专利名称：一种微生物活化剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于园林绿化土壤的微生物活化剂及制作方法，在土壤中添加， 可显著降低土壤中氨的含量，消除土壤中的异味以及有害成分，达到提高土壤品质的作用。
背景技术：
近年来，由于人口的急剧增长和工业的迅猛发展，固体废物的倾倒和堆放量日益增多，有害废水不断向土壤中渗透，大气中的有害气体和漂浮的尘土也不断随雨水降落在土壤中，导致了土壤污染。土壤污染所造成的危害有以下几个方面第一，土壤污染导致严重的直接经济损失，对此目前尚缺乏系统的调查资料。仅以土壤重金属污染为例，我国每年因重金属污染而减产的粮食就有1000多万吨，被污染的粮食每年也多达1200万吨，合计经济损失至少200 亿元。第二，土壤污染导致食物品质不断下降。我国大多数城市所效土壤都受到了不同程度的污染，许多地方的粮食、蔬菜、水果等食物中的镉、铬、砷、铅等重金属含量超标和接近临界值。第三，土壤污染会使污染物在植物体中积累，并通过食物链富集到人体和动物体中， 危害人畜健康，引发多种疾病。另外，受到污染的土壤表土在风力和水力的作用下，进入到大气和水体中，导致大气污染和水体污染。
发明内容
本发明的目的是提供一种能有效分解土壤中的有害物质、抑制细菌、寄生虫卵的产生，同时减少土壤气味的一种微生物活化剂及其制备方法。为了实现以上目的，本发明提供了一种微生物活化剂，其特征在于，由细黄链霉菌 30 34重量份、地衣芽孢杆菌20 23重量份、植物乳杆菌23 沈重量份和干酪乳杆菌 17 27重量份混合培养而成。所述的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌经过选育和制种，具体方法为
第一步将细黄链霉菌接种到马铃薯培养基(PDA)中，在35°C培养48h，将地衣芽孢杆菌通过营养琼脂培养基传代培养，在37°C培养48h，观察菌种生长速度，将植物乳杆菌和干酪乳杆菌接种到乳酸细菌培养基(MRQ中，在30°C培养48h，分别将直径大于3ml的干酪乳杆菌落、直径大于3ml的植物乳杆菌落、直径大于2ml的细黄链霉菌落，直径大于5ml的地衣芽孢杆菌落的菌株在0°C 4°C温度加以保存；
第二步将第一步得到的细黄链霉菌株接种于马铃薯培养基(PDA)中，将地衣芽孢杆菌株接种在营养琼脂培养基中、植物乳杆菌株和干酪乳杆菌株分别接种在乳酸细菌培养基 (MRS)中，将四种菌株分别在转速为220转/分 250转/分的恒温摇床中在35°C 40°C 培养M小时 观小时，取样，利用平板计数法进行菌落总数测定，菌落总数大于30亿/ml 的菌种用于生产制种；
第三步将筛选出的地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和细黄链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35 40°C温度下培养45 50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时取出，得到用于后续培养的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌，然后放入2 6°C的冰箱中保存。本发明还提供了上述微生物活化剂的制备方法，其特征在于，将细黄链霉菌30 34重量份、地衣芽孢杆菌20 23重量份、植物乳杆菌23 沈重量份和干酪乳杆菌17 27重量份混合，将复合菌种进行液体高速培养、固体扩大培养后，将所得的固体培养物与载体混合，干燥粉碎得到微生物活化剂。所述的液体高速培养为将液体培养基在120 高温灭菌30 45min，将复合菌种按重量比1 :20 25的接种于上述液体培养基中，在发酵罐中搅拌25min 35 min, 其转速为200 220r/min，搅拌均勻后放入消毒后的塑料桶中静置5 7天，静置过程中每天测定PH值并释放产出的气体；发酵过程中抽样在显微镜下检测菌体生长情况和测定PH 值，当活菌总数达到30亿/ml浓度且pH值达到4. 5 5. 5时停止发酵。所述的液体培养基由糖蜜13 16重量份、酵母粉0.3 0.5重量份、硫酸镁 0. 4 0. 7重量份、硫酸铵0. 4 0. 8重量份、磷酸氢二钠0. 1 0. 3重量份、尿素0. 8 1 重量份、消泡剂1 1. 5重量份和无菌水79. 2 84重量份混合而成。所述的消泡剂可为道康宁公司生产的消泡剂1520US。所述的固体扩大培养为将固体扩大培养基在120°C 高温灭菌30min 45min，将液体高速培养得到的复合菌种按重量比1 :20 25接入上述固体扩大培养基中， 倒入消毒双层饲料袋中密封发酵，温度30 35°C，时间8 10天；发酵过程中取样测定水分和pH值，当水分重量含量为35% 40%且pH值为4. 5 5. 5时停止发酵。所述的植酸酶可为夏盛实业公司生产的SP500-027。
