专利名称：基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法
技术领域：
本发明涉及一种测试方法，具体的涉及一种基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法。
背景技术：
人类的生活环境中存在着大量肉眼看不见的微生物，包括各种各样的细菌和真菌。在一般情况下，人们皮肤上的一些常驻菌起着保护皮肤免受致病菌危害的作用，但一旦机体免疫力下降，加上脱落的皮屑、分泌的汗液以及适宜的温湿度又能为细菌的繁殖提供良好的环境，它们中的少量致病菌就会大量繁殖，造成皮肤上菌群生态平衡的失调，侵入皮肤引起疾病。皮革制品作为消费量最大的革制品，由于汗和灰尘等原因，更利于真菌的滋生，因此，皮革制品像纺织品和公用设施等一样，在使用过程中也需要赋予抗菌性，以抑制细菌等的生长，阻断疾病的传播。目前，皮革制品的抗菌性能研究较少，同时缺少较好的抑菌效果检测方法。但随着人们生活水平的提高，对皮革产品不仅要求防水、防污、耐光可洗，也像纤维制品一样，要求赋予皮革抗菌功能。
发明内容
为克服现有技术中不足，本发明的目的在于提供一种基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法，该检测方法操作简单，结果准确，重复性好，具有较高应用价值。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明采用了以下技术方案—种基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法，其包括以下步骤步骤I)制备试样将样品剪成正方形，正反两面均在紫外下照射30min灭菌；步骤2)制备2，3，5-氯化三苯基四氮唑固体培养基用常规培养基配制方法配制固体培养基，按2/100000加入2，3，5_氯化三苯基四氮唑，后塞上棉塞，121 °C，灭菌20min ；步骤3)制备接种菌悬液取培养好的菌悬液各O. 5ml加入4. 5ml灭菌的生理盐水试管中，即稀释至KT1的浓度，充分混匀后取 ο—1浓度的菌悬液O. 5ml加入另一只4. 5ml灭菌的生理盐水试管中，即稀释至10_2的浓度，依次类推，直至稀释至10_4的浓度的接种菌悬液；步骤4)检测操作4.1)向已灭好菌的平皿中倒入2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑固体培养基15 25ml,
室温凝固；4. 2)取制备好的接种菌悬液O. Iml加到2，3，5_氯化三苯基四氮唑固体培养基表面，用无菌涂布棒涂布均勻，室温静5 IOmin ；
4. 3)将试样平贴在培养基上，功能面朝下，用镊子轻压试样，使其紧贴于培养基表面；各样品边缘相距I. 5cm以上，与平皿边缘也相距I. Ocm以上；每样均做4 6个平行；4.4)倒置平皿,于生化培养箱中培养,其中，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌37 °C ± 1°C培养18 24h ;白色念珠菌28± 1°C培养24 48h ；4. 5)于体式显微镜或显微镜下观察菌落生长情况；步骤5)评价与报告试样抑菌率按下式(I)计算
Xa-XbY= -^-X 100%( I )式中Y为抑菌率，100% ;Xa为未经抗菌处理试样菌落数平均值，单位为cfu ;Xb为抗菌处理试样菌落数平均值，单位为cfu。进一步的，所述菌悬液的制备方法如下从保存于4°C冰箱的菌种斜面中取一接种环菌，在平板培养基上划线，37°C 土 TC，培养18 24h ;取液体培养基20ml放入IOOml 三角瓶中；用接种环从已培养18 24h的平皿中挑取一个典型的菌落，接种到液体培养基中，37°C ±l°C，130r/m振荡培养18 20h，即为菌悬液。与现有技术相比，本发明具有以下优点本发明的技术方案是在培养基中加入2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC);细菌胞内脱氢酶的存在，使进入细胞内的TTC由无色的氧化状态变为红色的还原状态，使菌落呈现红色，加入TTC显色的平板培养基法作为抑制细菌的检测方法，解决了菌落较小、样品不透明、不易观察和记录的缺点；检测方法操作简单，结果准确，重复性好，具有较高应用价值。上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段， 并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中图I为针对大肠杆菌的抗菌处理样品(I)与非抗菌处理样品(II)的对比图。
图2为针对金黄色葡萄球菌的抗菌处理样品(I)与非抗菌处理样品(II)的对比图。图3为针对枯草芽孢杆菌的抗菌处理样品⑴与非抗菌处理样品(II)的对比图。
具体实施例方式下面将参考附图并结合实施例，来详细说明本发明。I.材料I. I样品浙江衢州富华皮革公司皮革(防霉处理、未加防霉处理)I. 2培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基、牛肉膏蛋白胨半固体培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基I. 3 菌种大肠杆菌I. 358 ;金黄色葡萄球菌I. 801 ;枯草芽孢杆菌I. 108。
