还包含至少部 分免疫球蛋白恒定区(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jones et al., Nature 321:522-525(1986) ；Riechmannet al., Nature 332:323-329(1988) ；Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593_596 (1992)。
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“物种依赖性抗体”，例如哺乳动物抗人IgE抗体，指对来自第一哺乳动物物种的 抗原的结合亲和力强于对来自第二哺乳动物物种的该抗原的同系物的结合亲和力的抗体。 通常，物种依赖性抗体“特异性结合”人类抗原(即具有不超过约IxlO-7M,优选不超过约 1χ10_8Μ，最优选不超过约1x10_9M的结合亲和力(Kd))，但是对来自第二非人哺乳动物物种 的该抗原的同系物具有比其对人类抗原的结合亲和力弱至少约50倍，或至少约500倍，或 至少约1000倍的结合亲和力。物种依赖性抗体可以是上文定义的各种类型抗体，但是优选 人源化抗体或人抗体。术语“依照Kabat的可变域残基编号”或“依照Kabat的氨基酸位置编号”及其变 体指Kabat et al. ,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)巾白勺车t 用于重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包 含较少或另外的氨基酸，对应于可变域FR或CDR的缩短或插入。例如，重链可变域可包含 H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat为残基52a)及重链FR残基82后的插入残基 (例如依照Kabat为残基82a、82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号可通过将抗体 序列与“标准”Kabat编号序列对比同源区来确定。短语“基本上相似”或“基本上相同，，在用于本文时表示两个数值(通常一个涉及 本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人 员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具 有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较抗体的数值的函数，所述两 个数值之间的差异优选小于约50%，优选小于约40%，优选小于约30%，优选小于约20%， 优选小于约10%。“结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗 原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，“结合亲和力”指 反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间1 1相互作用的内在结合亲和力。分子X对 其配偶体Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域知道的常用方 法来测量，包括本文中所描述的。低亲和力抗体通常缓慢的结合抗原且趋于容易解离，而高 亲和力抗体通常更快速的结合抗原且趋于保持更长时间的结合。本领域知道测量结合亲和 力的多种方法，其中任一种都可用于本发明的目的。下文描述了具体的示例性实施方案。在一个实施方案中，依照本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下测定法所述使用Fab 型式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的通过在存在 未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的125I标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体 包被的平板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液中的结合亲和力(Chen，et al.，J Mol Biol 293:865-881(1999))。为了确定测定条件，用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5yg/ml捕 捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用PBS中的2% (w/v) 牛血清清蛋白在室温(约23°C )封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM 或26pM[125I]_抗原与连续稀释的目的Fab混合(例如与Prestaet al.，Cancer Res. 57 4593-4599 (1997)中抗VEGF抗体，Fab_12的评估一致)。然后将目的Fab保温过夜；不过， 保温可持续更长时间(例如65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以 进行室温保温(例如1小时)。然后除去溶液，并用含0. 1 % Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ 1/孔闪烁液(MicroScint-20 ；Packard)，然后在Topcount伽马计 数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab的给出小于或等于最大结合之20%的 浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测 定法使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C使用 固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用 盐酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) 活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH 4. 8将 抗原稀释至5 μ g/ml (约0. 2 μ Μ)，然后以5 μ 1/分钟的流速注入以获得约10个响应单位 (RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测 量，在25°C以约25 μ 1/分钟的流速注入在含0. 05% Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续 稀释的Fab(0. 78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAcore Evaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(k。n) 和解离速率(k。ff)。平衡解离常数(Kd)以比率k。ff/k。n计算。参见例如Chen，Y.，et al.， J Mol Biol 293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过 IO6M-1S-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的 分光光度计(a stop-flow equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用经搅拌的比色杯的测量，在存在浓度渐 增的抗原的条件下，测量PBS，pH 7. 2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发 射强度(激发=295nm;发射=340nm，16nm带通(band pass))的升高或降低。
it M R _ W “^n -π“ (on-rate, rate ofassociation, association