所述的固体扩大培养基由以下方法制得在无菌水19. 4 29. 12重量份中加入清糠 50 53重量份、豆粕粉10 12重量份、糖蜜8 10重量份、磷酸二氢钾0. 4 0. 7重量份、磷酸二氢钠1 2重量份、硫酸镁0. 4 0. 6重量份、尿素1 2重量份以及植酸酶(作为产物促进剂)0. 08 0. 1重量份中的至少四种，搅拌混合得到固体扩大培养基。所述的载体为斜发沸石粉，固体培养物与载体的混合重量比例为1 :0. 4 0. 5。所述的干燥粉碎为将固体培养物与载体的混合物放入培养箱干燥，温度控制在 40°C 45°C，时间14小时 16小时，干燥完成的物料水份重量含量< 12%，将干燥后的物料通过60 80目的震动筛，包装得到微生物活化剂成品。本发明采用可发酵分解土壤的多种有益微生物，通过专用培养基发酵，同时在发酵中添加特殊的吸附载体，可显著降解土壤有害有机物，降低氨气产生，同时分解后的土壤通过处理后可作为有机肥料重复利用，这是本发明的技术关键。本技术产品中含有多种有益细菌，对土壤具有明显的除臭作用。其除臭的主要机理为
1.动物摄入的大量有益微生物在胃肠道内形成了生态优势抑制了腐败菌的活动，促进营养物质的消化吸收，防止产生有害物质氨和胺，使粪便在动物的体内臭味有所减轻；
2.是摄入的有益微生物和撒在地面上的有益微生物在生长繁殖时能以氢、硫化氢等物质为营养，这样由腐败产生的氨被这些微生物吸收了一部分；
3.多效微生态制剂中的有些微生物(如真菌)有一定的固氮作用，从而减少了氨气在碱性条件下的挥发。乳酸菌制剂能够增强免疫力，表现在两方面
1.影响非特异性免疫应答，增强单核吞噬细胞(单核细胞和巨噬细胞)、多形核白细胞的活力，刺激活性氧、溶酶体酶和单核因子的分泌；
2.二是刺激特异性免疫应答，如加强粘膜表面和血清中IgA和IgM，IgG水平以加强体液免疫，促进T、B淋巴细胞的增殖，加强细胞免疫。Schiffrin等(1994)发现约氏乳杆菌(L. johnsonnii)Ljl和乳酸双歧杆菌(B. lactis)Bbl2能在体外增强吞噬细胞对大肠杆菌的吞噬作用；噬热链球菌与沙门氏菌一起使用可起到免疫佐剂的作用，显著提高血清中IgA的含量。吸附除臭是采用比表面大、孔容大的具有优异吸附能力的物质利用分子间的范德华吸附力将恶臭分子吸附于多孔性物质(吸附剂)中的除臭方法，常见的吸附物质有活性炭、活性炭纤维、各类沸石、某些金属氧化物和大孔高分子材料等。这些吸附剂的吸附能力和选择性一般都不相同。例如，活性炭对非极性分子。直径较大的恶臭物质如饱和化合物 (如苯、甲苯、硫醇等)的吸附力很强。与之不同，合成沸石有极性，对直径较小的恶臭物质和不饱和化合物(氨、硫化氢等)的吸附力较大。本产品选用的载体为斜发沸石粉，其介于两者之间，对土壤产生的甲烷、有机酸、各种醇类、氨、乙烯醇、硫化氢等多种气体有很好的吸附作用。本发明的具有以下优点
1.本发明中的细黄链霉菌能将土壤中的氨基中的氮转化成硝基中的氮，而硝基中的氮则被反硝化成尾气体，大大降低土壤的氨的含量；
2.本发明中的被摄入的有益微生物和撒在地面上的有益微生物在生长繁殖时能以氢、硫化氢等物质为营养，降低土壤中甲烷、有机酸、各种醇类、氨、乙烯醇、硫化氢等多种气体含量；
3.本发明采用的载体具有良好的吸附功能，可以减少土壤中甲烷、有机酸、各种醇类、 氨、乙烯醇、硫化氢等有害气体；
4.本发明中的乳酸菌能在除臭过程中，分解土壤中的未消化的有机物，能有效地保持土壤中N、P、K及有机质养分，因而有提高土壤品质的作用；
5.本发明发酵过程中采用液体高速培养和固体复合培养的方法，使各种菌种相互作用，其产品中有益活菌总数达到30亿/g，能充分保障作用园林所需的有益活菌数；