I. 4药品与试剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)、NaCl等均为国产分析纯I. 5器皿与仪器培养皿、试管、三角烧瓶、移液管、移液枪、吸球、接种环；细菌计数板；电子分析天平；真空干燥箱；双目显微镜；生化培养箱；超净工作台； 立式压力蒸汽灭菌器等；振荡培养箱；涡旋混合器；显微镜。2.菌悬液的制备从保存于4 °C冰箱的菌种斜面中取一接种环菌，在平板培养基上划线， 37°C ± 1°C (真菌28± 1°C )，培养18 24h。取液体培养基20ml放入IOOml三角瓶中。用接种环从已培养18 24h的平皿中挑取一个典型的菌落，接种到液体培养基中，37°C ±1°C， 130r/m振荡培养18 20h，即为菌悬液。3.基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法，其包括以下步骤步骤I)制备试样将样品剪成正方形，正反两面均在紫外下照射30min灭菌；步骤2)制备2，3，5-氯化三苯基四氮唑固体培养基用常规培养基配制方法配制固体培养基，按2/100000加入2，3，5_氯化三苯基四氮唑，后塞上棉塞，121 °C，灭菌20min ；步骤3)制备接种菌悬液取培养好的菌悬液各O. 5ml加入4. 5ml灭菌的生理盐水试管中，即稀释至KT1的浓度，充分混匀后取 ο—1浓度的菌悬液O. 5ml加入另一只4. 5ml灭菌的生理盐水试管中，即稀释至10_2的浓度，依次类推，直至稀释至10_4的浓度的接种菌悬液；步骤4)检测操作4.1)向已灭好菌的平皿中倒入2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑固体培养基15 25ml,
室温凝固；4. 2)取制备好的接种菌悬液O. Iml加到2，3，5_氯化三苯基四氮唑固体培养基表面，用无菌涂布棒涂布均勻，室温静5 IOmin ；4. 3)将试样平贴在培养基上，功能面朝下，用镊子轻压试样，使其紧贴于培养基表面；各样品边缘相距I. 5cm以上，与平皿边缘也相距I. Ocm以上；每样均做4 6个平行；4.4)倒置平皿,于生化培养箱中培养,其中，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌37 °C ± 1°C培养18 24h ;白色念珠菌28± 1°C培养24 48h ；4. 5)于体式显微镜或显微镜下观察菌落生长情况；步骤5)评价与报告试样抑菌率按下式(I)计算
权利要求
1.基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法，其特征在于，包括以下步骤步骤I)制备试样将样品剪成正方形，正反两面均在紫外下照射30min灭菌；步骤2)制备2，3，5-氯化三苯基四氮唑固体培养基用常规培养基配制方法配制固体培养基，按2/100000加入2，3，5-氯化三苯基四氮唑， 后塞上棉塞，121 °C，灭菌20min ；步骤3)制备接种菌悬液取培养好的菌悬液各O. 5ml加入4. 5ml灭菌的生理盐水试管中，即稀释至KT1的浓度， 充分混匀后取KT1浓度的菌悬液O. 5ml加入另一只4. 5ml灭菌的生理盐水试管中，即稀释至10_2的浓度，依次类推，直至稀释至10_4的浓度的接种菌悬液；步骤4)检测操作4.I)向已灭好菌的平皿中倒入2，3，5-氯化三苯基四氮唑固体培养基15 25ml，室温凝固；4.2)取制备好的接种菌悬液O. Iml加到2，3，5-氯化三苯基四氮唑固体培养基表面，用无菌涂布棒涂布均勻，室温静5 IOmin ；4.3)将试样平贴在培养基上，功能面朝下，用镊子轻压试样，使其紧贴于培养基表面； 各样品边缘相距I. 5cm以上，与平皿边缘也相距I. Ocm以上；每样均做4 6个平行；4.4)倒置平皿,于生化培养箱中培养,其中，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 37 0C ± I °C培养18 24h ;白色念珠菌28 ± I °C培养24 48h ；4.5)于体式显微镜或显微镜下观察菌落生长情况；步骤5)评价与报告试样抑菌率按下式(I)计算Xa-XbY=----X 100%Xa(I)式中=Y为抑菌率，100% ；Xa为未经抗菌处理试样菌落数平均值，单位为Cfu ；Xb为抗菌处理试样菌落数平均值,单位为cfu。
2.根据权利要求I所述的基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法，其特征在于，所述菌悬液的制备方法如下从保存于4°C冰箱的菌种斜面中取一接种环菌，在平板培养基上划线，37°C ±1°C，培养18 24h ;取液体培养基20ml放入IOOml三角瓶中；用接种环从已培养18 24h的平皿中挑取一个典型的菌落，接种到液体培养基中，37°C ±1°C， 130r/m振荡培养18 20h，即为菌悬液。
全文摘要
本发明公开了一种基于平板培养基的皮革材料的抑菌效果检测方法，其包括以下步骤1)制备试样；2)制备2，3，5-氯化三苯基四氮唑固体培养基；3)制备接种菌悬液；4)检测操作；5)评价与报告。本发明的检测方法操作简单，结果准确，重复性好，具有较高应用价值。
文档编号C12Q1/18GK102586395SQ20121005632
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月6日 优先权日2012年3月6日
发明者任信, 朱小卫, 朱建华 申请人:中华人民共和国吴江出入境检验检疫局