专利名称：一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种医疗器械，具体的说，本发明涉及一种用于对细胞冷冻、复苏以及输液用的容器。
背景技术：
随着生物学技术的发展，细胞治疗正在全世界范围内快速发展和日益被人们所接受。细胞治疗的根本是活细胞的获取和储存。此外，细胞的体外培养也已经被广泛应用到各种生物学研究领域。在体外细胞培养工作中，为了保存细胞，并使其长期具有生物活性， 细胞的冻存与复苏成为至关重要的环节。而对于细胞的制备和储存，尤其是干细胞的低温储存、复苏的条件和防止操作过程的污染，是目前细胞治疗临床应用的重要课题。许多国家和地区建立了各种细胞库，最优化细胞冻存复苏程序和防止污染已经成为细胞生产和保障细胞质量的前提。细胞冻存与复苏的基本原则是“慢冻速溶”，这样可以最大限度地保持细胞活性。 细胞冻存过程中，降温的速度，直接关系到冻存效果，在特定控制的速度和条件下的“缓慢冰冻”是保护细胞使之不发生严重损伤的关键因素。作为冻存细胞的方法，已知是添加二甲亚砜等的冻害保护剂在-80至_196°C左右的超低温下保存。如此低的温度保存需要在极低温度下也可使用、进而可杀菌处理、使用简便的冷冻袋。作为冻存细胞的复苏方法，已知是将冻存的细胞溶液从液氮到37°C水浴加热后期，再将细胞液体从袋中倒出，移入另一个容器(例如离心管)进行离心，然后，再加入液体、再次离心；然后在注入输液袋或注射器中供患者使用。目前临床中广泛使用的在液氮中储存细胞的材料是得到美国FDA批准和中国药监部门许可的德国美天尼公司(Miltenyi Biotec)的细胞储存袋；然而使用该细胞储存袋由于在冻存、复苏离心各阶段需要应用不同的容器，导致暴露于空气的次数增多，增加了细胞产品被污染的机会。另外，在临床医生使用时，还需要再将细胞抽吸于不同的容器中，抽吸的过程既可能被污染，又可能破坏部分细胞。本发明的发明人针对现有技术中存在的诸如复苏率低、操作过程不统一以及上述的冻存细胞容易受到污染以及破坏的技术问题，通过对细胞冻存后复苏时的全部过程的仔细研究，设计一种新型的细胞冷冻以及复苏的容器。
发明内容
解决现有技术中所存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器。本发明的细胞冷冻以及复苏的容器实现了一袋多用的功效，既方便了细胞制备过程也方便了临床使用，更重要的是大大减少了细胞接触空气和被污染的机会，有利于细胞的质量控制和产品的纯度。为了实现上述目的，本发明的第一方面涉及一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，包括冻存袋，空置状态下具有椭圆形的底部和长方形的上部，其特征在于，冻存袋的椭圆形底部具有加厚层，并且所述冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述细胞输入管道以及清洗液进入管道的终端连接有Luer螺栓。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述的冻存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)、乙烯-甲基丙烯酸酯或直链状低密度聚乙烯制成；优选地，所述的冻存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述的加厚层由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)、乙烯-甲基丙烯酸酯或直链状低密度聚乙烯制成；优选地，所述的加厚层由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直链状低密度聚乙烯制成；优选地，所述的加厚层由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述冻存袋的厚度为 100-500 μ m ;优选地，所述冻存袋的厚度为150-350 μ m。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述加厚层的厚度为所述冻存袋厚度的1/3-1/2。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述加厚层可以采用热熔粘法进行。例如，可以采用热辊在冻存袋的一面或两面上加热熔融上述树脂的同时并挤出并加压而形成加厚层。热辊的温度优选为150-250°C。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述冻存袋还具有标签袋，用于插入样本信息的标签，以确保样品的正确管理。优选地，所述标签袋位于所述冻存袋的下部。在所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器中，所述灌洗和输出通道采用保护帽封闭；该保护帽为可以扭开的密封结构。保护帽的中间为耐冷橡胶，外加金属圈保护。保护帽打开后，冻存袋可以与灌洗液装置连接，细胞清洗完毕后，加入细胞终悬液，盖回保护帽。应用前，打开金属圈，如同输液装置，医生用针插入橡胶层，即可以得到细胞悬液。