6.本发明用的培养基为粮食作物的副产品，成本低，取材广，便于在边远地区推广；
7.本发明采用的菌种为农业部658公告允许在饲料添加中添加的有益菌种，无其他化学物质添加，无抗生素和药物残留，安全可靠。
具体实施例方式以下实施例对本发明作进一步说明。实施例1
步骤1、取细黄链霉菌菌种QStr印tomyces niicrofIavus,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC40027)地衣芽孢杆菌菌种{Bacillus Iicheniformis,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC10146)，植物乳杆菌菌种(Lactobacillus plantarum,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC11118)，干酪乳杆菌菌种Oacio如cillus c<asei，中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC10640)，进行选育和制种将细黄链霉菌接种到马铃薯培养基中， 在35°C培养48h，将地衣芽孢杆菌通过营养琼脂培养基传代培养，在37°C培养48h，观察菌种生长速度，将植物乳杆菌和干酪乳杆菌接种到乳酸细菌培养基中，在30°C培养48h，分别将直径大于3ml的干酪乳杆菌落、直径大于3ml的植物乳杆菌落、直径大于2ml的细黄链霉菌落，直径大于5ml的地衣芽孢杆菌落的菌株在2°C温度加以保存；
将得到的细黄链霉菌株按重量比例5 95接种于马铃薯培养基中，将地衣芽孢杆菌株、 植物乳杆菌株和干酪乳杆菌株按照重量比10 :90分别接种在营养琼脂培养基中，将四种菌株分别在转速为220转/分的恒温摇床中在35°C培养M小时，取样，利用平板计数法进行菌落总数测定，菌落总数大于30亿/ml的菌种用于生产制种；
将筛选出的地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、细黄链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35°C温度下培养45小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时取出，得到用于后续培养的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌，然后放入2°C的冰箱中保存。上述营养琼脂培养基由牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂17g、水IOOOml配制而成、PH值为7. O 7. 2，121°C灭菌20min ；马铃薯培养基由马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂 17g和水IOOOml配制而成。MRS培养基为青岛海博生物技术有限公司生产的HB0384。步骤2、混合培养
步骤2. 1 将细黄链霉菌30重量份、地衣芽孢杆菌20重量份、植物乳杆菌23重量份和干酪乳杆菌27重量份混合得到复合菌种；
步骤2. 2 将液体培养基在120°C高温灭菌30min，将复合菌种按重量比1 :20的接种于上述液体培养基中，在发酵罐中搅拌25min，其转速为200r/min，搅拌均勻后放入消毒后的塑料桶中静置5天，静置过程中每天测定PH值并释放产出的气体；发酵过程中抽样在显微镜下检测菌体生长情况和测定PH值，当活菌总数达到30亿/ml浓度且pH值达到4. 5 时停止发酵。所述的液体培养基由糖蜜13重量份、酵母粉0. 3重量份、硫酸镁0. 4重量份、 硫酸铵0. 4重量份、磷酸氢二钠0. 1重量份、尿素0. 8重量份、消泡剂1重量份和无菌水84 重量份混合而成。所述的消泡剂为道康宁公司生产的消泡剂1520US。步骤2. 3 将固体扩大培养基在120°C 高温灭菌30min 45min，将液体高速培养得到的复合菌种按重量比1 :20 25接入上述固体扩大培养基中，倒入消毒双层饲料袋中密封发酵，温度30 35°C，时间8 10天；发酵过程中取样测定水分和pH值，当水分重量含量为35% 40%且pH值为4. 