专利名称：糖链的非还原末端为甘露糖残基的糖蛋白的制造方法
技术领域：
本发明涉及使用哺乳动物细胞的糖链的非还原末端为甘露糖残基的糖蛋白的制造方法。
背景技术：
哺乳动物细胞中，糖蛋白的N-糖苷键糖链在自RNA翻译出蛋白质并经内质网内腔运送至高尔基体的过程中经由各种酶参与的复杂路径被附加于蛋白质的天冬酰胺残基。N-糖苷键糖链的主体为复合型糖链和高甘露糖型糖链。高甘露糖型糖链大体具有以下述结构式I表示的结构。此外，复合型糖链有各种类型，其特征是非还原末端为唾液酸残基。其一例以下述结构式2表示。此外，复合型糖链和高甘露糖型糖链共通的以下述结构式3表示的区域称为核心区域。[化I]
权利要求
1.转化哺乳动物细胞，其特征在于，导入有外源的β-Ν-乙酰葡糖胺酶基因并表达。
2.如权利要求1的转化哺乳动物细胞，其特征在于，通过导入该β-N-乙酰葡糖胺酶基因而表达的β-N-乙酰葡糖胺酶在高尔基体中显示其活性。
3.如权利要求1或2的转化哺乳动物细胞，其特征在于，该β-N-乙酰葡糖胺酶基因来源于昆虫。
4.如权利要求3的转化哺乳动物细胞，其特征在于，该昆虫是属于鳞翅目的昆虫。
5.如权利要求4的转化哺乳动物细胞，其特征在于，属于鳞翅目的该昆虫为草地夜蛾或蚕蛾。
6.如权利要求5的转化哺乳动物细胞，其特征在于，该β-N-乙酰葡糖胺酶基因为选自β -N-乙酰葡糖胺酶I基因、β -N-乙酰葡糖胺酶3基因、SfFDL基因和BmFDL基因的I种或2种以上。
7.如权利要求1 6中 的任一项的转化哺乳动物细胞，其特征在于，进一步导入编码规定的糖蛋白的外源基因并表达，从而产生该规定的糖蛋白。
8.如权利要求7的转化哺乳动物细胞，其特征在于，编码该规定的糖蛋白的外源基因为来源于人的基因。
9.如权利要求8的转化哺乳动物细胞，其特征在于，来源于人的该基因为编码溶酶体酶的基因。
10.如权利要求9的转化哺乳动物细胞，其特征在于，该溶酶体酶为选自葡糖脑苷脂酶、酸性神经鞘磷脂酶、溶酶体酸性脂肪酶、酸性α -葡糖苷酶、N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、C1-L-艾杜糖醛酸酶、α-半乳糖苷酶Α、己糖胺酶、α-N-乙酰半乳糖胺酶和α -甘露糖苷酶、唾液酸酶的酶。
11.如权利要求9的转化哺乳动物细胞，其特征在于，该溶酶体酶为葡糖脑苷脂酶。
12.位于N-糖苷键糖链的非还原末端的残基全部或一部分为甘露糖残基的糖蛋白的制造方法，其特征在于，包括: (a)将权利要求1 6中的任一项的哺乳动物细胞在培养液中培养，使其表达糖蛋白的步骤；以及 (b)对通过上述步骤(a)表达的糖蛋白进行纯化的步骤。
13.如权利要求12的制造方法，其特征在于，使用权利要求7的哺乳动物细胞代替权利要求I 6中的任一项的哺乳动物细胞。
14.如权利要求13的制造方法，其特征在于，编码该糖蛋白的外源基因为来源于人的基因。
15.如权利要求14的制造方法，其特征在于，来源于人的该基因为编码溶酶体酶的基因。
16.如权利要求15的制造方法，其特征在于，该溶酶体酶为选自葡糖脑苷脂酶、酸性神经鞘磷脂酶、溶酶体酸性脂肪酶、酸性α -葡糖苷酶、N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、a-L-艾杜糖醛酸酶、α-半乳糖苷酶Α、己糖胺酶、α-N-乙酰半乳糖胺酶和α -甘露糖苷酶、唾液酸酶的酶。
17.如权利要求15的制造方法，其特征在于，该溶酶体酶为葡糖脑苷脂酶。
全文摘要
本发明揭示了使用哺乳动物细胞的N-糖苷键糖链的非还原末端全部或一部分为甘露糖残基的糖蛋白的制造方法。该制造方法为导入β-N-乙酰葡糖胺酶基因并使其表达的转化哺乳动物细胞及使用该细胞的糖蛋白的制造方法。
文档编号C12N5/10GK103154243SQ20118004952
公开日2013年6月12日 申请日期2011年10月13日 优先权日2010年10月15日
发明者高桥健一 申请人:日本化学研究株式会社