rate)或“k。n”也可通过上文所述相同的表面等离振子共振技术使用BIACore -2000或 BIAcore -3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C使用固定化抗原 CM5 芯片在约 10 个响应单位(RU)来测定。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨 基丙基)_碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感 器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH 4. 8将抗原稀释至5 μ g/ml (约0· 2 μ Μ)， 然后以5 μ 1/分钟的流速注入以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注 入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25°C以约25 μ 1/分钟的流速注入 在含0. 05% Tween-20的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (0. 78nM至500nM)。使用简单一 对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3.2)通过同 时拟合结合和解离传感图计算结合速率(k。n)和解离速率(k。ff)。平衡解离常数(Kd)以比率 让。 /\11计算。参见例如0^11，￥.，6丨 al. ,J Mol Biol 293 :865_881 (1999)。然而，如果根据 上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率优选使用荧光淬灭技 术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Avivlnstruments)或8000系 列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用经搅拌的比色杯的测量，在存在浓度 渐增的抗原的条件下，测量PBS，pH 7.2中的20碰抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发 射强度(激发=295nm ；发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。在一个实施方案中，依照 本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下测定法所述使用Fab型式的抗体和抗原分子进行的放 射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下， 用最小浓度的125I标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量
35Fab 对抗原的溶液中的结合亲和力(Chen，et al.，J Mol Biol 293 :865_881 (1999))。为了 确定测定条件，用50mM碳酸钠(pH 9. 6)中的5 μ g/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包 被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用PBS中的2% (w/v)牛血清清蛋白在室温(约23°C)封 闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM[125I]_抗原与连续稀释的目 的 Fab 混合(与 Presta et al.，Cancer Res. 57 :4593_4599 (1997)中抗 VEGF 抗体，Fab-12 的评估一致)。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如65个小时)以 保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温1小时。然后除去溶液，并用 含0. 1 % Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ 1/孔闪烁液(MicroScint-20 ； Packard)，然后在Topcount伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab的给 出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd 值是通过表面等离振子共振测定法使用BIACOreTM-2000或BIACOreTM-3000 (BIAcore, Inc.， Piscataway, NJ)在25°C使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而 言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’ -(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC) 和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAc0re Inc.)。 用IOmM乙酸钠pH 4. 8将抗原稀释至5 μ g/ml (约0. 2 μ Μ)，然后以5 μ 1/分钟的流速注入 以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基 团。为了进行动力学测量，在25°C以约25 μ 1/分钟的流速注入在含0. 05% Tween-20的 PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (0. 78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir) 结合模型(BIAcoreEvaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图 计算结合速率(k。n)和解离速率(k。ff)。平衡解离常数(Kd)以比率k。ff/k。n计算。参见例如 Chen, Y. ,et al. ,J Mol Biol 293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定 法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如 配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度计 (ThermoSpectronic)中用经搅拌的比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量 PBS，pH 7.2中的20碰抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发= 295nm;发 射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。 在一个实施方案中，依照本发明的“结合速率”(on-rate，rate of association, association rate)或“k。n”是通过上文所述相同的表面等离振子共振技术使用 BIAcore -2000 或 BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.，Piscataway, NJ)在 25°C使用固定化抗 原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测定的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙 基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基 化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH 4. 8将抗原稀释至 5 μ g/ml (约0. 2 μ Μ)，然后以5 μ 1/分钟的流速注入以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋 白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25°C以约 25 μ 1/分钟的流速注入在含0. 05% Tween-20的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (0. 78nM 至 500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAcore Evaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(k。n)和解离速率(k。ff)。 平衡解离常数(Kd)以比率k。ff/k。n计算。参见例如Chen，Y.，et al.，J Mol Biol 293 865-881(1999)。然而，如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1JP