5 5. 5时停止发酵。所述的植酸酶为夏盛实业公司生产的SP500-027。所述的固体扩大培养基由以下方法制得在无菌水29. 12重量份中加入清糠50重量份、豆粕粉10重量份、糖蜜8重量份、磷酸二氢钾0. 4重量份、磷酸二氢钠 1重量份、硫酸镁0. 4重量份、尿素1重量份以及植酸酶(作为产物促进剂)0. 08重量份，搅拌混合得到固体扩大培养基。步骤2. 4 将步骤2. 3中得到的固体培养物与载体按照重量比例为1 :0. 4混合，在锥形搅拌机内混合15min，所述的载体为斜发沸石粉。步骤2. 5 将固体培养物与载体的混合物放入培养箱干燥，温度控制在40°C，时间 14小时，干燥完成的物料水份重量含量< 12%，将干燥后的物料通过60目的震动筛，将过筛后的物料装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数水份< 12%、活菌数> 30亿/g ；物理性状深黄色粉末状固体。将所得的产品用水稀释(稀释比例为Ikg产品加IOL水)，每亩土壤施加2. 5L微生物活化剂稀释液，M小时后，土壤无异味，除臭效果明显。实施例2
步骤1、取细黄链霉菌菌种QStr印tomyces niicrofIavus,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC40027)地衣芽孢杆菌菌种{Bacillus Iicheniformis,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC10146)，植物乳杆菌菌种(Lactobacillus plantarum,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC11118)，干酪乳杆菌菌种Oacio如cillus c<asei，中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC10640)，进行选育和制种将细黄链霉菌接种到马铃薯培养基中， 在35°C培养48h，将地衣芽孢杆菌通过营养琼脂培养基传代培养，在37°C培养48h，观察菌种生长速度，将植物乳杆菌和干酪乳杆菌接种到乳酸细菌培养基中，在30°C培养48h，分别将直径大于3ml的干酪乳杆菌落、直径大于3ml的植物乳杆菌落、直径大于2ml的细黄链霉菌落，直径大于5ml的地衣芽孢杆菌落的菌株在0°C温度加以保存；
将得到的细黄链霉菌株按重量比5 95接种于马铃薯培养基中，将地衣芽孢杆菌株、植物乳杆菌株和干酪乳杆菌株按重量比10 90分别接种在营养琼脂培养基中，将四种菌株分别在转速为250转/分的恒温摇床中在40°C培养观小时，取样，利用平板计数法进行菌落总数测定，菌落总数大于30亿/ml的菌种用于生产制种；
将筛选出的地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、细黄链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在40°C温度下培养50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时取出，得到用于后续培养的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌，然后放入6°C的冰箱中保存。上述营养琼脂培养基由牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂17g、水IOOOml配制而成、PH值为7. O 7. 2，121°C灭菌20min ；马铃薯培养基由马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂 17g和水IOOOml配制而成。MRS培养基为青岛海博生物技术有限公司生产的HB0384。步骤2、混合培养
步骤2. 1 将细黄链霉菌34重量份、地衣芽孢杆菌23重量份、植物乳杆菌沈重量份和干酪乳杆菌17重量份混合得到复合菌种；
