专利名称：一种羊血红素肽及制备方法
技术领域：
本发明属于功能食品和食品添加剂领域，具体涉及一种羊血红素肽及其制备方法。
背景技术：
动物血液蛋白质组成平衡，含有人体所需的8种必需氨基酸，为优质蛋白源，具有 较高的生物效价，同时含有丰富的有机铁。但是目前动物血液，特别是羊血大部分被以污水 的形式排放或丢弃，导致大量宝贵营养资源流失，还给环境造成了严重污染。
血红素铁是高等动物血液、肌肉中的红色色素，它的基本结构成分是由吡咯组成 的卟吩(Porphin)，带上侧链后形成卟啉(Porphyrin)，再和一分子亚铁构成铁卟啉化合物 即为血红素铁。在血红蛋白及肌红蛋白中，血红素铁约占3.8%，全血中血红素铁含量为 0. 5%左右。血红素铁是动物血液深加工的一个重要产品之一。血红素的生产方法主要有 醋酸钠法(周淡宜等.药物生物技术，2002，9(2) :103-104 ;)、蒸馏法和羧甲基纤维素法。
专利申请《复合酶法水解猪血生产血肽素》(申请号为200910058656. 8)和《脱血 红素猪血血红蛋白酶解物及血红素肽的制备方法》(申请号为200710031826.4)公开了有 关猪血血肽素或血红素肽及其制备方法，但是到目前为止，还没有发现有关羊血红素肽的 报道，主要是由于羊血带有膻味，难以作为食品添加剂应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种无膻味的羊血红素肽。本发明羊血红素肽无不良风味，
可直接添加于食品；本发明血红素回收率高，血红素含量高。 本发明另一 目的是提供上述羊血红素肽的制备方法。 实现本发明的技术方案如下 本发明一种羊血红素肽，按照如下方法制备 (1)预处理按照O. 3 0. 5%的重量百分比向羊血中加入柠檬酸三钠，搅拌均匀， 然后在4000 6000g离心6 10min，分离为两层溶液，上层为羊血浆蛋白溶液，下层为羊 血红蛋白溶液，收集下层的羊血红蛋白溶液； (2)将所得羊血红蛋白溶液置于密闭容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到 0. 07 0. 09兆帕时，再加热到60 7(TC抽气3 5分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液；
(3)用水将步骤(2)所得的羊血红蛋白溶液稀释至浓度为15 20X，调节其pH为 6. 5 7. 5，按照复合蛋白酶与血红蛋白之间质量比为1 : 50 100的比例向羊血红蛋白 溶液中加入复合蛋白酶，然后在40 45°C、pH为6. 5 7. 5条件下进行水解反应4 7h， 再在85 90。C下保温2 4min灭酶，接着冷却至20°C ，在5000 6000g离心5 10min， 收集沉淀，得沉淀物； (4)用1 2倍重量的蒸馏水洗涤步骤(3)所得的沉淀物，再在4000g 5000g离 心5min 10min，取沉淀物；按上述操作重复洗涤沉淀物2 3次；冷冻干燥，得羊血红素肽。 上述羊血红素肽步骤(3)中所述的复合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成， 它们之间的酶活比例为1:1。 上述羊血红素肽步骤(1)中所述的羊血可以为新鲜羊血。 上述羊血红素肽步骤(3)中所述的pH值用1摩尔浓度的盐酸或氢氧化钠溶液调 节。 所述的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶皆可于市场购买。
上述羊血红素肽的制备方法，包括如下步骤 (1)预处理按照O. 3 0. 5%的重量百分比向羊血中加入柠檬酸三钠，搅拌均匀， 然后在4000 6000g离心6 10min，分离为两层溶液，上层为羊血浆蛋白溶液，下层为羊 血红蛋白溶液，收集下层的羊血红蛋白溶液； (2)将所得羊血红蛋白溶液置于密闭容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到 0. 07 0. 09兆帕时，再加热到60 7(TC抽气3 5分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液；
(3)用水将步骤(2)所得的羊血红蛋白溶液稀释至浓度为15 20X，调节pH为 6. 5 7. 5，按照复合蛋白酶与血红蛋白之间质量比为1 : 50 100的比例向羊血红蛋白 溶液中加入复合蛋白酶，然后在40 45°C、 pH6. 5 7. 5条件下进行水解反应4 7h，再 在85 90。C下保温2 4min灭酶，接着冷却至20°C ，在5000 6000g离心5 10min，收 集沉淀，得沉淀物； (4)用1 2倍重量的蒸馏水洗涤步骤(3)所得的沉淀物，再在4000g 5000g离 心5min 10min，取沉淀物；按上述操作重复洗涤沉淀物2 3次；冷冻干燥，得羊血红素 肽。 上述制备方法步骤(3)中所述的复合蛋白酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它 们之间的酶活比例为1:1。 上述制备方法步骤(1)中所述的羊血可以为新鲜羊血。 上述制备方法步骤(3)中所述的pH值用1摩尔浓度的盐酸或氢氧化钠溶液调节。 所述的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶皆可于市场上购买。 本发明羊血红素肽可作为功能食品或食品添加剂添加于食品中。 本发明具有的优点(1)、本发明羊血红素无膻味，采用真空抽气法，能脱除其中