36么结合速率优选使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度 计(Aviv Instruments)或 8000 系列 SLM-Aminco 分光光度计(ThermoSpectronic)中用经 搅拌的比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量PBS，pH7. 2中的20nM抗抗原 抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发=295nm ；发射=340nm, 16nm带通)的升 高或降低。短语“实质性降低”或“实质性不同”在用于本文时表示两个数值(通常一个涉及 本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人 员将认为在用所述数值(例如Kd值、HAMA反应)所测量的生物学特性背景内两个数值之间 的差异具有统计学显著性。作为参照/比较抗体的数值的函数，所述两个数值之间的差异 优选大于约10 %，优选大于约20 %，优选大于约30 %，优选大于约40 %，优选大于约50 %。“抗原”是抗体可选择性结合的预定抗原。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、 脂质、半抗原或其它天然发生的或合成的化合物。优选的是，靶抗原是多肽。就本文目的而 言，“受体人框架”是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架之氨基酸 序列的框架。“衍生自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架包含与之相同的氨基 酸序列，或者可包含预先存在的氨基酸序列变化。当存在预先存在的氨基酸变化时，优选存 在不超过5个，优选4个或更少，或者3个或更少预先存在的氨基酸变化。当VH中存在预 先存在的氨基酸变化时，优选那些变化只位于71H、73H和78H中的三个、两个或一个位置； 例如，位于那些位置的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL受体 人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。本发明的抗体可能能够竞争对第二抗体所结合的相同表位的结合。若单克隆抗体 在标准体外抗体竞争结合分析中在相同抗体浓度阻断其它单克隆抗体的结合达40%或更 多，则认为各单克隆抗体共享“相同表位”。“人共有框架”是代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常见的氨基酸残基 的框架。通常，所述人免疫球蛋白VL或VH选集来自可变区序列亚型。通常，所述序列亚型 是如Kabat等人所述的亚型。在一个实施方案中，对于VL，所述亚型是如Kabat等人所述的 亚型κ I。在一个实施方案中，对于VH，所述亚型是如Kabat等人所述的亚型III。“VH亚型III共有框架”包含获自Kabat等人所述的可变重链亚型III中的氨基 酸序列的共有序列。"VL亚型I共有框架”包含获自Kabat等人所述的可变轻链κ亚型I中的氨基酸 序列的共有序列。“未修饰的人框架”是具有与受体人框架相同的氨基酸序列的人框架，例如在受体 人框架中没有人到非人的氨基酸替代。“改变的高变区”就本文目的而言是其中包含一个或多个(例如1个至约16个)
氨基酸替代的高变区。“未修饰的高变区”就本文目的而言是具有与衍生它的非人抗体相同的氨基酸序 列的高变区，即其中没有一个或多个氨基酸替代的高变区。术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变且 /或形成结构上确定的环的区域。通常，抗体包含6个高变区三个在VH中(Η1、Η2、Η3)， 三个在VL中(L1、L2、L3)。本文使用且包括许多高变区的叙述。Kabat互补决定区(OTR)是以序列可变性为基础的，而且是最常用的(Kabat et al.，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,MD. (1991))。Chothia 改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。“接触”高变区是以可获得复杂晶体结构的分析为基础的。下 文记录了这些高变区中每一个的残基。除非另有说明，将采用Kabat编号。高变区的位置 通常如下第24-34位氨基酸(HVR-Ll)、第49-56位氨基酸(HVR-L2)、第89-97位氨基酸 (HVR-L3)、第26-35A位氨基酸(HVR-Hl)、第49-65位氨基酸(HVR-H2)和第93-102位氨基 酸(HVR-H3)。高变区还可包括如下“延伸的高变区”:VL中的氨基酸24_36(L1)和氨基酸 46-56 (L2)。对于这些定义中的每一个，可变域残基是依照文献Kabat等人(见上文)所述 编号的。“框架”或“FR”残基是可变区中除了如本文所定义的高变区残基以外的那些残基。“人抗体”是具有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列且/或使用本 文所公开的用于制备人抗体的任何技术制备的抗体。人抗体的这种定义明确排除了包含非 人抗原结合残基的人源化抗体。“亲和力成熟的”抗体指在其一个或多个CDR中具有导致抗体对抗原的亲和力 与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的一处或多处改变的抗体。优选的亲和力成熟 的抗体将具有纳摩尔或甚至皮摩尔水平的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过 本领域已知流程生成。Marks et al.，Bio/Technology 10 :779_783 (1992)描述了经由 通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。下列文献描述了 CDR和/或框架残基的随机诱 ^ =Barbas et al. ，Proc.Nat. Acad. Sci. USA 91 3809-3813(1994) ；Schier et al. ，Gene 169 147-155(1995) ；Yelton et al.，J. Immunol. 155 1994-2004(1995) Jackson et al.， J. Immunol. 154(7) :3310_9 (1995)；及 Hawkins et al.，J. Mol. Biol. 226 :889_896 (1992)。“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗 体。优选的阻断性抗体或拮抗性抗体基本上抑制或完全抑制抗原的生物学活性。"TAT结合寡肽”指结合，优选特异性结合本文中所描述的TAT多肽的寡肽。TAT 结合寡肽可使用已知寡肽合成方法而化学合成，或者可使用重组技术来制备和纯化。TAT 结合寡肽的长度通常是至少约5个氨基酸，或者长度为至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、 40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、 65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、 90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个氨基酸或更多，其中能够结合，优选特异性结合 本文所述TAT多肽的此类TAT结合寡肽可使用众所周知的技术无需过多实验就得以鉴定。 在这点上，注意到用于对寡肽库筛选能够特异性结合多肽靶物的寡肽的技术是本领域众 所周知的(参见例如美国专利 5，556，762，5，750，373，4，708，871，4，833，092，5，223，409， 5，403，484，5，571，689，5，663，143 ;PCT
发明者保罗·波拉基斯, 威廉·马利特, 马克·丹尼斯 申请人:健泰科生物技术公司