步骤2. 2 将液体培养基在高温灭菌45min，将复合菌种按重量比1 :25的接种于上述液体培养基中，在发酵罐中搅拌35 min,其转速为220r/min，搅拌均勻后放入消毒后的塑料桶中静置7天，静置过程中每天测定PH值并释放产出的气体；发酵过程中抽样在显微镜下检测菌体生长情况和测定PH值，当活菌总数达到30亿/ml浓度且pH值达到5. 5 时停止发酵。所述的液体培养基由糖蜜16重量份、酵母粉0. 5重量份、硫酸镁0. 7重量份、 硫酸铵0. 8重量份、磷酸氢二钠0. 3重量份、尿素1重量份、消泡剂1. 5重量份和无菌水79. 4 重量份混合而成。所述的消泡剂为道康宁公司生产的消泡剂1520US。步骤2. 3 将固体扩大培养基在高温灭菌45min，将液体高速培养得到的复合菌种按重量比1 :25接入上述固体扩大培养基中，倒入消毒双层饲料袋中密封发酵，温度 350C，时间10天；发酵过程中取样测定水分和pH值，当水分重量含量为40%且pH值为5. 5 时停止发酵。所述的植酸酶为夏盛实业公司生产的SP500-027。所述的固体扩大培养基由以下方法制得在无菌水19. 4重量份中加入清糠53重量份、豆粕粉12重量份、糖蜜10重量份、磷酸二氢钾0. 7重量份、磷酸二氢钠2重量份、硫酸镁0. 6重量份、尿素2重量份以及植酸酶(作为产物促进剂)0. 1重量份，搅拌混合得到固体扩大培养基。步骤2. 4 将步骤2. 3中得到的固体培养物与载体按照重量比例为1 :0. 5混合，在锥形搅拌机内混合15min，所述的载体为斜发沸石粉。步骤2. 5 将固体培养物与载体的混合物放入培养箱干燥，温度控制在45°C，时间 16小时，干燥完成的物料水份重量含量< 12%，将干燥后的物料通过80目的震动筛，将过筛后的物料装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数水份< 12%、活菌数> 30亿/g ；物理性状深黄色粉末状固体。将所得的产品用水稀释(稀释比例为Ikg产品加IOL水)，每亩土壤施加2. 5L微生物活化剂稀释液，M小时后，土壤无异味，除臭效果明显。实施例3
步骤1、取细黄链霉菌菌种QStr印tomyces niicrofIavus,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC40027)地衣芽孢杆菌菌种{Bacillus Iicheniformis,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC10146)，植物乳杆菌菌种(Lactobacillus plantarum,中国农业微生物菌种保藏管理中心，ACCC11118)，干酪乳杆菌菌种Oacio如cillus c<asei，中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC10640)，进行选育和制种将细黄链霉菌接种到马铃薯培养基中， 在35°C培养48h，将地衣芽孢杆菌通过营养琼脂培养基传代培养，在37°C培养48h，观察菌种生长速度，将植物乳杆菌和干酪乳杆菌接种到乳酸细菌培养基中，在30°C培养48h，分别将直径大于3ml的干酪乳杆菌落、直径大于3ml的植物乳杆菌落、直径大于2ml的细黄链霉菌落，直径大于5ml的地衣芽孢杆菌落的菌株在4°C温度加以保存；
将得到的细黄链霉菌株按重量比5 95接种于马铃薯培养基中，将地衣芽孢杆菌株、植物乳杆菌株和干酪乳杆菌株按重量比10 :90分别接种在营养琼脂培养基中，将四种菌株分别在转速为230转/分的恒温摇床中在37°C培养36小时，取样，利用平板计数法进行菌落总数测定，菌落总数大于30亿/ml的菌种用于生产制种；
将筛选出的地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、细黄链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在37°C温度下培养47小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时取出，得到用于后续培养的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌，然后放入4°C的冰箱中保存。上述营养琼脂培养基由牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂17g、水IOOOml配制而成、PH值为7. 0 7. 2，121°C灭菌20min ；马铃薯培养基由马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂 17g和水IOOOml配制而成。MRS培养基为青岛海博生物技术有限公司生产的HB0384。步骤2、混合培养