95%的膻味，使其风味能被消费者所接受。(2)、本发明采用食品级蛋白酶(木瓜蛋白酶和
中性蛋白酶)经在温和条件下酶解制备血羊红素肽，其安全性高，无副作用。(3)、本发明羊
红素肽，吸收率高，食用后无不良反应。(4)本发明血红素回收率高，可达到95%以上，血红
素含量高，可达到28 32%。
(4)、本发明制备方法简便易行，成本低。
具体实施例方式
实施例1羊血红素肽的制备
按照如下方法进行 (1)、向500g羊血液中加入浓度为20%的柠檬酸三钠溶液10g，搅拌均匀，然后在 5000g离心6min，分离得到两层溶液，上层为羊血浆蛋白溶液，下层为羊血红蛋白溶液，收 集羊血红蛋白溶液(325g)。
(2)、将所得血红蛋白溶液置于密封容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到 0. 085兆帕时，再加热到65t:，抽气3分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液。
(3)、用水将步骤(2)所得羊血红蛋白溶液稀释至浓度为15X，调节pH为6.8，加 入复合蛋白酶(木瓜蛋白酶(广西南宁杰沃利生物制品有限公司生产)与中性蛋白酶(北 京东华强盛生物技术有限公司生产)按酶活l : 1的比例)0.8g，在42t:、pH为6.8条件下 进行水解反应5h，然后在9(TC下保温2分钟，冷却到2(TC，在5500g离心8min，收集沉淀， 得到沉淀物15g ; (4)、用15g蒸馏水洗涤步骤(3)所得沉淀物，在4500g离心9分钟，取沉淀物，重 复上述洗涤沉淀物操作3次，再将所得沉淀物冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展有限 公司)12小时，得羊血红素肽7g。 采用硫氰酸钾比色法测定血红素肽中铁的含量，结果血红素肽中铁的含量为 7. 2%。 实施例2羊血红素肽的制备 (1)、向1000g羊血液中加入浓度为20X的柠檬酸三钠溶液18g，搅拌均匀，然后在 5000g离心(TGL-16A离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司)7min，分离得到两层溶液，下层 为羊血红蛋白溶液(660g)，上层为羊血浆蛋白溶液，收集下层的羊血红蛋白溶液(660g)。
(2)、将所得羊血红蛋白溶液置于密闭容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到 0. 087兆帕时，再加热到64t:，抽气4分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液。
(3)、用水将步骤(2)所得羊血红蛋白溶液稀释至浓度为17X，调节pH为7.0，加 入复合蛋白酶(木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按酶活1 : 1的比例，来源同实施例1)1.3g，在 43°C 、 pH7. 0条件下进行水解反应5. 5h，然后在85。C下保温3分钟，冷却到20°C ，在6000g 离心8min，收集沉淀，得到沉淀物31g。 (4)、用40g蒸馏水洗涤步骤(3)所得的沉淀物，然后在5000g离心8分钟，取沉淀 物；重复上述洗涤沉淀物操作2次，最后将沉淀物冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展 有限公司)15小时，得血红素肽15g。 采用硫氰酸钾比色法测定血红素肽中铁的含量，结果血红素肽中铁的含量为 7. 1%。 实施例3羊血红素肽的制备
按照如下步骤进行 (1)、向2000g羊血液中加入浓度为20 %的柠檬酸三钠溶液37g，搅拌均匀，然后在 5000g离心(TGL-16A离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司)6min，分离得到两层溶液，下层 为羊血红蛋白溶液(1340g)，上层为羊血浆蛋白溶液(660g)，收集下层的羊血红蛋白溶液。
(2)、将羊血红蛋白溶液置于密闭容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到0. 084 兆帕时，再加热到65t:，抽气5分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液。 (3)、用水将步骤(2)所得的羊血红蛋白溶液稀释至浓度为18%，调节pH为6. 9， 加入复合蛋白酶(木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按酶活l : 1的比例)3.0g，在43t:、pH为6.9 条件下进行水解反应6h，然后在9(TC保温3分钟，冷却到20°C ，在6000g离心6min，收集沉 淀，得到沉淀物60g; (4)、用80g蒸馏水洗涤步骤(3)所得的沉淀物，在5000g离心8分钟，取沉淀物；重复上述洗涤沉淀物操作2次，将沉淀物冷冻干燥(FD-1PF，北京德天佑科技发展有限公 司)10小时，得血红素肽31g。 采用硫氰酸钾比色法测定血红素肽中铁的含量，结果血红素肽中铁的含量为 7. 3%。