本发明的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，复苏后的离心步骤中可以兼用作离心袋，当其中盛有细胞悬浮液时，离心状态下会自然鼓起形成一个类圆锥体，细胞会随着离心力自然沉降在底部，清洗时，只需把离心后的上清液倒出，清洗数次后，直接加入欲给患者输入的液体以悬浮细胞，因此冷冻袋又成为直接可供临床使用的输液袋。本发明的第二方面，还涉及一种冻存细胞的复苏方法，其采用本发明的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，将从液氮中取出的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器置于 37°C恒温水浴溶解，并直接进行离心分离。优选地，所述离心过程在500-1000转/分钟的条件下进行。本发明具有以下有益的技术效果现有的已经获得批准在临床使用的产品，是单纯的冷冻袋。功能只是完成细胞的冷冻和储存过程。复苏后就必须剪开和倒出细胞，然后弃置。细胞在清洗和使用前需要换数次液体及相应的容器，极大地增加了细胞被丢失、破坏和污染的几率。本发明的容器综合了全部的细胞冷冻、复苏和使用的过程，弥补了原有产品的不足，从设计理念上和便利使用的角度，完善了细胞临床治疗前的处理过程，使细胞质量得到保障，科学合理、经济适用，从而极大地保障了细胞治疗的临床效果。
图I :本发明一个实施例的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器空置状态的示意图。图2 :本发明一个实施例的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器盛有细胞悬液状态下的示意图。图中附图标记所代表的含义分别为100-冻存袋；10-长方形的上部；20_椭圆形的底部；30_加厚层；40_细胞输入管道；50_清洗液进入管道；60_灌洗和输出通道; 70-Luer螺栓；80_标签；90_输液挂孔。
具体实施例方式下面将结合附图和具体的实施例对本发明的技术方案进行详细描述，但附图以及具体实施例不作为对本发明专利的限定。实施例I如图I所示，本实施例涉及一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，包括冻存袋，空置状态下具有椭圆形的底部和长方形的上部，冻存袋的厚度为250 μ m,冻存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成；所述冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道。细胞输入管道以及清洗液进入管道的终端连接有Luer螺栓；冻存袋的椭圆形底部具有加厚层，加厚层的厚度为100 μ m，加厚层同样由EVA制成；冻存袋还具有标签袋和输液挂孔；冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道，该端口用于与灌洗液装置连接， 所述灌洗和输出通道采用保护帽封闭；该保护帽为可以扭开的密封结构。保护帽的中间为耐冷橡胶，外加金属圈保护。保护帽打开后，冻存袋可以与灌洗液装置连接，细胞清洗完毕后，加入细胞终悬液，盖回保护帽。应用前，打开金属圈，如同输液装置，医生用针插入橡胶层，即可以得到细胞悬液。当盛有细胞悬液的时候，本实施例的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器如附图 2所示，其在复苏后的离心步骤中可以兼用作离心袋，其底部成为一个离心容器，细胞被离心至底部,清洗时,只需把离心后的上清液倒出，清洗数次后,直接加入欲给患者输入的液体以悬浮细胞，因此冷冻袋又成为直接可供临床使用的输液袋。实施例2本实施例涉及一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，包括冻存袋，空置状态下具有椭圆形的底部和长方形的上部，冻存袋的厚度为300 μ m,冻存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成；所述冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道。细胞输入管道以及清洗液进入管道的终端连接有Luer螺栓；加厚层的厚度为 150 μ m，加厚层由乙烯-甲基丙烯酸酯制成；冻存袋还具有标签袋和输液挂孔；冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道，该端口用于与灌洗液装置连接，所述灌洗和输出通道采用保护帽封闭；该保护帽为可以扭开的密封结构。保护帽的中间为耐冷橡胶，外加金属圈保护。 保护帽打开后，冻存袋与灌洗液装置连接，细胞清洗完毕后，加入细胞终悬液，盖回保护帽。 应用前，打开金属圈，如同输液装置，医生用针插入橡胶层，即可以得到细胞悬液。本实施例的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，在复苏后的离心步骤中可以兼用作离心袋，其底部成为一个离心容器，细胞被离心至底部，清洗时，只需把离心后的上清液倒出，清洗数次后，直接加入欲给患者输入的液体以悬浮细胞，因此冷冻袋又成为直接可供临床使用的输液袋。