步骤2. 1 将细黄链霉菌33重量份、地衣芽孢杆菌22重量份、植物乳杆菌M重量份和干酪乳杆菌21重量份混合得到复合菌种；
步骤2. 2 将液体培养基在高温灭菌35min，将复合菌种按重量比1 :22的接种于上述液体培养基中，在发酵罐中搅拌30min，其转速为210r/min，搅拌均勻后放入消毒后的塑料桶中静置6天，静置过程中每天测定PH值并释放产出的气体；发酵过程中抽样在显微镜下检测菌体生长情况和测定PH值，当活菌总数达到30亿/ml浓度且pH值达到5时
9停止发酵。所述的液体培养基由糖蜜14重量份、酵母粉0. 4重量份、硫酸镁0. 6重量份、硫酸铵0. 6重量份、磷酸氢二钠0. 2重量份、尿素0. 9重量份、消泡剂1. 2重量份和无菌水80 重量份混合而成。所述的消泡剂为道康宁公司生产的消泡剂1520US。步骤2. 3 将固体扩大培养基在高温灭菌40min，将液体高速培养得到的复合菌种按重量比1 :22接入上述固体扩大培养基中，倒入消毒双层饲料袋中密封发酵，温度 320C，时间9天；发酵过程中取样测定水分和pH值，当水分重量含量为37%且pH值为5时停止发酵。所述的植酸酶为夏盛实业公司生产的SP500-027。所述的固体扩大培养基由以下方法制得在无菌水24. 01重量份中加入清糠52重量份、豆粕粉11重量份、糖蜜9重量份、磷酸二氢钾0. 4重量份、磷酸二氢钠1. 5重量份、硫酸镁0. 5重量份、尿素1. 5重量份以及植酸酶(作为产物促进剂)0. 09重量份，搅拌混合得到固体扩大培养基。步骤2. 4 将步骤2. 3中得到的固体培养物与载体按照重量比例为1 :0. 45混合， 在锥形搅拌机内混合15min，所述的载体为斜发沸石粉。步骤2. 5 将固体培养物与载体的混合物放入培养箱干燥，温度控制在41°C，时间 15小时，干燥完成的物料水份重量含量< 12%，将干燥后的物料通过70目的震动筛，将过筛后的物料装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数水份< 12%、活菌数> 30亿/g ；物理性状深黄色粉末状固体。将所得的产品用水稀释(稀释比例为Ikg产品加IOL水)，每亩土壤施加2. 5L微生物活化剂稀释液，M小时后，土壤无异味，除臭效果明显。
权利要求
1.一种微生物活化剂，其特征在于，由细黄链霉菌30 34重量份、地衣芽孢杆菌 20 23重量份、植物乳杆菌23 沈重量份和干酪乳杆菌17 27重量份混合培养而成。
2.如权利要求1所述的微生物活化剂，其特征在于，所述的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌经过选育和制种，具体方法为第一步将细黄链霉菌接种到马铃薯培养基中，在35°C培养48h，将地衣芽孢杆菌通过营养琼脂培养基传代培养，在37°C培养48h，观察菌种生长速度，将植物乳杆菌和干酪乳杆菌接种到乳酸细菌培养基中，在30°C培养48h，分别将直径大于3ml的干酪乳杆菌落、直径大于3ml的植物乳杆菌落、直径大于2ml的细黄链霉菌落，直径大于5ml的地衣芽孢杆菌落的菌株在0°C 4°C温度加以保存；第二步将第一步得到的细黄链霉菌株接种于马铃薯培养基中，将地衣芽孢杆菌株接种在营养琼脂培养基中、植物乳杆菌株和干酪乳杆菌株分别接种在乳酸细菌培养基中，将四种菌株分别在转速为220转/分 250转/分的恒温摇床中在35°C 40°C培养M小时 洲小时，取样，利用平板计数法进行菌落总数测定，菌落总数大于30亿/ml的菌种用于生产制种；第三步将筛选出的地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和细黄链霉菌分别转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35 40°C温度下培养45 50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时取出，得到用于后续培养的细黄链霉菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌和干酪乳杆菌，然后放入2 6°C的冰箱中保存。
