专利名称：血清miRNA-483-5p的定量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种血清的检测方法，尤其是涉及一种血清miRNA-483-5p的定量检测方法。
背景技术：
中国专利CN101793882A公开一种人血清中肿瘤标记物Bicr6蛋白的质谱筛选方法，其具体步骤为取人血清，用磁珠吸附后洗脱得到磁珠富集液；将磁珠富集液加入基质溶液，按以下条件进行基质辅助激光解离电离飞行时间质谱检测第一离子源电压20kV ； 第二离子源电压18. 6kV ；晶体电压7. 6kV ；脉冲离子时间:320ns ；极性正；矩阵抑制模式门控；门控强度最大；抑制高限600Da ；检测器1.4 1.5kV ；样本率1.00Gs/S ；电子获取增强，IOOmV ；实时流畅高；激光频率20Hz ；激光衰减关73%，范围20%;质荷比为4964士 1处的峰为Bicr6蛋白。该发明具有时间短、灵敏度高等特点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血清miRNA-483_5p的定量检测方法。本发明包括以下步骤1)取待检测血清与裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA ；2)取纯化miRNA在MMLV酶催化下应用特定引物将miRNA变为cDNA，然后将 cDNA在EXtaq酶催化下应用miRNA-483_5p的PCR引物和探针进行定量PCR检测，条件为 950C IOmin后进行40循环95°C 10s，60°C 10s，70°C 10s，每循环在70°C时检测FAM荧光值， 完成循环后分析数据与标准品比较得出定量值；所述miRNA-483-5p的PCR引物和探针如表 1所示。表 权利要求
1.血清miRNA-483-5p的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤[1)取待检测血清与裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA；[2)取纯化miRNA在MMLV酶催化下应用特定引物将miRNA变为cDNA，然后将cDNA在 EXtaq酶催化下应用miRNA-483-5p的PCR引物和探针进行定量PCR检测，条件为95°C IOmin 后进行40循环95°C 10s,60°C 10s,70°C 10s，每循环在70°C时检测FAM荧光值，完成循环后分析数据与标准品比较得出定量值；所述miRNA-483-5p的PCR引物和探针如下表
2.如权利要求1所述的血清miRNA-483-5p的定量检测方法，其特征在于在步骤1)中， 所述待检测血清为400 μ 1。
3.如权利要求1所述的血清miRNA-483-5p的定量检测方法，其特征在于在步骤1)中， 所述裂解液的用量与待检测血清同体积。
4.如权利要求1所述的血清miRNA-483-5p的定量检测方法，其特征在于在步骤2)中， 所述进行定量PCR检测采用ABI7300定量PCR仪。
全文摘要
血清miRNA-483-5p的定量检测方法，涉及一种血清的检测方法。取待检测血清与裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA；取纯化miRNA在MMLV酶催化下应用特定引物将miRNA变为cDNA，然后将cDNA在EXtaq酶催化下应用miRNA-483-5p的PCR引物和探针进行定量PCR检测，每循环在70℃时检测FAM荧光值，完成循环后分析数据与标准品比较得出定量值。系统完整地验证了从引物、探针设计、各种催化酶的使用到外参定量方法，解决了血清中内参不稳定导致定量不准确的弊端，有望将此发明应用于临床，并对今后血清中miRNA作为各种疾病的生物标记这一热门研究起到引导作用。
文档编号C12Q1/68GK102424858SQ201110458588
公开日2012年4月25日 申请日期2011年12月31日 优先权日2011年12月31日
发明者刘平果, 张舟径, 王效民 申请人:厦门大学附属中山医院