权利要求
一种羊血红素肽，其特征在于按照如下方法制备(1)按照0.3～0.5％的重量百分比向羊血中加入柠檬酸三钠，搅拌均匀，然后在4000～6000g离心6～10min，分离为两层溶液，上层为羊血浆蛋白溶液，下层为羊血红蛋白溶液，收集下层的羊血红蛋白溶液；(2)将所得羊血红蛋白溶液置于密闭容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到0.07～0.09兆帕时，再加热到60～70℃抽气3～5分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液；(3)用水将步骤(2)所得的羊血红蛋白溶液的浓度调节为15～20％，调节其pH为6.5～7.5，按照复合蛋白酶与血红蛋白之间质量比为1∶50～100的比例向羊血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，然后在40～45℃、pH为6.5～7.5条件下进行水解反应4～7h，再在85～90℃下保温2～4min灭酶，接着冷却至20℃，在5000～6000g离心5～10min，收集沉淀，得沉淀物；(4)用1～2倍重量的蒸馏水洗涤步骤(3)所得的沉淀物，再在4000g～5000g离心5min～10min，取沉淀物；按上述操作重复洗涤沉淀物2～3次；冷冻干燥，得羊血红素肽。
2. 按照权利要求l所述的羊血红素肽，其特征在于其步骤(3)中所述的复合蛋白酶由 木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它们之间的酶活比例为1 : 1。
3. 按照权利要求1或2所述的羊血红素肽，其特征在于其步骤(1)中所述的羊血为新 鲜羊血。
4. 按照权利要求3所述的羊血红素肽，其特征在于其步骤(3)中所述的pH值用l摩尔 浓度的盐酸或氢氧化钠溶液调节。
5. 权利要求1所述的羊血红素肽的制备方法，包括如下步骤(1) 按照0. 3 0. 5%的重量百分比向羊血中加入柠檬酸三钠，搅拌均匀，然后在 4000 6000g离心6 10min，分离为两层溶液，上层为羊血浆蛋白溶液，下层为羊血红蛋 白溶液，收集下层的羊血红蛋白溶液；(2) 将所得羊血红蛋白溶液置于密闭容器中，然后用真空泵抽气，当真空度达到 0. 07 0. 09兆帕时，再加热到60 7(TC抽气3 5分钟，得到无膻味的羊血红蛋白溶液；(3) 用水将步骤(2)所得的羊血红蛋白溶液稀释至浓度为15 20X，调节pH为6. 5 7. 5，按照复合蛋白酶与血红蛋白之间质量比为1 : 50 100的比例向羊血红蛋白溶液中 加入复合蛋白酶，然后在40 45°C 、pH 6. 5 7. 5条件下进行水解反应4 7h，再在85 90。C下保温2 4min灭酶，接着冷却至20°C ，在5000 6000g离心5 10min，收集沉淀， 得沉淀物；(4) 用1 2倍重量的蒸馏水洗涤步骤(3)所得的沉淀物，再在4000g 5000g离心 5min 10min，取沉淀物；按上述操作重复洗涤沉淀物2 3次；冷冻干燥，得羊血红素肽。
6. 按照权利要求5所述的制备方法，其特征在于其步骤(3)中所述的复合蛋白酶由木 瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成，它们之间的酶活比例为1 : 1。
7. 按照权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于其步骤(1)中所述的羊血为新鲜 羊血。
8. 按照权利要求7所述的制备方法，其特征在于其步骤(3)中所述的pH值用l摩尔浓 度的盐酸或氢氧化钠溶液调节。
全文摘要
本发明公开了一种羊血红素肽及其制备方法，属于食品添加剂领域。主要是向羊血中加入柠檬酸三钠，然后离心，收集分离所得的羊血红蛋白溶液；再置于密闭容器中抽真空，去掉膻味；然后加入由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合蛋白酶进行酶解，离心，收集沉淀；再用蒸馏水洗涤沉淀物，离心取沉淀物，最后冷冻干燥即得羊血红素肽。本发明羊血红素肽无膻味，且安全性高，无副作用；本发明血红素回收率高，可达到95％以上，且血红素含量高，可达到28～32％；本发明制备方法简便易行，成本低。
文档编号A23J3/12GK101755997SQ20101000093
公开日2010年6月30日 申请日期2010年1月21日 优先权日2010年1月21日
发明者伏圣兴, 杨苏扬, 苏东明, 苏岩, 薛可 申请人:辽源市麒鸣生物技术综合开发有限公司