3.权利要求1所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，将细黄链霉菌30 34重量份、地衣芽孢杆菌20 23重量份、植物乳杆菌23 沈重量份和干酪乳杆菌17 27 重量份混合，将复合菌种进行液体高速培养、固体扩大培养后，将所得的固体培养物与载体混合，干燥粉碎得到微生物活化剂。
4.如权利要求2所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，所述的液体高速培养为将液体培养基在120 高温灭菌30 45min，将复合菌种按重量比1 :20 25的接种于上述液体培养基中，在发酵罐中搅拌25min 35 min,其转速为200 220r/min，搅拌均勻后放入消毒后的塑料桶中静置5 7天，静置过程中每天测定pH值并释放产出的气体；发酵过程中抽样在显微镜下检测菌体生长情况和测定PH值，当活菌总数达到30亿/ml 浓度且PH值达到4. 5 5. 5时停止发酵。
5.如权利要求3所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，所述的液体培养基由糖蜜13 16重量份、酵母粉0. 3 0. 5重量份、硫酸镁0. 4 0. 7重量份、硫酸铵0. 4 0. 8重量份、磷酸氢二钠0. 1 0. 3重量份、尿素0. 8 1重量份、消泡剂1 1. 5重量份和无菌水79. 2 84重量份混合而成。
6.如权利要求2所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，所述的固体扩大培养为将固体扩大培养基在120°C 高温灭菌30min 45min，将液体高速培养得到的复合菌种按重量比1 :20 25接入上述固体扩大培养基中，倒入消毒双层饲料袋中密封发酵，温度30 35°C，时间8 10天；发酵过程中取样测定水分和pH值，当水分重量含量为 35% 40%且pH值为4. 5 5. 5时停止发酵。
7.如权利要求5所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，所述的固体扩大培养基由以下方法制得在无菌水19. 4 29. 12重量份中加入清糠50 53重量份、豆粕粉10 12重量份、糖蜜8 10重量份、磷酸二氢钾0. 4 0. 7重量份、磷酸二氢钠1 2重量份、硫酸镁0. 4 0. 6重量份、尿素1 2重量份以及植酸酶0. 08 0. 1重量份中的至少四种，搅拌混合得到固体扩大培养基。
8.如权利要求3所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，所述的载体为斜发沸石粉，固体培养物与载体的混合重量比例为1 :0. 4 0. 5。
9.如权利要求3所述的微生物活化剂的制备方法，其特征在于，所述的干燥粉碎为将固体培养物与载体的混合物放入培养箱干燥，温度控制在40°C 45°C，时间14小时 16 小时，干燥完成的物料水份重量含量< 12%，将干燥后的物料通过60 80目的震动筛，包装得到微生物活化剂成品。
全文摘要
本发明提供了一种微生物活化剂及其制备方法，所述的微生物活化剂，其特征在于，由经过选育和制种的细黄链霉菌30～34重量份、地衣芽孢杆菌20～23重量份、植物乳杆菌23～26重量份和干酪乳杆菌17～27重量份混合培养而成。所述的制备方法，其特征在于，将细黄链霉菌30～34重量份、地衣芽孢杆菌20～23重量份、植物乳杆菌23～26重量份和干酪乳杆菌17～27重量份混合，将复合菌种进行液体高速培养、固体扩大培养后，将所得的固体培养物与载体混合，干燥粉碎得到微生物活化剂。本发明能降低禽舍粪便中的有害气体的含量，除臭功能高，提高禽舍垫料的品质。
文档编号C12R1/245GK102174405SQ201110056188
公开日2011年9月7日 申请日期2011年3月9日 优先权日2011年3月9日
发明者江瀚, 马正驰 申请人:上海创博生态工程有限公司