实施例3本实施例涉及一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，包括冻存袋，空置状态下具有椭圆形的底部和长方形的上部，冻存袋的厚度为300 μ m,冻存袋由乙烯-醋酸乙烯酯(EVA)制成；所述冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道。细胞输入管道以及清洗液进入管道的终端连接有Luer螺栓；加厚层的厚度为 150 μ m，加厚层由乙烯-甲基丙烯酸酯制成；冻存袋还具有标签袋和输液挂孔；冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道，该端口用于与灌洗液装置连接，所述灌洗和输出通道采用保护帽封闭；该保护帽为可以扭开的密封结构。保护帽的中间为耐冷橡胶，外加金属圈保护。 保护帽打开后，冻存袋与灌洗液装置连接，细胞清洗完毕后，加入细胞终悬液，盖回保护帽。 应用前，打开金属圈，如同输液装置，医生用针插入橡胶层，即可以得到细胞悬液。本实施例的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，在复苏后的离心步骤中可以兼用作离心袋，其底部成为一个离心容器，细胞被离心至底部，清洗时，只需把离心后的上清液倒出，清洗数次后，直接加入欲给患者输入的液体以悬浮细胞，因此冷冻袋又成为直接可供临床使用的输液袋。以上所述，仅为本发明的优选实施例，不能解释为以此限定本发明的范围，凡在本发明的权利要求书要求保护的范围内所做出的等同的变形和改变的实施方式均在本发明所要求保护的范围内。
权利要求
1.一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，包括冻存袋，空置状态下具有椭圆形的底部和长方形的上部，其特征在于，冻存袋的椭圆形底部具有加厚层，并且所述冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道。
2.根据权利要求I所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述的冻存袋由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直链状低密度聚乙烯制成。
3.根据权利要求2所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述的加厚层由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直链状低密度聚乙烯制成。
4.根据权利要求1-3任一项所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道由乙烯-醋酸乙烯酯、乙烯-甲基丙烯酸酯或直链状低密度聚乙烯制成。
5.根据权利要求1-3任一项所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述细胞输入管道以及清洗液进入管道的终端连接有Luer螺栓。
6.根据权利要求3任一项所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述冻存袋的厚度为100-500 μ m。
7.根据权利要求5所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述加厚层的厚度为所述冻存袋厚度的1/3-1/2。
8.根据权利要求1-3任一项所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述灌洗和输出通道采用保护帽封闭；该保护帽为可以扭开的密封结构，保护帽的中间为耐冷橡胶，外加金属圈保护。
9.根据权利要求1-3任一项所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，其特征在于所述冻存袋还具有标签和输液挂孔。
10.一种冻存细胞的复苏方法，其特征在于采用多用权利要求1-9任一项所述的多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器对细胞进行冷冻和复苏，复苏时将所述多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器从液氮中取出、置于37°C恒温水浴溶解，并直接进行离心分离。
11.权利要求10所述的冻存细胞的复苏方法，其特征在于所述离心过程在500-1000转 /分钟的条件下进行。
全文摘要
本发明涉及一种多用途细胞冷冻以及冻存后复苏容器，包括冻存袋，空置状态下具有椭圆形的底部和长方形的上部，其特征在于，冻存袋的椭圆形底部具有加厚层，并且所述冻存袋的袋口还连接有灌洗和输出通道、细胞输入管道以及清洗液进入管道。本发明的细胞冷冻以及复苏的容器实现了一袋多用的功效，既方便了细胞制备过程也方便了临床使用，更重要的是大大减少了细胞接触空气和被污染的机会，有利于细胞的质量控制和产品的纯度。
文档编号C12M3/00GK102586104SQ20111043621
公开日2012年7月18日 申请日期2011年12月23日 优先权日2011年12月23日
发明者胡敏 申请人:北京瑞建天行生物技术有限公司